-TBST缓冲液配制及使用方法
蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法
精品文档蛋白相关试剂、缓冲液的配制方法20% （W/V） Glucose配制量 100ml配制方法 :1.称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至 100 ml 。
3.高温高压灭菌后， 4℃保存。
0.5 M EDTA （pH8.0）配制量 1L配制方法 :1.称取 186.1 g Na2EDTA?2H2O，置于 1 L 烧杯中。
2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌。
3.用 NaOH调节 pH值至 8.0 （约 20 g NaOH）。
4.加去离子水将溶液定容至 1 L 。
5.适量分成小份后，高温高压灭菌。
6.室温保存。
注意： pH值至 8.0 时， EDTA才能完全溶解。
1MDTT配制量 50ml配制方法 :1.称取7.71g DTT，加入到100ml烧杯中。
2.加50 ml的0.01 M NaAc（pH5.2），溶解后根据使用情况0.22um 滤膜过滤除菌。
3.适量分成小份后， -20 ℃保存。
30%丙烯酰胺（ 29：1）配制量 1L配制方法 :1.量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。
Acrylamide 290gBisacrylamide 10g2.向烧杯中加入约 600 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至 1 L ，用 0.45um 滤膜滤去杂质。
4.于棕色瓶中 4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。
聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。
5×Tris- 甘氨酸电泳缓冲液组份浓度 0.125 M Tris, 1.25 M Glycine,0.5%（ W/V）SDS配制量 1L配制方法：1．称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。
2．取下列溶液，加入烧杯中。
Tris 15.1gGlycine 94gSDS 5g3.加入约 800 ml 的去离子水，搅拌溶解。
1×TBST缓冲液说明书
加缓冲液的洗脱能力。
本产品为 1×工作液，可直接使用，用后请及时拧紧瓶盖，以防挥发。4℃保存可延长产品保质期，长
期不用建议低温保存。若产品出现结晶析出，请置于 37℃水浴至完全溶解。
组分aCl
150 mM
Tween-20
0.05%（V/V）
HCl
至 PH7.6
北京索莱宝科技有限公司
1×TBST 缓冲液说明书
货号：T1085
规格：500ml
保存：2-8℃，有效期至少 12 个月。
产品说明：
TBST 缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液，主要用于 Western Blot 实验中洗去膜上非特异性
结合的抗体等试剂。由 Tris-HCl 构成稳定的 PH 缓冲体系，NaCl 提供等渗条件，Tween-20 作为去污剂可增
TBST缓冲液配制及使用方法
TBST缓冲液配制及使用方法1.材料准备- 10×TBST缓冲液：10倍浓缩的Tween-TBS缓冲液，可以购买现成的或根据配方自制。
-纯水：去离子水或超纯水。
- Tween-20：一种非离子表面活性剂，用于减小蛋白质与试管内表面的非特异性吸附。
2.计算配制量-计算需要的TBST缓冲液总体积，根据实验需求决定，通常在100mL 到1L之间。
-计算所需的10×TBST缓冲液的体积。
3.配制缓冲液- 按照10×TBST缓冲液中Tween-TBS和纯水的比例来计算Tween-TBS和纯水的体积。
- 将计算得出的所需体积的Tween-TBS缓冲液加入容器中。
-加入等量的纯水，搅拌均匀。
4.调整pH值（如果需要）-使用pH计检测缓冲液的pH值。
-如有必要，可使用盐酸（HCl）或氢氧化钠（NaOH）来调节pH值，直至达到所需的范围。
5.储存缓冲液-将配制好的TBST缓冲液分装到小容器中，标注好日期和成分。
-在4℃储存。
1.实验准备-准备含有蛋白质的样品及所需试管或膜。
-加载样品前，可以使用TBST缓冲液对膜进行预洗。
2.膜的洗涤-将膜置于一个容器中，加入足够的TBST缓冲液来完全浸泡膜。
