实验二 凝集、沉淀反应ppt课件
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级本科实验2w凝集反应课件
单向免疫扩散
2. 双向免疫扩散
【原理】
• 可溶性抗原与抗体分别加到琼脂板上相应的小孔中，两 者各自向四周扩散，若抗原与抗体相对应，两者相遇即 发生特异性结合，并在比例合适处形成白色沉淀线。
• 可以用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体）， 鉴定抗原性物质或免疫血清的浓度、纯度以及比较抗原 之间的异同点。
定义：的条件下，如果两者比例适当， 在一定的温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的凝 集块，这种现象叫做凝集反应。
凝集反应
直接凝集反应
【原理】 细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原在适当电解 质存在的条件下，可以直接与相应的抗体特异性 结合，形成肉眼可见的凝集块。
实验二
Part I 凝集反应 Part II 沉淀反应 Part III 免疫器官的组织结构观察
123
实验内容
• 凝集反应 – 直接凝集反应：玻片凝集
• ABO血型鉴定
• 沉淀反应
– 环状沉淀 – 琼脂扩散技术：单向免疫扩散、双向免疫扩散 – 电泳技术：对流免疫电泳实验
• 免疫器官的组织结构观察
Part I 凝集反应
• 皮质区 浅皮质区（非胸腺依赖区）：B细胞区（淋巴滤泡） 深皮质区（胸腺依赖区）：T细胞、M 、内皮细胞
• 髓质区 髓索：B细胞，浆细胞，部分T细胞和M 髓窦：大量M
2. 淋巴结（lymph node） 淋巴结皮质
被膜 淋巴小结 被膜下淋巴窦
深（副）皮质区
2. 淋巴结（lymph node）
对准序号加样
3. 对流免疫电泳试验
【原理】
• 在双向免疫扩散基础上加电泳的方法。 • 带电胶体颗粒在电场中移动的方向与其所带电荷有关。
抗原在pH8.6的缓冲溶液中带负电荷，由阴极向阳极移 动。抗体为球蛋白，只带微弱的负电荷，分子量又大， 因为电渗作用反而向负极倒退。 • 抗原与抗体在琼脂两孔间相遇时，在两者比例适当处形 成白色沉淀线。
【大学完整】沉淀反应ppt课件
优点
分辨率强，敏感度高，操作周期短，仅 需数小时，结果易于分析。
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40
沉淀反应在医学检验中的应用
1.主要用于血液、体液中蛋白质的测定。 2.优点：稳定性好，敏感度高，精确度高，简便快 速，易于自动化，无放射性核素污染，适合大批量 标本检测。
3.对流免疫电泳与火箭免疫电泳技术由于电渗的缘 故已不推荐使用。
第六章 Hale Waihona Puke 淀反应完整最新ppt1
第六章 沉淀反应
第一节 沉淀反应的特点 第二节 液体内沉淀试验
一、絮状沉淀试验 二、免疫浊度测定
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2
第三节 凝胶内沉淀试验 一、单向扩散试验 二、双向扩散试验
第四节 免疫电泳技术 一、对流免疫电泳 二、火箭免疫电泳 三、免疫电泳 四、免疫固定电泳
思考题
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38
免疫固定电泳示意图
SP G A M κ λ SP G A M κ λ
SP G A M κ λ
左图为IgG κ型, 中图为IgG λ型，右为正常
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39
免疫固定电泳
应用
最常用于M蛋白的鉴定与分型，也 用于尿中本周氏蛋白质的检测与κ、 λ分型，脑脊液中寡克隆蛋白的检
测与分型。
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11
免疫浊度测定
影响因素
1.抗原抗体的比例：反应体系中保持抗体过量 2.抗体的质量 ：特异性强，效价高，亲和力
强并使用R型抗体 3.抗原抗体反应液的最适PH为6.5～8.5 4.使用增浊剂
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12
免疫浊度测定
分类
1.透射免疫比浊法 2.散射免疫比浊法 3.免疫胶乳比浊法
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凝集反应和沉淀反应课件
第五章 凝集反应和沉淀反应 （P37）
凝集反应 (agglutination reaction)
