血浆-血清-体液蛋白质组学(完整版 柳满然)
肝脏疾病常用检查PPT课件
（七）肝功能实验检查项目的选择与应用
检验肝功能的目的在于探测肝脏有无损害、查明原因、 判断预后以及鉴别黄疸等。因此，肝功能试验的临床 应用对于诊断、治疗、预后等方面具有重要价值。肝 功能试验种类繁多，不下数百种，但是一种试验只能 探查肝脏的某一种功能，没有一种试验能全面反映肝 脏的一切功能。因此，为了得到比较正确的结论，应 做若干种试验，必要时要反复复查。同时对肝功能试 验的评价，必须结合临床表现全面考虑，避免片面性 及主观性。此外，也要注意节约人为物力及财力，有 的放矢地选择性做必要的肝功能试验是重要的。
尿中胆素原
增多
不定或升高
减少或消失
粪中胆素原
增多
减少
减少或消失
血清 蛋白
电泳谱 脂蛋白X
正常 阴性
Alb减少，γ-球蛋白
升高 一般阴性
球蛋白明显升高 明显增高
血
谷丙转氨酶
正常，稍高
清 酶
碱性磷酸酶
正常
类
γ-谷氨酰转肽酶
正常
肝炎急性期增高 正常或轻度增高 可增高
正常或增高 明显增高 明显增高
其
凝血酶原时间
参考值：
成人
40-110u/L（金-阿氏法）。
儿童
<250u/L
（五）血清酶及同工酶检查
临床意义： A）ALP分布 肝、骨、肠等，主要在肝 B）ALP分布在肝细胞血窦侧和毛细胆管侧的微 绒毛上，经胆汁排入小肠，当胆汁排出不畅， 毛细胆管压力增加时，可诱发产生大量ALP， 故胆汁淤滞时，ALP升高。 C）骨骼疾病时，骨瘤、骨折恢复期ALP也可升高
肝病预后。 （2）活化部分凝血活酶时间测定（APTT） 延长见于严重肝病、维生素K缺乏。
4、血氨测定
重庆医科大学刘先俊《生物化学》第15章.血液的生物化学
当人从海平面上到4500 米高原后两天内， 2,3 BPG的浓度有原来的5mM 增加到8mM，结果对组织 的供氧量又恢复到接近 正常水平（0.38）。
如果BPG仍维持5mM水 平，对组织的供氧量将 减少四分之一，为0.30。
本章总结 血浆蛋白的电泳分类；非蛋白氮的 概念及主要种类。
｛ CO2的运输 （6％） 碳酸氢盐形式
｛ 化合结合
（约2/3 ）
（94％） 氨基甲酸血红蛋白
（约1/4 ）
1. 碳酸氢盐形式的运输
2.氨基甲酸血红蛋白的形式运输
HbNH2+CO2
在组织中
（氨基甲酸血红蛋白）
HbNHCOOH
肺
HbNHCOO－ ＋ H＋
HbH＋
+ HbO2
O2
Bohr效应的总结
CO2＋H2O ＝ H＋＋HCO3－
结果使得细胞内的pH降低。低pH使Hb对氧的亲和 力降低。
波耳效应提高了氧转运系统的效率。在肺部，CO2 水平低，氧很容易被血红蛋白占有，同时释放出质子；
而在代谢的组织中，CO2水平相对来说比较高，pH较低，
O2容易从氧合血红蛋白中卸载。
（三）运输二氧化碳
Байду номын сангаас
物理溶解
运输O2、CO2、H+ （一）运输O2
与Hb结合占98.5％ 氧的运输
物理溶解占1.5％
Hb与O2呈可逆结合
O2分压高（肺）
Hb＋O2
HbO2
O2分压低（组织）
（还原、紫蓝色）
（氧化、红色）
Hb氧饱和曲线呈S型，两端斜率小，中间大； Mb氧饱和曲线呈双曲线型
生理意义：
（二）波尔效应（Bohr effect）
血浆蛋白质组学的研究进展
白图谱发生了戏剧性的变化， 至少有 ３ 个额外的低丰度蛋白 ５ ０ ］ ］ ３ ７ 在胶上显现出来［ 。Ｐ 等［ 用免疫亲合层析法去除了血 ｉ ｅ ｐ ｅ ｒ 清中的高丰度蛋白后， 又用阴离子交换和排阻色谱法将血清 分为 ７ 个组分后分别行 ２ ， 经考马斯亮蓝染色清楚地显示 ４ Ｄ Ｅ 个蛋白点， 由于在这些点中许多点是蛋白质翻译后修 出３ ７ ０ ０ 饰的变异体， 经质谱鉴定这些点为 ３ 个蛋白； 尽管检测方法 ２ ５ － １ · 的蛋白质， 如白 相对不敏感， 仍然检测到了血清中 ＜ １ ０ ｇ Ｌ μ 介素 、 组织蛋白酶和肽类激素。免疫亲和层析特异性好， 在 ６ 去除干扰蛋白时蛋白丢失比超滤离心少。 １ ． １ ． ３ 等电聚焦预分离 除了利用分子量和抗原抗体反应清除血浆中高丰度蛋 白外， 还可根据蛋白质等电点的不同， 用微量溶液等电聚焦 进行初步分馏， 将血浆蛋白分为一系列连续 ｐ Ｈ值的部分再 ］ ８ 行２ ， 这样做使 ２ 倍［ ， 对 Ｄ Ｅ Ｄ Ｅ的上样量至少提高了 ６ ～３ ０ 于分辨低丰度蛋白极为有利。 １ ． １ ． ４ 多维分离质谱鉴定 ］ ９ 等［ 用蛋白 Ａ 将余下的 Ａ ｄ ｋ ｉ ｎ ｓ ／ Ｇ去除血清免疫球蛋白， 蛋白酶切， 获得的肽段用强阳离子交换柱分成不同组分， 再 用反相毛细管液相色谱和离子阱质谱在线鉴定了 ４ ９ ０个蛋 倍， 并且检测 白质， 该方法检测到的蛋白比以往增加了 ３ ～５
应用分泌_释放蛋白质组学鉴定HBV相关的肝细胞癌血浆标志物_杨磊
④ 中国医学科学院&北京协和医学院, 肿瘤医院&肿瘤研究所检验科, 北京 100021; ⑤ 首都医科大学佑安医院检验科, 北京 * 联系人, E-mail: dr_wujianxiong@; yngao@; chengshj@ 收稿日期: 2013-04-25; 接受日期: 2013-05-02 国家自然科学基金 (批准号 : 81172035, 30973388)、全国优秀博士论文专项资金 (批准号 : 2007B68)、国家高技术研究发展计划 (批准号 : 2012AA020206)和中国医学科学院&北京协和医学院肿瘤医院基本科研项目(批准号 : JK2009B08, LC2009B45)资助
引用格式: 杨磊, 荣维淇, 肖汀, 等. 应用分泌/释放蛋白质组学鉴定 HBV 相关的肝细胞癌血浆标志物. 中国科学: 生命科学, 2013, 43: 663–671 英文版见: Yang L, Rong W Q, Xiao T, et al. Secretory/releasing proteome-based identification of plasma biomarkers in HBV-associated hepatocellular carcinoma. Sci China Life Sci, 2013, 56: 638–646, doi: 10.1007/s11427-013-4497-x
中国科学: 生命科学
2013 年
第 43 卷
第8期
