单基因遗传性疾病的分子诊断共76页
遗传性疾病的分子机制及其诊断治疗研究
遗传性疾病的分子机制及其诊断治疗研究遗传性疾病指由基因突变或染色体异常引起的疾病。
这些疾病在人群中的发生率、易感个体的家族史和先天畸形的出生率等方面有明显特征。
近些年来，随着分子生物学、细胞生物学和遗传学的不断发展，人们对于遗传疾病的分子机制以及诊断治疗方法有了更深入的了解。
一、遗传性疾病的分子机制许多遗传性疾病的基本分子机制是基因突变。
如单基因遗传病，它们的发病机理都是某一个基因的突变导致的。
例如，囊性纤维化、家族性高胆固醇血症、固定性肌营养不良等。
另外，染色体结构异常也是一种重要的遗传性疾病形式，如唐氏综合症、爱德华氏综合症等。
二、遗传性疾病的诊断方法1.分子诊断分子生物学技术的发展，使得分子诊断成为了现代遗传诊断的重要手段。
目前，DNA测序、基因芯片、核磁共振等技术已经广泛应用于遗传性疾病的检测和研究。
例如，在国际上十分常见的小儿癌症——神经母细胞瘤的诊断中，比较长的Chr11q23-24常部误删失导致的CHUNK3-NTRK1融合蛋白已经成为了这一疾病的分子标志物。
2. 产前诊断在孕早期通过基因检测来诊断是否有遗传缺陷，早期发现胎儿的故障，也叫产前诊断。
产前诊断种类包括：绒毛取样诊断、羊膜腔穿刺诊断、脐带穿刺诊断、胎儿血液诊断以及羊水产前诊断等。
近几年来，非侵入性产前基因检测技术飞速发展，这种技术可以通过孕妇血液中的胎儿DNA来进行遗传疾病的诊断。
三、遗传性疾病的治疗方式1.基因治疗基因治疗是将正常基因或修正过的基因导入患者体内来治疗疾病。
常见的技术是向病人的细胞中导入一段健康基因负载的病毒，然后这些细胞通过体内部分物质传递或转移回到病人大部分的组织中。
目前，基因治疗作为一种前沿的治疗策略，已经用于许多遗传性疾病的治疗，如移印细胞贫血症、近视、癌症等。
2.细胞治疗细胞治疗作为一种重要的治疗方式，涉及了细胞学和基因学两大领域。
它包括干细胞治疗、免疫细胞治疗、基因编辑等。
细胞治疗有着一个在多个领域都可以见到的大的优势，那就是细胞数量十分庞大，再加上其自我复制和修复能力，使得细胞治疗成为了不可或缺的治疗方式。
遗传性疾病的分子诊断
MstⅡ酶切位点(GCTNAGG)
5´
3´
1.15kb
正常基因
×
5´
3´
1.35kb
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
﹣
1.35kb 1.15kb
0.2kb
+
正常人 突变携带着 患者
二、ASO探针杂交
主要适用于检测已知点突变 受检者基因组DNA或含 突变位点的PCR扩增产物 与标记的ASO 探针杂交
遗传性疾病诊断策略
1. 点突变的诊断
方法有等位基因特异性寡核苷酸杂交（ASO）、 PCR － ELISA 、 等 位 基 因 特 异 性 扩 增 （ ASA ） 、 PCR－RFLP、基因芯片技术进行诊断；
对于一些基因背景未知的点突变，可以采用单链 构 象 多 态 性 （ SSCP ） 、 变 性 梯 度 凝 胶 电 泳 （DEEG）、异源双链分析（HA）、DNA序列测定 蛋白截短测试等方法。
单核苷酸多态性 （single nucleotid polymorphism，SNP）
定义:主要是指在P与STR不同, 它是直接以序列的变异作为标记,而不是以片段的 长度差异作为标记.
