20150420-化妆品美白功效评价-赵华(伽蓝)

米糠发酵产物 美白六肽
十字花科美白素
精密度 1.30%
— — — —
— — —
重复性 1.33%
— — — —
— — —
量效关系 0.5%~5% 1%~4% 2%~5% 2%~4% 2%~4%
2%~5% 无显效 无显效
韩国法规 2%~5% 1%~2% 2%~5%
2% 2%
— — —
IC50值 0.02% 0.8%
方法 对华北、西南、华东三个地区、四个季节的皮肤本底值进行数据采集，幵分 析四季黑色素指数及人体颜色的变化。
3.化妆品美白功效评价方法研究
人体试用试验—中华皮肤本底值测试
季节因素对测试部位的影响
部位
春季
手臂和脸颊部位的皮肤颜色最浅
夏季
左手背肤色最深，而左手臂、左脸颊肤色偏白；
秋季
左手背肤色最深，而左手臂、左脸颊肤色偏白
细胞生物学试验-鼠B16黑素细胞瘤试验
实验组 阴性对照
样品 未添加任何物质
细胞内酪氨酸水平测定
浓度
平行1
平行2
0.032%
0.032%
平行3 0.037%
实验组1#
烟酰胺
实验组2#
乙基醚
实验组3# 阳性对照
β-熊果苷 a-熊果苷
0.10% 0.20% 0.30% 1.00% 2.00% 3.00% 1.00% 2.00% 3.00%
浅黑(dark)
Ⅴ
-30°<ITA°≤10°
褐色(brown)
Ⅵ
ITA°<-30°
黑色(black)
参考文献：Chardon A,Cretois I,Hourseau C. Skin color typology and suntanning pathways. Int J Cosmet Scien,1991,13(5):191–208.
含量 2% 2~5% 1~2% 0.05% 2% 3% 2~5% 0.5% 2%
1.背景
日本厚生劳动省已批准的医药部外品美白成分（15个）
1.背景
台湾卫生福利部核准使用的美白成分（13种）
1.背景
韩国美白化妆品功效评价方法指南
功效实验
体外酪氨酸酶抑制试验 体外多巴氧化抑制试验 黑素生成抑制试验
化妆品美白功效评价研究
北京工商大学 赵华
2015.05.08. 010-68984949,13321182622;
zhaoh@btbu.edu.cn
主要内容
1 背景 2 技术路线
3 化妆品美白功效评价方法研究
4 结束语
1.背景
目的及意义
2014美白类化妆 品纳入特殊用途化 妆品进行管理;
化妆品的功效宣 称应当有充分的实 验或者评价数据支 持。
冬季
左手背肤色最深，而左手臂、左脸颊肤色偏白
结论
受试部位 手臂内侧皮肤颜色较其它部分受季节影响最小
季节
秋季部位间皮肤颜色差异最小
MI值符合入选参 MI值范围在160~260之间（仪器德国CK公司，MX18） 考标准
建议：在选择美白测试受试者时，应选择在相同季节，避免季节的差异 对肤色测试结果的影响。
α-熊果苷
96.85% 96.94% 97.45%
1.00%
2.00% 3.00% 浓度，g/mL
98.11% 4.00%
抑制率
98.71%
5.00%
3.化妆品美白功效评价方法研究
细胞生物学试验-鼠B16黑素细胞瘤试验
细胞增殖试验结果
细胞存活率
β-熊果苷 VC乙基醚
阳性对照 a熊果苷 100.00% 100.00%
3.化妆品美白功效评价方法研究
人体试用试验—中华皮肤本底值测试
中华本底值采集
选择北京、烟台、西宁、深圳、昆明等9个城市，共3600人，对当地人群额头、 脸颊、手臂（内侧）、颈部手背等7个部位，进行皮肤含水量、油脂分泌、皮肤颜 色、纹理度等11项指标进行本底采集，幵在四个季节里进行重复采集。
目的 分析春、夏、秋、冬四个季节里中国人群皮肤颜色在某一个季节的整体分布 情况，以及在单个季节里的数据中地区、部位间是否存在差异，以确定人体评价 的最佳季节、年龄段和受试部位，以及不同地区是否存在差异，幵明确测试指标 符合人体测试的参考基准。
3.化妆品美白功效评价方法研究
人体试用试验—中华皮肤本底值测试
地域因素对测试部位的影响
Chardon皮肤颜色6等级法分级标准
肤色分级
ITA°
皮肤颜色
Ⅰ
55°<ITA°
非常白(very fair)
Ⅱ
41°<ITA°≤55°
白(fair)
Ⅲ
28°<ITA°≤41°
中间白(medium)
Ⅳ
10°<ITA°≤28°