概念：
细菌、细胞等颗粒性抗原悬液加 入相应抗体，在电解质存在下，两者 特异性结合，出现肉眼可见的凝集现 象。
Ag 凝集原 agglutinogen Ab 凝集素 agglutinin
颗粒性抗原： 凝集反应
原理：将已知抗体吸附于颗粒性载体 上，检测未知抗原
反向间接血凝试验结果判定
3.间接凝集抑制反应
方法：
待测样本（可溶性Ag？）+已知Ab
→ +已知致敏Ag颗粒（已成为颗粒性 Ag） → 观察是否有凝集现象
凝集为阴性，说明标本中无相应Ag; 不凝集为阳性，说明标本中有相应Ag
如： 用胶乳凝集抑制试验检测尿液 中绒毛膜促性腺激素（HCG）
体液免疫测定种类及敏感度
反应名称 抗原 结果 敏感度（m g/ml)
直接凝集 颗粒 凝集
0.5~1.0
间接凝集 抗原 现象
0.001~0.003
环沉
20~30
双扩
可溶 沉淀
3~5
单扩
抗原 现象
12~110
放射扩散
3~10
免疫电泳
50~200
思考题：
1.玻片凝集试验和试管凝集试验的区 别
2.反向间接凝集试验、间接凝集抑制 试验的原理及实例
协同凝集试验
协同凝集试验实际是用已知 抗体检测未知抗原，可用于的 细菌、病毒的直接检测
5 明胶凝集试验（gelatin-gglutination ,GAT)
属正向间接凝集反应 方法：
粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原（称为致敏 Ag颗粒）+待测血清→观察有无凝集现象。 凝集为阳性，说明血清中含相应的病毒Ab; 不凝集为阴性，说明无相应Ab。 用途：常用于抗HIV-1抗体及抗精子抗体的 检测
凝集反应 (agglutination reaction)
概念：
细菌、细胞等颗粒性抗原悬液加 入相应抗体，在电解质存在下，两者 特异性结合，出现肉眼可见的凝集现 象。
Ag 凝集原 agglutinogen Ab 凝集素 agglutinin
颗粒性抗原： 凝集反应
原理：将已知抗体吸附于颗粒性载体 上，检测未知抗原
反向间接血凝试验结果判定
3.间接凝集抑制反应
方法：
待测样本（可溶性Ag？）+已知Ab
→ +已知致敏Ag颗粒（已成为颗粒性 Ag） → 观察是否有凝集现象
凝集为阴性，说明标本中无相应Ag; 不凝集为阳性，说明标本中有相应Ag
如： 用胶乳凝集抑制试验检测尿液 中绒毛膜促性腺激素（HCG）
体液免疫测定种类及敏感度
反应名称 抗原 结果 敏感度（m g/ml)
直接凝集 颗粒 凝集
0.5~1.0
间接凝集 抗原 现象
0.001~0.003
环沉
20~30
双扩
可溶 沉淀
3~5
单扩
抗原 现象
12~110
放射扩散
3~10
免疫电泳
50~200
思考题：
1.玻片凝集试验和试管凝集试验的区 别
2.反向间接凝集试验、间接凝集抑制 试验的原理及实例
协同凝集试验
协同凝集试验实际是用已知 抗体检测未知抗原，可用于的 细菌、病毒的直接检测
5 明胶凝集试验（gelatin-gglutination ,GAT)
属正向间接凝集反应 方法：
粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原（称为致敏 Ag颗粒）+待测血清→观察有无凝集现象。 凝集为阳性，说明血清中含相应的病毒Ab; 不凝集为阴性，说明无相应Ab。 用途：常用于抗HIV-1抗体及抗精子抗体的 检测
最新5实验五经典免疫学检测技术：抗原抗体凝集实验和抗原抗体沉淀实验课件PPT
注意2：看并列词组同它相关的句子成分搭 配是否完全恰当。
一.“和”字（3）
1、通过检查，大家讨论、发现、解决了课外活动 中的一些问题。
2、产品要赢得消费者的喜爱，厂家必须在售后、 生产、销售等各个环节下足功夫，真正为消费者 着想。
3、人生价值和意义，其实并不在于别人对自己 如何膜拜、崇敬、羡慕，而在于自己对社会，对 历史的进步和发展作出何种贡献。
高考真题
（13江西）B.教育主管部门要求，各级各类学校学生的生 活用品以及床上用品都应由学生自主选购，不得统一配备。
（13四川）D.2013年财富全球论坛是成都自改革开放以 来举办的具有里程碑意义的国际盛会，是成都推进和发展 国际化建设进程面临的重大历史性机遇。
（13辽宁）A. 第二十五届阿姆斯特丹国际记录片电影节 12天里吸引了20多万名观众，来自40多个国家的近2500 名电影人、300多部电影前来参与。
注意3：看并列词组内部的逻辑顺序是否恰 当。
一.“和”字（4）
1.他背着总经理和副总经理偷偷地把这笔钱分别 存入了两家银行。 2.这次外出比赛，我一定说服老师和你一起去， 这样你就不会太紧张了，可以发挥得更好。 3.因患病住院，83岁高龄的黄昆和正在美国的姚 明没能到场领奖。
