Mayer'苏木素染液(免疫组化)使用说明及注意事项
苏木素染色原理
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液(H-E）【型号】苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型；伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型。
【包装规格】货号：DH0006单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。
因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。
【主要组成成分】试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。
【检验方法】l、石蜡切片于二甲苯I、II中脱蜡；2、经无水乙醇和95%乙醇，经8O%乙醇，自来水冲洗；3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色，自来水洗；或苏木素染色液(Mayer)染色；4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；若用苏木素染色液(Mayer)染色后则不需分化；5、自来水冲洗返蓝；亦可用碳酸锂水溶液返蓝，自来水洗；6、入伊红染色液(水溶)染色，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再入伊红染液(醇溶)染色(忌水洗）；7、95%乙醇I、II中调色；8、无水乙醇I、II中脱水，二甲苯I、II中透明；9、封片胶封片，镜检。
免疫组化操作注意事项
有论文报道，修复时间过长，加重组织切片出现脱片现象。
3、过氧化氢的阻断时间
①3%过氧化氢灭活时间短点，10分钟左右。
②0.3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间，一般30分钟。 经过脱色素的切片，在加过氧化氢阻断时，需要观察切片，防止脱片。
4、PBS缓冲液的时间问题
免疫组化操作注意事项
一、组化的基本步骤
1、石蜡切片脱蜡至水（自来水）。 2、蒸馏水洗（浸泡）。 3、根据即用型一抗的具体要求进行分类修复： 一、修复液的种类 ①EDTA(PH8.0/9.0) ②柠檬酸 ③消化酶（胃酶、胰酶...）
④不修复
二、修复方式 ①高温高压修复 ②微波修复
③水浴修复
4、EDTA（PH8.0）高温高压修复，2分钟。 5、3%过氧化氢， 室温孵育 10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。 6、PBS 浸泡 2分钟 x3次。（浸泡6分钟） 7、滴加 一抗 即用型工作液，室温孵育3小时或 4 ℃ 过夜。 8、PBS 冲洗，2分钟 x3 次。 9、滴加扩增剂工作液（即用型二抗套装，试剂2，黄色瓶）， 37 ℃ 孵 育 20 分钟。
①新配置的PBS在完全溶解后1小时后再使用，PH值稳定。 ②未使用完的PBS需密时间后，PBS的水分蒸发后，盐分增高。冬季暖 气开放，湿度降低，将增加水分蒸发。注意切片上的PBS不可过少，易干 片，出现薄雾状盐渍。
2、增强剂孵育后的 PBS冲洗时间适当延长为佳，增强剂贴服切片的 能力长，易形成水膜，影响二抗的滴加。 5、一抗的孵育时间 ①温度37℃，孵育1-2小时。 ②温度4℃，恒温过夜。 ③室温（30℃），孵育3小时。（上午11时至下午2时）。 6、二抗的孵育时间 ①试剂2（黄色瓶，增强剂）室温20分钟。 ②试剂3（红色瓶，二抗）室温30分钟。
Mayer'苏木素染液(免疫组化)使用说明及注意事项
Mayer'苏木素染液(免疫组化)使用说明及注意事项
货号：G1080
规格：10mL/100mL
保存：室温避光保存，有效期至少一年。
产品简介：
Mayer'苏木素染液(免疫组化)适合免疫组化中组织切片的复染，染色后细胞核呈蓝色。
本产品为工作液，可直接使用。
染色液可重复使用多次，但染色效果会逐渐降低。
使用方法：
1、免疫组化显色后，将组织切片浸入苏木素染色液，也可以直接滴加到样本上染色
5-10分钟(深染)，或0.5-2分钟（浅染）。
2、浸自来水中冲洗去除多余的染色液。
3、颜色过深可以在分化液（1%盐酸）中分化几秒钟，再用氨水(0.25%)或PBS(pH7.4)
冲洗返蓝，镜下观察结果。
4、染色、分化、返蓝时间都需要预实验优化至最佳，分化和返蓝步骤可选。
5、根据显色液的种类，用水性封片剂直接封片或梯度酒精脱水，二甲苯透明后用中性
树胶封片。
注意事项：
1、第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
2、室温避光保存，2-8℃保存最佳，至少一年有效。
3、染色过程推荐浅染，通常只需能够分辨细胞核即可，颜色过深有可能影响细胞质颜色。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