以 7 L/min 的速度自动进样 3 min. 所用溶剂 A 为 0.1%溶于水的甲酸, B 为 0.1%溶于乙腈的甲酸, 流动 相 A 线性梯度为 97%~60%, 流动相 B 的线性梯度为 3%~40%. 分离 90 min 以上, 速度为 200 nL/min, 随 后, 10%流动相 A 和 90%流动相 B, 10 min. 以 lock mass 模式, Glu-fibrinopeptide B 浓度为 100 fmol/L, 恒 速 300 nL/min 传 递 到 nano-ACQUITY 系 统 . SYNAPT 高分辨率质谱分析胰酶消化后的肽段 [14], 质谱在 V 模式下进行, 全宽度半最大值最小为 10000. TOF 质谱分析仪串联质谱校准 Glufibrinopeptide B 离 子片段 m/z(质荷比)设为 50~1600, 喷雾器采样频率为 30 s. 高精度 LC-MS 在 MSE 模式下数据采集(低碰撞 能量为 4 eV, 高碰撞能量从 15 eV 升至 45 eV, 开关 间 隔 1 s, 扫 描 间 隔 0.02 s), 质 量 范 围 (m/z) 为 300~1990.
食管癌患者血浆外泌体蛋白标志物TMT定量蛋白质组学筛选及分析
解剖学研究 2021 年第 43 卷第 3 期 Anat Res, 2021. Vol. 43. No.3
.论著•
食管癌患者血浆外泌体蛋白标志物TMT定量蛋白质 组学筛选及分析
卢喜，年亮'，谭遥，王海峰，俞婷婷' (新疆医科大学附属肿瘤医院胸腹放疗科，新疆乌鲁木齐830011)
【摘要】目的探讨食管癌患者血浆外泌体蛋白的表达变化，筛选并分析食管癌诊断的生物标志物。方法 采用定量蛋白质组学串联质量标签(TMT)标记技术对3例食管鳞状细胞癌患者及3例健康体检者的血浆外泌体 蛋白进行检测及定量分析，筛选食管癌患者血清外泌体中发生显著性变化的差异蛋白。采用Proteome Discoverer. STRING等数据库对差异蛋白进行生物信息学分析。结果共鉴定出17种显著差异表达蛋白，其中显著上调蛋白 6个，显著下调蛋白11个。GO功能注释、COG注释、KEGG通路注释和结构域注释显示差异蛋白主要包括蛋白酶 抑制剂的竣肽酶、细胞外基质1、分泌磷蛋白24.ERV/ALR硫代氧化酶、血小板反应蛋白/软骨寡聚基质蛋白的卷曲 螺旋结构域、胎球蛋白B半胱氨酸蛋白酶抑制结构域。结论定量蛋白质组学TMT法能有效筛选食管癌患者血 浆外泌体中的差异蛋白，筛选出的差异蛋白有望成为食管癌诊断的标志物。
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上，取1.0 ml于离心管中，4七下、3 000 g离心10 min,去除细胞碎片，取上清转移至离心管中；再次 离心收集的上清液，4七、10 000 g离心20 min,去 除颗粒，取上清于试管内；加入1.0 ml预冷的lx PBS稀释，混匀，再加入500 pL外泌体提取试剂 (ECS试剂)，混匀,2七~8七静置过夜，代、10 000 g 离心60 min,收集沉淀，用400 pL lxPBS均匀吹打 离心沉淀物，均匀悬浮后，转移至1.5 ml离心管 中，再于4V、12 000 g离心2 min ,分离得富含外泌 体的上清液。将收获的外泌体粗品置于外泌体纯 化柱(EPF柱)，4七、3 000 g离心10 min,收集纯化 后的外泌体,-80T保存备用。采用Western blot对 外泌体进行鉴定。 1.2.2外泌体蛋白提取及定量外泌体重悬液中 加入适量的裂解液、超声，4七、12 000xg离心 10 min,收集上清液，加入丙酮(1:4),-20^过夜； 4七、12 000 g离心10 min,分离得沉淀，加入适量 的裂解液、超声.4t、12 000g离心10 min,取上清 液。蛋白质团块中加入200 |jlL RB,反复吹打直至 蛋白质充分分散，超声后于冰上冷却，重复1次， 4七、12 000 g离心10 min, ±清液转移至EP管 中。分别取 5、10、15、20、25、30 和、35 憾的 BSA 制作标准曲线。每管加入1 ml Bradford染色，涡旋 振荡20 s,测定吸光值。计算得到各样品的浓度 后，调节样品浓度，再进行定量。SDS-PAGE凝胶 电泳。 1.2.3蛋白酶切及TMT试剂标记 蛋白液充分混 匀，加 0.05 mol/L TCEP 溶液,60X：孵育 1 h, 70% 乙 醇润洗10KD超滤管,12 000 g离心20 min,再用纯 水润洗，12 000 g离心20 min;超滤管中加入蛋白 液，12 000 g离心20 min,弃掉滤液；加入100 p.1 UA( 8 p.mol/L urea, 0.1 |xmol/L Tris/HCL, pH &5)溶 液,12 000 g离心20 min，离心2次；加入100 p.1 0.25 |jimol/L TEAB, 12 000 g 离心 20 min,重复 3 次。加入 jjlI 0.5 jimol/L TEAB,加入胰酶(1 p,g/ □乙酸溶液，与蛋白质量比为1：50),37七孵育12 h后，补加胰酶(与蛋白质量比为1 ： 100), 37七孵 育4 h,离心收集滤液，加入50 |11 0.5 pmol/L TEAB,离心，与之前滤液合并，低温真空抽干。
患者入院时血浆Lp-PLA2、LP（b）、NIHSS_评分及MoCA_评分对急性缺血性脑卒中预后不良
患者入院时血浆Lp-PLA2、LP（b）、NIHSS评分及MoCA 评分对急性缺血性脑卒中预后不良的预测效能王秀杰，郑富霞，熊鑫，李敏，范海燕，赵晓晶华北理工大学附属医院神经内科，河北唐山063000摘要：目的 分析患者入院时血浆脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）、脂蛋白b［LP（b）］、NIHSS评分及MoCA评分对急性缺血性脑卒中（AIS）预后不良的预测效能。
方法 AIS患者231例，根据患者出院3个月时mRS量表评分划分为预后良好组125例与预后不良组106例。
收集两组患者的性别、年龄、高血压病史、糖尿病病史、吸烟史、饮酒史及入院时的实验室检测结果、NIHSS评分、MoCA评分等资料，实验室检测指标包括血浆Lp-PLA2、血尿酸（UA）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、脂蛋白a［LP（a）］、脂蛋白b［LP（b）］、同型半胱氨酸（Hcy）、空腹血糖（FBG）、C反应蛋白（CRP）等。
