不同培养基对人外周血单核细胞来源树突状细胞发育的影响

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树突状细胞培养方法

树突状细胞培养方法树突状细胞（Dendritic Cells，DCs）是一类免疫细胞，主要负责识别和激活T细胞，发挥着重要的免疫调节和抗肿瘤等作用。

为了进行树突状细胞的研究，科研人员需要对其进行体外培养。

本文将介绍常用的树突状细胞培养方法。

1.制备树突状细胞前驱细胞：树突状细胞前驱细胞主要存在于外周血和骨髓中。

首先，采集外周血或骨髓，并将其进行红细胞裂解。

然后，用PBS洗涤样品，离心沉淀细胞。

最后，将细胞进行培养。

2.培养基的选择：培养树突状细胞需要选择适宜的培养基。

目前常用的培养基有RPMI1640、DMEM等。

添加10-20%的胎牛血清（FBS）可以提供必要的生长因子和营养物质。

3.添加生长因子：在培养树突状细胞的过程中，可能需要添加一些生长因子来促进细胞的分化和增殖。

常见的生长因子包括GM-CSF（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）和IL-4（白细胞介素4）。

可以将这些生长因子添加到培养基中，以达到最佳生长条件。

4.细胞培养条件的控制：树突状细胞对培养条件非常敏感。

因此，需要对温度、湿度、CO2浓度等参数进行严格控制。

一般来说，将细胞培养在37摄氏度、5%CO2的培养箱中。

5.细胞的分离和传代：在树突状细胞培养过程中，细胞会不断增殖。

为了保证细胞的活力和稳定性，需要定期分离和传代细胞。

可以使用胰酶等消化酶将细胞从培养瓶中剥离，然后进行细胞计数并按照一定比例进行传代。

6.细胞质量的评估：在培养树突状细胞的过程中，需要对细胞质量进行评估。

可以通过使用流式细胞仪等设备来检测细胞表面标记物的表达情况，以及细胞活力、树突状突起的形态等指标来评估细胞的质量。

7.树突状细胞的激活：树突状细胞的主要功能是激活T细胞。

为了使树突状细胞具备充分的抗原递呈能力，可以使用多种促进细胞激活的方法，如脂多糖、TNF-α等。

总结：树突状细胞培养方法包括制备前驱细胞、培养基选择、生长因子添加、细胞培养条件控制、细胞分离和传代、细胞质量评估以及细胞的激活等步骤。

人外周血单核细胞来源树突状细胞转染重组腺相关病毒诱导特异性T细胞的效应

漂星景题由课广州市科委资助，
为重点面上项目．资助金额１万５元，目前已完成了
单位：方医科大学附属南方医院肿瘤中南
０引言
心。
材料：实验于２０ — ５１０６０／０在南方医院肿
树突状细胞是抗原递呈功能最强的抗原瘤科生物室完成。对象：ＡＡ ① ＨＬ — ２基因亚型的递呈细胞，直接抗肿瘤效应，其可将摄取健康自愿供血者１名，对本实验知情同意，无但实
发特异性抗肿瘤免疫反应。转染基因所用的（ｂｏ公司）ＭＴＳｇＧｉｃ；Ｔ（ｉｍａ公司）重组人粒；载体主要是病毒，腺病毒、如反转录病毒、痘细胞一巨噬细胞集落刺激因子（＆ｙｔｍｓＲＤＳｓｅ病毒、相关病毒等，腺以腺病毒转染率最高。公司）重组人白细胞介素４比活性１／ｇ，；（３Ｕｎ经病毒转染的树突状细胞疫苗，提供更多、Ｐｏｇ能ｒｍｅａ公司）肿瘤坏死因子Ｏ，组人白细；．ｒ重更有效可供识别的抗原表位，服了ＨＬ限胞介素２（放军军事医学科学院）Ｆｃｌ克Ａ解；ｉｌｏ淋制，持续诱导细胞毒性Ｔ细胞。利用基因巴细胞分层液（津血研所）能天；小鼠抗人
６ｆＴＣＤ８一Ｉ：３ＦＴＣ，ＣＤ４ — ０ＰＥ，ＣＤ８一Ｅ０Ｐ工程技术构建树突状细胞疫苗面临的一个难ＣＤ８＿ｌＣ，

人外周血单核巨噬细胞诱导、培养及鉴定

人外周血单核巨噬细胞诱导、培养及鉴定杨志梅;符州;王莉佳;陈艳【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2008(25)5【摘要】在重组人粒.巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)作用下体外诱导培养人外周血单核巨噬细胞,并进行鉴定和功能检测.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMc),含10%胎牛血清的RPMll640培养基和rhGM-CSF培养7d.光镜、扫描电镜及透射电镜观察细胞形态,鸡红细胞吞噬试验检测吞噬功能,流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CDl4等生物学技术鉴定贴壁细胞性质.获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态学特征及免疫表型.有吞噬功能,纯度较高.人外周血单核细胞在rhGM-CSF诱导下向巨噬细胞分化,具有生物学活性,纯度较高.是一种简单易行的体外诱导培养巨噬细胞的方法.【总页数】3页(P66-68)【作者】杨志梅;符州;王莉佳;陈艳【作者单位】重庆医科大学附属儿童医院,重庆,400014;重庆医科大学附属儿童医院,重庆,400014;重庆医科大学附属儿童医院,重庆,400014;重庆医科大学附属儿童医院,重庆,400014【正文语种】中文【中图分类】R329.2+8【相关文献】1.体外诱导培养健康成人外周血单核细胞源树突状细胞及鉴定 [J], 叶双樱;陈礼平;武蓉珍2.人外周血树突状细胞体外诱导培养及表型鉴定 [J], 颜汝平;周海滨;李翀;王剑松;王伟;赵献3.健康人外周血树突状细胞诱导培养及鉴定 [J], 林东军;方志刚;华佳叶;刘相富;黄仁魏4.人外周血树突状细胞的诱导、培养及其表面标记的鉴定 [J], 张云飞;范清宇5.人外周血来源树突状细胞诱导培养及鉴定的实验研究 [J], 孙梯业;颜伟;孙冬丽;刘全达;段伟宏;周宁新因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人外周血树突状细胞的体外培养及其影响因素的研究

ｖｔ．ＴｅｐｒｙｏｓａｄｔｅｑａｔｉｓｏｖｒｘｅｍｅｔｒｕｅｅｓｕｉｄａｈｔａｓＴｅａｉｔｆＤＣｏｓｉｌａｅｉｏｒｈｕｔｆＤＣｎｈｕｉｅｆｅｅｐｒｎａｇｏｐｗｒｔｄｅｔｔｅ７ｈｄｙ．ｈｂｌｙｏｓｔｔｉｎｔｅｙｉｌｉｍｕｔｐｏｉｒｔｎｏＨｇｎｉｙｈｃｔｓｗａｓｅｅｔｄｒｌｅａｉｆａｏｅｅｃＴｌｍｐｏｙｅｓａｏｄｔｃｅ．ｆｏｌＲｅｕｔＡｔｒＰＭＣａｅｎｃｔｒｄｂｔｙｏｉｅｏｄｙ，ｓｌｓｆＢｅｓｈｄｂｅｕｕｅｙｗｈｃｔｋｎｓｆｒ７ａｓｌｉ
ｔｅｅｗｒａｇｕｅｆＤｉｈｌｇｕｔｈｃｏｄｓｉｌａｅｐｏｉｒｔｎｏｌｇｎｉＴｌｍｐｏｙｅ．ＩｄｉｏｈｒｅｅａｌｒｅｎｍｂｒｏＣｓｗｔｌｈｐｒｙｗｉｈｃｕｔｉｉｌｍｕｔｒｌｅａｉｆａｏｅｅｃｙｈｃｔｓｎａｄｔｎ，ｔｅｆｏｌｉｈｃｔｅｏｓｃｎｂｎｕｎｅｙｂｏｄｓｕｄｔｅｄｎｉｙｏｙｏｉｅ．ｌｒｕｕｆＤＣａｅｉｆｅｃｄｂｌｏｔｍｓａｈｅｔｆｃｔｋｎｓｌｅｎｓＣｎｌｓｏｓＤｓｃｎｂｕｔｒｄｆｏＰｏｃｕｉｎＣａｅｃｕｅｒｍＢＭＣｓｌ，

TRAF6在人PBMC来源的树突状细胞成熟中的作用

TRAF6在人PBMC来源的树突状细胞成熟中的作用刘璐;李琳;闵军;王捷;伍衡;曾育杰;陈双;褚忠华【摘要】目的:探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在不同成熟度树突状细胞(DCs)中的表达及其对DCs免疫刺激活性的影响.方法:重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(IL-4)体外诱导的人外周血单个核细胞来源的DCs,经TNF-α、LPS和细胞因子鸡尾酒法诱导成熟,分别以流式细胞术、ELISA和混合淋巴细胞反应(MLR)检测DCs的表面标志、IL-12分泌和刺激淋巴细胞增殖能力.Western blotting和real-time PCR分别检测各组TRAF6蛋白水平及mRNA的表达.结果:各组DCs均表达TRAF6,成熟状态最佳的鸡尾酒诱导下DCs的TRAF6蛋白表达最高.高表达TRAF6的DCs可促进IL-12的分泌,增强刺激淋巴细胞增殖的能力.结论:TRAF6是调节DCs激活和成熟的关键因素.%AIM: To investigate the immunological effect of tumor necrosis factor receptor - associated factor 6 ( TRAF6 ) on the maturation of dendritic cells in vitro.METHODS: The human peripheral blood mononuclear cell ( PBMC ) - derived dendritic cells ( DCs ), induced by recombined human granulocyte macrophage colony - stimulating factor ( GM - CSF ) and interleukin ( IL ) - 4, were stimulated to mature with TNF - α, LPS or cocktail of cytokines ( TNF - α, IL - 6, IL - 1 β and PGE2 ).The cell surface markers, T - cell stimulatory proliferation capacity and IL - 12 p40 production of the DCs were determined by the methods of flow cytometry, ELISA and mixed lymphocyte reation ( MLR ), respectively.The mRNA expression of TRAF6 was detected by real - time PCR.RESULTS: The expression of TRAF6 was observed in all groups, which in cocktail group was the highest in the DCswith optimum state of maturation.Furthermore, TRAF6 enhanced the production of IL - 12 and the ability of T - cell stimulation of mature DCs.CONCLUSION: TRAF6 might play an important role in inducing the maturation of human PBMC - derived DCs.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)009【总页数】5页(P1767-1771)【关键词】树突细胞;肿瘤坏死因子受体相关因子;细胞因子【作者】刘璐;李琳;闵军;王捷;伍衡;曾育杰;陈双;褚忠华【作者单位】中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科,广东,广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院妇产科,广东,广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科,广东,广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科,广东,广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科,广东,广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科,广东,广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科,广东,广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科,广东,广州,510120【正文语种】中文【中图分类】R363肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor－receptor associated factor，TRAF)是肿瘤坏死因子超家族和Toll样/白细胞介素－1受体(interleukin－1 receptor，IL－1R)超家族重要的接头分子，在天然免疫和获得性免疫中发挥了重要的作用[1]。

人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定

人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定目的：研究人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定方法。

方法：采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞，用EGM-2培养基在多聚赖氨酸包被的培养板中进行诱导培养，动态地观察贴壁细胞的生长状况，免疫组织化学技术检测培养细胞表面标志物的表达。

结果：人外周血单个核细胞经体外培养至第2天，呈贴壁生长，细胞形态为大小相近的圆球体；第4天一些细胞开始出现尾状物，形态呈蝌蚪样改变，部分细胞聚集形成细胞簇；至第7天细胞形态变长，呈梭形改变，细胞间相互围绕呈环形，并有集落出现，免疫组织化学染色CD133、CD34、VEGFR-2和Ⅷ因子表达均呈阳性。

结论：运用本实验方法可以成功实现人外周血内皮祖细胞的分离、培养和扩增。

标签：内皮祖细胞；外周血；细胞培养内皮祖细胞（Endothelial Progenitor Cells，EPCs）是血管内皮细胞的前体细胞，亦称血管母细胞（angioblast），EPCs不仅参与胚胎血管生成，而且也参与出生后的血管新生过程。

近些年来人们对EPCs在血管形成、心脑血管疾病和创伤愈合等方面的作用进行了广泛的研究[1]，EPCs移植技术已成为治疗心脑血管疾病的一种新兴的方法[2]，具有广阔的临床应用前景。

但由于EPCs的来源有限，目前的培养方法尚不能满足基础研究和临床治疗的需要，在本实验中，笔者研究从来源相对广泛的人外周血中分离培养EPCs，为EPCs的应用提供一种便捷有效的分离方法。

1 材料和方法1.1 材料：主要试剂和仪器：内皮细胞培养基（Endothelial Cell Growth Medium-2，EGM-2）（Lonza公司）。

人淋巴细胞分离液（天津灝洋生物制品有限公司）。

鼠抗人CD133单克隆抗体、血管内皮生长因子受体2（Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2，VEGFR-2）（北京博奥森生物技术有限公司）。