-建议使用摇床、旋转器或烧杯辊转器进行洗涤，方法可根据实验需求来选择。
-进行洗涤的时间和次数可以根据实验需求进行调整，通常洗涤3次，每次5分钟。
3.洗涤液的丢弃-将洗涤液倒入废液容器中，避免直接排入下水道。
4.试管的洗涤-将试管置于容器中，加入足够的TBST缓冲液来完全浸没试管。
-摇动容器，将TBST缓冲液彻底洗涤试管表面。
5.使用洗涤后的试管-待试管干燥后，可以进行进一步的实验步骤，如添加试剂或继续处理样品。
关于TBST缓冲液的注意事项：1. 在配制TBST缓冲液时，严格按照配方比例来计算Tween-TBS和纯水的体积，以确保溶液浓度的准确性。
2.制备好的缓冲液应避免与污染物接触，如灰尘、细菌等。
(精编资料推荐)TBST缓冲液配制及使用方法
TBST是TBS+Tween的缩写,TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液用1N HC1调pH至7.4,Tween为一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力.如果配置1000ml的TBST：先称量NaCl 40g ，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl 47.6g，倒入刚才的那个烧杯中,：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。
往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加吐温20， 5ml,转入1000ml 容量瓶中，在定容，转移即可。
TBST缓冲液是以进口粉剂为原材料配制，品质稳定。
•·主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印•迹膜；•·无色液体，0.22 μm膜过滤纯化；•·室温储存，效期为18个月；•使用说明•·1×TBST缓冲液配制：900 ml去离子水与100 ml 10×TBST缓冲液充分混匀；•友情提示•·室温条件下保存，如果低温保存溶液，可能会产生沉淀，可摇晃•或加热溶解；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；用来洗细胞的TBS/PBS最好加KCl，这样比较接近体液的电解质比例其他用途如WB等可以忽略，只要电导和离子浓度符合要求就可以了。
个别去垢剂如SDS 遇到钾会沉淀，所以更不能加KClpH和盐浓度看自己需要而定，不用拘泥于书本，当然一般来说是等渗的150mM NaCl保存条件：1：室温保存，12个月2：如果低温保存溶液，可能会有晶体沉淀产生，可通过摇晃或加热溶解即可使用。
注意事项：1：说明：TBST缓冲液，PH 7.2-7.5；2：颜色为无色透明液体；3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作；使用说明：1：使用前将10 X TBS缓冲液和Tween20按1:39混合，注意需在使用前新鲜配制。
缓冲液的配制方法
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2.溶解。
3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法 l.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.溶解。
3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
4.再向溶液中加入下列试剂。
5.用6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭 (10 mg/ml)组份浓度 10 mg/ml溴乙锭配制量 100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
TBS-葡萄糖溶液
Leagene 。
com 北京雷根生物技术有限公司
TBS-葡萄糖溶液
简介：
Tris 缓冲盐溶液简称TBS, 属于常规pH 缓冲液，常用于清洗Western Blot 中蛋白印迹膜或配制封闭液，是常用分子生物学试剂。
TBS-葡萄糖溶液主要成分为Tris-HCl(pH7.4)、氯化钠、1%葡萄糖、防腐剂，不含Tween 20，经过滤除菌。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。