将AIS患者是否预后不良作为因变量，以患者血浆Lp-PLA2、UA、TC、TG、HDL-C、LDL-C、LP（a）、LP（b）、Hcy、FBG、CRP水平、入院NIHSS评分、MoCA评分为自变量，采用多因素二元logistic回归分析法分析AIS患者预后不良的独立影响因素。
采用受试者工作特征曲线（ROC）分析独立影响因素及联合预测因子L对AIS患者预后不良的预测效能。
结果 预后不良组血浆Lp-PLA2、TC、LDL-C、LP（b）、CRP水平及NIHSS评分均显著高于预后良好组（P均<0.05），MoCA评分显著低于预后良好组（P<0.05）。
血浆Lp-PLA2水平、血浆LP（b）水平、NIHSS评分、MoCA评分是AIS患者预后不良的独立影响因素（P 均<0.05）。
血浆Lp-PLA2水平预测AIS患者预后不良的AUC为0.885，取截断值为158 ng/mL时，血浆Lp-PLA2水平预测AIS患者预后不良的灵敏度为80.19%、特异度为86.40%。
单一人份纤维蛋白胶的制备,能及止血效果观察性
ｃ ｐ ｏｃ ａ ｉ ） 离 心 分 离 后 加 无 水 乙 醇 脱 水 ２次 ， ａ ｒｉ ｃ ， ｄ
６ ℃干 燥 ５ 干 燥 器 内恒 重 后 称 重 。 ０ ｈ， １ ５ Ｆ ｘ［ ． ｎ活性 的 测 定 采 用 纤 维 蛋 白凝 块 溶 解 法 测 定 ： 按 一 系 列 稀 释 度 稀 释 好 的 标 准 血 浆 和 待 测 取
用 多联 采血 袋 的封 闭 系统 中操 作 可保 证 制 品 满 足 血 液 成分 的质 量 标 准要 求 。 由 于所 制 备的 纤 维 蛋 白原 新 鲜 程 度 高 且 未 经 冻 干 ， 溶 解性 明 显 优 于 冻干 制 重 剂 ， 临 床 实 际 使 用 过 程 中 颇 受 医 护 人员 的 欢迎 。 在 但 由于 献 血 者 个 体 差 异 和 操 作 人员 和 方 法 的 差 异 ． 国 外 制 备 出来 的冷 沉 淀 的 量 以 及 其 中的 纤 维 蛋 白原 的 含量 往 往 彼 此 差 异 很 大 “ ， 文通 过 对 自 己制 备 的 ：本 冷 沉 淀 中 纤 维 蛋 白原 、 凝 血 Ｆ ｘ 人 Ⅲ等关 键 活 性 成 分含量 （ 活性 ） 测 定 和 所 制 得 的 纤 维 蛋 白胶 的 有 关 的 特 性 指 标 的考 察 ， 以及 止血 效 果 的观 察 ． 结 制 备 和 总
只 ５ 注 射 器 内 ， 以 上 两 只 注 射 器 通 过 一 个 Ｙ 型 ｍｌ 将
塑 料 装 置 混 合 即 形 成 所 需 的 纤 维 蛋 白胶 ， 接 喷 入 直 （ 入 、 入 口患 部 后 ， 涂 塞 伤 即可 达到 止血 或 粘 结 等 目
的 。 节 悬 浮 冷 沉 淀 的 生 理 盐 水 的 量 ， 可 改 变 胶 的 调 即
及 展 望 ． 国 输 血 协 会 第 一 次 大 会专 题 学 术 报 告 汇 编 ，９ ７ ２ 中 １ ８ ；５
无偏质谱蛋白质组学-概述说明以及解释
无偏质谱蛋白质组学-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述：无偏质谱蛋白质组学是一种基于质谱技术的蛋白质组学方法，其核心思想是通过无偏的蛋白质分析方法，全面地揭示生物体内蛋白质的组成、结构和功能。
随着质谱技术的不断发展和完善，无偏质谱蛋白质组学在生物医学研究领域得到越来越广泛的应用。
无偏质谱蛋白质组学的方法包括离子传输质谱、亲和质谱、双重标记定量质谱等多种技术手段，能够对样本中的蛋白质进行高效、灵敏和准确的分析。
相比传统的蛋白质组学方法，无偏质谱蛋白质组学具有更高的分辨率、更广的蛋白质检测范围和更快的分析速度，能够为生物体内蛋白质的研究提供更加全面和深入的信息。
通过无偏质谱蛋白质组学的应用，我们可以深入了解生物体内蛋白质的种类、表达水平、修饰状态等重要信息，为疾病的诊断、治疗和药物研发提供重要参考。
因此，无偏质谱蛋白质组学具有广阔的应用前景，将成为生物医学研究领域的重要工具和技术手段。
1.2文章结构"1.2 文章结构"本文将首先介绍无偏质谱蛋白质组学的概念，阐述其在生物学和医学领域中的重要性。
随后，将详细探讨无偏质谱蛋白质组学在生物医学研究中的应用，包括对疾病机制的解析、药物研发和临床诊断的改进等方面。
最后，将分析无偏质谱蛋白质组学相较于传统方法的优势和局限性，并探讨未来在该领域的发展方向和挑战。
通过本文的综合讨论，希望读者能对无偏质谱蛋白质组学有一个全面的了解，以及对其在生命科学研究中的潜在价值有所启发。
1.3 目的本文旨在探讨无偏质谱蛋白质组学在生物学研究中的重要性和应用。
通过对该技术的概念、应用和优势进行深入分析，可以帮助读者更好地理解无偏质谱蛋白质组学在蛋白质组学研究中的作用，为未来的研究和应用提供指导和参考。
同时，通过本文的撰写，还可以推动无偏质谱蛋白质组学技术的进一步发展和应用，为生命科学领域的发展做出贡献。
2.正文2.1 无偏质谱蛋白质组学的概念无偏质谱蛋白质组学是一种新兴的蛋白质组学技术，其核心理念在于尽可能地减少实验过程中的偏差和误差，以获取更加真实和可靠的蛋白质数据。
血浆的组成文献综述
血浆的组成：蛋白质的全球资源研究。
摘要：最近在临床上有个越来越受到各方面关注的话题那就是部分血液样品以及其他临床样品在全球来说有非常大的需求。
从另一个方面来说就是我们需要大量的血液样本以广泛应用于蛋白质，基因组和代谢组。
血液样本是应用于各种生命科学最基础的生物样本，我们为了全球资源蛋白质组学界而介绍一个新的参考血浆（肝素）。
我们定义了血浆里C-反应蛋白应该小于3mg/L,而当C-反应蛋白大于30mg/L则是一种疾病。
在这些研究里我们用了新出生1~2周的婴儿血浆，以及15~30岁，30~50岁和65岁以上的患者的血浆。
总的来说，我们各组分分别为80例，血浆标准的发展和特点将成为我们的数据参考。
在生物组已经对样本进行了评估，目前允许对蛋白质进行定量的研究。
通过采用高品质的血浆样本，比如染色质人体蛋白质组计划（HPP）将有利于整个人类蛋白质组研究。
简介：在全球范围内，对病人的护理和对疾病的理解必须有一定的研究。
包括：“个性化医疗”和用药物治疗技术和成像技术对生物标志物诊断来代替早期的疾病诊断指示。
对于生物诊断的发展，我们需要一个对世界各地的慢性疾病和人口老龄化的医疗保健系统的规划。
这些变化将为医学研究界采取以病人为中心的技术驱动的研究策略带来新的机会和挑战。