人类基因组图谱的初步分析表明，共有3万 至3.5万个基因。有300多万个单核苷酸多态 性,SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～ 1000个碱基对中就有1个，3-4个相邻的标记构成 的单倍型（haplotype）就可有8-16种。
bA probe bS probe
Homo
Hetero
Normal
2）地中海贫血
珠蛋白基因缺失或基因中某些硷基替代
→ 影响a-或b-珠蛋白链的合成速率 → a-或b-地贫
单基因疾病的分子诊断(教材)
单基因疾病的三种遗传方式
1. 常染色体遗传（autosomal inheritance）包括： 常染色体显性遗传和常染色体隐性遗传。
2. X连锁遗传（ X-linked inheritance）包括：
X连锁显性遗传和X连锁隐性遗传。
3. 线粒体遗传（mitochondrial inheritance）
2、基因背景未知的点突变
• 单链构象多态性(single-strand conformational polymorphism, SSCP) • 变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE) • 异源双链分析(heteroduplex analysis, HA) • DNA序列测定 • 蛋白截短测试（protein truncation test, PTT）
Southern blot
DNA片段在琼脂 糖凝胶上电泳分 离
DNA片段从琼脂 糖凝胶上转印到 膜上
杂交信号的 检测
在缓冲液中将 标记的探针加 到膜上
膜上固定DNA 片段
分子诊断
二、单基因病的分子诊断
（一）血友病A的分子诊断 （二）珠蛋白合成障碍性贫血的分子诊断
二、单基因病的分子诊断
（一）血友病A的分子诊断 1.凝血因子Ⅷ基因的主要遗传缺陷
第22号内含子倒位的ຫໍສະໝຸດ 制二、单基因病的分子诊断2. FⅧ基因的直接检测——22号内含子倒位检测
12kb/
11kb/12kb
11kb/
12kb/
长距离PCR扩增22号内含子
二、单基因病的分子诊断
3. FⅧ基因连锁分析—— FⅧ基因st14位点多态性检测
C/ B/D
分子诊断学遗传性疾病的分子诊断
simultaneously：同时地；
multiplex：多样化； exon：外显子；
deletion：缺失
01
02
Phenylketonuria is an inborn error of metabolism resulting from a deficiency of phenylalanine hydroxylase. There are many techniques that can be used to mutation screening, such as PCR-STR, PCR-SSCP, PCR-RFLP, PCR-DGCE, and so on.
主要是由于肝内苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase, PAH）严重缺失所致的苯丙氨酸代谢异常，为常染色体隐性遗传病 临床表现：智力障碍、色素减少、尿特殊气味及神经和精神症状
分子诊断方法：
1
PCR-STR连锁分析
2
PCR-RFLP
3
多重ASPCR法 PCR-DGGE法
Phenylketonuria：苯丙酮尿 phenylalanine hydroxylase：苯基丙氨酸羟化酶
Cystic fibrosis(CF) is caused by mutations in the CFTR gene. Five tests are most frequently used: resctriction enzyme analysis, the heteroduplex analysis, ARMS, reverse hybridization and OLA.