苏丹Ⅲ染色试剂盒说明书
苏丹Ⅲ染色试剂盒说明书货号：G1511规格：3×50mL保存：RT避光，12个月。
产品组成：名称3×50ml Storage试剂(A):Mayer苏木素染色液50ml RT避光试剂(B):苏丹Ⅲ分化液50ml RT试剂(C):苏丹Ⅲ染色液50ml RT避光产品说明：脂质(Lipid)是中性脂肪、类脂及其衍生物的总称，其共同的物理特性是不溶于水，易溶于有机溶剂(如乙醇、乙醚等)。
中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油组成的脂类，呈中性。
中性脂肪是储存能量的方式之一，在氧化时释放出能量。
在正常情况下，除脂肪细胞外其他细胞在光学显微镜下几乎看不到脂滴，如果细胞质内出现大量脂滴即为脂肪变性，常见于肝细胞、心肌细胞、肾曲管上皮细胞等。
中性脂肪染色经常采用苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、苏丹黑B、油红O法等。
苏丹染料脂质染色的机理一般认为纯属物理学的脂溶作用和吸附作用。
苏丹类染料由于在脂质中的溶解度大于在有机溶剂的溶解度，所以染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去，使脂质呈现出染液的颜色。
苏丹Ⅲ染色液主要用于显示组织器官的脂肪变性和类脂质的异常沉着，常发生于肝、肾、心等实质脏器的脂肪变性，细胞内出现多数中性脂肪滴；鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质。
标本不采用含有乙醇的固定液(如需固定可采用10%中性福尔马林)、也不采用石蜡切片，需用冰冻切片或碳蜡切片。
自备材料：70%乙醇、蒸馏水、显微镜、甘油明胶封片剂操作步骤(仅供参考)：1、新鲜组织低温切片，一般-20℃～-25℃。
如样本为脂肪瘤，应调节至-30℃。
2、冰冻切片6～15μm(6～8μm为佳)，贴于载玻片上。
3、蒸馏水稍洗。
4、入Mayer苏木素染色液，复染核1min。
5、自来水洗后，苏丹Ⅲ分化液分化数秒，流水洗至核为蓝色。
6、蒸馏水冲洗后，入70%乙醇稍微浸洗一下。
7、入苏丹Ⅲ染色液，浸染30min。
8、70%乙醇分化数秒，自来水洗。
Mallory 磷钨酸苏木素染色液(PTAH 自然氧化法)使用说明
Mallory磷钨酸苏木素染色液(PTAH自然氧化法)使用说明货号：G1381规格：100mL保存：室温避光保存，有效期24个月。
产品说明：肌纤维(Muscle fiber)属于肌组织成分，由肌细胞组成。
根据形态和功能特点，肌纤维可以分为平滑肌(又称横纹肌)、骨骼肌和心肌。
肌纤维染色的方法有很多种，如丽春红法、苯胺蓝法、钨磷钨酸苏木素法等。
Mallory PTAH染色液为自然氧化成熟的染液，染色能力好，保存时间长。
适用于CNS、一般组织结构以及所有标准固定液固定的组织。
多用于显示横纹肌的横纹，用该法对横纹肌肉瘤进行诊断。
染色时间依配制方法、所用固定液和所显示的组织结构而异。
操作步骤(仅供参考)：1、组织固定于10%福尔马林固定液，常规脱水包埋。
2、石蜡切片厚4μm，常规脱蜡至水。
3、入新配制好的PTAH氧化剂中氧化5min。
4、稍水洗。
5、入草酸溶液漂白1-2min。
6、自来水冲洗2min，用蒸馏水洗1次。
7、入Mallory PTAH染色液(化学氧化法)浸染(加盖)，染色24h~48h。
8、取出切片，直接用95%的乙醇洗去多余的染液。
9、常规脱水透明，中性树胶封片。
染色结果：横纹肌的横纹、纤维素、细胞核、红细胞和神经胶质纤维深蓝色胶原纤维、软骨基质棕红色粗的弹性纤维紫色注意事项：1.若染色后所显示横纹的蓝色不够或横纹呈鲜红色，则说明染色液氧化的时间不够，或者可能是已过度氧化，这就需要重新换染液或者配制新染液。
2.磷钨酸苏木素染液染色后不要水洗，用95%的乙醇洗时也要迅速，因为水洗或乙醇洗的时间稍长，都可以洗脱磷钨酸苏木素所染的颜色。
3.钨酸苏木素染色为进行性染色，因此不要过染，在染色24小时后，可取出在显微镜下观察着色程度。
4.染色也可以在60℃染色几个小时，但是效果可能没有常温染色好。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
免疫组化染色（石蜡切片）操作步骤及结果分析方法（精髓版）
免疫组化染色（石蜡切片）操作步骤及结果分析方法（精髓版）免疫组化染色（石蜡切片）操作步骤及结果分析方法一、原理及应用免疫组化，简单说是用标记的抗体对组织中相应抗原进行定位、定性和部分定量的分析。
二、操作步骤：（1）将石蜡组织切片置于65°C恒温箱，烤片1h左右。
（2）脱蜡：二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精（由高到低）各5min。
（3）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。