所谓进入新的医疗领域就是把量化蛋白质当做最关键技术。
世界各地的公司正在建立提供服务和创造市场，血液的分析就是临床诊断的一个关键因素。
我们正进入一个有大量公认诊断标志物的崭新的未来。
因此开发新的诊断生物标志物对学术领域的投资和探索以及创新性的发现潜力非常巨大。
现代临床方法重要的基石是参考标准的材料以及参考的标准化方法的蛋白质研究，人类的血液由于其广泛的实用性对于临床试验有其可取之处。
如今，一些大型临床研究的样本集合已经开始研究生物的应用、这些生物银行在研究中心和国家各级举行宝贵的和疾病，病例有关的信息交流。
特别重要的是储存在相同环境中的生物库的高质量。
重组人血清白蛋白的研究进展_满初日嘎
第26卷 第4期2009年 8月 生物医学工程学杂志Journal of Biomedical EngineeringVol.26 No.4August 2009重组人血清白蛋白的研究进展＊满初日嘎1 张英霞2Δ 综述 张 云3 审校1(海南大学农学院,海口570228)2(海南大学海洋学院热带生物资源教育部重点实验室海南省热带水生生物技术重点实验室,海口570228)3(中国科学院昆明动物研究所,昆明650223) 摘要 人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)是现代医学中一种重要的临床生物制品,主要用于维持血浆胶体渗透压及作为血浆容量扩充剂,广泛应用于出血性休克、烧伤、癌症、白细胞增多症、白蛋白过少症等。
H SA 主要靠收集人的血液分级过滤获得,有可能被病毒、致病蛋白粒子等污染。
目前人们利用生物工程技术表达重组人血清白蛋白(Recombinant HSA,rH SA),其结构和功能与血浆来源的血清白蛋白(P lasma derived HSA,pdHSA)相似。
预临床和临床试验已证明r HSA可安全地应用于多种疾病治疗。
关键词 重组人血清白蛋白 功能 临床中图分类号 Q512.1 文献标识码 A 文章编号 1001-5155(2009)04-0900-04Progresses in Recombinant Hu man Serum AlbuminManchu Riga1 Zhang Yingxia2 Zhang Yun31(The College o f Li fe S cience and Ag ricultu re,Ha inan University,H aikou570228,Ch ina) 2(K ey Labor ator y o f Trop ic B iolog ical Res our ces,Ministr y o f Ed ucation,Hainan Key Laborator y o f Trop icalH ydr obio logy Tech no logy,Ocean C o llege,Hainan University,Ha ikou570228,China)3(Kunming Institute o f Zoolog y,The Ch inese Academy of Sciences,K unming650223,China) Abstract Human se rum albumin(HSA)is an impo rtant bio log ical pro duct in clinical pharmacy practice a t pres-ent.I ts main clinical use is in maintaining co llo id osmo tic pr essure and increasing circulating plasma v olume so as to cure hemo rrhagic sho ck,burn,cancer,hy percy to sis,hypoalbuminosis,etc.HSA is iso lated by f ractionating human plasma,w hich entails po ssible co ntamina tion by viruse s o r prions.Recombinant human ser um albumin(rH SA)has been successfully pro duced by biological eng ineering.T he structural and functio na l proper ties of r HSA are similar to tho se of plasma de rived human se rum albumin(pdHSA).P reclinical and clinical trials have confir med the safety and efficacy of using this r HSA preparation in the treatment of certain disease s.Key words Recombinant human se rum albumin(r HSA) F unctio n Clinic1 引 言血清白蛋白是脊椎动物血浆中含量最丰富,且极易纯化的蛋白质,因而是血浆蛋白中研究最早、最清楚的组分。
血清PGC-1α、Irisin水平对急性缺血性脑卒中患者出血转化的预测价值
结果显示,血 清 PGC-1α、Irisin 预 测 AIS 患 者 发 生 HT 的 曲 线 下 面 积 (AUC)分 别 为 0.886(95%CI:0.817~
0.936)、0.811(95%CI:0.731~0.876),对 应 的 敏 感 度 分 别 为 83.02%、67.92%,特 异 度 分 别 为 80.28%、
um markerstopredictHTinAISpatients. Keywords:peroxisomeproliferator-activatedreceptorgammacoactivator1α; Irisin; acuteischemic
stroke; hemorrhagictransformation; predictivevalue
gressionwasusedtoanalyzetheriskfactorsofHTinAISpatients.Results Thetimefromonsettothrombolysis,NationalInstituteofHealthstrokescale(NIHSS)scoreatadmission,plateletcountofAISpatientsin
