血型的鉴定方法及操作全解

规则抗体：ABO系统产生抗Ａ、抗Ｂ是有规律的。 Landsteiner规律： Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ 不规则抗体：除ABO 系统外，其他系统产生的抗体 均不符合上述规律。 正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体 （unexpected antibody）。

完全抗体和不完全抗体

原理：根据IgM类抗体与红细胞膜上特异性抗 原能发生凝集反应。 正定型：已知血型抗体试剂 + 红细胞
鉴定红细胞上血型抗原
反定型：已知标准红细胞 + 血清
鉴定血清中抗体

反应条件：生理盐水介质，室温，肉眼可见凝 集反应 平板法，试管法，微孔板法，试管离心法最可 信赖。 应用：ABO血型定型、RhD抗原定型 （IgG+IgM，IgM单克隆抗体），交叉合血
增强IgG抗体 的凝集作用
注意事项：

Rh血型不需作反定型 每次实验均需作阳性、阴性对照

方法学评价

简单经济

稳定性、准确性较差，不能检出MN、Duffy血 型系统
3.抗人球蛋白实验（Coomb’s test）

原理和方法
抗IgG
待测红细胞 + 抗RhD（IgG）
红细胞凝集
+ 抗人球蛋白
应用延伸：

红细胞血型

红细胞血型分类： ISBT（The International Society of Blood Transfusion)
2002年，29个系统，200多个抗原 目前，30个系统，300多个抗原
一、ABO血型系统
1. ABO血型抗原和抗体特性
2.ABO血型的遗传与生化
（1）ABO基因型与表型 A型——AA，AO B型——BB，BO AB型——AB O型——O


天然抗体：ABO血型系统中，A型个体血浆中 天然存在抗B，B型个体血浆中存在抗A。多 数天然抗体是IgM型，最佳反应温度为室温或 更低。 免疫抗体：一般通过输血、妊娠、注射三种方 ห้องสมุดไป่ตู้接受抗原刺激，多数免疫抗体是IgG型，最 佳反应温度是37oC。
天然抗体和免疫抗体特性比较
规则抗体和不规则抗体
反应室
凝胶柱

结果判读：

阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，和 （或）出现溶血。
注意事项：


专用水平离心机 假阳性：镰型红细胞、巨幼红细胞 白细胞过多 纤维蛋白原未完全去除 细菌污染，血浆蛋白异常 假阴性：抗原抗体比例不合适 不适用于直接Coombs阳性的红细胞标本、酶 处理的红细胞标本
方法学评价



灵敏度和准确性高，实验结果重复性好，可长 时间保存 自动化程度高，实验过程标准化， ISO9000/CE认证 成本高
应用延伸：用于ABO正反定型，交叉配血、其他血型
抗原检测（CcEe）、不规则抗体检测、Coombs实验
凝胶柱
中 性 胶
特 异 性 胶
抗 人 球 蛋 白
三、交叉配血（cross matching）


简单，灵敏度低，只适合IgM抗体 试管法：需时短，离心增强凝集，可发现亚型 和较弱的反应，正、反定型皆适合 玻片法：适合大规模血型普查，反应时间长， 有时漏掉弱反应，反定型不适合。
2.酶介质法（enzymic medium test）：

原理和方法：主要用于Rh血型鉴定（IgG抗体）
蛋白水解酶

适于各类抗体（IgM，IgG）
快速、灵敏、可靠 对检测Kell血型系统抗体不理想，不能用肝素 抗凝。


5.微柱凝胶法(gel cards with microtubes)

1986年法国人Dr. Yves Lappierre发明 1994年，获美国FDA认证
原理和方法

葡聚糖做成微型凝胶柱， 上端为反应室，下端凝 胶柱为抗原抗体凝集反 应的介质。 抗原与抗体结合后离心， 经过凝胶分子筛作用， 游离红细胞在凝胶底部， 而与抗体结合凝集的红 细胞位于凝胶上部或悬 浮于凝胶中。
正反定型不一致的可能原因（三）

出现假阳性的常见原因：
红细胞出现多凝集现象； 严重肠道革兰氏阴性杆菌感染，可使红细胞获得类B 现象； 异常的血浆蛋白升高、白蛋白/球蛋白异常，高浓度纤 维蛋白原造成假凝集现象； 待检血清中有不规则抗体存在； 右旋糖酐、静脉注射某些造影剂等引起红细胞 类似凝 集。
方法学评价
4.聚凝胺介质法（polybrene test）

原理和方法
低离子强度盐溶液（low ionic strength salt solution, LISS)：降低介质离子强度，增加抗原抗体结合 聚凝胺：中和红细胞表面负电荷，使红细胞发生非特异性 凝集。 重悬液（resuspension)
方法学评价