不同诱导方法对人外周血树突状细胞体外成熟的影响

Ｃｏｒｓｎｎａｈｒ：ＣＨＵｒｅｐｏｄｉｇｕｔｏＺｈｏｇ－ｕａ，ＥｍａｌＣＨＵ９ｎｈｉ：００９１３．ｅ＠６ｎｔ
【ｂｔｃ】ＯｊｃｖＴｖｓｇｔｔｍｎｙｅｅｆｉｅｎｃｔｉｎｉｍｔｅＡｓａｔｒｂｅｔｅｏｉｅｉｅｈｉｕｉｆｃｏｄｆｅｔｙｋｅｏａｒｉｎｔａｅｍｔｆｔｆｒｏｎｍｕ
ｄｎｒｔｅｌｎｖｔ．ＭｅｈｄＴｅｈｍａｎｃｔ — ｅｖｄｄｎｒｉｅｌｗｅｅｉｄｃｄｉｈｅｄｉｃｌｉｉｏｉｃｓｒｔｏｓｈｕｎｍｏｏｙｅｄｒｅｅｄｉｃｃｌｒｎｕｅｎｔｅｉｔｓ
ｅｄｃｔｃｉｉ，Ｔｃｌｔｌｔｒｒｌｅａｉｎｃｐｃｔｎｏｙｉａｔｔｃｖｙｅｌｓｉａｏｙｐｏｉｒｔａａｉｓｍｕｆｏｙ，ａｄＩ一２４ｒｄｃｉｎｎＬ１ｐ０ｐｏｕｔｏ．ＲｅｕｔＡｍｏｇｓｌｓｎ
・
不同诱导方法对人外周血树突状细胞体外成熟的影响
刘璐李琳伍衡闵军王捷曾育杰褚忠华
探讨不同诱导方式对于体外培养的树突状细胞（ｅｄｔｌ，Ｃ免疫刺激ｄｎｒｉｃｌＤ）ｉｅｓｃ
通过ｒＧＣＦ和Ｉ一ｈＭ．ＳＬ４体外诱导的人外周血单核细胞来源的Ｄ分别用肿瘤Ｃ，
标记小鼠抗人Ｃ８与ＨＬ．Ｄ３ＡＤＲ、异硫氰酸（ｕｒｃｉｉｔｉｃａａｅＦＴ）ｌｆｏｅｅｎｓｈｏｙｎｔ，ＩＣ标记小鼠抗人Ｃ８、ｏＤ６

人外周血来源树突状细胞的诱导及培养方法的研究

第１１卷第８期
・５６１・
人外周血来源树突状细胞的诱导及培养方法的研究
张秀敏曲萍郭风袁媛王净王超王慧（１第四军医大学基础部病理与病理生理学教研室；四军医大学教学实验中心；２第３第四军医大学西京消化病医院陕西西安７０３）１０２
ａａｈｓｎｏＣｐｅｕｓｒｔｒｍｏｅｓｓｅｄｎｅｌａｄｓｏｇｙａｈｓｅｃｌ；Ｄｅｅｉｌｔｏｕａｅｐｅａｂｏｄｗｔｅｉ— ｌｄｅｉｆｒｃｒｓｏｅｖｕｐｎｉｃｌｔｎｌｄｅｉｅｌ ④ ＣｗｒｏａｄｆｍｈｍｎｐｒｈｒｌｌｉｔｏＤｏｇｓｎｒｖｓｓｅｒｉｈｈｎｄｃｉｆｍｎｎｅａｅｌｂｅｏｂｎｔｈｍａｒｎｌｃｔ／ｃｐａｅｃｌｙｓｍｌｔｇｆｃｏｎｅｏｂｎｎｈｍａｔｒｕｉ４ｕｔｎｏｏｏｕｌｒｌｙｒｃｍｉａｕｎｇａｕｏｙｅｍａｒｈｇｏｏｔｕａｉａｔｒａｄｒｃｍｉａｔｕｎｉｅｌｋｎ．⑤ ｏｅｃｓｎｏｎｉｎｎｅ
一
曲ｇＨｓｉｌｏｒｌａｙＭｅｉｎｎｖｒｔ，ｉｎＳａｎｉ１０２，ｈｎ．ｏｔ，ＦｕｈＭｉｔｒｄｃｅＵｉｓｙＸ＂，ｈａｘ０３Ｃｉｐａｔｉｉｅｉａ７ａ
【ｂｔｃ】ＯｊｃｖＴｉｕｓｎｔｌｈｈｅｏｒａｓｕｕｎｅｄｔｅｓｒｕａｅｐｅａｂｏ．ｔｏｓＡｓａｔｒｂｅｅｏｓｓａｄｅａｉｅｍｔｄｆｓｃｌｒｇｎｒｉｃｌｏｈｍｎｒｈｒｌｌｄＭｅｄｉｔｄｃｓｂｓｔｈｏｍｔｉｄｉｃｌｆｍｐｉｉｏｈ

EC9706肿瘤条件培养基对树突状细胞的影响

EC9706肿瘤条件培养基对树突状细胞的影响路静;江亚南;杨洪艳;黄幼田;秦珍珠;白睿华;郑智敏;赵明耀;董子明【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2008(043)006【摘要】目的:探讨食管癌EC9706细胞肿瘤条件培养基模拟的体外肿瘤微环境对人单核细胞来源的树突状细胞(DC)分化发育的影响.方法:密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,加入含rhGM-CSF和rhIL-4的RPMI 1640培养液诱导DC.第2天对照组同前培养,实验组在此基础上加入含rhGM-CSF、rhIL-4的EC9706肿瘤条件培养基;第4天加入超声破碎法制备的EC9706抗原;第6天加入脂多糖.第8天收集对照组正常成熟DC和实验组肿瘤相关DC(TADC),显微镜观察其形态,流式细胞仪检测其免疫表型,RT-PCR检测CD1a基因的表达,混合淋巴细胞反应及体外杀伤活性实验检测其诱导的细胞毒T细胞(CTL)的增殖能力及对EC9706细胞的杀伤能力.结果:第8天,与正常成熟DC相比,TADC细胞呈发育迟缓状态,CD86、CD1a及CD11c表达降低(P<0.01),CD1a基因不表达(正常DC较强表达),TADC 体外刺激形成的CTL增殖率及对EC9706细胞的杀伤率均降低(P<0.01).结论:EC9706肿瘤条件培养基所模拟的微环境对DC的诱导分化及功能有明显的抑制作用,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.【总页数】4页(P1098-1101)【作者】路静;江亚南;杨洪艳;黄幼田;秦珍珠;白睿华;郑智敏;赵明耀;董子明【作者单位】郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001;郑州大学基础医学院病理生理学教研室,郑州,450001【正文语种】中文【中图分类】R730【相关文献】1.肿瘤坏死因子-α预处理人脐带间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响 [J], 聂顺义;周彪;巴特;屠华雷;马双飞;李武2.单核细胞条件培养基对体外培养人血液树突状细胞的促成熟作用 [J], 韩少荣;王宝成;汪森明;张积仁;张健3.肿瘤坏死因子α对慢性粒细胞白血病源树突状细胞表达树突状细胞趋化因子1的影响 [J], 李亮亮;柴晔;张连生;曾鹏云;吴重阳;易良才;陈红鹰;白俊4.树突状细胞疫苗特异肿瘤多肽联合树突状细胞体外刺激淋巴细胞功能评估 [J], 杨朵;李彬;任军;周心娜;王硕;王小利;袁艳华;杨化兵;耿会珍;彭兵;李子博5.肿瘤抗原负载的树突状细胞对肝癌肿瘤浸润淋巴细胞体外抗瘤作用的影响 [J], 汪晓莺;梁志强;张一心;孙伟红;石佑琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