摘 要:目的 探讨血清过氧化物酶体增殖物激活受体 γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)、鸢尾素(Irisin)水 平
对急性缺血性脑卒中(AIS)患者出血转化(HT)的预测价值。方法 选取2018年8月至2020年6月定州市人
民医院收治的 AIS患者124例为研究对象,根据患者头颅 CT 复查结果将其分为 HT 组(53例)和非 HT 组(71
激活受体 γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)是增加线粒体 抗氧化 酶 能 力 的 必 需 因 子。 最 新 研 究 发 现,PGC-1α 基因的抑制导致 部 分 线 粒 体 功 能 失 效,通 过 AMP 活 化蛋白激酶(AMPK)/沉 默 信 息 调 节 因 子 1(SIRT1)PGC-1α途 径 抑 制 C1q 肿 瘤 坏 死 因 子 相 关 蛋 白 3 (CTRP3)在缺血 性 脑 卒 中 海 马 神 经 元 凋 亡 中 的 保 护 作用 。 [4] 然而,PGC-1α 在 AIS 患 者 HT 中 的 生 理 作 用尚 不 清 楚。鸢 尾 素(Irisin)是 一 种 含 有 Ⅲ 型 结 构 域 的跨膜蛋白,有研究发现,Irisin可通过抑制 Toll样受 体4(TLR4)/髓样 分 化 因 子 88(MyD88)途 径 保 护 脑 缺血/再灌注损伤 。 [5-6] 目前,关于 AIS 发 生 HT 患 者 血清 PGC-1α与 Irisin 水 平 的 关 系,以 及 二 者 与 AIS 预后关系的研究 较 少,因 此,本 研 究 分 析 AIS 患 者 血 清 PGC-1α、Irisin水平 对 HT 的 预 测 价 值,以 期 为 临 床治疗提供参考。
一、血浆蛋白质的组成、功能及分类一血浆蛋白质的组成PPT课件
【临床意义】主要作为急必时相反应的 指标，风湿病、恶性肿瘤、心肌梗塞患者上 升，营养不良、严重肝病下降。
（五）甲胎蛋白（AFP）分子量6.5～ 7 万， pI4.75 ，含糖量 4 ％，主要在胎儿肝合 成，妊娠13～15周血清AFP含量最高，以后逐 渐下降，出生时仅为高峰期的1％，周岁时接 近成人水平，仅10～30μg/L，功能不详。
（三）肾脏疾病 肾脏疾病可出现蛋白尿而导致血 浆蛋白质丢失，丢失的蛋白质与其分子量 有关。小分子量蛋白质丢失最明显，而大 分子量的蛋白质因肝细胞代偿性地合成增 加，绝对含量升高。所以血浆 Alb 、 PA 、 AAG 、AAT、TRF↓，而AMG、β-LP、Hp↑， 这称为选择性蛋白质丢失。 当严重肾病是肾小球失去分子筛 作用，可导致非选择性蛋白质丢失，表现 为广泛地低血浆蛋白质血症。
（十一）C-反应蛋白（CRP） 是一种能结 合肺炎双球菌细胞壁 C- 多糖的蛋白质，分子量 11.5 ～ 14 万，五条肽链组成，肝细胞合成。 CRP 能激活补体，促进粒细胞、巨噬细胞的运动和吞 噬，具有调理素样作用。
CRP测定方法 免疫扩散法，火箭免疫 电泳法，ELISA法，放免法， 【参考范围】＜8.0mg/L。
（四）α1-酸性糖蛋白（α-AG或AAG） 分子量约4万，含糖约45％，pI2.7～3.5，主 要由肝细胞合成，某些肿瘤组织也可合成。 AAG是主要的急性相反应蛋白，急性炎症时上 升，与免疫防御功能有关。
AAG测定方法 使用AAG抗体，进行 免疫散法或免疫比浊法检测， 【参考范围】0.25～2.0g/L
二、血清总蛋白的测定（双缩脲法）
【原理】蛋白质分子中的肽链在碱 性条件下能与二价铜离子作用生成紫红色的 络合物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋 白质的含量成正比，但双缩脲反应并非蛋白 质特有的颜色反应，分子中含二个以上肽键 者均有此反应。
血清生化25项检查指标表名称的词解释及病理之欧阳家百创编
血清生化25项检查指标表名称的词解释及病理一、总卵白总卵白，英文缩写TP。
正常范围：成人60～80g／L。
一般解释：血清卵白质是血清固体成分中含量最多的一类物质。
临床意义：一、增高：主要是血清中水分减少，使总卵白浓度相对增高，如高度脱水而至血液浓缩，慢性肾上腺皮质功能减退时，钠丢失继发水分丢失，进而促推血浆出现浓缩现象。
2、降低：各种原因引起的水钠潴留，使血浆被稀释，或静脉打针过多的低渗溶液而形成血浆中总卵白降低。
肝功能障碍，则肝脏合成卵白质减少，白卵白下降就明显。
营养不良或消耗增加，如长期食物中卵白质含量不足或慢性肠道疾患而至接收不良，患有慢性消耗性疾病如结核病、恶性肿瘤、肝硬化等。
总卵白偏高的原因：一、日常平凡身体的正常心理性升高例如：剧烈运动后也是引起总卵白偏高的原因。
二、总卵白偏高的原因是因为某种疾病引起的偏高，常见的原因有：1.慢性肝脏疾病：包孕自身免疫性慢性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬化，慢性酒精性肝病，原发胆汁性肝硬化等；球卵白偏高程度与肝脏病严重性相关。
如果发现总卵白偏高时因为慢性肝脏疾病引起的，就要经由过程用药来控制，降低总卵白。
一、总卵白偏高的原因是什么在慢性病毒性肝炎时，因为病毒的连续存在，导致免疫系统的增生，球卵白的连续增多，如果这时肝脏的功能还比力好，能够合成足够量的白卵白，以这时的化验成果往往是白卵白正常，球卵白增加，总卵白也增加，白/球比例谷氨酰转移酶偏高可正常或轻度下降，公式表示：T=A G（总卵白=球卵白白卵白）二、总卵白偏高的原因的分析，总卵白偏高的原因主要有以下两个方面：总卵白偏高的原因一、心理性升高：剧烈运动后也会引起总卵白偏高。
2、是因为某种病因引起的偏高，常见的原因有：1.自身免疫性疾病 2.慢性肝脏疾病：包孕自身免疫性慢性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬化，慢性酒精性肝病，原发胆汁性肝硬化等；球卵白偏高程度与肝脏病严重性相关。
如果白卵白尚能保持正常，申明肝功尚还有一定的储备能力，这时即使是球卵白升高，导致的白/球比下降也不能认为是肝功恶化。
血液蛋白质组学在血瘀证的研究近况
可能与能量代谢 障碍、 氧化损伤 和应激反应有 关。苗兰 等 通