（4）0.5% Triton X-100通透（PBS配制），目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。
Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。
当然了，如果检测的是膜抗原无需通透，忽略该步骤。
（4）抗原修复：使用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，微波炉微波高火 3min，之后转成低火 15-30min。
注：福尔马林或多聚甲醛固定，会导致蛋白交联，而解交联的过程称为抗原修复。
所以冰冻切片不需要抗原修复！！抗原修复方法有多种，一般包括两大类：酶抗原修复(胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K) 热抗原修复(高压蒸汽法、微波法、水浴加热法)。
微波法最为常用。
（5）1×PBS 洗涤3次，每次5min。
（6）3% H2O2，室温孵育30min，目的是灭活内源性过氧化物酶。
（7）1×PBS 洗涤3次，每次5min。
（8）使用1% BSA 进行室温封闭30min，用于封闭非特异性抗原表位。
（9）根据抗体说明书使用合适浓度的特异性一抗，4°C 湿盒中静置过夜孵育。
（10）次日取出切片，室温下复温30min。
（11）1×PBS 洗涤3次，每次5min。
（12）按照免疫组化二抗试剂盒说明书操作。
（13）DAB 显色：DAB 显色液按说明书配制，使用时滴加到血管组织上，显微镜下观察并计时，待目的蛋白显色呈棕黄色时结束显色。
细胞免疫组化实验步骤
细胞免疫组化实验步骤细胞免疫组化实验步骤：1）脱蜡与水化：将石蜡切片放置于60°烤箱烤片30-60min，这一步是为了使蜡片水分蒸发和石蜡融化，好让组织切片牢固地贴在玻片上。
而后依次将其放入二甲苯I、II、III各10min，乙醇梯度（高至低：100%、95%、80%、70%）各2min，水洗5min（不要直接对着切片冲洗）。
PBS洗3次，3 min/次。
2）细胞通透与封闭：用预热的封闭通透液（40ml PBS+120ul TritonX-100+400ul 30%H2O2）浸润切片30min（RT 避光），降低内源性过氧化物酶的活性。
PBS洗3次，3 min/次。
3）抗原修复：由于制作石蜡切片时，甲醛固定使得蛋白之间交联及醛基的封闭作用从而失去抗原性，这一步就是让胞内的抗原决定簇重新“满血复活”。
这里常用微波修复，pH 6.0的0.01M柠檬酸钠缓冲液浸泡切片，在微波炉里高火4min至沸腾后，取出自然冷却至室温，重复2次，每次补足液体以免干片。
（当然有的朋友用酶修复法也是可以的）。
PBS洗3次，3 min/次。
4）血清封闭：用与二抗同一来源的血清封闭一些非特异性结合位点。
此时可用“祖传”的油性笔围绕组织画圈，并对圈内的组织滴加稀释好的血清，37℃温箱中30min,用滤纸吸去多余的血清。
5）孵育一抗：对圈内的组织（面积为1×1）滴加稀释好的一抗20ul，4℃过夜或者37℃1-2h。
PBS洗3次，3 min/次。
（一般4℃过夜后，需要将切片放置37℃复温45min，防止脱片以及可使抗原抗体结合的更稳定）6）孵育二抗：对圈内的组织（面积为1×1）滴加稀释好的二抗20ul，37℃1-2h，PBS洗3次，3 min/次。
7）切片显色：用DAB-H2O2显色10min，显色液最好是现用现配，此时要通过显微镜观察染色是否明显，10min内即可用蒸馏水终止显色。
8）复染及封片：为了形成细胞轮廓，更好的定位目标蛋白，可用Mayer苏木素染色30s，水洗，盐酸酒精分化2s，流水浸入15min。
油红O染色液(细胞专用)使用说明
6、 入ORO Buffer 1min。
7、 流水冲洗，晾干。
染色结果:
中性脂肪 磷脂 细胞核
橙红色或橘红色 粉红色 蓝色
注意事项:
1、 ORO染色液不够稳定，易产生沉淀，不宜提前配制。
2、 Mayer 苏木素染色液复染时间不能过长。
3、 染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
货号：G1262 有效期: 12 个月 产品内容：
油红 O 染色液(细胞专用)使用说明
名称
4×20ml
4×50ml
Storage
试剂(A): ORO Fixative
20ml
50 ml
RT 避光
Hale Waihona Puke 试剂(B): ORO B1: ORO Stain A
Stain
操作步骤(仅供参考)：
1、 制备新鲜骨髓、血液涂片，入ORO Fixative固定10～15min。
2、 取出涂片，放于流通的空气中10～15min。
3、 入新配制好的ORO Stain，浸染15min。
4、 入60%异丙醇漂洗20～30s，流水冲洗，入蒸馏水稍微清洗。
5、 入Mayer苏木素染色液，复染核2min。
B2: ORO Stain B
12 ml 8 ml
30 ml 20 ml
4℃ 避光 RT