造血干细胞和单核细胞来源的树突状细胞在形态、表型及功能的对照实验研究

临床与病理杂志, 2015, 35(S1) S82腹腔镜治疗>5 cm胃GIST是否安全可行：前瞻性队列研究结果李非，曹锋，李昂，李嘉，方育(首都医科大学宣武医院普通外科, 北京 100053)[摘　要] 目的：由于担心术中肿瘤破裂，腹腔镜手术治疗>5 cm胃GIST仍存争议。

方法：为探讨腹腔镜手术切除>5 cm胃GIST的可行性及安全性，我们于2011年3月至2015年3月入组一前瞻性研究队列。

研究主要终点为术中肿瘤破裂发生率；次要终点包括：中转开腹率、手术时间、手术出血量、恢复流食及固体食物时间、术后住院时间及随访期间肿瘤复发率。

结果：共有22例患者进入研究队列，平均肿瘤直径(7.04±1.53)cm，范围：(5.2~10.8cm)，无术中肿瘤破裂。

平均手术时间(88.1±31.9)min，估计手术出血量(37.1±18.7)mL，无需输血病例。

恢复流食及固体食物时间分别为(1.1±0.6)d及(2.5±0.9)d。

平均术后住院时间为(5.4±5.8)d。

平均随访时间为(18.9±10.2)月，范围：(2~47月)，随访期内无复发病例。

结论：腹腔镜手术切除>5 cm胃GIST安全、可行。

Is it feasible and safe for laparoscopic resection for gastric GIST larger than 5 cm? Result froma prospective cohort studyFei Li, Feng Cao, Ang Li, Jia Li, Yu Fang(Department of General Surgery, Xuanwu Hospital, Capital MedicalUniversity, Beijing 100053, China)Abstract Objective: Role of laparoscopic resection for large (especially larger than 5 cm) gastric GIST is still in debate for the fear of intraoperative tumor rupture. Methods: To determine the feasibility and safety of laparoscopic approach in treatment of large gastric GIST, a prospective study was carried out between March 2011 and March 2015. Intraoperative tumor rupture was studied as primary outcome. Secondly outcomes were conversion rate, operating time, estimated blood loss, time of tolerate fluid and solid diet, length of postoperative hospital stay and recurrence rate at the end of the follow-up. Results: Twenty-two patients were included in this study with tumor size (7.04 ty-tw) cm (range, 5.2~10.8 cm). No intraoperative tumor rupture occurred. The median duration of operation was (88.1±31.9) min with estimated blood loss (37.1±18.7) mL. No patient needed blood transfusion. The average time until start of oral intake for fluid and solid diet was (1.1±0.6) days and (2.5±0.9) days, respectively. The median time for length of postoperative hospital stay was (5.4±5.8) days. The follow-up period for all the patients was (18.9follo) months (range, 2~47months). No local or distant recurrence was observed. Conclusion: Laparoscopic resection for large gastric GIST is feasible and safe. Laparoscopic surgery should be considered as standard approach in all cases irrespective of tumor size and location.doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.06.S130造血干细胞和单核细胞来源的树突状细胞在形态、表型及功能的对照实验研究董建涛，刘刚，蔡建辉(河北省人民医院，石家庄 050051)[摘　要] 背景：来自外周血单核细胞的自体DC疫苗作为一种很有前途的抗肿瘤免疫疗法，其面临的局限性包括细胞数量不足和功能缺陷。

猪外周血及骨髓源树突状细胞分化方法的建立

猪外周血及骨髓源树突状细胞分化方法的建立赵文影;周艳君;刘雪兰;童光志;姜一峰;虞凌雪;赵款;朱豪杰;高飞;李国新;张玉娇;李丽薇【摘要】本研究对猪源树突状细胞(dendritic cell,DC)的分化条件进行了摸索,通过对试验猪只日龄的选择、刺激物浓度和刺激时间的比较以及DC表面分子标记的选择,确定了猪外周血和骨髓源DC的分化条件.静脉采集15日龄猪只抗凝血分离获得外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),贴壁12 h 后,用终浓度80 ng/mL的GM-CSF和40 ng/mL的IL-4共同刺激7 d,用CD152作为DC的表面分子标志,试验结果显示:贴壁的单核细胞在GM-CSF和IL-4的共同刺激下,7 d后能够将超过60％的单核细胞刺激分化为CD152+的DC.取15日龄猪只的股骨和胫骨并冲洗骨髓腔,参考外周血来源DC的分化方法,结果显示:可以获得约63％的骨髓源单核细胞刺激分化为CD152+的DC.本研究建立的DC分化方法为进一步研究病毒感染后猪体建立获得性免疫应答的机制奠定了平台基础.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2019(027)002【总页数】5页(P61-65)【关键词】外周血单核细胞;树突状细胞;细胞分化【作者】赵文影;周艳君;刘雪兰;童光志;姜一峰;虞凌雪;赵款;朱豪杰;高飞;李国新;张玉娇;李丽薇【作者单位】安徽农业大学动物科技学院,合肥 230036;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;安徽农业大学动物科技学院,合肥 230036;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,扬州 225009;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海 200241【正文语种】中文【中图分类】S852.42树突状细胞（dendritic cell，DC）是目前已知的机体内功能最强的抗原递呈细胞，是将抗原递呈给B细胞和T细胞从而引发获得性免疫应答的主要细胞[1]。

外周血单个核细胞临床意义

外周血单个核细胞临床意义一、前言外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）是指外周血中的淋巴细胞、单核细胞和自然杀伤细胞等非红白细胞的单核细胞群体。

PBMCs在免疫系统中发挥着重要的作用，对于研究人体免疫系统、诊断疾病以及治疗某些疾病都有着重要的临床意义。

二、PBMCs的来源和组成PBMCs主要由淋巴细胞、单核细胞和自然杀伤细胞等组成。

其中，淋巴细胞包括T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK（自然杀伤）细胞；单核细胞包括单核吞噬细胞、树突状细胞和髓系前体；自然杀伤细胞则是一类具有非特异性杀伤肿瘤和感染性微生物能力的大颗粒淋巴样白血球。

PBMCs来源于外周血液，它们是由骨髓中分化出来的干造血祖细胞进入血液循环后，通过不同的受体和分子在血管内壁上的黏附分子上进行黏附，最终进入组织和器官中发挥免疫功能。