注意4：出现并列的多个人或物时，看是否 有歧义
A
+抗A血清
+抗B血清
B
3.实验方法
（3）手持玻片，前后左右轻轻转动，促 其充分混匀。
A
B
不凝集（-） 凝集（+）
•如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不 等的红色凝集块者，即为红细胞凝集；如混合液仍呈均匀 混浊状，则为不凝集。
4.实验结果
记录受检者红细胞凝集情况，根据 ABO血型鉴定表，判断受检者的血型。
一.“和”字（3）
1、通过检查，大家讨论、发现、解决了课外活动 中的一些问题。
2、产品要赢得消费者的喜爱，厂家必须在售后、 生产、销售等各个环节下足功夫，真正为消费者 着想。
3、人生价值和意义，其实并不在于别人对自己 如何膜拜、崇敬、羡慕，而在于自己对社会，对 历史的进步和发展作出何种贡献。
高考真题
（13江西）B.教育主管部门要求，各级各类学校学生的生 活用品以及床上用品都应由学生自主选购，不得统一配备。
（13四川）D.2013年财富全球论坛是成都自改革开放以 来举办的具有里程碑意义的国际盛会，是成都推进和发展 国际化建设进程面临的重大历史性机遇。
（13辽宁）A. 第二十五届阿姆斯特丹国际记录片电影节 12天里吸引了20多万名观众，来自40多个国家的近2500 名电影人、300多部电影前来参与。
注意3：看并列词组内部的逻辑顺序是否恰 当。
一.“和”字（4）
1.他背着总经理和副总经理偷偷地把这笔钱分别 存入了两家银行。 2.这次外出比赛，我一定说服老师和你一起去， 这样你就不会太紧张了，可以发挥得更好。 3.因患病住院，83岁高龄的黄昆和正在美国的姚 明没能到场领奖。
注意4：出现并列的多个人或物时，看是否 有歧义
A
+抗A血清
+抗B血清
B
3.实验方法
（3）手持玻片，前后左右轻轻转动，促 其充分混匀。
A
B
不凝集（-） 凝集（+）
•如混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不 等的红色凝集块者，即为红细胞凝集；如混合液仍呈均匀 混浊状，则为不凝集。
4.实验结果
记录受检者红细胞凝集情况，根据 ABO血型鉴定表，判断受检者的血型。
实验二抗体制备和凝集反应沉淀反应PPT参考课件
12
Ⅰ 单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
抗原浓度
13
Ⅱ 双向琼脂扩散实验:
14
方法：
1. 微波炉中彻底融化1% 琼脂
2. 取5ml 琼脂均匀铺在载玻片上
凝固
3. 在琼脂板上打5个孔
4. 在孔中加入相应样品 5. 37℃, 孵育24h
7
4. 预期结果
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
凝集程度 ++++ +++ ++ + -
8
管底沉淀 凝集程度
最高稀释比例
待测血清的滴度
9
Test 2 沉淀反应
——琼脂扩散实验
10
沉淀反应:
➢ 经典抗原抗体反应的一种。
制备绵羊红细胞溶液20%、 25%、30%、40%
取0.1ml 皮下注射
免疫小鼠
18
素材和资料部分来自 网络，如有帮助请下载!
➢
+
可溶性抗原
➢ 分类:
✓ 琼脂扩散 ✓ 环状沉淀反应 ✓ 絮状沉淀反应 ✓ 免疫电泳
相应抗体
沉淀线或沉淀环
11
➢ 琼脂扩散实验:
✓ 可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，在适当比例 下形成沉淀线或沉淀环。
✓ 分类:
单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 —— 定量实验
双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散 —— 定性实验
Ⅰ 单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
抗原浓度
13
Ⅱ 双向琼脂扩散实验:
14
方法：
1. 微波炉中彻底融化1% 琼脂
2. 取5ml 琼脂均匀铺在载玻片上
凝固
3. 在琼脂板上打5个孔
4. 在孔中加入相应样品 5. 37℃, 孵育24h
7
4. 预期结果
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
凝集程度 ++++ +++ ++ + -
8
管底沉淀 凝集程度
最高稀释比例
待测血清的滴度
9
Test 2 沉淀反应
——琼脂扩散实验
10
沉淀反应:
➢ 经典抗原抗体反应的一种。
制备绵羊红细胞溶液20%、 25%、30%、40%
取0.1ml 皮下注射
免疫小鼠
18
素材和资料部分来自 网络，如有帮助请下载!