2、 一般稀释至1×，再加入0.05～0.1% Tween 20，即获得1×TBST 进行下游实验。
注意：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、 注意无菌操作，避免微生物污染。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关：
编号 名称 CC0165 Storage TBS-葡萄糖溶液 500ml 4℃ 使用说明书 1份 编号 名称 OR0001
pH 标准缓冲溶液(pH=4.00) PE0080
Tris-HCl 缓冲液(1mol/L,pH6.8) PS0013
RIPA 裂解液(强) PT0013
考马斯亮蓝快速染色液 PW0053
Western 抗体洗脱液(碱性) PW0084
丽春红S 染色储存液(10×Ponceau S) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD 比色法)。
WB试剂配制
WB试剂配制及保存
1.30%丙烯酰胺：
29g丙烯酰胺+1g甲叉双丙烯酰胺，超纯水至100 ml溶解后4℃保存，使用时恢复至室温且无沉淀。
2.10%SDS：SDS 10g，超纯水至100ml，水浴50℃溶解，室温保存。
3.电泳液（5X）：Tris 15.1g，甘氨酸9
4.0g，SDS
5.00g，超纯水至1000ml，溶解后室温保存。
4.转膜液（1X）：甘氨酸14.4g，Tris 3g，甲醇150ml，加超纯水至1000ml（现配现用）。
5.TBS缓冲液（10X）：Tris 24.2g，NaCl 80.0g，加超纯水至1000ml，浓盐酸（10ml）调pH 至7.6，室温保存待用。
6.TBST缓冲液（1X）：10X TBS缓冲液100ml，超纯水900ml，Tween-20 1ml（Tween 20较粘稠，应缓慢吸取并可把枪头剪掉，防止产生气泡），溶解后室温保存。
7. 10%过硫酸铵（AP）：过硫酸铵0.1g，超纯水1ml（现配现用）。
8.1.5M Tris-HCl（pH6.8）：Tris 18.671g，超纯水100ml溶解后，浓盐酸调pH至8.8，室温保存。
9.1M Tris-HCl（pH8.8）：Tris 12.114g，蒸馏水100ml溶解后，浓盐酸调pH至6.8，室温保存。
分离胶制备（8.8）堆积胶制备（6.8）
H2O H2O
30%丙烯酰胺30%丙烯酰胺
1.5M Tris 1.0M Tris
10% SDS 10%SDS
10%过硫酸铵（AP）10%过硫酸铵（AP）
TEMED(避光) TEMED(避光)。
western-blot 通用配方
1.Western Blotting 相关溶液及抗体1)转膜缓冲液（running buffer）(10×)(1L)Tris 30.3g甘氨酸144g不调pH转膜工作液（1×)(1L)（现配现用）(10×)转膜缓冲液（running buffer）100ml无水乙醇100ml水800ml2)TBS 缓冲液(5×)（1L）Tris-HCl 12.15gNaCl 146.4g用36-37%浓盐酸调节pH值至约7.4（约5ml浓盐酸，pH试纸检测即可）TBST：TBS+Tween-20 0.1%（1ml for 1L）3) 封闭液TBST 缓冲液中加入5%脱脂奶粉或者(3% Gelatine)4）Western Blotting 第一抗体适合于自己蛋白的抗体5）Western Blotting 第二抗体辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG/(羊抗鼠IgG)4.实验步骤（1）SDS-PAGE 电泳分离蛋白质：(浓缩胶70V，30-40min；分离胶120V，1h)5×loading buffer: 4mlddH2O 1.76ml 1M Tris-HCl pH 6.8 0.24ml甘油1ml 10%（w/v）SDS 0.8mlß-巯基乙醇0.2ml（2）将4 张滤纸剪成与海棉大小一致的方形（3）配（1×)转膜工作液(10×)转膜缓冲液（running buffer）80ml无水乙醇80ml水640ml800ml（4）将胶泡在（1×)转膜工作液中（防止胶干掉，最好不要用水，水泡胶会涨）（5）用尺子量胶大小，裁PDVF膜（不要用手蹭膜，手上有蛋白）（6）PDVF膜先在无水乙醇中泡约1min,然后泡到（1×)转膜工作液中。