三、PBMCs的临床意义1. 免疫系统研究PBMCs是免疫系统中重要的组成部分，对于免疫系统的研究有着重要的意义。

通过对PBMCs进行深入的分析和研究，可以更好地了解免疫系统在不同情况下的反应机制和调节机制，为治疗相关疾病提供理论支持。

2. 诊断某些感染性和免疫性疾病PBMCs可以作为一种检测指标来诊断某些感染性和免疫性疾病。

例如，在HIV感染者中，CD4+T淋巴细胞数量减少是HIV感染进展的标志之一；在类风湿关节炎患者中，外周血单核细胞增多与关节滑膜组织中单核细胞浸润有关。

3. 评估药物毒性PBMCs可以用于评估某些药物的毒性。

例如，一些抗癌药物可以通过对PBMCs的毒性测试来确定其最大耐受剂量。

4. 细胞治疗PBMCs还可以用于细胞治疗。

例如，在肿瘤治疗中，患者的PBMCs可以被收集、扩增和激活，然后重新注射到患者体内，以增强免疫系统的反应能力。

四、外周血单核细胞临床意义的变化1. 感染性疾病在感染性疾病中，PBMCs数量和组成会发生变化。

例如，在流感感染中，T淋巴细胞和B淋巴细胞数量下降，而自然杀伤细胞数量升高；在结核感染中，单核细胞数量升高。

不同培养基和促成熟组合对人外周血来源树突状细胞发育的影响

ｈｍａｅｉｈｒｌｂ０ｄｄｒｖｄｄｎｒｔＣｃｌｄｖｌｐｕｎｐｒｐｅａｌ０ — ｅｉｅｅｄｉｉｅｌｅｅｏｍｅｔｎ
ＪＮＹｕｌ３ｌｅ３ＺＮＧＢｉｚ‘ ＨＡｎ３ＣＨＥＮＨ，３ ‘
ｌＴＭｎｌＧｒｗｏｔｐｓｍｅｉｍｎｉｅｅｔｍａｕａｉｎｐｏｔｇｍｅｈｄＭｅｈｏｏｕｉｚ５ａｄＣｅｌｏｔｙｅｄｕａｄｄｆｒｎｔｒｔｏｒｍｏｉｔｏ．ｆｎｔｄｓＴｔｌｅＧＭ—ＣＦ＋Ｌ一ｙｉＳＩ４ｃ— ｔｋｎｏｉａｉｎａｄａｔｒｏｔｒｔｏ，ｆｗｙｏｔｖｃｌｐｅｏｙｅｗｒｓｄｉｅｅｔｃｌｒｙｔｍｓｉｈｏｉｅｃｍｂｎｔｎｌｆｍａｕｅｍｅｈｄｌｏｅｏｃｔｍｅｒｅｌｈｎｔｐｅｅｕｅ，ｄｆｒｎｕｔｅｓｓｅｎｔｅｆｕｓｐｒａａｔｃｎａｎｎｈｈｎｅｆｃｔｋｎｓｗｅｅｄｔｒｎｄｂｕｅｎｔｎｏｔｉｉｇｔｅｃａｇｓｏｙｏｉｅｒｅｅｍｉｅｙＥＬＩＡ，ｄｆｒｎｄｕａｄｄｆｒｎｔｒｔｏＳｉｅｅｔｍｅｉｍｎｉｅｅｔｍａｕａｉｎｆｆｐｏｔｎｔｏｒｎｌｚｄｗｈｃｓｆｒＤＣｏｈｕｃｉｎｏｅｉｒｍｏｉｇｍｅｈｄｗｅｅａａｙｅ，ｉｈｗａｏｎｔｅｆｎｔｆｔｍｐａｔｂｒｈｌｇｃｌｏｓｒａｉｎｆｒｉｏｈｃｙｍｏｐｏｏｉａｂｅｖｔｏｍｍａｏ－

红桂木凝集素对树突状细胞生长的影响

ｒｓｅｔｅｙＴｅｍｏｐｏｏｉａｅｔｒｓｗｒｂｅｖｄｂｎｅｔｏｔａｃｓｏｅＴｅｃｌｐｏｉｒｔｎｗａａｙｅｅｐｃｉｌ．ｈｒｈｌｇｃｌｆａｕｅｅｅｏｓｒｅｙｉｖｒｐｉｌｍｉｒｃｐ．ｈｅｌｒｌｅａｉｓａｌｚｄｖｃｏｆｏｎ
ＲｅｕｔＡＬｏｌｒｍｏｅｎｔｎｙｔｅｐｏｉｒｔｎｏｕｓｅｓｃｅｉｎｏＬ１／７ｎＮＦ．ｈｅｓｌｓＬｃｕｄｐｏｔｏｌｈｒｌｅａｉｆＤＣｂｔｏｔｅｒｔｆ．２Ｐ０ａｄＴ一ＴｅｃｌｏｆｏｌａｈｏＩｌ
ｅｚｍｅｌｋｄｉｕｅｓｒｅｔａｓｙＥＩＡ），ｌｐｅｏｐｓｃａｇｓｗｒｖｕｔｙｆｗｅｔｔ（Ｃ．ｎｙ－ｎｅｉｍｍｎｂｎｓａ（ＬＳ．１ｈｎｔｅｈｅｅｅｅａａｅｂｏｙｏｒＦＭ）ｏＩｅ｝ｙｎｌｄｌｍｅｙ
ｍｏｏｙｅｄｒｅｅｄｉｃｃｌ（ｎｃｔ— ｅｉｄｄｎｒｔｅｌＤＣ）ＭｅｏｓＴｅｍｏｏｕｌａｅｌｗｒｂａｎｄｆｏｈａｔｙｈｍａｓｐｉｆｅｈｖｉ．ｔｄｈｎｎｃｅｒｌｅｅｏｔｉｅｍｅｈｕｎａｅｔｒｓｈｃｓｒｌｃ
【ｂｔｃ】ＯｊｃｖＴｕｙｒｃｒｓｉｎｎｎｉｌｔ（Ｌ）ｎｔｒｔｏｈｍｎｐｒｈｒｌｄＡｓａｔｒｂｅｔｅｏｔｔａｕｎａｅｓｃｎＡＬｏｅｏｈｆｕａｅｐｅｌｏｉｓｄａｏｐｌｇｓｅｉｈｇｗｉａｂｏ