按B1:B2=3:2比例混合静置10min, 即为ORO Stain，不宜提前配制
试剂(C): Mayer苏木素染色液
20ml
50 ml
4℃ 避光
试剂(D): ORO Buffer
20ml
50 ml
免疫组化实验方法
免疫组化用户自备试剂：1．粘片剂APES 或POLY-L-LYSINE（博士德公司有售）。
2．免疫组化专用PBS（pH7.2-7.6）配法：1000ml 蒸馏水中加氯化钠8.5g, Na2HPO42.8g,NaH2PO4 0.4g。
如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。
3．0.01M 枸橼酸盐缓冲液：1000ml 蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g, 枸橼酸(C6H8O7·H2O ) 0.4g。
4．DAB显色试剂盒（博士德公司有售）。
A.石蜡切片热修复抗原染色程序:1. 载玻片防脱片剂处理:可选择APES 或Poly-Lysine。
捞片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以使切片紧密粘附。
2. 切片常规脱蜡至水。
脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60 °C 恒温箱中烘烤20min。
然后按下列步骤进行：1) 组织切片置于二甲苯中浸泡3 次，每次10 min ；2) 无水乙醇中浸泡3 次，每次10 min ；3) 依次通过质量分数为95% 、70% 、50% 的梯度乙醇溶液，每次 10 min ；4) PBS 中浸泡10 min 。
3. 30%H2O2 1 份+蒸馏水10 份混合,室温5-10 分钟以灭活内源性酶。
蒸馏水（可用PBS）洗3 次。
4. 热修复抗原:将切片浸入0.01M 柠檬酸钠缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10 分钟后，反复1-2 次。
冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1-2 次。
5. 滴加5%BSA 封闭液,室温20 分钟。
甩去多余液体, 不洗。
6. 滴加适当稀释的一抗（小鼠或兔IgG），37 ℃ 1 小时左右或20℃时2 小时左右。
也可4℃过夜。
PBS（pH7.2-7.6）洗2 分钟×3 次。
（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。
一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。
百度文库-Mayer苏木素说明书
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Mayer苏木素染色液说明书
货号：S-1507
组成：
组成规格
Mayer 100ml
说明书1份
产品简介：
苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
Leagene Mayer苏木素染色液属于明矾苏木素液的一种，苏木精含量小，无氧化膜形成，对细胞核染色很清晰，不着染胞质和纤维成分，属进行性染色，故染色后不需盐酸乙醇分化，染色时间约3～5min。
常用于糖原等特染、酶组化和免疫组化等染色后复染细胞核，尤其适用于在经过特殊染色后不能经酸处理时对细胞核的复染，此时染色时间较短(通常5-10min)，染完后即可进行蓝化，不必分化。
在特殊染色中，Mayer苏木素染色液与天青石蓝B联合染色，使细胞核染色后不被后续的酸性染料所褪色。
保存：4℃避光保存，保质期12个月。
细胞核染色原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
注意事项：
1.脱蜡应尽量干净。
系列乙醇应经常更换新液。
2.您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
染色结果：
结果判定：
细胞核呈蓝色。
苏木染色方法
苏木染色方法苏木染色是一种常用的组织切片染色方法，常用于生物医学领域的组织学研究中。
苏木染色可以清晰地显示细胞核和细胞质，有助于观察细胞结构和组织形态。
下面将介绍苏木染色的方法步骤和注意事项。
1. 材料准备。
苏木染色所需材料包括，苏木精溶液、甲醛固定液、酒精、蜡块、切片、显微镜等。
其中，苏木精溶液和甲醛固定液是必不可少的试剂，其浓度和保存条件需严格控制。
2. 样本处理。
首先，将待染色的组织样本进行固定处理，一般采用甲醛固定液固定组织，固定时间视样本大小而定，一般为6-24小时。
固定后，进行脱水和透明化处理，使组织脱水透明。
3. 切片制备。
将处理后的组织样本进行包埋、切片，制备出5-8μm厚的切片。
切片后，将其放置在温水中，使切片展开并粘附在载玻片上。
4. 染色步骤。
将载玻片放置在苏木精溶液中浸泡，时间一般为5-10分钟，然后取出晾干。