（PDVF膜为疏水性的，先在乙醇中泡会使其亲水性好）（7）将海绵和滤纸在水中浸湿，然后按照一下顺序(整个操作过程中保证膜不能干)：白板—海绵—两层滤纸--PDVF膜（靠正极）--胶（靠负极）（用小试管排气泡）--两层滤纸—海绵（用小试管排气泡）--夹住—放入胶槽中（白板靠红，黑板靠黑，保证电极方向不要错）--在胶槽中加入转子—倒入（1×)转膜工作液—在胶槽中放入冰袋—80V～100V 恒压，60min(该条件可以转移25kD～90kD的蛋白)(8)封闭：在封闭液中室温，摇1h或者4℃静置过夜。
tbst成分
tbst成分
TBST中含有Tris-Hcl，NaCl，tween20 这三种物质，是做WESTERN BLOT中常用的一种缓冲溶液。
TBST是TBS+Tween的缩写,TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液
用1N HC1调pH至7.4,Tween为一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力。
拓展资料：
PBS和PBST 差别：
PBST中由PBS 加入了Tween 20, Tween 20 是非离子型去污剂。
因为western 中所用的膜可以与蛋白质结合，这样的话孵育过程中，抗体是能够与膜非特异性结合的，为了防止以后曝光造成胶片背景太高，在孵育抗体后，混有Tween 2的PBS 能够将非特异性结合的抗体洗掉，增加特异性。
在抗体的保存中，抗体往往是以极高浓度保存在甘油之中的，使用的时候按照一定的比例去稀释，TBST 跟TBS 都可以用来稀释抗体，以做孵育抗体之用。
缓冲液配制
Tris缓冲液（TBS和THB）的配制（一）TBS的配制0.05 M TBS ( pH7.4 ) 的配制：Tris ( 三羟甲基胺基甲烷) 12.1gNaCl 17.5g加蒸馏水1500ml磁性搅拌下滴加浓HCl至pH为7.4，再加蒸馏水至2000ml，即可。
如需含1% Triton X-100，则在滴加HCl前先加入20ml Triton X-100。
（二）THB的配制A液( 0.2 M Tris )：( MW 121.14 ) 称取2.428克Tris，溶于100毫升蒸馏水中。
B液( 0.1 N HCl)：取37% HCl ( 比重1:19 ) 0.84毫升，加入蒸馏水中，使成100毫升。
不同pH ( 7.19 ~ 9.10 ) 的0.05 M THB配制：按下表，取A液25ml加B液Xml，补加蒸馏水至100ml。
B=X pH B=X pH45.0 7.19 25.0 8.1442.5 7.36 22.5 8.2341.4 7.40 20.0 8.3240.0 7.54 17.5 8.4138.4 7.60 15.0 8.5137.5 7.66 12.5 8.6235.0 7.77 10.0 8.7432.5 7.87 7.5 8.9230.0 7.96 5.0 9.1027.5 8.05免疫组织化学中，常用pH7.6的THB。
磷酸盐缓冲液（PB）的配制（1）A液（0.2M磷酸二氢钠水溶液）：NaH2PO4·H2O 27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。
（2）B液（0.2M磷酸氢二钠水溶液）：Na2HPO4·7H2O 53.6g (或Na2HPO4·12 H2O 71.6g或Na2HPO4·2 H2O 35.6g ) 加蒸馏水溶解，加水至1000ml。
（3）不同pH值磷酸盐缓冲液（PB）缓冲液的配制A液X ml (参照下表) 中，加入B液Y ml，为0.2M PB。
TBST缓冲液配制及使用方法
TBST缓冲液配制及使⽤⽅法TBST缓冲液TBST是TBS+Tween的缩写,TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液⽤1N HC1调pH⾄7.4,Tween为⼀种⾮离⼦型去污剂,有复性抗原的作⽤,可提⾼特异性的识别能⼒.如果配置1000ml的TBST：先称量NaCl 40g ，倒⼊烧杯中，加DDW蒸馏⽔400ml,再称量NaCl 47.6g，倒⼊刚才的那个烧杯中,：由于NaCl的量太多，⼀次称量不⽅便，所以分两次称量，且易于溶解）。
往烧杯中加⼊Tris—HCl 缓冲液100ml，最后加吐温20，5ml,转⼊1000ml 容量瓶中，在定容，转移即可。
TBST缓冲液是以进⼝粉剂为原材料配制，品质稳定。