Ａ ｏ —Ｉ在心绞 痛血 瘀证 患 者 和正常 人血 浆 中存 在差 异 表 过制作大 鼠气虚血瘀证动 物模 型 ， ｐＡ Ｖ 利用二 维凝 胶 电泳 ， 软件分 达， 结果提示冠 心病 不稳定性心绞痛血瘀证特 征表现为炎症 反 析及质谱鉴定等技术观察 气虚血 瘀证 大 鼠血 清 的蛋 白质表 达 应、 代谢紊 乱（ 包括血脂 、 血氧 等 ） 。李雪 峰等 通 过对入 冠心 谱改变情况 ， 进行 正常大鼠与气 虚血瘀证 大 鼠血清 的蛋 白质组 病血瘀证组患者 ， 用荧光差异显示二维凝胶 电泳筛选差异 功能 学初步研究 ， 为初 步发现的差异蛋 白可能与气 虚血瘀证 的形 认 蛋 白， 基质辅助激光解析／ 电离 一飞行 时间质谱 对血 小板 差异 成 、 发生 、 发展 有关 。刘 蕾 等 。 用基 于 荧光 差 异 凝胶 电泳 。利 功能蛋 白进行 鉴定 ， 寻找冠心病血瘀证患者 冠脉事件关键 血小 （ Ｉ Ｅ 技术的差异蛋 白质组学 的方法 筛选心 肌缺血血瘀 证小 ＤＧ ）
板功能蛋 白 ， 对鉴定成功差异蛋 白 ， ｓ ｒ Ｗｅｔ ｎ—Ｂｏ ｉｇ 一步验 型猪血浆差异表达 的蛋 白， ｅ ｌｔ 进 ｔｎ 初步发现 白蛋 白、 碱性磷 酸酶 、 肌球
证 。结果筛选 出 １ 差 异蛋 白点 ， ３个 质谱 成功 鉴 定 ７个 ， 为 蛋 白、 认 白细胞抗原相关酪蛋 白磷 酸酶相 关蛋 白、 酸核糖 焦磷 磷 Ｃ４ Ｄ １和 Ａ ｔ ｃ ｎＹ是冠 心病 血瘀 证的标志蛋 白， ｉ 其他血 小板功能 酸合成酶相关 蛋 白 １ 血 红素 蛋 白 、 、 烟酸 受体 、 Ｈ ｎ ｅｒｔ Ｃ ａｄ ｓｃｅ ｅ 蛋 白的异 常表 达可能在冠 心病血 瘀证 事件 发生发 展 中起 关键 ｄ ｍ ｉ ｏ ｗｎ Ｍ、 ｕａ ｄｉ ｕ ｏｌ ｕｉ ｅｖ ｈ ｉ、 脂 酶 ｏ ａ ｆ ｉｅ ｇ ｍ ｔｔ ｎ Ｓ Ｉ ｅ ｍｍ ｎｇ ｂ ｌ ｈａｙ ａ 磷 ｏ ｎ ｃ ｎ
中医证本质研究中的血清蛋白质组学应用探讨_赵海燕
1背景
白质组学和功能蛋白质组学。由于功能蛋白质组学是将疾
证候是对疾病处于一定阶段的病因、病位、病变性质，
病的整个过程视为一个黑箱而只着眼于与疾病相关的差异
中
以及邪正双方力量对比各方面情况病理概括。中医证本质
表达蛋白质［7 － 8］，在临床上得到广泛应用。
华 的含义是指证发生发展的物质基础，这些物质决定着证的
选取抑郁症、经前期综合征、更年期综合征，按照辨证标准 参考文献
诊断为肝郁证患者各 100 例进行研究，发现 12 个差异蛋白 ［1］ Fields S. Proteomics in genomeland［J］. Science. 2001，291
质点，其中 spot73 仅在正常组中表达，spot71 仅在 3 个肝郁 证疾病组中表达，另外的 10 个点均在 3 个肝郁组表达上 调； 单证方面，刘希成［21］等应用蛋白质组学技术比较了老 年肾阳虚患者与健康对照组的血清样本，发现有 10 种在肾 阳虚血清中特异表达，有 6 种在健康对照组中特异表达； 在 方证结合的应用方面，可将某一证候动物模型在相应方剂 治疗下机体所发生的物质变化视为该证候的物质基础，因 为正是该方剂在机体内发挥其药理作用过程中纠正这些物 质后，才使该证候的临床症状得以缓解甚至完全消失［22］。 苗兰等［23］用复合因素制作大鼠气滞血瘀证模型，发现模型
间的延长有向正常水平恢复的趋势。苗兰等［18］发现气滞 医学和生物学发展的核心驱动力……中国传统医学的深厚
血瘀证大鼠血清与正常大鼠相比有 1 个蛋白质下调，5 个 积淀，为发展系统生物学，并将其与现代医学紧密结合提供
蛋白质上调，1 个蛋白表达缺失，推测气滞血瘀证的形成可 了十分有利的客观条件。”
能与这些差异蛋白点相关。
体液蛋白组学-概述说明以及解释
体液蛋白组学-概述说明以及解释1.引言概述部分的内容可以如下撰写：1.1 概述体液蛋白组学是一门研究体液中蛋白质组成和功能的学科。
体液蛋白组学研究的对象包括血液、尿液、唾液等各种体液中存在的蛋白质。
蛋白质是生物体内重要的功能分子，不仅参与到细胞的结构与功能中，还在机体内发挥着调控生理过程、传递信号等重要作用。
体液蛋白组学的核心目标是通过分析和解读体液中的蛋白组成及其变化，揭示与疾病发生发展密切相关的蛋白表达与功能异常。
相比其他研究方法，体液蛋白组学具有非侵入性、高灵敏性和广泛的应用性等优点，成为研究疾病诊断和治疗的一个重要工具。
本文将从蛋白组学的概念和原理、体液蛋白组学的研究方法以及其在疾病诊断和治疗中的应用等方面，全面介绍体液蛋白组学的研究进展和意义。
通过对体液蛋白组学的探索，我们可以更好地了解疾病的发病机制、早期诊断和治疗策略的制定，并为精准医疗的发展提供重要支持。
接下来的文章结构将分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分将对体液蛋白组学的研究背景和意义进行概述；正文部分将介绍蛋白组学的概念和原理、体液蛋白组学的研究方法以及其在疾病诊断和治疗中的应用；结论部分将对体液蛋白组学的意义和前景进行总结，并展望未来的研究方向。
通过这样的文章结构，旨在全面揭示体液蛋白组学在生物医学领域中的重要性和应用前景。
1.2文章结构1.2 文章结构本文将按照以下结构来探讨体液蛋白组学的相关内容：1. 引言：首先对体液蛋白组学进行概述，明确其研究对象和意义，并介绍本文的目的。
2. 正文：本部分包括三个小节。
2.1 蛋白组学的概念和原理：首先介绍蛋白组学的基本概念，解释其与传统蛋白质研究的区别和联系。
接着详细介绍蛋白组学的原理，包括蛋白质组分分离、鉴定和定量的常用方法与技术。
2.2 体液蛋白组学的研究方法：本节将重点介绍体液蛋白组学研究中常用的方法和技术。
包括体液样本的采集和处理、蛋白质组分的分离技术、质谱分析技术以及生物信息学分析工具等。
第1讲--细胞培养的设施与技术基础(1)
自动双重纯水蒸馏器，纯水仪
超净工作台
CO2培养箱
显微操作仪、倒置显微镜
冰箱 离心设备：离心机、离心管、移液管/吸管/移液器
培养器皿：培养瓶、培养皿、培养板
细胞计数器/仪、计数板 摇床 液氮罐 压力蒸汽消毒器 水纯化装置 电热干燥箱 滤器，酸缸
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超净工作台
工作原理
利用鼓风机驱动空气 滤过高效滤器除去空 气中的尘埃颗粒而净 化。净化空气徐徐通 过工作台面，使工作 台内构成无菌环境。