按照合成速率降低的珠蛋白类型分为α、β、γ、δ地中海贫血
α-地中海贫血（ α -thalassemia） α0地贫是α链完全不能合成者 α+地贫是部分α链合成者
单基因遗传病简介及基因检测
B
A基因和B基因位于同源染色体上相同基因 座位的一对基因，互为等位基因，控制同
一性状，位于一对染色体的同一位置。
是指某种疾病的发生主要受一对等位基因控制，它们的传递方式遵循孟德尔分离律
单基因遗传病
危害性：
致畸、致残、致死，无有效治疗方法
特点：
先天性、终身性、遗传性、临床表型 和遗传异质性
发病率：
单一发病率低，但种类多，总发病率达2.5%。
3. X连锁显性遗传病
• 决定某疾病的基因位于X染色体上，并且此基因对其相应的等位基因来说是显性的，这种遗传病的遗 传方式称为X连锁显性遗传（X-linked dominant inheritance，XD)。
• 男性只有一条X染色体，其X染色体上的的基因在Y染色体上缺少与之对应的等位基因，因此男性只有 成对基因中的一个成员，故称半合子（hemizygote），其X染色体上有此基因就表现出相应性状或疾 病。
1.常染色体显性遗传病
• 遗传病有关的基因位于常染色体上，其性质是显性的，这种遗传方式称为常染色体显性遗传 （autosomal dominant inheritance,AD）。由这种致病基因导致的疾病称为常染色体显性遗传病。
常染色体显性遗传病—特征:
• 发病与性别无关，男女患病几率均等； • 一个致病等位基因即可致病； • 患者双亲之一为患者，同胞中有1/2的可能为患者； • 正常者的后代无患者； • 疾病常存在连续传递现象； • 散在病例源于新产生的突变。
诊断方法
常见基因检测技术：
Lench Nicholas., Barrett Angela., Fielding Sarah., McKay Fiona., Hill Melissa., Jenkins Lucy., White Helen., Chitty Lyn S.(2013). The clinical implementation of noninvasive prenatal diagnosis for single-gene disorders: challenges and progress made. Prenat. Diagn., 33(6), 555-62. doi:10.1002/pd.4124
三种单基因遗传病的产前分子诊断
三种单基因遗传病的产前分子诊断徐盈 张建芳 郭芬芬 黎昱 燕凤 徐慧 任菊霞 宋婷婷 王德堂 辛晓燕 陈必良（第四军医大学西京医院妇产科，陕西西安 ７１００３２）【摘要】 目的 探讨脊髓性肌萎缩症（ＳＭＡ）、苯丙酮尿症（ＰＫＵ）和先天性软骨发育不全（ＡＣＨ）产前基因诊断的高效的临床检测方法。
方法 根据不同单基因病的基因突变类型，本研究应用ＤＨＰＬＣ技术对１例ＳＭＡ阳性家族史的胎儿绒毛样本进行ＳＭＮ１基因７号外显子缺失检测，选择正常人及ＳＭＡ患者作对照。
通过直接测序法分别对ＰＫＵ家系和ＡＣＨ家系的患者、表型正常的个体及其胎儿进行ＰＡＨ致病基因和ＦＧＦＲ３基因第１０外显子进行检测。
结果 ＳＭＡ阳性家系中，胎儿未检测到ＳＭＮ１基因７号外显子的纯合缺失，建议继续妊娠，结果顺利产出１名正常儿。
ＰＫＵ阳性家系通过检测发现患者在ＰＡＨ基因上确实存在无义突变，ｃ．７８１Ｃ＞Ｔ（ｐ．Ａｒｇ２６１Ｔｅｒ）和错义突变ｃ．８４２Ｃ＞Ｔ（ｐ．Ｐｒｏ２８１Ｌｅｕ），均为杂合子。
但是胎儿与患者母亲的突变类型一致，为携带者，不发病，建议继续妊娠。
软骨发育不全患者送检标本ＦＧＦＲ３基因外显子１０发现１处序列异常，为ｃ．１１３８Ｇ＞Ａ，导致编码氨基酸改变Ｇｌｙ３８０Ａｒｇ，但其胎儿羊水标本检测ＦＧＦＲ３基因外显子１０未发现序列异常。
结论 根据单基因病不同的基因突变类型，选择合适的方法可快速、准确地实现单基因病产前基因的诊断，尽早避免单基因病患儿的出生。