➢
+
可溶性抗原
➢ 分类:
✓ 琼脂扩散 ✓ 环状沉淀反应 ✓ 絮状沉淀反应 ✓ 免疫电泳
相应抗体
沉淀线或沉淀环
11
➢ 琼脂扩散实验:
✓ 可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，在适当比例 下形成沉淀线或沉淀环。
✓ 分类:
单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 —— 定量实验
双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散 —— 定性实验
免疫学实验课沉淀反应19页PPT
，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！
免疫学实验课沉淀反应
21、没有人陪你走一辈子，所以你要 适应孤 独，没 有人会 帮你一 辈子， 所以你 要奋斗 一生。 22、当眼泪流尽的时候，留下的应该 是坚强 。 23、要改变命运，首先改变自己。
24、勇气很有理由被当作人类德性之 首，因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿． 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ，它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ，以便 让别一 只脚能 够再往 上登。
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！
免疫学实验课沉淀反应
21、没有人陪你走一辈子，所以你要 适应孤 独，没 有人会 帮你一 辈子， 所以你 要奋斗 一生。 22、当眼泪流尽的时候，留下的应该 是坚强 。 23、要改变命运，首先改变自己。
24、勇气很有理由被当作人类德性之 首，因 为这种 德性保 证了所 有其余 的德性 。--温 斯顿． 丘吉尔 。 25、梯子的梯阶从来不是用来搁脚的 ，它只 是让人 们的脚 放上一 段时间 ，以便 让别一 只脚能 够再往 上登。
《兽医免疫学》实验课件：实验二 沉淀反应
B
B
A
A抗体中针对B抗原 的抗体可以 跨越透过C抗原来自BCA
二、双向琼脂扩散试验
实验材料：
1、鸡传染性法氏囊病毒标准抗原； 2、鸡传染性法氏囊病毒标准阳性血清； 3、待检血清：来自受检鸡的新鲜血清； 4、平皿（Φ6cm）、打孔器、微量加样器等；
二、双向琼脂扩散试验
5、琼脂凝胶板： 将琼脂糖1.0克、NaCl 8.0克、蒸馏水100ml装
入三角烧瓶，煮沸，然后用吸管吸取7ml加入平皿 内（勿有气泡）使成约3mm厚的凝胶，待冷却凝 固后按如下图方式打孔。 注意:孔间距为孔的直径大小,打孔完毕要封底）
二、双向琼脂扩散试验
实验步骤：
中间孔加标准抗原， 外周孔加被检血清及阳性 血清（如要测被检血清的 效价，外周孔可倍比稀释 后依次加入）。加样后盖 上皿盖，37℃扩散24小时， 观察结果。
实验二 沉淀反应
一、环状沉淀反应 二、双向琼脂扩散试验
一、环状沉淀反应
目的：以炭疽环状沉淀反应为例，掌握 沉淀反应原理、操作方法及结果 的判定方法。
原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如 果二者相应，则可在抗原、抗体两 液接触界面形成白色的沉淀环。
一、环状沉淀反应
实验材料：
1．被检抗原（沉淀原）的制备： （1）热浸法 取可疑材料约1克，研碎，加入510mL生理盐水混合，转至试管内，煮沸30min，取出 冷却，用滤纸过滤，滤液即为被检的沉淀原。 （2）冷浸法 取疑为炭疽的皮革和兽毛，高压灭 菌后，取1cm2或兽毛数克浸于5-10倍的0.5%石炭酸生 理盐水中，4℃浸渍18-24小时，同上法过滤。
原理：
可溶性Ag与Ab在含有电解质的半固体（1%）琼 脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散相 遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相遇处 形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀带对于 组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而对其它 的Ag与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代表一种 AgAb系统的沉淀物。
凝聚性实验PPT课件
的用途和操作不同可分为免疫电泳、对流免疫电泳、火箭免疫电 泳等技术。
第46页，共47页。
第47页，共47页。
试验时出现白色沉淀带的最高抗原稀释倍数，即为血清的沉淀
价。