按一定设计方案，在细胞、亚细胞或组织水平上 进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官及 个体，创造优良品种和产品的生物工程。
细胞生物学、生物工程是其基础
5
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绪论与课程介绍 P1-4
细胞工程的研究内容**
细胞与组织培养(Cell/Tissue culture)(P1)
细胞融合或细胞杂交(Cell fusion/hybridization)： 在自然或人工诱导条件下，两个或两个以上细胞 形成一个细胞的过程 运用：单克隆抗体技术
营养成分
氨基酸 单糖 维生素 无机盐
促生长因子及激素
适宜的pH: 7.2-7.4
渗透压：260-320mOsm/kg
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4.1 天然培养基
天然培养基有血清、血浆、和组织提取液 （如鸡胚和牛胚浸液）。
✓ 优点：营养成分丰富，培养效果好 ✓ 缺点：来源受限。成分复杂，影响对某些
实验产物的提取和实验结果的分析。易发
29 29
大容量细胞培养箱
细胞转瓶机
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倒置显微镜
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MAIDI-TOF
数据处理 与生物信 息学分析
ESI-MS/MS
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2DE:Advantages & Disadvantages
• Provides a hard-copy record of separation • Allows facile quantitation • Separation of up to 3000 different proteins • Highly reproducible • Gives info on Mw, pI and post-trans modifications • Inexpensive • Limited pI range (4-8) • Proteins >150 kD not seen in 2D gels • Difficult to see membrane proteins (>30% of all proteins) • Only detects high abundance proteins (top 30% typically) • Time consuming • 30% of spots with multiple proteins from pI 4-7
基本缩略词
IEF: isoelectric focusing (等电聚焦) 2-DE：Two-dimensional gel electrophoresis
第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离； 第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离， 把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开
DIGE：2-D difference Gel Electrophoresis HPLC：High-performance liquid chromatography
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Shotgun:Advantages & Disadvantages
Advantages
• Alleviate some limitations of the 2-DE/MS method • Generally high throughput • Protein identification and quantification is straightforward • process is simple • Can be used to ID posttrans. modifications
10
PMF常用软件 Mascot: Profound: PepIdent: www.expasy.ch/tools ProteinProspector: PepSea: 195.41.108.38
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常用串联质谱检索工具
SEQUEST: /sequest
Mascot: PepFrag: ProteinProspector:
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基于2DE的差异蛋白质组分析技术流程
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Shotgun Protein Identification
SCX column fractionation
Reverse column separation
Protein mixture
Protein digests
Auto MS/MS detection
Results BioWorks data base search Tandem MS spectra
Co-separate by 2D PAGE
Excitation wavelength 1
Disadvantages
• Requires more handling for sample isotopic labeling • Low reproducibility • Requires high level expertise • Showed biases for high Mr proteins and against certain types and classes of proteins
优点：与传统两性电解质等电聚焦相比，具有分辨率更高、上样量更大。 分辨率可达0.001pH, 是目前分辨率最高的电泳方法 可用于等电点及其附近的蛋白质和多肽的分析、制备