接着，将载玻片放入蜡熔点略高于60℃的热蜡中，使切片蜡块包埋。
包埋后，切片放入苏木精溶液中浸泡，时间一般为2-5分钟。
最后，将切片取出，经过脱水、透明化处理后，封片即可。
5. 注意事项。
在进行苏木染色时，需要注意苏木精的浓度和染色时间，过浓的苏木精会使细胞核染色过深，影响观察效果；染色时间过长也会导致染色过深。
此外，切片的制备过程中要保持刀片锋利，切片厚度均匀，以确保染色效果。
总结。
苏木染色方法是一种简单易行的组织切片染色技术，通过对组织样本的固定、切片和染色处理，可以清晰地显示细胞核和细胞质的结构，为细胞学和组织学研究提供了重要的技术支持。
在实际操作中，需要严格控制各个步骤的条件和时间，才能获得理想的染色效果。
通过本文的介绍，相信大家对苏木染色方法有了更深入的了解，希望能够在实验操作中取得良好的结果。
祝大家实验顺利！。
苏木素染液的配制
苏木素染液的配制1) Harry`s苏木素苏木素 1g无水酒精10ml硫酸铝钾 20g蒸馏水 200ml氧化汞 0.5g冰醋酸 8ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水加热溶解硫酸铝钾，然后两液混合并煮沸，加入氧化汞，继续加热和搅拌至溶液为深紫色，立即冷却，恢复至室温后过滤备用。
(2) 改良Lillie-Mayer`s苏木素苏木素 2.5g无水酒精 20ml硫酸铝钾 5g蒸馏水330ml碘酸钠250mg甘油150ml冰醋酸 10ml分别用无水酒精溶解苏木素，蒸馏水溶解硫酸铝钾，然后两液混合后，依次加入碘酸钠、甘油和冰醋酸。
(3) Mayer`s苏木素苏木素100mg蒸馏水100ml碘酸钠 20mg硫酸铝铵 5g柠檬酸100ml水合氯醛 5g用蒸馏水溶解苏木素后，依次加入碘酸钠、硫酸铝铵和水合氯醛，过滤后备（4）Ehrlich氏苏木素（1886）苏木素1g无水酒精50ml甘油50ml硫酸铝钾 7.5g蒸馏水50ml冰醋酸5ml将苏木素溶于无水酒精里，硫酸铝钾溶于蒸馏水中，然后所有的试剂都加在一起，充分搅拌均匀后，放于窗台上阳光充足的地，让其慢慢氧化成熟，大约需四个星期，才可使用。
该液量种很好的细胞核染色液，用它染后，细胞核染色清晰，不易过染。
对于用酸脱钙组织细胞核的染色，该试剂优于其它各种苏木素。
这种自然氧化成熟的苏木素，可长期使用，不会变质。
但染色时间较长，需要20分钟以上。
如需急用而苏木素又未成熟时，该液可加入20-30mg的碘酸钠，以促使其迅速氧化成熟，但这试剂配成后，就不是原来的苏木素，不能长期使用，但起码可用半年左右。
（5）Weigert氏铁苏木素A液：苏木素 1g无水酒精100ml将苏木素溶于酒精，让其慢慢氧化成熟，约四周以后，便可以使用，或者用成熟的10%的苏木素酒精配制，即时可用。
B液：29%三氯化铁水溶液 4ml蒸馏水95ml盐酸1ml临用时，取A液和B液等份混合，即可使用，在4小时内使用完毕，如果超时，这种试剂便过分氧化而失效。
免疫组化的注意事项操作要点和技巧
免疫组化的注意事项、操作要点和技巧一些教训：1、对于多甲灌注固定的标本，如要长期保存，要先脱水后冻存，此法对于采用漂片法IHC 较适合。
正确操作：多甲灌注固定一一多甲或甲醛后固定一一蔗糖梯度脱水一一负70度保存一一冰冻切片错误操作：多甲灌注固定一一多甲或甲醛后固定一一负70度保存一一蔗糖梯度脱水一一冰冻切片，结果是会有大量冰晶形成。
J2、如果能确认使用石蜡切片并使用贴片法进行下一步IHC，多甲或甲醛后固定后应尽快脱水并石蜡包埋。
要点和操作技巧：1•固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。
对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。
有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。
」Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。
PLP液：即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛，适于固定石蜡切片。
适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
2 •组织脱水，透明：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。
3 •切片时展片：有些组织在切片后难以在水中展开，这时可适当地在水中加入几滴乙醇。
4 •烤片：60 C 30分钟或37 C过夜，温度太高或时间太长，抗原容易丢失。
5 .蜡块及切片的保存：最好在 4 C保存6.脱片问题：Poly-L-Lysine（多聚赖氨酸）为目前免疫组化染色工作中最常用的一种防脱片剂，6ml 的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的工作液，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。
