Prog检测作业指导书

R1：生物素化的抗孕酮抗体（灰盖），1 瓶，10ml 。
生物素化的抗孕酮抗体浓度0.15mg/l，磷酸缓冲液0.025mol/l，pH7.0 。含防腐剂。
R2：钌（Ru）标记的孕酮-多肽（黑盖），1 瓶，8ml 。
钌（Ru）标记的孕酮-多肽浓度10ng/ml，磷酸缓冲液0.025mol/l，pH7.0 。含防腐剂。
含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。标本和质控液禁用叠氮钠防腐。
标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1 瓶，6.5ml 。
链霉亲和素包被的微粒浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng 生物素/mg 粒子。含防腐剂。
其他所需材料：
常规实验设备
Elecsys E 170/E 411
Elecsys 系统清洗液（SysClean）,货号11298500
Elecsys E 170分析仪所需材料:
Elecsys 系统缓冲液 （ProCell M）,货号12135019
Elecsys 检测池洗液（CleanCell M）,货号12135027
在Calibrห้องสมุดไป่ตู้tion—Status菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。
5.2 样本检测程序：
单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。
Elecsys 加样头（TIP），货号11706802
4.仪器和校准
使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪
仪器校准：每批孕酮试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用孕酮
定标液定标。
定标频率：
每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24 小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：
Elecsys PC/CC杯,货号03023141
Elecsys 清洗液（ProbeWash M），货号03005712
Elecsys 反应杯/加针头/废物袋（CUP/TIP），货号12102137
Elecsys 系统清洗适配器（SysClean Adapter M），货号03027651
Elecsys E 411分析仪所需材料:
Elecsys 系统缓冲液（ProCell），货号11662988
Elecsys 测量池清洗液（CleanCell），货号11662970
Elecsys 系统清洗液（SysWash），货号11930346
Elecsys 适配器 （Adapter for SysClean），货号11933159,
Elecsys 反应杯（CUP），货号11706829
6.质量控制
Elecsys通用质控品（PreciControl ）1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。
7.计算方法
分析仪自动计算每份标本的测定浓度，单位为nmol/l,ng/ml 或ug/l。
· 第3 步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2 点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
2.标本要求
血清：按标准常规方法采集。
血浆：肝素（锂、纳）、EDTA-K3 、枸橼酸钠或氟化钠/草酸-K 抗凝均可。如用枸橼酸钠抗凝，结果应+10%。标本在2 o C－8 o C 可稳定5 天，-20 o C 至少可稳定6 个月。只能冻融一次。
· 一个月（同一批号试剂）
· 7 天（放置仪器上的同一试剂盒）
· 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。
5.操作步骤（以E 170为例）
5.1 校准操作步骤：
在编缉各项目的参数时，已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。进入Calibration—Status菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。
批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。
进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。
换算方法是：
nmol/l × 0.314=ng/ml
ng/ml × 3.18=nmol/l
8.参考范围
百分位数
50％
5－95％
50％
5－95％
nmol/l
ng/ml
男性
33
1.8
0.7－4.3
0.6
0.2 – 1.4
女性
卵泡期
192
2.1
1.分析原理
采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。
· 第1 步：30 µl 标本、生物素化的抗孕酮抗体、钌（Ru）标记的孕酮衍生物与达那唑（Danazol）混匀，释放孕酮。标本中的孕酮与标记的孕酮衍生物同时竞争抗体上的结合位点。
· 第2 步：加入链霉亲和素包被的微粒。形成的免疫复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。结合到固相上的标记的孕酮衍生物数量与标本中的孕酮含量成反比。