人外周血单核细胞来源的树突状细胞的体外诱导

诱导培养５，多数细胞呈集落生长，细胞表型Ｃ８、ＤａＣ８、Ｄ０及Ｃ４分别是１．％、２８ｄ后Ｄ３Ｃｌ、Ｄ６Ｃ４Ｄ１４３１．％、
２．％、９９Ｏ１１．％及１．％。加入ｒＴＦＯ诱导后，培养第７天，胞表型Ｃ８、Ｄｌ、Ｄ６Ｃ４６２ｈＮ —Ｌ即细Ｄ３ＣａＣ８、Ｄ０及Ｃ４分Ｄ１
激ＤＣ成熟。倒置显微镜下观察ＤＣ形态，流式细胞仪检测ＤＣ表面标志物Ｃ８、Ｄｌ、Ｄ６Ｃ４、Ｄ４表Ｄ３ＣａＣ８、Ｄ０Ｃ１达水平，Ｍｒ法测定Ｄ用ｒｒＣ刺激同种异体Ｔ细胞增殖的能力。结果：人外周血单核细胞经ｒＧＣＦ及ｒＩ．ｈＭ．ＳｈＬ４
实用医学杂志２１第２００年６卷第血单核细胞来源的树突状细胞的体外诱导
彭卫斌沙卫红李瑜元聂玉强
摘要目的：探讨在体外从人外周血单核细胞诱导培养成熟的树突状细胞（ｅｄｔｅ，Ｃ）ｄｎｒｉｃｌＤ的方法。方ｉｃｌ法：培养过程分两阶段，第一阶段：采用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞．以黏附法分再
ｈｎ，Ｌｕｙａ，ＮＥＹ —ｉｇｏｇＩＹ —ｕｎＩｕｑａ．ｎ
ＤｐｒｅｔｆＧｓｏｎｅｏｇ，ＧａｇｈｕＦｒｅｐｅｓＨｓｉｌｅａｔｎａｔｅｔｒｌｙｕｎｚｏｉｔＰｏｌｏｐｔ，ｍｏｒｏｓａ ‘
别是２．％、８２３．％、８１９８ｌ．％、３６２．％及８％（第５天比较．Ｐ＜００）．与０均．５。成熟后的ＤＣ具备较强刺激Ｔ细胞增

树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用

树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用树突状细胞的体外培养主要通过分离外周血单核细胞（PBMCs）或骨髓细胞，经过不同的培养条件，使其分化成树突状细胞。

一种常用的方法是使用人造蛋白质GM-CSF和IL-4使PBMCs分化为树突状细胞。

此外，使用细胞因子如TNF-α和IL-1β也可以促进树突状细胞的分化。

通过培养条件的调控，可以获得成熟的树突状细胞，以及具有抗原递呈和免疫调节功能的活化状态。

经过体外培养的树突状细胞可以被用于诱导抗肿瘤免疫作用。

树突状细胞具有特异性抗原递呈的能力，可以对采集的肿瘤抗原进行处理和递呈给T细胞，从而激活T细胞的抗肿瘤免疫应答。

研究表明，经过树突状细胞处理的肿瘤抗原能够激活肿瘤特异性T细胞，增强T细胞的杀伤活性，从而抑制肿瘤生长和扩散。

此外，树突状细胞还可以通过诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的产生来增强抗肿瘤免疫。

树突状细胞经过处理后，可以递呈肿瘤相关抗原给T细胞，从而激活和扩增CTL。

这些CTL具有特异性杀伤肿瘤细胞的能力，从而对肿瘤产生直接的抗肿瘤作用。

研究表明，经过树突状细胞处理的肿瘤细胞可以显著增加CTL的活性，抑制肿瘤生长和扩散。

此外，树突状细胞还可以通过刺激NK细胞的活性来增强抗肿瘤免疫。

研究发现，树突状细胞可以分泌细胞因子，如IL-12和IL-15，这些细胞因子可以激活NK细胞的活性，并促进其对肿瘤细胞的杀伤作用。

此外，树突状细胞还可以通过递呈肿瘤相关抗原给NK细胞，增强其对肿瘤细胞的识别和杀伤能力。

因此，通过刺激NK细胞的活性，树突状细胞可以对肿瘤产生直接的抗肿瘤作用。

综上所述，树突状细胞的体外培养技术提供了一种重要的方法来诱导抗肿瘤免疫作用。

通过处理肿瘤抗原并递呈给T细胞、CTL和NK细胞，树突状细胞能够激活并增强这些免疫细胞的活性，从而抑制肿瘤生长和扩散。

因此，树突状细胞体外培养技术对于发展抗肿瘤免疫治疗具有重要的意义。

进一步的研究和应用将继续推动这一领域的发展，为抗肿瘤治疗提供更多的选择和希望。

人外周血单核细胞来源树突状细胞的成熟诱导

维普资讯
人外周血单核细胞来源树突状细胞的成熟诱导
李东印谷川闵军① 褚忠华 ① 区庆嘉 ① （津市第一中心医院普外科，津３０９）天天０１２
文献标识码Ａ文章编号１０－８Ｘ（０７）６０３－００４４２００－５１４０
式细胞仪检测其成熟表型Ｃ８、Ｄ３Ｃ８、Ｌ — Ｒ和ＦＴ —ｅｔｎ的内吞能力，ＬＳＤ０Ｃ８、Ｄ６ＨＡＤＩＣＤｘａｒＥＩＡ法检测其Ｉ一Ｌ１２的分泌，１Ｍ－ｒ法检测其刺激淋巴细胞增殖活性。结果：Ｄ０ＬＳＴＦＯ、Ｃ４Ｌ、Ｐ、Ｎ — 鸡尾酒法均可诱导Ｄｓ的成熟，中以鸡尾酒法诱导成熟的效果最ｔＣ其优，Ｄ３的表达率为６．１（００）成熟ＤｓＦＴ —ｅｔｎ的内吞能力明显下降；Ｃ８６９％Ｐ＜．５；ＣＩＣＤｘａｒ成熟ＤｓＩ一２分泌量明显高于未成ＣＬ１
ｅｔ．ｅｉｅｅｄｉｃｃｌｒｄｃｄｉｈｒｓｎｅｏｙｏｉｅＭ— ＳｄＩ－ＯａｙｅｄｒｖｄｄｎｒｔｅｌｗｅｅｉｕｅｔｅｐｅｅｃｆｃｔｋｎｓＧＣＦａＬ４．ｎｄｙ６，ｔｅｉｉｓｎｎｎｈｍｍａｕｅＤＣｅｅｐｌｅｔｒｓｗｒｕｓｄ
ｗｔａｈｏＤ０ＬＳＴＦ０ｏｃｔｉｏｃｔｋｎｓＴＦＯ，Ｌ６Ｉ・ｐＰＥ）Ｃｅｅｈｒｅｔｄａｅｄｃｏ．ｉｅｃｆ４Ｌ，Ｐ，Ｎ一ｒｃｋａｏｉｅ（Ｎ — Ｉ－，Ｌ１，Ｇ２．Ｄｓｒａｓｆｒ４ｈｉｕｔｎｈＣＬａｏｌｆｙｔｗｖｅｔ２ｎｉ