如不行，可用双重处理（APES和Poly-L-Lysine ）的切片。
在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前，放在APES 1 : 50丙酮溶液中浸泡3分钟，晾干，即可进行下一步。
7 .灭活内源性酶：HRP系统：3%双氧水灭活；AP系统：3%HAc灭活。
改良型Mayer's苏木素染液使用说明书
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1 改良型Mayer's 苏木素染液
改良型Mayer's 苏木素染液
改良型Mayer's 苏木素染液是由氧化的苏木精和铝离子组成的复合体，可将细胞核染成蓝色。
染液无乙醇，无汞。
可清晰并锐利的对核进行染色，无背景染色。
可用于免疫组化DAB 或AEC 后的复染。
实验流程
1. 免疫组化常规操作完成后，DAB 或AEC 显色（HRP 系统）。
2. 显色强度合适时，用自来水冲洗终止显色。
•
3. 甩去样品上的自来水，滴加适量改良型苏木素以覆盖整个组织，复染 30sec~3min 。
4. 用自来水完全冲洗掉复染液，PBS 或去离子水浸泡切片3~5min ，使胞核返蓝。
5. 脱水、透明、封片。
•
注意事项
HE 染色是一个对经验要求非常高的染色，上述实验流程中所提供的染色时间都是参考时间，要根据实验原理，结合具体情况而定。
结果
细胞核：蓝色。
温馨提示
1. 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。
2. 试剂应保存于阴凉、干燥、通风良好的环境中。
储存温度
避光储存于室温。
包装清单 货号
品名 包装 HCY108
改良型Mayer's 苏木素染液 100mL 说明书 1份。
苏木素-伊红染色液使用方法
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液(H-E）【型号】苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型；伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型。
【包装规格】货号：DH0006单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。
因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。
【主要组成成分】试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。
【检验方法】l、石蜡切片于二甲苯I、II中脱蜡；2、经无水乙醇和95%乙醇，经8O%乙醇，自来水冲洗；3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色，自来水洗；或苏木素染色液(Mayer)染色；4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；若用苏木素染色液(Mayer)染色后则不需分化；5、自来水冲洗返蓝；亦可用碳酸锂水溶液返蓝，自来水洗；6、入伊红染色液(水溶)染色，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再入伊红染液(醇溶)染色(忌水洗）；7、95%乙醇I、II中调色；8、无水乙醇I、II中脱水，二甲苯I、II中透明；9、封片胶封片，镜检。
免疫组化相关问题-个人总结
一般的sp法步骤啊，具体如下：1、烤片，68℃，20分钟，2. 脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯,依据的是相似相溶的原理.一般在每个试剂中放10min,天气热可以少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min.3. 抗原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2-甲醇溶液浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。
4. 血清封闭：冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS 中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时。
血清稀释10倍（900µlPBS：100µl血清封闭液）。
5. 加一抗：将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，不洗，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。