第34页，共47页。
二、琼脂凝胶扩散试验
利用可溶性抗原和抗体在半固体凝胶中进行反应，当抗原 抗体分子相遇并达到适当比例时，就会互相结合、凝聚，出 现白色的沉淀线，从而判定相应的抗体和抗原。常用的凝胶
有琼脂(agar)和琼脂糖(agarose)等。
(简称凝集试验)和间接凝集试验。
第2页，共47页。
抗原与相应抗体结合形成复合物，在有电解质存在下，复 合物相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或沉淀物，根据是 否产生凝聚现象来判定相应抗体或抗原，称为凝聚性试验。 凝聚性试验是最简单的一类血清学试验。根据参与反应的抗 原性质不同，分为由颗粒性抗原参与的凝集试验和由可溶性 抗原参与的沉淀试验两大类。
(一)间接血凝试验(indirect hemagglutination test，IHAT)： 亦称被动血凝试验（passive hemagglutination assay，
PHA)，是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相 应抗体，在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集。如将 抗体致敏于红细胞表面，用以检测样本中相应抗原，致 敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝集，称为反向间接 血凝试验(reverse passive hemagglutinatmn assay，RPHA)。
第42页，共47页。
第43页，共47页。
第44页，共47页。
第45页，共47页。
三、免疫电泳技术
免疫电泳技术是凝胶扩散试验与电泳技术相结合的免疫检测技 术，在抗原抗体凝胶扩散的同时，加入电泳的电场作用，使抗体或 抗原在凝胶中的扩散移动速度加快，缩短了试验时间；同时限制了 扩散移动的方向，使集中朝电泳的方向扩散移动，增加了试验的敏 感性，因此此方法比一般的凝胶扩散试验更快速和灵敏。根据试验
第46页，共47页。
第47页，共47页。
试验时出现白色沉淀带的最高抗原稀释倍数，即为血清的沉淀
价。
第34页，共47页。
二、琼脂凝胶扩散试验
利用可溶性抗原和抗体在半固体凝胶中进行反应，当抗原 抗体分子相遇并达到适当比例时，就会互相结合、凝聚，出 现白色的沉淀线，从而判定相应的抗体和抗原。常用的凝胶
有琼脂(agar)和琼脂糖(agarose)等。
(简称凝集试验)和间接凝集试验。
第2页，共47页。
抗原与相应抗体结合形成复合物，在有电解质存在下，复 合物相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或沉淀物，根据是 否产生凝聚现象来判定相应抗体或抗原，称为凝聚性试验。 凝聚性试验是最简单的一类血清学试验。根据参与反应的抗 原性质不同，分为由颗粒性抗原参与的凝集试验和由可溶性 抗原参与的沉淀试验两大类。
(一)间接血凝试验(indirect hemagglutination test，IHAT)： 亦称被动血凝试验（passive hemagglutination assay，
PHA)，是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相 应抗体，在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集。如将 抗体致敏于红细胞表面，用以检测样本中相应抗原，致 敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝集，称为反向间接 血凝试验(reverse passive hemagglutinatmn assay，RPHA)。
第42页，共47页。
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三、免疫电泳技术
免疫电泳技术是凝胶扩散试验与电泳技术相结合的免疫检测技 术，在抗原抗体凝胶扩散的同时，加入电泳的电场作用，使抗体或 抗原在凝胶中的扩散移动速度加快，缩短了试验时间；同时限制了 扩散移动的方向，使集中朝电泳的方向扩散移动，增加了试验的敏 感性，因此此方法比一般的凝胶扩散试验更快速和灵敏。根据试验
实验二 凝集、沉淀反应
2、打孔：
琼脂凝固后，用打孔器打孔成梅花型，针头取出孔中琼脂。
3、封底：
用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。
4、加样：
中间孔加抗AFP抗体，1、4孔加AFP阳性对照，2、3孔加待检血清，5、6孔加 生理盐水。
5、反应：
于湿盒，37C 24h。
1
A1g
6
2
6
2 Ag?
5
3
本试验方法简单，容易观察结果，可测定抗原的灵敏度 约为10～20μg／ml.