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pH 梯度范围的选择
使用宽pH范围的胶条（pH 3-10）可以在同一块凝胶上 看到样品中绝大多数的蛋白质。 将有重叠区域的窄pH梯度的胶条联合使用，也同样可 以得到整个pH 3-10范围的结果。
MS是单级质谱，适用于样品不是特别复杂的样品分析。 对于复杂样品，单级质谱会出现很多干扰峰，影响测定。
质谱仪分为进样系统、离子源、质量分析器和检测器四部分。 离子源又分为： 电子轰击源 (Electron Ionization，EI) 化学电离源 (Chemical Ionization，CI) 场致电离源 (FI) 电喷雾电离源 (Electro Spray Ionization，ESI) 等 MS/MS是串联四级杆质谱，通过两个质量分析器间的碰撞室进行 一定能量的碰撞，选择性的扫描碰撞后得到的子离子碎片，不符合 一定质量数的离子被抛弃，这就降低了背景噪音、大大提高了检测的 灵敏度和准确度。 8
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传统的基于2DE的差异蛋白质组学分析技术
优点：
①技术路线成熟 ②重现性和直观性好 ③费用较低 ④展示差异蛋白质的PI和Mw
缺点：
①蛋白质共迁移(comigration)问题，不适合于很复杂的样品
②线性动态范围较窄 ③强疏水性，强硷性，分子量过大(150kD）的 蛋白质受到限制
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基于Shotgun差异蛋白质组分析技术流程
1 mM EDTA, 1 mM EGTA
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2-D Difference Gel Electrophoresis (DIGE)
Protein extract 1 Label with fluor 1 Mix labeled extracts Protein extract 2 Label with fluor 2
基本缩略词
ESI-MS：Electro Spray Ionization-Mass Spectroscopy，
电喷雾质谱
MALDI-TOF-MS：Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization/
Time of Flight Mass Spectrometry 基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱， 是一种新型的软电离生物质谱
ห้องสมุดไป่ตู้
MALDI-TOF-TOF：基质辅助激光解吸离子化-串联飞行时间质谱
MALDI-Q-TOF：基质辅助激光解吸离子化-三级四级杆-飞行时间质谱
LC-ESI-MS/MS: 高效液相色谱-电喷雾串联质谱
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基本缩略词
PMF： Peptide Mass Fingerprinting (肽质量指纹谱)，
是蛋白质被识别特异酶切位点的蛋白酶水解后得到的
蛋白酶抑制剂 PMSF（很常用，使用 浓度为1mM） 多肽水解蛋白抑制剂， 如： 1. 亮肽素leupeptin 2. 抑肽素pepstatin 3. 抑肽酶aprotinin 4. 苯丁抑制剂bestain 有效抑制的酶 不可逆抑制剂，抑制： 1. 丝氨酸水解酶 2. 一些般胱氨酸水解酶 1. 亮肽素抑制多种丝氨 酸和半胱氨酸蛋白酶 2. 抑肽素抑制天冬氨酸 蛋白酶 3. 抑肽酶抑制许多丝氨 酸蛋白酶 4. 苯丁抑制剂抑制氨基 酸多肽酶 抑制金属蛋白酶 缺点 在含水溶液中很快失活 毒性大 价格昂贵 为小分子多肽，在双向 电泳结果中出现 抑肽素pepstatin在pH 为9 时不能起抑制作用
血浆、血清、体液蛋白质组学 研究及其应用
E-mail: mliu-hncq@ Tel: 6848-5184
1
柳满然 Ph.D
蛋白组学基本知识 血浆、血清蛋白组学
唾液蛋白组学 尿液蛋白组学 脑、脊液蛋白组学
2
一、蛋白组学基本知识
3
蛋白质组(proteome = protein + genome): 一种细胞、组织或生物体完整基因组所对应的 全套蛋白质 蛋白质组学（proteomics) 研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化 规律的科学
or high-pressure liquid chromatography (高压液相色谱法)
iTRAQ: Isobaric tag for relative and absolute quantitation 同位素标记相对和绝对定量 7
基本缩略词
MS：Mass Spectroscopy (质谱)
因为绝大多数蛋白聚焦在pH 3-10的中间区域，所以研 究人员有时选用非线性梯度的胶条，这种胶条将两端 的pH梯度压得很窄，却可以使中间区域的蛋白质得到 较好的分离。
将窄 pH 梯度的线性 IPG 胶条重叠使用，效果要比用非 线性胶条好得多，它可以检测出样品中更多的蛋白质 斑点。
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常用蛋白酶抑制剂
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IPG(EF):Immoblized pH gradients isoelectric focusing(固相pH梯度等电聚焦)
建立于20世纪80年代，一种新型等电聚焦技术。利用一系列具有弱酸 或弱碱性质的丙烯酰胺衍生物滴定，在滴定终点形成pH梯度并参与 丙烯酰胺的共价聚合。
特点：形成固定的、不随环境电场等条件变化的pH梯度
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Sensitivity and dynamic range of protein analysis methods
Sensitivity Bio-Safe coomassie G-250 stain Coomassie Blue R-250 stain Silver stain kit 5-10ng 10-25ng 0.5-1ng