血型检测方法

血型检测方法

一、血凝试验

指抗体和红细胞在液体介质中发生肉眼可见的凝集反应。根据操作方法的不同,主要可以分为以下3 种方法:

①玻片法:根据标准抗体血清与待测红细胞(或标准红细胞与待测血清) 在干燥玻片上是否发生凝集反应来确定待测红细胞(待测血清) 血型。它仍然是目前临床常用的血型鉴定的初筛试验方法,具有操作简便,节省材料的优点。但弱凝集反应需要借助显微镜观察确定。

②试管法:是交叉配血试验中最基础的实验方法之一,其与玻片法原理相同,只是借助试管更大的反应空间,并对待测红细胞予以一定浓度的稀释(通常是用生理盐水稀释红细胞至2 %～5 %) 或加入更多的待测血清,通过低速离心后根据有无肉眼可见的凝集反应来判定结果。由于待测红细胞经过稀释,在一定程度上减少了血液中非特异性抗体的浓度,从而提高了试验的敏感性。相比玻片法具有更加准确可靠的优点。

③全自动微板法:检测技术产生于全自动血液样品系统以及用于凝聚实验的扫描酶标仪问世之后。通过标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止以及反应前后吸光度值增加数值的计算,从而达到对血型进行定型与反定型的目的。应用ABO 血型自动化检测方法进行正反定型试验,一次判读正确率在99.8%以上,且能提高检测灵敏度,使弱凝集样本更易显现。全自动微板法检测ABO血型改变了传统的手工操作,肉眼判读结果的检测方法,具有快速、准确、自动化程度高等优点,适合批量操作。并且血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点, 目前在各大采供血机构已得到广泛应用。

二、微柱凝胶试验

采用凝胶技术进行抗球蛋白试验可提高试验的灵敏度及特异性。目前微柱凝胶试验(MGT) 在国外输血领域已逐渐作为常规应用于ABO及Rh血型定型,未知血型抗体筛查以及直接抗球蛋白试验。在微柱凝胶介质中,红细胞与相应的抗体结合,经过低速离心,凝集的红细胞悬浮于凝胶中,而未与相应抗体结合的红细胞沉到管底。凝胶试验分为中性胶,特异性胶和抗球蛋白胶,分别用于血型血清学不同的试验:在中性胶试验中,凝胶不含抗体,可用于细胞筛选,抗体检测和ABO血型反定型;在特异性胶试验中,凝胶含有血型抗体,可用于血型抗原检测;在抗球蛋白胶实验中,凝胶中含球蛋白抗体,可用于血型不完全抗体检测。

MGT与经典盐水法相比,操作简单,省略了洗涤细胞及结果确认等过程,结果明确可靠、易于判读,反应灵敏,工作程序和结果判定易于标准化、自动化、重复性好,对需大量或反复输血的患者配血既安全又快速。所需样本量少,对样本不易抽取的患者(如新生儿、大面积烧伤患者等) 可节约样本。另外,对于不规则红细胞血型抗体的检测,MGT 法要优于经典的试管法。目前,MGT 已经通过全新的液

体处理系统,使基于其的血型鉴定和配血系统完成了自动化。但是,红细胞浓度过低或过高而离心不彻底、血清中含纤维蛋白出现细胞“凝块”、细菌污染等,可能导致MGT 假阴性或假阳性。

三、流式细胞技术

目前有研究表明将流式细胞技术应用于ABO血型鉴定方面获得成功。具体方法为:用荧光素标记人源抗2A、抗2B以及相应的亚型抗体,将待测血样的红细胞用生理盐水稀释成5%的红细胞悬液,分装各管分别等比加入荧光素标记抗体,避光放置15min 待受检红细胞上的血型抗原与相应荧光标记抗体结合后,用生理盐水洗涤离心去除未结合抗体,重悬后立即用流式细胞仪检测与荧光标记抗体结合的红细胞,通过软件分析,得出待测细胞中与抗2A、抗2B 结合的细胞的百分率,从而得到待测样本的红细胞血型。

流式细胞技术在细胞分型方面具有速度快、灵敏度高、特异性好,检测的结果准确,可重复性好,特别适合应用于ABO血型亚型的快速鉴定。目前有研究指出流式细胞技术亦可通过分离孕妇血液中的胎儿红细胞用于产前非侵入性胎儿血型检测。

四、酶联免疫吸附试验(ELISA)

主要体现在通过酶联免疫吸附实验的原理、相应的酶标单抗技术以及酶与底物反应显色的原理达到鉴定血型的目的。此种鉴定方法最初被研究证明可以用于唾液中血型物质的检测,实验设计利用酶标的单克隆抗2A与抗2B的与唾液样本中的血型物质反应,然后通过酶与底物作用显色达到血型鉴定的目的,这种方法比经典的红细胞凝集抑制实验鉴定血型的方法敏感性要高出1000倍。随后亦有利用EL ISA 法测定精液中的血型物质P84 ,实验利用抗血型物质P84的单克隆抗体包板,捕捉精液或精斑样本中的相应抗原,实验证明即使样本在40℃温度下保存8 个月,样本中仍有超过60%的P84血型物质生物学活性存在,仍然可以用这种办法顺利进行血型物质的鉴定。