应用:
人血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。
2021/5/27
12
单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
2021/5/27
抗原浓度
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（二）双向琼脂扩散试验 （操作）
2.沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体在适当条件下结 合而出现的沉淀现象。
2021/5/27
3
实验材料
伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、 载玻片、接种环、记号笔、酒精灯；琼脂板、 打孔器、针头、毛细滴管、待测血清、 AFP阳 性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）等。
实验内容
1.直接凝集反应：玻片法（操作）
原理:
将可溶性抗原与相应抗体两种溶液置于琼脂糖凝胶的不 同位置，使两者在凝胶中各自向四周扩散,抗原与抗体相遇并 在比例合适处形成可见的乳白色沉淀线。
应用:
检测 AFP 、HBsAg, 协助疾病诊断.
2021/5/27
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双向琼脂扩散法测血清中AFP
琼脂凝固后，用打孔器打孔成梅花型，针头取出孔中琼脂。
3、封底：
用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。
4、加样：
中间孔加抗AFP抗体，1、4孔加AFP阳性对照，2、3孔加待检血清，5、6孔加 生理盐水。
5、反应：
于湿盒，37C 24h。
1
A1g
6
2
6
2 Ag?
5
3
本试验方法简单，容易观察结果，可测定抗原的灵敏度 约为10～20μg／ml.
应用:
人血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。
2021/5/27
12
单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40 1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
2021/5/27
抗原浓度
13
（二）双向琼脂扩散试验 （操作）
2.沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体在适当条件下结 合而出现的沉淀现象。
2021/5/27
3
实验材料
伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、 载玻片、接种环、记号笔、酒精灯；琼脂板、 打孔器、针头、毛细滴管、待测血清、 AFP阳 性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）等。
实验内容
1.直接凝集反应：玻片法（操作）
原理:
将可溶性抗原与相应抗体两种溶液置于琼脂糖凝胶的不 同位置，使两者在凝胶中各自向四周扩散,抗原与抗体相遇并 在比例合适处形成可见的乳白色沉淀线。
应用:
检测 AFP 、HBsAg, 协助疾病诊断.
2021/5/27
14
双向琼脂扩散法测血清中AFP
凝集反应和沉淀反应 PPT
以பைடு நூலகம்盐缓冲液为反应介质的抗原抗体特异 性结合的沉淀试验。
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)
免疫学实验课沉淀反应培训课件
免疫学实验课沉淀反应
17
;两者相遇时在比例合适处形成沉淀线。
抗体
抗原
免疫学实验课沉淀反应
11
免疫学实验课沉淀反应
12
双向琼脂扩散试验 免疫学实验课沉淀反应
13
(3)对流免疫电泳检测血清中AFP
• 1、3孔加抗AFP抗 体
+
1
• 2孔，AFP阳性对照
3
血清
• 4孔，待检血清
pH 8.6巴比妥缓冲液
免疫学实验课沉淀反应
2
免疫学实验课沉淀反应
实验室规则－要点
❖ 实验室安全－门窗、水、电、火源
实验结束后关闭门窗、水、电、火源 酒精灯和易燃物的使用注意事项；棉塞着火须报
告老师 电源－空气开关 水的使用
❖ 实验室安全－生物安全
白大褂的穿着要求
不得将实验无关物品带入实验室
不得在实验室内饮食
不得擅自开UV灯
污染及潜在污染物品须进行消毒处理
免疫学实验课沉淀反应
5
沉淀反应:
可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液、组织浸液、微生
物蛋白等）与相应抗体，在一定的抗原抗体比例下，在一定离 子浓度的缓冲体系中，发生结合后出现沉淀物称沉淀反应。
沉淀原，沉淀素。
环状法、絮状法、琼脂扩散法
类型：
★单向免疫扩散 ★双向免疫扩散 ★对流免疫电泳
★免疫比浊法
免疫学实验课沉淀反应
-
4
14
电场力
Ab
pI～7.5
电
Ag
pI～4.8
琼脂糖：在pH8.6的缓冲液中带负电 与琼脂糖接触的可移动液体：带正电
免疫学实验课沉淀反应
15
对流免疫电泳 免疫学实验课沉淀反应
医学免疫学实验之凝集反应和沉淀反应课件16页PPT
类风湿因子的检测
Normal serum
Patient’s serum
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Macroscopic agglutination of latex(乳胶颗粒) coated with human IgG serum from a patient with rheumatoid arthritis.