8.63% 0.5%
烟酰胺
抑制率
76.74% 79.18% 58.25% 62.48%
17.14%
1.0%
2.0% 3.0% 浓度
4.0%
5.0%
3.化妆品美白功效评价方法研究
生物化学试验-酪氨酸酶抑制试验
酪氨酸酶活性抑制率
100% 80% 60% 40% 20% 0%
3-o-乙基抗坏血酸 (维生素C乙基醚)
均值 22.75% 22.39% 27.23% 26.53% 15.28% 14.08% 21.41% 17.20% 14.23% 12.30% 20.10%
实验结果：β-熊果苷和维生素C乙基醚均能影响细胞内黑色素水平，且均使其呈 降低趋势；烟酰胺为显示对细胞内黑色素水平的影响。
3.化妆品美白功效评价方法研究
3% 1.80% 1.60%
2.40% — —
动力学测试 非竞争性抑制 非竞争性抑制 非竞争性抑制
— —
— — —
抑制酪氨酸酶活性的强弱：
α-熊果苷﹥β-熊果苷﹥Vc乙基醚﹥抗坏血酸葡糖苷﹥构树皮提取物﹥酵母亮白精华﹥烟酰胺
3.化妆品美白功效评价方法研究
生物化学试验-酪氨酸酶抑制试验
酪氨酸酶活性抑制率
机
胞外 抑制
转运
促进形成 内皮素自由基
理
通过黑素细胞的树枝状突起向角质形成细胞转运，上行至角质层
皮肤黑色
促进
UV
随角质层脱落
1.背景
美白功效评价方法
化学仪器分析检测
生物化学法
人体试用试验
美白功效 评价方法
细胞水平功效测定
动物实验法
分子水平功效测定
1.背景
韩国美白功效原料清单
韩国美白功效原料 Broussonetia Extract(小构树提取物) Arbutin(熊果苷) Ethyl Ascorbyl Ether（维生素C乙基醚/3-o-乙基抗坏血酸） Oil Soluble Licorice(Glycyrrhiza) Extract（油溶性甘草提取物） Ascorbyl Glucoside（抗坏血酸葡糖苷） Magnesium Ascorbyl Phosphate（抗坏血酸磷酸酯镁） Niacinamide（烟酰胺） (-)-alpha-bisabolol（红没药醇） Ascorbyl Tetraisopalmitate（抗坏血酸四异棕榈酸酯）
季节、对照、 盲样试验、 样本量、 受试者人数
实验室间 方法比对
3.化妆品美白功效评价方法研究
1 生物化学试验-酪氨酸酶抑制试验
2 细胞生物学试验-鼠B16黑素细胞瘤试验
3
人体试用试验
3.化妆品美白功效评价方法研究
生物化学试验-酪氨酸酶抑制试验
样品名称 α－熊果苷 维生素C乙基醚
烟酰胺 构树皮提取液 抗坏血酸葡糖苷
加强对化妆品 中功效宣称的
监督与管理
规范化妆品 市场、保护 消费者权益
提高产品技 术含量和市 场竞争力
化妆品美白功效评价研究
1.背景
酪氨酸
酪氨酸酶
抑
胞内 抑制
制 黑
多巴
酪氨酸酶
多巴醌
半胱氨多巴
褐黑素
色
素
多巴色素
多巴色素互变酶
形
DHI
DHICA
成
DHI氧化酶 （酪氨酸酶）
DHICA氧化酶
的
DHI-黑素 真黑素 DHICA-黑素
0.10% 91.12%
0.20% 80.83%
烟酰胺浓度 0.30% 0.50% 57.20% 41.55%
0.80% 15.63%
1.00% 9.71%
15% 9.24% 12.76%
1.50% 6.64%
参照美白剂酪氨酸酶活性抑制的量效关系，以及国外法规，确定黑色素水平测试 和酪氨酸酶活性测定样品浓度为1%、2%、3%；其中由于烟酰胺细胞存活率过 低，所以测定浓度选为0.1%、0.2%、0.3%。
0.50% 94.41% 96.56%
1% 73.24% 74.44%
2% 64.62% 42.09%
浓度
3% 58.51% 19.99
5% 43.02% 18.28%
8% 26.52% 15.13%
10% 11.06% 13.15%
阳性对照
细胞存活率 a熊果苷
平均值
97.48%
0.05% 95.24%
28.22%
0.30%
26.37%
26.62%
1.00%
15.27%
15.59%
2.00%
14.24%
13.97%
3.00%
21.49%
20.84%
1.00%
17.32%
17.71%
2.00%
14.59%
14.44%
3.00%
12.25%
12.51%
1%
20.06%
20.14%
