小肽含量测定方法

2.2.2 小肽含量的测定
（1）原理
三氯乙酸（TCA）可以去除酸不溶性的蛋白和长链肽沉淀。

余下的蛋白为低分子量的小肽类物质和氨基酸。

（2）测定方法
将待测样品0.5g，加入10mL 的10%三氯乙酸（TCA），160 r/min振荡30 min，而后4000 r/min离心15 min，取上清液做适当稀释后用Folin-酚法测定蛋白质总量。

2.2.3 Folin-酚法（lorry法）测定蛋白质总量
（1）原理
蛋白质与碱性铜溶液中的Cu2+络和使得肽键伸展，从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸在碱性铜条件下与福林试剂反应，产生蓝色。

在一定浓度范围内，其颜色的深浅与蛋白质中的酪氨酸和色氨酸的含量成正比。

（2）试剂
甲液：A、B液的混合物，A液50份，B液1份。

A液为10g Na2CO3，2g NaOH 和0.25 g酒石酸钾钠，定容到500 mL；B液为0.5 g CuSO4定容到100 mL。

乙液：Folin-酚试剂。

（3）测定方法
标准曲线的制作：在分析天平上精确称取0.0250 g结晶牛血清白蛋白，用蒸馏水溶解后转入100 mL容量瓶中，配成250 μg/mL的牛血清白蛋白溶液。

按一定的比例配成蛋白质含量为0 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL、200 μg/mL、250 μg/mL，总体积为1 mL的溶液。

各加入5 mL甲试剂，混合后室温下放置10 min，再各加入0.5 mL乙液，立即混匀。

30 min后，以不含蛋白质的溶液做对照，在650 nm处测定各溶液的吸光度，做出标准曲线。

样品的测定：同标准曲线。