不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化

不同离心力分离外周血单个核细胞的条件优化熊静;王思雨;张云惠;吴利红;邓弘仙;刘阳;罗兴燕【摘要】目的观察不同离心力对人外周血单个核细胞 (PBMC) 分离的影响.方法采用聚蔗糖密度梯度离心法分离人外周血中PBMC, 不同分离离心力及洗涤离心力获取细胞, 利用流式细胞仪检测细胞得率和存活状况, 并进行统计学分析.结果分离离心力结果:离心力600g时获取的细胞数最多;24h检测的凋亡细胞数在离心力300～900g分离时差异无统计学意义 (P>0.05) 且相对较少, 增加离心力, 凋亡细胞数增加;72h检测离心力大于1 200g或低至300g时, 存活细胞数显著减少.洗涤离心力结果:离心力150g时细胞得率显著低于300～2 400g时;24h检测细胞凋亡显示离心力大于600g时, 凋亡细胞数增加;72h检测显示洗涤离心力大于1 200g 时, 存活细胞数显著减少.结论分离离心力在600～900g及洗涤离心力在300～600g均可用于PBMC的分离.%Objective To observe the effect of different centrifugal force on the separation of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) .Methods PBMCs were isolated by adopting the ficoll density gradient centrifugation at different centrifugal force of separation and centrifugal force of washing.Then the yield rate and survival status of PBMCs were measured by flow cytometry and the statistical analysis was performed.Results The results of separation centrifugal force:the maximum number of PBMCs was obtained at 600 g.The number of apoptotic cells between 300-900 g separation in detection at 24 hhad no statistically significant difference, moreover was relatively less, increasing centrifugal force, the number of apoptosis cells was increased;in the detection at 72 h, the centrifugal force higher than 1 200 g or low to 300 g, the survival cellswere significantly decreased.The results of washing centrifugal force:the centrifugal force was 150 g, the yield rate of PBMCs was significantly lower than that of 300-2 400 g.The apoptotic cells detected at 24 hshowed that the centrifugal force was more than 600 g, the number of apoptosis cells was increased;the detection at 72 h showed that the washing centrifugal force was more than 1 200 g, and the number of survival cells was decreased significantly.Conclusion The centrifugal force of separation is 600-900 g and centrifugal force of washing is 300-600 g, which all can be used for the separation of PBMC.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2019(016)003【总页数】3页(P289-291)【关键词】外周血单个核细胞;聚蔗糖密度梯度离心法;离心力【作者】熊静;王思雨;张云惠;吴利红;邓弘仙;刘阳;罗兴燕【作者单位】成都医学院检验医学院,成都 610500;成都医学院科研实验中心,成都610500;成都医学院科研实验中心,成都 610500;成都医学院科研实验中心,成都610500;成都医学院科研实验中心,成都 610500;成都医学院科研实验中心,成都610500;成都医学院科研实验中心,成都 610500【正文语种】中文【中图分类】R392.12外周血单个核细胞(PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞、吞噬细胞和树突状细胞等[1-3]。

雷帕霉素对人单核细胞来源的树突状细胞免疫功能的影响

雷帕霉素对人单核细胞来源的树突状细胞免疫功能的影响骆高江;方明;姜昌浩【摘要】目的：研究雷帕霉素对人树突状细胞(DC)免疫功能的影响。

方法分离外周血单个核细胞,在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM- CSF）、IL-4、胎牛血清及有或无雷帕霉素的培养条件下制备DC。

用流式细胞仪检测DC表型（CD1a、CD83、CD86、HLA- DR）；混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激能力；流式细胞仪检测DC吞噬功能和凋亡细胞数；ELISA法测定MLR上清液中的细胞因子。

结果与对照组比较,经雷帕霉素处理的DC表面CD1a、CD83、CD86、HLA- DR的表达明显降低（均P＜0.01）；对T 淋巴细胞刺激的能力下降（P＜0.01）；细胞吞噬能力下降（P＜0.01）；凋亡细胞数增加（P＜0.01），MLR中细胞因子（TNF-α、IL-10、IL-12）浓度降低（均P＜0.01）。

结论雷帕霉素对人树突状细胞免疫功能有明显的抑制作用,可能是其防止冠状动脉支架术后再狭窄的机制之一。

%Objective To investigate the effects of rapamycin on immune function of human monocyte- derived dendritic cel s (DC). Methods Human monocytes were isolated and cultured with fetal bovine serum, granulocyte- macrophage colony- stimulating factor (rhGM- CSF) and interleukin- 4 (rhIL- 4) with or without rapamycin. Al ogeneic T cel activation by DCs was tested by mixed lymphocyte reaction (MLR). ELISA was used to detect the expression of IL- 10, IL- 12 and TNF- α. The im-munophenotype, cel apoptosis and endocytic activity of DCs were measured by flow cytometry. Results The level of CD1a, CD83, CD86 and HLA- DR in rapamycin treatment group was lower than those in control group(P<0.01). Rapamycin inhibited the endocytic and T- cel stimulatingactivity of DCs (P<0.01), induced DC apoptosis, and decreased the secretion of IL- 10, IL- 12 and TNF- a(P<0.01). Conclusion Rapamycin can inhibit the immune function of human monocyte- derived dendritic cel s, which may be one of the mechanisms for prevention of in- stent restenosis.【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2014(000)021【总页数】4页(P1771-1774)【关键词】雷帕霉素;树突状细胞;免疫功能【作者】骆高江;方明;姜昌浩【作者单位】322000 义乌市中心医院心内科;322000 义乌市中心医院心内科;322000 义乌市中心医院心内科【正文语种】中文动脉粥样硬化（AS）是一种慢性炎症和自身免疫性疾病，炎症和免疫是致AS发病的中心环节。

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文章编号（Article ID）：1009－2137（2011）04－1010－05·论著·不同培养基对人外周血单核细胞来源树突状细胞发育的影响陈晨，刘元林，梁晓雷，朱恒，李红，吴英，毛宁，张毅军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学研究室，北京100850摘要本研究旨在探讨RPMI1640和IMDM两种培养液对诱导人外周血单核细胞向树突状细胞（DC）发育分化的影响。

利用GM-CSF+IL-4细胞因子组合，在培养条件一致的前提下，改变培养液种类，通过对成熟、未成熟DC形态观察，用流式细胞术检测细胞表型和吞噬能力、应用混合淋巴细胞反应（MLR）检测其刺激T细胞的增殖能力，用悬浮芯片技术检测DC与同种异体T细胞共培养后上清中所含细胞因子的变化，分析不同培养液对DC功能的影响。

研究结果表明，两种培养液培养所得的DC在形态上无显著差异，DC的吞噬能力以及CD14和CD83的表达亦无显著差异，但应用IMDM培养的DC的CD1a表达明显降低，且对T细胞增殖的刺激能力也显著降低；IMDM培养的DC高表达IL-6、IL-8和IL-10，而IL-12的表达则显著降低。