加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜(≥18h)。
6. 加二抗：将载玻片从冰箱中取出，4℃过夜后在37℃复温45分钟，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
7. 加SABC:将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS 后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。
SABC稀释100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
8. 加显色剂：将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。
2015-免疫组织化学染色方法
(2)蛋白酶的种类 胰蛋白酶0.05%～0.1％胰蛋白酶加入等
量的氯化钙，用0.1N NaoH调pH至7.8。消化 时间37℃ 30min。
胃蛋白酶 0.4%胃蛋白酶，用0.01N HCI稀 释，消化时间37℃ 30～180min。 蛋白酶K 20μg/ml，用pH8.0 0.5M TrisHCI配制，消化时间37℃ 20～40min。
1.直接测定法
一抗稀释度 1:50 1:100 1:200 1:400 1:500 阴性对照
特异性染色 ++++ ++++ ++++ ++++ +++ (－)
非特异性染色
++ ++ ++ + (－) (－)
2.棋盘法
3.抗体稀释液 抗体稀释液是从事IHC 工作实验室必备，其制备方法如下：1克 明胶(红、绿)溶在300ml 0.2M pH7.6 TBS 中，加温，搅拌使其溶解，待其冷却后， 加入1克牛血清白蛋白和100mg NaN3，4℃ 保存。
主要内容
一、实验的设计 二、石蜡切片的脱蜡至水 三、内源性酶的消除方法 四、IHC的非特异性染色 五、抗原的暴露和修复 六、抗体的购置及注意事项 七、抗体最佳稀释度的测定和保存 八、显示系统及衬染剂的选择和配制
一、实验的设计 1.查阅相关文献，列出要做的
IHC指标，根据经费情况，选择相 关公司购置特异性抗体和检测试剂。
免疫组化染色技术
概述
免疫组织化学（Immunohistochemistry; IHC） 技术是一门综合性技术，除了具备 优质、高效，特异的一抗，敏感的检测方法， 稳定的显示系统外，还需要掌握组织标本或 标本的取材、固定、包埋、切片，以及IHC 前的处理，内源性酶的消除方法，非特异背 景的消除方法，怎样防止IHC染色过程中的 脱片。
苏木素-伊红染色试剂盒使用说明书
注意：当跳过此步骤时，不使用二甲苯透明，酒精将会保存于组织切片上，导致伊红从切片 上流出。
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13 封片：中性树胶封片，自然风干或烤干，显微镜观察。
注意事项 HE 染色是一个对经验要求非常高的染色，上述实验流程中所提供的染色时间都是参考时间， 要根据实验原理，结合具体情况而定。
染色较弱是由于：1）组织切片过薄；2）染色时间不足；3）随后 95%酒精分化过度。 染色过度是由于：1）染液浓度较高（可能是由于过度蒸发）；2）组织切片过厚；3）染色时 间过长；4）随后 95%酒精分化不足。
伊红染色未分化（一种颜色）是由于： 1）固定不彻底； 2）过度染色，a）染色时间过长；b）染液浓度过高。
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4. 水洗：苏木素染色后，用水洗组织是非常重要的。这一步以及随后的水洗，可将多余的 染料，媒染剂等去除。适当的漂洗可以去除表面金属光泽，金属光泽可阻止苏木素的染色。 注意：跳过此步，将产生不好的结果，例如沉淀的形成，染液的稀释，表面金属光泽的存在。 5. 酸酒精：酸酒精分色剂 3~5sec。在苏木素染色方 注意：如果没有此步骤，组织切片将变为暗紫色。嗜酸结构，例如，胶原，将不会呈现明亮 的粉红色。组织结构之间将很难区分。很难对切片做出正确的判断。 分色过度可能是由于：1)酸浓度过高；2)脱色时间过长等。分色不足是由于：1)酸浓度过低； 2)脱色时间不足；3)在切片上有多余的蛋白或者明胶等。
结果 细胞核染为蓝色；细胞质染为红色。
温馨提示 1. 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。 2. 试剂应保存于阴凉、干燥、通风良好的环境中。
储存温度 避光储存于室温。
包装清单 货号
HCY112A HCY112B
苏木素染色液说明书
苏木素染色液说明书【产品名称】通用名称：苏木素染色液英文名称：EnVision TM FLEX Hematoxylin (Link)【包装规格】3×45mL【预期用途】用于对组织细胞切片中的细胞核染色。
【主要组成成分】苏木素水溶液【储存条件及有效期】室温下避光保存。
有效期12个月。
