工业微生物的菌种选育与保藏优秀课件

（五）毒性试验
自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的， 将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工 业有关的菌种，更应慎重。据有的国家规定，微 生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉 和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微 生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。
第二节 培养分离
从自然界中分离培养微生物是菌种选育的重要和基础 的步骤。
（二）增殖培养
为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生 物至少是在数量上不要增加，可以通过配制选 择性培养基，选择一定的培养条件来控制。
例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤 维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源， 那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常 生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样 对下阶段的纯种分离就会顺利得多。
2．根据所采集样本的各种生态参数，描述所要分离的微 生物之生态系统或栖息地：
3．将若干样本分成若干类型，如植物和植物各部，土壤 (类型和土层)、岩石、水、昆虫和发酵食品等；
4．罗列出所要考察和测量的环境参数，如pH、盐分、水 分、氧化还原电势及温度等；
5．列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中的 几丁质、葡萄表皮的果胶；
工业微生物的菌种选育与 保藏
第一节 菌种的分离简介
一、菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂
或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。
二、分离思路
新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照 生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法， 快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。
6．根据上述1-5项中所获得的数据，设计分离方法，即 选择适宜的稀释液、底物、试样、天然浸出汁和培养条 件；
7．用标准方法作对照来评价生态学分离方法；
8．根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法；
9．运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选意义的 微生物类群。
四、自然界中细菌的分离
(一)采样和采集方法
（三）培养分离
尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物 的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。在这— 步，增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用， 而且控制得细一点，好一点。纯种分离的方法有划 线分离法、稀释分离法。
稀
划
释
线
分
分
离
离
法
法
（四）筛 选
这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件， 通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，以求得适 合于工业生产用菌种。
分离：利用分离技术得到纯种。
发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养 特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、 耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。
（一）采样
1、采样对象 以采集土壤为主。
田园土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主。
富含碳水化Βιβλιοθήκη Baidu物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较 多，如一些野果生长区和果园内。
3、采好的样必须完整地标上样本的种类及采集 日期、地点以及采集地点的地理、生态参数 等；
4、应充分考虑采样的季节性和时间因素，因为 真正的原地菌群的出现可能是短暂的；
5、采好的样应及时处理，暂不能处理的也应 贮存于4℃下，但贮存时间不宜过长。这是因 为一旦采样结束，试样中的微生物群体就脱 离了原来的生态环境，其内部生态环境就会 发生变化，微生物群体之间就会出现消长
为了从一特定生态系统中分离出具有代表性的 细菌菌群，特别是分离那些在唯一微环境区域 中出现的菌群时，必须十分重视样本的采集。
样本采集时所需的工具通常有无菌刮铲、土样 采集器、镊子、解剖刀、手套、无菌小塑料袋 和塑料瓶等。
采样的注意事项
1、采样时应尽可能保持相对无菌；
2、所采集的样本必须具有某种代表性；
到目前为止，还没有一种分离培养方法能揭示一个试 样中所包含的所有微生物总数和种类。
在任一试样中所存在的微生物仅为极少数特定种类的菌 株；在工业微生物筛选过程中，应及时调整检测方法， 以与各种不同类型的生长和代谢之微生物相适应。
一、成功的分离培养方法
(1)认真考它所需产品的特征和生产过程； (2)制订初步的筛选标准； (3)将生态学方法运用到分离和筛选过程。
采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。
从自然界筛选
2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。
3、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去 表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的 牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时 间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样 中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步 分批寄回，以便及时分离。
2．植物体采集方法
在采集叶面时，一般是用灭菌的剪刀、打孔 器、安全刀片等，由几片新鲜叶片的同一部位 切取一小块，并注意不要损伤周围边缘。
选择叶面时应考虑叶位、叶龄、叶片正反面和 在一片叶上的取样部位。
1．土样采集方法
森林、旱地，草地可先掘洞，由土壤下层向上层顺序采 集；
水田等浸水土壤在不损土层结构的情况下插入圆筒采集。 如果层次要求不严格，可取离地面5～15cm处的土。将 采集到的土样盛入聚乙烯袋或玻璃瓶中。
在采集植物根际土样时，一般方法是自土壤中慢慢拔出 植物根，在大量无菌水中浸渍约20min，洗去粘附在根 上的土壤，然后再用无菌水漂洗下根部残留的土，这部 分上却为根际土样。
实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必 须重新进行分离纯化。
有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合 理先进的设备与之配合。
三、新种分离与筛选的步骤
定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。
采样：有针对性地采集样品。
增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后， 在数量上占优势。
二、培养分离中要解决的问题
1、“分离什么和从哪里分离出?”
2、必须充分考虑所分离微生物的生产能力、生 长速度、生物群体培养和产品生产工艺及其 提纯的难易和费用，工业生产发酵罐中稳定 性及遗传操作的难易程度等。
3、选择适宜的培养分离方法和检测方法。
三、将生态学方法用于培养分离的 一般思路要点
1．罗列出所要分离的微生物类群；