梅毒快速血清反应素RPR试验
1、4孔加AFP阳性对照 2、3、5、6孔加待检血清
3. 置于湿盒，37C 24h
•结果下周观察
学号
1
6
2
5
3
4
抗AFP抗体
对流免疫电泳检测血清中AFP
• 1、3孔加抗AFP抗体
+
• 2孔，AFP阳性对照血清
1
• 4孔，待检血清
3
pH 8.6巴比妥缓冲液
2
-
4
第2次 凝集反应与沉淀反应
1. 试管凝集（操作） 2. 双向扩散（操作）、对流免疫电泳（示教） 3. 抽血（每组一人，下次实验用）
• 肥达反应结果（观察结果注意：勿摇；先看对照管）
- 不凝集 + 小部分凝集，管底小量凝集，上层液体较混浊 ++ 部分凝集，管底部分凝集，上层液体微混浊 +++ 大部分凝集，凝块非全部下沉于管底而是稍有铺开，上层液体澄清 ++++ 完全凝集，管底有边缘不整齐的膜状凝集块，上层液体澄清透明。
沉淀反应 Precipitation Tests
RPR是心脂质（而不是密螺旋体的）梅 毒抗体试验，在疾病初期呈阳性。 将病人血清与炭联心脂质抗原试剂 混合，阳性血清显示凝集抗原颗粒。 (4分钟后观察颗粒凝集）
《凝集反应》课件
特性
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
THANKS
感谢您的观看
在最适pH值下，凝集反应的速 率和程度可能达到最大值。
pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
Part
04
凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
。
热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
THANKS
感谢您的观看
在最适pH值下，凝集反应的速 率和程度可能达到最大值。
pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
Part
04
凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
。
热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
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直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
结果及判断
❖ 盐水侧无凝集颗粒； ❖ 血清侧出现肉眼可见的凝集块为阳性，仍为均匀一致乳浊
液者为阴性。
注意事项
1、接种环在伤寒菌液取菌前后均需严格灭菌，以免出现假阳性。 2、注意涂菌时，先涂生理盐水侧，以免污染血清产生错误结果。 3、摇动玻片时不要把两凹内液体混在一起。
分类：
单向琼脂扩散实验: 仅抗原或抗体扩散 —— 定量实验
双向琼脂扩散实验: 抗原和抗体同时扩散 —— 定性实验
精品课件
（一）单向琼脂扩散试验 （示教）
原理:
适宜浓度的抗体预先在琼脂中混匀后制成琼脂 板，以适当距离打孔，将可溶性抗原至孔中，抗原向周围扩 散，与琼脂中抗体相遇，抗原与抗体比例适宜时，出现沉淀。 沉淀环的直径与孔中抗原浓度呈正相关，可根据沉淀环直径 大小从预先绘制成的标准曲线查出待测标本中抗原含量。
2.沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体在适当条件下结 合而出现的沉淀现象。
精品课件
实验材料
伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理 盐水、
载玻片、接种环、记号笔、酒精灯；琼脂板、 打孔器、针头、毛细滴管、待测血清、 AFP阳
实验内容 性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）等。
1.直接凝集反应：玻片法（操作） 2.沉淀反应： （1）单向琼脂扩散试验（示教） （2）双向琼脂扩散试精验品课（件 操作）
4、加样：
中间孔加抗AFP抗体，1、4孔加AFP阳性对照，2、3孔加待检血清，5、6孔加 生理盐水。
5、反应：
于湿盒，37C 24h。
1
6
2
5
3
4
抗AFP抗体
Ag1
6
Ab
5 4
Ag
精品课件
2 Ag? 3 Ag?
双向扩散法测血清中AFP实验结果
1
6
2
5
3
4
1
6
2
5
3
4
1、4两孔（阳性对照孔）与中心孔之间应出现清晰的乳白色沉淀线， 5、6（阴性对照孔）两孔与中心孔之间无沉淀线。
精品课件
二、沉淀反应:
➢ 经典抗原抗体反应的一种。
➢
+
可溶性抗原
➢ 分类:
✓ 琼脂扩散 ✓ 环状沉淀反应 ✓ 絮状沉淀反应 ✓ 免疫电泳
相应抗体
精品课件
沉淀线或沉淀环
琼脂扩散试验：
琼脂是一种含有硫酸基的多糖体，高 温时溶于水，冷却后凝固，形成凝胶，呈多孔结构， 充满水分，允许各种抗原抗体分子自由扩散。二者 于比例适当处相遇，发生沉淀，形成可见的沉淀带。
材料：
待测血清、 AFP阳性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）、 生理盐水、琼脂板、打孔器、针头、毛细滴管、酒精灯。
精品课件
双向扩散法测血清中AFP操作步骤
1、制备琼脂板：
1%盐水琼脂加热溶化，取5ml均匀铺与载玻片上。
2、打孔：
琼脂凝固后，用打孔器打孔成梅花型，针头取出孔中琼脂。
3、封底：
用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。
本试验方法简单，容易观察结果，可测定抗原的 灵敏度约为10～20μg／ml.