【适用仪器】组织染色机（Autostainer Link 48）【检测方法】1.检测步骤1)将抗原修复液按照1：50比例配制好，放置在免疫组化预处理系统（PT Link）中2)运行免疫组化预处理系统（PT Link）至65度，将切片放置在抗原修复液中3)加热至95度，持续20分钟，降温至65度4)将切片取出放置在洗脱缓冲液工作液中，5分钟后，放置在自动染色系统上染色5)过氧化物酶阻断剂5分钟6)洗脱缓冲液工作液冲洗7)一抗20分钟8)洗脱缓冲液工作液冲洗9)二抗20分钟10)洗脱缓冲液工作液冲洗11)DAB显色10分钟12)自来水冲洗13)苏木素染色液复染5分钟14)自来水冲洗15)70%酒精，80%酒精，90%酒精，100%酒精，100%酒精各2分钟16)二甲苯透明5分钟17)二甲苯透明5分钟18)封片2.质量控制程序1) 每次染色过程中都应当同时对一份已知的阳性对照标本进行染色，以确定染色时所使用的全部试剂是否有效。
若阳性对照标本没有出现阳性染色结果，此次检测样本的标记过程应当视为无效。
2) 应当同时采用阴性对照试剂对每份标本进行染色，以排除发生非特异性染色的可能性。
如果不能明确区分非特异性染色和特异性染色，此次检测样本的标记过程应当视为无效。
更多信息及使用说明请参见DAB染色液试剂盒（代码K8002）使用说明书和Dako自动染色系统（Autostainer Link 48）仪器操作手册。
【检测结果的解释】含有DAB的底物缓冲液可以在一抗所识别的目标抗原部位产生褐色。
阳性对照样本应当在其目标抗原的预期部位出现褐色。
天狼星红-苦味酸染色说明书
仅供科研使用版本号：170628天狼星红染色液(南京森贝伽生物科技有限公司)【产品组成】Component SBJ-0294S2×50mlSBJ-0294M2×100mlStore at试剂(A):天狼星红染色液50ml 100ml 4℃，避光试剂(B):Mayer苏木素染色液50ml 100ml 4℃，避光【保存条件】4℃,避光,12个月【产品概述】胶原纤维(CollagenFiber)是结缔组织中分布最广含量最多的一种纤维，广泛分布于各种脏器，其中皮肤、巩膜、肌腱最丰富。
Ⅰ型胶原纤维主要是骨、皮肤、肌腱纤维；Ⅱ型胶原纤维主要是软骨胶原；Ⅲ型胶原纤维主要在胚胎组织、成人血管、胃肠道；Ⅳ型胶原纤维主要在基膜中。
天狼星红与其衬染液都是强酸性染料，易与胶原分子中的碱性基团结合，吸附牢固。
偏振光镜检查，胶原纤维有正的单轴双折射光的属性，与天狼星红复合染色液结合后，可增强双折射，提高分辨率，从而区分两型胶原纤维。
天狼星红染色液主要由天狼星红染色液、Mayer苏木素染色液组成，主要用于各种组织病变时对胶原纤维异常或纤维增生的研究中，在普通光学显微镜下心脏血管等组织的胶原纤维被染成红色，在偏振光镜下对各种纤维化病变的分型和分级研究有一定的帮助作用。
采用免疫组化技术也可显示Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维，但所用抗体昂贵，操作费时，而采用天狼星红染色试剂便宜，操作简单。
【使用方法】1、组织固定于10%福尔马林固定液，常规脱水包埋。
2、切片厚6μm，常规脱蜡至水。
3、天狼星红染色液滴染1h。
4、流水稍微冲洗，去除切片表面染液。
5、Mayer苏木素染色液染细胞核8～10min。
6、流水冲洗10min。
7、常规脱水透明，中性树胶封固。
【染色结果】普通光学显微镜:胶原纤维红色细胞核蓝色偏振光显微镜:Ⅰ型胶原纤维强橙黄色或亮红色Ⅲ型胶原纤维绿色【注意事项】1、为使在偏振光镜下显示清晰，本法的切片厚度以6～7μm为宜。
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Mayer'苏木素染液(免疫组化)使用说明及注意事项
货号：G1080
规格：10mL/100mL
保存：室温避光保存，有效期至少一年。
产品简介：
Mayer'苏木素染液(免疫组化)适合免疫组化中组织切片的复染，染色后细胞核呈蓝色。
本产品为工作液，可直接使用。
染色液可重复使用多次，但染色效果会逐渐降低。
使用方法：
1、免疫组化显色后，将组织切片浸入苏木素染色液，也可以直接滴加到样本上染色
5-10分钟(深染)，或0.5-2分钟（浅染）。
2、浸自来水中冲洗去除多余的染色液。
3、颜色过深可以在分化液（1%盐酸）中分化几秒钟，再用氨水(0.25%)或PBS(pH7.4)
冲洗返蓝，镜下观察结果。
4、染色、分化、返蓝时间都需要预实验优化至最佳，分化和返蓝步骤可选。
5、根据显色液的种类，用水性封片剂直接封片或梯度酒精脱水，二甲苯透明后用中性
树胶封片。
注意事项：
1、第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
2、室温避光保存，2-8℃保存最佳，至少一年有效。
3、染色过程推荐浅染，通常只需能够分辨细胞核即可，颜色过深有可能影响细胞质颜色。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。