结论：不同的培养体系可获得功能不同的DC，IMDM培养的DC可能与免疫耐受有关，本研究结果为DC在临床上的应用提供了新思路。

关键词RPMI1640；IMDM；单核细胞；树突状细胞中图分类号R329．28文献标识码AEffect of Different Culture Mediums on the Development of Monocyte-derived Dentritic CellsCHEN Chen，LIU Yuan-Lin，LIANG Xiao-Lei，ZHU Heng，LI Hong，WU Ying，MAO Ning，ZHANG Yi Department of Cell Biology，Institute of Basic Medical Sciences，Beijing100850，ChinaCorresponding Author：ZHANG Yi，Professor，Senior Scientific Researcher．Tel：（010）66931320．E-mail：zhangyi@nic．bmi．ac．cn Abstract This study was aimed to investigate the effect of RPMI1640and IMDM on the development of human peripheral blood monocyte-derived dendritic cells．Under the same cytokines and culture conditions，the different medium types were tested，and the morphology of mature and immature dendritic cells was observed by microscopy，the cell phenotype and endocytosis ability were detected by flow cytometry．Furthermore，the immunoregulatory function of various DC was analyzed by mixed lymphocyte reaction（MLR），the expression of cytokine in culture supernatant of MLR system was also analyzed by Bio-plex technology．The results showed that there were no difference in morphology，CD14，CD83 expression and endocytosis ability between IMDM-cultured DC and RPMI-1640medium-cultured DC，but there was a lower expression of CD1a in IMDM-cultured DC．Moreover，DC cultured with IMDM displayed a significant reduction in stimulating T cell proliferation，and highly expressed IL-6，IL-8and IL-10，but low expressed IL-12．It is concluded that the different cultural mediums can induce DC with different functions and DC cultured with IMDM may correlated with induction of immune tolerance．The results of this study will provide a new idea for DC clinical application．Key words RPMI1640；IMDM；monocyte；dentritic cellJ Exp Hematol2011；19（4）：1010－1014树突状细胞（dendritic cells，DC）作为一种重要的免疫辅佐细胞，是体内最强的抗原呈递细胞。

它最大的特点是能够显著刺激初始型T细胞，激发机体免疫反应，在诱导免疫应答中起关键作用［1］。

因此DC在人类重大疾病（如肿瘤、移植免疫等）的发病和治疗中具有重要的研究价值。

由于DC在体内含量很低，约占白细胞总数的1%－2%，且缺乏特异性的表面分子加以识别与纯化，因此近年来有关DC种类和功能的研究成为焦点。

目前有关DC来2+造血干细胞来源的DC，另一种是外周血单核细胞来源的DC。

体外培养DC的培养液为RPMI1640［2，3］，结合粒巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimu-lating factor，GM-CSF）和白介素4（interleukin-4，IL-4），可诱导获得CD1a+CD83+具有抗原呈递功基金项目：国家重点基础研究资助项目（编号2010CB833604）；国家自然科学基金面上项目（编号31070996通讯作者：张毅，教授、研究员．电话：（010）66931320．E-mail：zhangyi@nic．bmi．ac．cn2011－02－14收稿；2011－03－29接受·0101·中国实验血液学杂志Journal of Experimental Hematology2011；19（4）：1010－1014能的DC。

另外，近年人们发现还有一种具有免疫耐受作用的DC。

初步研究结果显示，在免疫抑制因子的刺激下，可诱导获得具有抑制体内免疫反应的DC，在移植免疫和自身免疫性疾病的治疗中将发挥重要作用。

有关如何获得免疫耐受型DC成为当前DC领域的研究热点，为此本研究试图通过改变培养液种类，结合细胞因子配伍，探讨诱导人外周血单核细胞向耐受型DC的发育分化，为临床应用以及后续研究提供实验依据。

材料和方法材料与试剂IMDM和RPMI1640液体培养液购自Hyclone公司，胎牛血清购自Gibco公司；重组人GM-CSF和重组人IL-4均购自Pepro Tech公司；Ficoll淋巴细胞分离液购自天津血液病研究所；Monocyte isolation kit MiniMACS、Pan T isolation kit MiniMACS购自Miltenyi Biotec公司；流式细胞术相关鼠抗人单克隆抗体CD1a-FITC、CD14-PE、CD83-PE购自BD PharMingen公司；葡聚糖FITC-Dextron购自Sigma 公司；Bio-Plex细胞因子检测试剂盒购自北京BioRad公司；健康供者外周血由军事医学科学院附属307医院血库提供。

DC的培养与形态表型鉴定取正常人外周血，淋巴细胞分离液分离单个核细胞后按照Monocyte isolation kit MiniMACS说明分离CD14+细胞，分别用含10%FBS的IMDM和RPMI 1640完全培养液重悬，调整细胞浓度为1ˑ106/ml，细胞因子配伍为GM-CSF50ng/ml，IL-450ng/ml，种于6孔板中，每孔终体积2ml，于37ħ、5%CO2孵箱内培养，每3天半量换液，培养至第5天，显微镜下观察细胞形态。

同时，向培养5天的培养体系中加入LPS（1μg/ml）刺激细胞成熟，至第7天时在显微镜下观察细胞形态。

另外，收集培养至第5天的未成熟DC （immature DC，iDC）和加入LPS刺激后培养至第7天的成熟DC（mature DC，mDC），分别标记抗体CD14-PE、CD1a-FITC、CD83-PE，用流式细胞仪检测其细胞表型变化。

DC吞噬能力的检测收集用不同培养液培养的iDC和mDC，每管1ˑ106/ml，分别于37ħ（实验组）和0ħ（对照组）孵育1560分钟，用冷PBS终止实验，洗涤后上流式细胞仪检测吞噬效率。

不同DC刺激T细胞增殖能力的混合淋巴细胞反应（MLR）检测应用混合淋巴细胞的反应（MLR）方法进行检测，取健康志愿者外周血，分离单个核细胞，按Pan T细胞免疫磁珠分离试剂盒说明分离CD3+细胞，用含20%FBS的IMDM和RPMI1640培养液分别重悬CD3+细胞，调整细胞浓度为2ˑ106/ml，在96孔板中加入100μl/well作为反应细胞；以30Gy照射后的2种不同培养液培养出的iDC和mDC为刺激细胞。

反应细胞数目不变，将刺激细胞按一定的梯度浓度与反应细胞混合后悬浮于含20%FBS的IMDM或RPMI1640培养液中，在37ħ、5%CO2孵箱内培养96小时，培养结束前16小时加3H-TdR 1μCi/well。

收集细胞，用液体闪烁仪检测cpm值。

细胞因子表达的悬浮芯片法检测收集混合淋巴细胞反应体系中的培养上清，按照BioRad公司悬浮芯片检测细胞因子说明，检测细胞因子IL-6、IL-8、IL-10和IL-12的表达。

统计学分析应用Excel软件进行统计分析，数据以珔XʃSD表示，均数比较用双尾t检验，校验水准α=0．05，p＜0．05有统计学意义。

结果不同培养液对DC发育分化的影响从倒置显微镜下观察细胞形态可以看出，在培养初期RPMI1640培养液培养的DC较IMDM培养的DC形态均一，但随着培养时间的延长，IMDM培养的细胞形态也逐渐均一。