是存在于红细胞上的化学结构，化学本质是糖 和多肽，是红细胞膜上的跨膜蛋白。 存在于红细胞膜上（完全抗原），也存在于上 皮细胞以及各种体液和分泌液中（半抗原）。
RBC 存在于体液、分泌液中

红细胞血型抗体

天然抗体、免疫抗体
规则抗体、不规则抗体 完全抗体，不完全抗体 同种抗体，自身抗体



天然抗体和免疫抗体

定义
检测意义

是安全输血的重要步骤

进一步验证血型鉴定是否正确
发现ABO、Rh血型以外的其他抗体

常用方法及评价
结果判断（同型输血）

主侧、次侧管均无凝集、无溶血，表示配血相 容，献血者血液可以输注； 出现主侧、次侧试管或单独一侧试管内红细胞 凝集和（或）溶血，则表明两血不相容，献血 者血液不可输注 。

注意事项（三）：


所有器材清洁干燥 一般先加血清，后加红细胞 反应温度：IgM抗体反应最适温度为40C，为防 止冷凝集素干扰，采用室温，370C反应减弱 离心时间和速度：3000g,30s 反定型不宜用玻片法 结果核对，避免笔误 正、反定型结果一致才能报告，否则查找原因
正反定型不一致的可能原因（一）：

检测红细胞同种抗体的经典方法，新生儿溶血、 病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血 直接Coomb’s（direct antiglobulin test, DAT） 间接Coomb’s（indirect antiglobulin test, IDAT）

DAT：检查红细胞是否致敏
IDAT：检测血清中不完全抗体



基因
酶
合成抗原
思考：A、B、AB型红细胞是否存在H物质？
（3）ABH可溶性抗原形成


分泌型血型物质：ABH抗原存在于红细胞、 内皮细胞、血小板、淋巴细胞、上皮细胞等， 也可出现在除脑脊液外的分泌液中，唾液中最 丰富。 Se，se基因——与体液分泌有关，Se编码α – L-fucocyltransferase，形成分泌液中的H抗 原，H也可转化为A或B抗原，Se不影响红细 胞上ABH形成，Se为分泌型；se为非分泌型； 19chr。
A，B是显性基因，O是隐性基因
ABO基因不是产生ABO抗原的遗传密码
（2）ABO血型的生化合成

H基因—— α –Lfucocyltransferase，19chr A基因—— α –N-acetyl-0galactosaminyltransferase， 9chr B基因——galactosyltransferase, 9chr O基因——无效基因，不产生转移 酶，O型红细胞含有H物质

操作技术上的错误：主要原因
离心过度或不足 细胞与血清反应比例不适当 阳性反应产生溶血现象而未能识别 漏加试剂、结果判读错误等
正反定型不一致的可能原因（二）：

出现假阴性的常见原因：
某些白血病患者和难治性贫血等导致ABO抗 原减弱； 免疫系统尚未健全的新生儿、4月~6月内婴儿、 抗体水平下降的老人； 亚型红细胞抗原性弱，难以检出； 低丙种球蛋白血症患者，血清定型时不凝集或 弱凝集。
Rh抗体种类 抗D，抗E，抗C，抗c，抗e

ABO和Rh血型系统的临床意义

安全输血的主要保证
新生儿溶血病的诊断 器官移植的必要条件 其他：遗传学研究，法医学鉴定



四、ABO和Rh血型鉴定

常用方法： 盐水介质法、酶介质法、抗人球蛋白法、聚凝 胺法 试管法、玻片法、微柱凝胶法
1.盐水介质法（salt medium test）


2.命名和种类

三种命名方式
Fisher-Race、数字命名法、现代命名法
Fisher-Race命名法（CDE命名法）
3.Rh血型种类

D、E、C、e、c

抗原的强弱次序 D>E>C>c>e
5.Rh抗体

Rh抗体产生 天然抗体罕见 主要通过输血和妊娠免疫产生IgG 初次免疫后3~6月出现，再次免疫后3周达高 峰


同型输注是输血的基本 原则 紧急情况下

红细胞血型系统及其检测
重庆医科大学临床血液教研室
血型的发现

1900年，ABO血型系统 1940年，Rh血型系统 Karl Landsteiner

血型（blood type)

狭义地讲，存在于红细胞上的特异性同种抗原。

广义地讲，是人类遗传多态性的一种表现，血 液中各种成分都有其各自型别。
红细胞血型（系统，抗原）

完全抗体：在盐水介质中能凝集红细胞抗体，多为IgM抗体。 不完全抗体：能使红细胞致敏，但在盐水质中不能凝集红细胞， 需要通过抗球蛋白法或其他非盐水介质法进行检测，多为IgG 抗体。