应用:
人血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量检测。
精品课件
单向琼脂扩散实验:
琼脂中含抗体
Ag
Ag
Ag
Ag
Ag
1:80
1:40
1:20
1:10
未知
沉淀环直径平方
精品课件
抗原浓度
（二）双向琼脂扩散试验 （操作）
原理:
将可溶性抗原与相应抗体两种溶液置于琼脂糖凝胶的不 同位置，使两者在凝胶中各自向四周扩散,抗原与抗体相遇 并在比例合适处形成可见的乳白色沉淀线。
操作步骤
➢ 取洁净玻片1张，用蜡笔划分2等份，如下图所示 ； ➢ 无菌操作，用接种环分别于一、二格内各加2～3环伤
寒杆菌诊断血清、生理盐水； ➢ 用接种环取待测菌液，分别涂布于生理盐水和伤寒血
清中，混匀； ➢ 轻轻摇动玻片，1~2分钟后观察结果。
生理盐水 ＋
待测菌液
ห้องสมุดไป่ตู้阴性
精品课件
伤寒血清 ＋
待测菌液
？
2、3两孔（待测血清）如与中心孔之间也出现了沉淀线，且一端与 相邻的阳性对照血清形成的沉淀线相吻合，则该待测血清为阳性。
如待测血清与中心孔出现了沉淀线，但与阳性对照血清的沉淀线相 交叉，不判为阳性。 如待测血清24h内与中心孔间无精沉品课淀件线则为阴性。
双向扩散法测血清中AFP注意事项
1、琼脂板一定平整、光滑 (无气泡)，琼脂不可过厚； 2、打孔不要划破边缘； 3、加样要加满而不溢出为止； 4、合理分配吸管，Ag、Ab吸管不能混淆。
精品课件
凝集反应与沉淀反应的比较
精品课件
思考题
❖ 1、凝集反应的原理及直接凝集反应玻片法的 用途是什么？
❖ 2、沉淀反应的原理是什么？
精品课件
作业
1 写出实验报告 2 分析凝集反应的结果和意义 3 绘出双向琼脂扩散试验结果图
精品课件
精品课件
应用:
检测 AFP 、HBsAg, 协助疾病诊断.
精品课件
双向琼脂扩散法测血清中AFP
甲胎蛋白（AFP）：
是一种在胚胎期由肝细胞和卵黄囊合成的α球蛋 白，存在于胎儿血清中，出生后血清中AFP几乎消失。 正常成人血清中仅含极微量的AFP，经典的免疫学方法 检测不出。
当肝细胞发生癌变时，AFP含量增高，测血清中AFP， 可协助诊断原发性肝癌。
常见抗原抗体反应的种类
抗原抗体反应又称血清学反应，主要有：
1、凝集反应 2、沉淀反应 3、补体参与反应 4、中和反应 5、免疫标记技术
精品课件
一、凝集反应
(一)概念
颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结合，在一 定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。
颗粒性Ag 又称凝集原 相应Ab 又精称品课凝件 集素
直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
原理 玻片凝集试验是一种快速简便的检测方法，即抗
原抗体的反应在玻片上进行，是一种定性的试验。用 已知抗体检测未知抗原。
本试验用已知的伤寒杆菌标准诊断血清鉴定未知 细菌。
材料
伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、 载玻片、接种环、蜡笔、酒精灯等。
精品课件
直接凝集反应玻片法--菌种鉴定
实验二
凝集、沉淀反应
精品课件
实验目的
1.熟悉凝集反应、沉淀反应的概念。 2.了解单向琼脂扩散实验的原理、方法及应用。 3.掌握直接凝集反应玻片法的原理、方法及其
用途。 4.掌握双向琼脂扩散实验的原理、方法、结果
判断。
精品课件
实验原理
1.直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体结合后所呈 现的肉眼可见的凝集现象。 。