·主要⽤于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印?迹膜；·⽆⾊液体，0.22 µm膜过滤纯化；·室温储存，效期为18个⽉；使⽤说明·1×TBST缓冲液配制：900 ml去离⼦⽔与100 ml 10×TBST缓冲液充分混匀；友情提⽰·室温条件下保存，如果低温保存溶液，可能会产⽣沉淀，可摇晃?或加热溶解；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴⼀次性⼿套操作；⽤来洗细胞的TBS/PBS最好加KCl，这样⽐较接近体液的电解质⽐例其他⽤途如WB等可以忽略，只要电导和离⼦浓度符合要求就可以了。
个别去垢剂如SDS遇到钾会沉淀，所以更不能加KCl pH和盐浓度看⾃⼰需要⽽定，不⽤拘泥于书本，当然⼀般来说是等渗的150mM NaClTris Buffered saline Tween，10X（TBST缓冲液，10X）产品组成保存条件：1：室温保存，12个⽉2：如果低温保存溶液，可能会有晶体沉淀产⽣，可通过摇晃或加热溶解即可使⽤。
注意事项：1：说明：TBST缓冲液，PH 7.2-7.5；2：颜⾊为⽆⾊透明液体；3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护⼿套操作；使⽤说明：1：使⽤前将10 X TBS缓冲液和Tween20按1:39混合，注意需在使⽤前新鲜配制。
实验常用试剂缓冲液的配制方法
实验常用试剂缓冲液的配制方法实验室中经常使用各种试剂和缓冲液进行实验。
下面我将介绍一些常用试剂和缓冲液的配制方法。
1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液一般有三种类型的配方：PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）、PBST（含Tween-20的磷酸盐缓冲盐溶液）和TBS（三氯甲烷缓冲盐溶液）。
配制PBS缓冲液：-加入适量的8.0g/L氯化钠和0.2g/L磷酸氢二钠到1L去离子水中。
-调整pH值至7.4，采用10M氢氧化钠（NaOH）或者盐酸（HCl）。
-用去离子水稀释至1xPBS。
配制PBST缓冲液：-配制1xPBS。
- 加入0.1%（v/v）Tween-20。
-混合均匀。
配制TBS缓冲液：-加入2.42g/L三氯甲烷到1L去离子水中。
-加入20g/L三甲基氯化胺到溶液中。
-调整pH值至8.0，采用盐酸（HCl）。
-用去离子水稀释至1xTBS。
2.毛细管电泳缓冲液毛细管电泳缓冲液的配制方法取决于电泳类型，一般包括凝胶和毛细管电泳。
配制凝胶电泳缓冲液：-加入8g/L琼脂糖和0.4g/L硼酸到1L去离子水中。
-用热板搅拌器加热，搅拌至溶解。
-冷却至室温后，调整pH值至8.3，采用盐酸（HCl）或氢氧化钠（NaOH）。
-用去离子水稀释至所需浓度。
配制毛细管电泳缓冲液：-加入10mM氢氧化钠（NaOH）和1mM二硼酸氢钠到500mL去离子水中。
-调整pH值至9.2，采用盐酸（HCl）。
-加入1mM十二烷基硫酸钠。
-用去离子水稀释至所需浓度。
3.蛋白质含量测定蛋白质含量测定一般采用BCA法、Lowry法或Bradford法。
BCA法配制试剂：-在15mL玻璃试管中加入BCA试剂（提取液A）。
-加入0.1M硫酸（提取液B）。
-混合提取液A和提取液B，即得到试剂。
Lowry法配制试剂：-加入白蛋白标准品和Na2CO3/NaOH缓冲液（A液）到250mL锥形瓶中。
-混合硫酸/磷酸/酒精试剂（B液）。
-将A液倒入B液中混合，待用。
Bradford法配制试剂：-加入试剂A到450mL去离子水中。
缓冲液配制
Tris缓冲液（TBS和THB）的配制（一）TBS的配制0.05 M TBS ( pH7.4 ) 的配制：Tris ( 三羟甲基胺基甲烷) 12.1gNaCl 17.5g加蒸馏水1500ml磁性搅拌下滴加浓HCl至pH为7.4，再加蒸馏水至2000ml，即可。
如需含1% Triton X-100，则在滴加HCl前先加入20ml Triton X-100。
（二）THB的配制A液( 0.2 M Tris )：( MW 121.14 ) 称取2.428克Tris，溶于100毫升蒸馏水中。
B液( 0.1 N HCl)：取37% HCl ( 比重1:19 ) 0.84毫升，加入蒸馏水中，使成100毫升。
不同pH ( 7.19 ~ 9.10 ) 的0.05 M THB配制：按下表，取A液25ml加B液Xml，补加蒸馏水至100ml。
B=X pH B=X pH45.0 7.19 25.0 8.1442.5 7.36 22.5 8.2341.4 7.40 20.0 8.3240.0 7.54 17.5 8.4138.4 7.60 15.0 8.5137.5 7.66 12.5 8.6235.0 7.77 10.0 8.7432.5 7.87 7.5 8.9230.0 7.96 5.0 9.1027.5 8.05免疫组织化学中，常用pH7.6的THB。