平行3 22.49% 21.21% 27.29% 26.60% 14.98% 14.05% 21.89% 16.56% 13.65% 12.13% 20.10%
参考标准
建议：在选择美白测试受试者时，应选择在相同地域人群，避免地区的 差异对肤色测试结果的影ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ。
3.化妆品美白功效评价方法研究
人体试用试验—中华皮肤本底值测试
地区人群皮肤颜色与年龄
年龄与地域
结论
华北、西南和华东这三个地区中，西南地区人群皮肤颜色 随着年龄变黑的趋势最明显
年龄与部位
额头、左脸颊、左手臂和左手背的皮肤颜色都有差异，而 左手臂的皮肤颜色受年龄影响最小，该部位皮肤颜色数 据较稳定
3.化妆品美白功效评价方法研究
人体试用试验—中华皮肤本底值测试
地域因素对测试部位的影响
结论
肤色总体分级 地域与肤色
肤色分级主要集中在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级，没有Ⅵ级肤色存在，即无 黑肤色人群及部位
西南地区人群肤色最黑；华北地区人群肤色相对最白
肤色与部位
左手背肤色偏黑，左手臂肤色偏白
ITA°值符合入选 ITA°值在20~45之间，德国CK公司 MPA 9
人体试验
人工色素沉着后美白效果评价 过色素沉淀症中美白效果评价
2.技术路线
化妆品美白功效评价
酪氨酸酶实验
黑色素瘤试验
人体试用试验
方量 法效 研关 究系
酶活、反应温 度和时间、波 长
动 IC50 力 值学
研 究
受试者 测试流程 测试指标 数据分析
细胞毒性 酪氨酸酶抑制
黑素抑制
性别 地域 年龄 部位 本底
细胞存活率 （﹥50%）
0.3%
1%
3% 1%(100%)
小结
试验浓度
0.10% 0.20% 0.30% 1.00% 2.00% 3.00% 1.00% 2.00% 3.00%
1%
黑色素水平
无变化 无变化 无变化 降低 降低 降低 降低 降低 降低 降低
酪氨酸酶活性
降低 降低 降低 升高 降低 降低 降低 降低 降低 降低
1%
0.033% 0.026% 0.017% 0.042% 0.007% 0.032% 0.015% 0.020% 0.008% 0.019%
0.024% 0.025% 0.020% 0.038% 0.008% 0.014% 0.028% 0.021% 0.008% 0.027%
0.032% 0.024% 0.018% 0.043% 0.005% 0.026% 0.020% 0.022% 0.010% 0.029%
87.77% 89.27%
72.13%
91.44%
4.56% 0.5%
1.0%
2.0%
3.0%
浓度
4.0%
抑制率
95.69%
5.0%
3.化妆品美白功效评价方法研究
生物化学试验-酪氨酸酶抑制试验
酪氨酸酶活性抑制率
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
96.28% 0.50%
100% 80% 60%
构树皮提取液
抑制率
66.91% 73.27% 75.35% 56.02%
40%
31.14%
20% 15.27%
0% 0.5%
1.0%
2.0% 3.0% 浓度
4.0%
5.0%
3.化妆品美白功效评价方法研究
生物化学试验-酪氨酸酶抑制试验
酪氨酸酶活性抑制率
100% 80% 60% 40% 20% 0%
均值
0.034%
0.030% 0.025% 0.018% 0.041% 0.007% 0.024% 0.021% 0.021% 0.009% 0.025%
实验结果：β-熊果苷、维生素C乙基醚和烟酰胺均抑制细胞内酪氨酸酶活性。
3.化妆品美白功效评价方法研究
细胞生物学试验-鼠B16黑素细胞瘤试验
样品 烟酰胺 维生素C乙基醚 β-熊果苷 a-熊果苷
3.化妆品美白功效评价方法研究
细胞生物学试验-鼠B16黑素细胞瘤试验
实验组 阴性对照
实验组 1#
实验组 2#
实验组 3#
阳性对照
样品 未添加任何物质
烟酰胺
维生素C乙基醚
β-熊果苷 a-熊果苷
细胞内黑色素水平测定
浓度
平行1
平行2
/
22.44%
23.32%
0.10%
22.59%
23.37%
0.20%
26.17%