磷酸盐缓冲液（PB）的配制（1）A液（0.2M磷酸二氢钠水溶液）：NaH2PO4·H2O 27.6g，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml。
（2）B液（0.2M磷酸氢二钠水溶液）：Na2HPO4·7H2O 53.6g (或Na2HPO4·12 H2O 71.6g或Na2HPO4·2 H2O 35.6g ) 加蒸馏水溶解，加水至1000ml。
（3）不同pH值磷酸盐缓冲液（PB）缓冲液的配制A液X ml (参照下表) 中，加入B液Y ml，为0.2M PB。
western方法
Western bolt 所用试剂转膜缓冲液：25mmol/L Tris，192mmol/L Glycine，0.037% (w/v) SDS，20%(v/v)甲醇(3.03g Tris，14.4 g甘氨酸，0.37 g SDS，200 mL甲醇，超纯水定容至1 L)。
清洗缓冲液(TBST)：20mmol/L Tris-Cl，pH 8.0，150mmol/L NaCl，0.05% Tween-20 (20mL 1 mol/L Tris-Cl，pH 8.0，8.677 g NaCl，0.5 mL Tween-20，超纯水定容至1L)。
封闭液：5g脱脂奶粉/100mLTBST buffer。
一抗与二抗稀释液：即封闭液。
5×蛋白上样缓冲液：50mmol/L Tris-Cl，pH 6.8，10%(w/v) SDS，50%(v/v)甘油，0.5%溴酚蓝，200mmol/L DTT。
膜蛋白溶解液：7mol/L尿素，2mol/L硫脲，2% (w/v) CHAPS，1%(v/v) Triton-100，40mmol/L DTT。
Western Blot分析样品准备好后点样进行SDS-PAGE。
使用Bio-Rad电泳装置进行蛋白质电泳，先采用低电压50V，溴酚蓝进入分离胶后将电压改为100V 。
1.将目的蛋白、Marker、阴性对照、阳性对照按一定的顺序点样，同时也按照同样的顺序再点一组对照。
2.电泳完毕后将其中一块蛋白胶浸泡于转移缓冲液中平衡20 min。
另一块则直接进行考马斯亮蓝染色。
3.将剪裁好的PVDF膜(大于凝胶面积)放入甲醇中浸泡1min进行激活，同时将2块厚滤纸及纤维板浸泡于转移缓冲液。
4.“三明治”的制备：将凝胶盒黑色部分(负极)放置在一干净的保鲜膜上，然后依次小心在黑色板(负极)上叠放纤维板、滤纸片、凝胶、PVDF膜、滤纸片、纤维板，红色板(正极)，移动卡子扣牢后放于转膜仪中。
放置PVDF膜后可用一干净玻璃棒轻轻滚动以赶除凝胶与PVDF膜之间的气泡。
TBST缓冲液配制及使用方法精选文档
T B S T缓冲液配制及使用方法精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-TBST缓冲液TBST是TBS+Tween的缩写,TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液用1N HC1调pH至7.4,Tween为一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力.如果配置1000ml的TBST：•先称量NaCl40g，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl47.6g，倒入刚才的那个烧杯中,：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。
往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加吐温20，5ml,转入1000ml容量瓶中，在定容，转移即可。
TBST缓冲液是以进口粉剂为原材料配制，品质稳定。
·主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印迹膜；·无色液体，0.22 μm膜过滤纯化；·室温储存，效期为18个月；使用说明· 1×TBST缓冲液配制：900 ml去离子水与100 ml 10×TBST缓冲液充分混匀；友情提示·室温条件下保存，如果低温保存溶液，可能会产生沉淀，可摇晃或加热溶解；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；用来洗细胞的TBS/PBS最好加KCl，这样比较接近体液的电解质比例其他用途如WB 等可以忽略，只要电导和离子浓度符合要求就可以了。
个别去垢剂如SDS遇到钾会沉淀，所以更不能加KClpH和盐浓度看自己需要而定，不用拘泥于书本，当然一般来说是等渗的150mM NaClTrisBufferedsalineTween，10X（TBST缓冲液，10X）产品组成保存条件：1：室温保存，12个月2：如果低温保存溶液，可能会有晶体沉淀产生，可通过摇晃或加热溶解即可使用。
Tris缓冲盐溶液(10×TBS,pH7.5)
北京雷根生物技术有限公司
Tris 缓冲盐溶液(10×TBS,pH7.5)
简介：
Tris 缓冲盐溶液简称TBS, 属于常规pH 缓冲液，常用于清洗Western Blot 中蛋白印迹膜或配制封闭液，是常用分子生物学试剂。
Tris 缓冲盐溶液主要成分为Tris-HCl(pH7.5)、氯化钠、防腐剂，不含Tween 20。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 根据实验具体要求操作。
2、 一般稀释，再加入Tween 20，即获得TBST 进行下游实验。
注意事项：
1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
相关：
编号 名称 PW0013 Storage Tris 缓冲盐溶液(10×TBS,pH7.5) 500ml 4℃ 使用说明书 1份 编号 名称 DC0032
Masson 三色染色液 PS0013
RIPA 裂解液(强) PT0013
考马斯亮蓝快速染色液 PW0024
Tween20/TBS 溶液(10×TBST,pH7.5) PW0040
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Western 抗体洗脱液(碱性) PW0084
丽春红S 染色储存液(10×Ponceau S) TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 比色法)。
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TBST是TBS+Tween的缩写,TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液
用1N HC1调pH至7.4,Tween为一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力.
如果配置1000ml的TBST：
•先称量NaCl 40g ，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl 47.6g，倒入刚才的那个烧杯中,：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。
往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加吐温20， 5ml,转入1000ml 容量瓶中，在定容，转移即可。
TBST缓冲液是以进口粉剂为原材料配制，品质稳定。
•·主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印
•迹膜；
•·无色液体，0.22 μm膜过滤纯化；
•·室温储存，效期为18个月；
•使用说明
•·1×TBST缓冲液配制：900 ml去离子水与100 ml 10×TBST缓冲液充分混匀；
•友情提示
•·室温条件下保存，如果低温保存溶液，可能会产生沉淀，可摇晃
•或加热溶解；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作；
用来洗细胞的TBS/PBS最好加KCl，这样比较接近体液的电解质比例
其他用途如WB等可以忽略，只要电导和离子浓度符合要求就可以了。
个别去垢剂如SDS 遇到钾会沉淀，所以更不能加KCl
pH和盐浓度看自己需要而定，不用拘泥于书本，当然一般来说是等渗的150mM NaCl
说明书1份
保存条件：
1：室温保存，12个月
2：如果低温保存溶液，可能会有晶体沉淀产生，可通过摇晃或加热溶解即可使用。
注意事项：
1：说明：TBST缓冲液，PH 7.2-7.5；
2：颜色为无色透明液体；
3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作；
使用说明：
1：使用前将10 X TBS缓冲液和Tween20按1:39混合，注意需在使用前新鲜配制。
2：将混合后的TBST缓冲液（10X）加入到9份去离子水中，充分混匀即可使用。