【关键词】 单基因病；产前分子诊断；脊髓性肌萎缩症；苯丙酮尿症；先天性软骨发育不全【中图分类号】 Ｒ７１４．５５ 【文献标识码】 Ａ犇犗犐：１０．１３４７０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｐｄ．２０１４．０４．０１１基金项目：陕西省科技统筹创新工程（２０１２ＫＴＣＬ０３ ０９） 通讯作者：张建芳，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｊｆ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ【犃犫狊狋狉犪犮狋】 犗犫犼犲犮狋犻狏犲 Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｓｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｐｈｙ（ＳＭＡ），ＰＫＵａｎｄａｃｈｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａ（ＡＣＨ）．犕犲狋犺狅犱 Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｓａｒｅａｐｐｌｉｅｄｂａｓｅｄｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｕｔａ ｔｉｏｎａｌｐａｔｔｅｒｎ．Ｔｈｅｃｈｏｒｉｏｎｉｃｖｉｌｌｕｓｏｆ１ｆｅｔｕｓｗｉｔｈＳＭＡｐｏｓｉｔｉｖｅｆａｍｉｌｙｈｉｓｔｏｒｙｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅｅｘｏｎ７ｏｆｔｅｌｏｍｅｒｉｃｓｕｒｖｉａｌｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎ（ＳＭＮ１）ｇｅｎｅｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＤＨＰＬＣ．ＮｏｒｍａｌｍｅｍｂｅｒａｎｄＳＭＡｐａ ｔｉｅｎｔｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｓｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｔｈｅｈｏｔｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｅｘｏｎ１０ｏｆＦＧＦＲ３ｇｅｎｅａｎｄＰＡＨｇｅｎｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ，ｎｏｒｍａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓａｎｄｐｒｅｇｎａｎｃｙｆｅｔｕｓ．犚犲狊狌犾狋狊 ‘Ｈｏｍｏｚｙ ｇｏｕｓｄｅｌｅｔｉｏｎｏｆｔｈｅＳＭＮ１ｅｘｏｎ７ｗａｓｎ′ｔｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｐｒｅｇｎａｎｃｙｆｅｔｕｓ．Ｔｈｅｐｅｄｉｇｒｅｅｄｉａｇｎｏｓｅｄａｓｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｉｎｕｅｄｔｏｐｒｅｇｎａｎｃｙ，ａｎｄｇａｖｅｂｉｒｔｈｔｏａｎｏｒｍａｌｂａｂｙ．ｃ．７８１Ｃ＞Ｔ（ｐ．Ａｒｇ２６１Ｔｅｒ）ａｎｄｃ．８４２Ｃ＞Ｔ（ｐ．Ｐｒｏ２８１Ｌｅｕ）ｍｕｔａｔｉｏｎｓｏｆＰＡＨｇｅｎｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｐａｔｉｅｎｔｗｉｔｈＰＫＵｐｏｓｉｔｉｖｅｆａｍｉｌｙｈｉｓｔｏｒｙ．Ｆｏｒｔｕｎａｔｅ ｌｙ，ＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈｅｆｅｔｕｓｓｈｏｗｓｔｈｅｍｕｔａｔｉｏｎｏｆＰＡＨｇｅｎｅａｓｓａｍｅａｓｈｉｓｍｏｔｈｅｒｃ．８４２Ｃ＞Ｔ（ｐ．Ｐｒｏ２８１Ｌｅｕ）．Ｔｈｅｐｅｄｉｇｒｅｅｄｉａｇｎｏｓｅｄａｓｃａｒｒｉｅｒｃｏｎｔｉｎｕｅｄｔｏｐｒｅｇｎａｎｃｙ．ＴｈｅｍｏｔｈｅｒｏｆｔｈｅｆｅｔｕｓｄｉａｇｎｏｓｅｄａｓａｃｈｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａｈａｄＧ１１３８Ａｍｕｔａｔｉｏｎ，ｂｕｔｔｈｅｆｅｔｕｓｈａｄｎｏｒｍａｌｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｔｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ１１３８ｉｎｅｘｔｏｎ１０ｏｆＦＧＦＲ３，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅｗｅｒｅｅｘｃｌｕｄｅｄｆｒｏｍａｃｈｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａ．犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀狊 Ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆ ｆｅｒｅｎｔｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｓｉｓｅｆｆｉｃｉｅｎｔａｎｄｐｒａｃｔｉｃａｌｗａｙｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｏｎｏｇｅｎｉｃｄｉｓｅａｓｅ．【犓犲狔狑狅狉犱狊】 ｍｏｎｏｇｅｎｉｃｄｉｓｅａｓｅ；ｐｒｅｎａｔａｌｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｉａｇｎｏｓｉｓ；ｓｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｐｈｙ；ＰＫＵ；ａｃｈｏｎ ｄｒｏｐｌａｓｉａ. All Rights Reserved. 目前，遗传病与心血管病、癌症一起成为严重危害人类健康和致死率最高的前三名疾病，也是我国出生缺陷的重要原因之一［１］。
分子生物学检验技术-基因病的分子诊断
携带p53基因突变的人经常是李-佛美尼综合症的患者； APC基因是与大肠直肠癌发生有关的肿瘤抑制基因； BRCA1和BRCA2基因的突变则和乳癌相关；
42
Rb
正常细胞中具有活性的RB蛋白（pRB）在细胞中保持着低磷酸化或无磷 酸化的状态，它与细胞周期调节因子E2F结合，抑制E2F的活性从而抑 制G1期到S期的进行，也就抑制了转录活性。 RB蛋白的失活途径有以下几种：
RAS家族是信号传递通路G-protein的成份，藉由跨膜蛋白与Gprotein的结合将信号传至核内;
蛋白质-酪胺酸激酶( protein tyrosine kinase) ABL是细胞内信号传 递蛋白与信号传递至核内有关;
核内转录因子;
MYC是DNA结合蛋白，而JUN是转录因子；
细胞周期有关的蛋白;
3. 血清胆红素轻～中度增高，溶血危象时显着增高。本病的溶血虽以血管外溶血为主， 但也存在着血管内溶血；
4. 血浆结合珠蛋白降低，血浆游离血红蛋白可能增高； 5. 红细胞半衰期测定显示红细胞生存时间明显缩短至5～15 天[正常为(28±5)天]； 6. 血红蛋白电泳显示HbS占80%以上，HbF增多至2%～15%，HbA2正常，而HbA缺如；
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癌症的特点
几乎癌组织都是克隆性增殖; 患者的所有癌细胞都起源于单一
的癌细胞; 大多数癌症不能用单基因遗传方
式解释; 某些类型的癌症，亲属发生同类
肿瘤的风险会增加，但不表现孟 德尔遗传; 许多癌症与环境的物理化学因子 或生物因子有关;
造成癌症的因素
遗传因素 一些特殊的基因突变会造成特定的癌症
斑点杂交结果
βΑ/βΑ
遗传性疾病的分子遗传学与诊断
遗传性疾病的分子遗传学与诊断遗传性疾病是指由遗传变异引起的疾病。
在人类基因组计划完成后，人类已识别了许多遗传性疾病的基因。
然而，基因的发现并不意味着疾病的治愈，因为疾病的遗传机制十分复杂。
为了更好地了解遗传性疾病的分子遗传学和诊断方法，本文对此进行了讨论。
一、分子遗传学的基础知识分子遗传学是研究基因及其表达的分子机制的学科。
最基本的分子遗传学概念是基因，基因是生物遗传信息的基本单位。
基因通常由DNA序列编码。
分子遗传学的研究对象包括基因的表达、转录、翻译和调控等方面。
近年来，随着生物技术的发展，分子遗传学越来越广泛地应用于遗传性疾病的诊断治疗。
二、遗传性疾病的分类遗传性疾病可分为单基因遗传疾病和多基因遗传疾病。
1. 单基因遗传疾病是由单个基因所引起的遗传性疾病。
例如，囊性纤维化、酚酞蓝尿症等。
2. 多基因遗传疾病是由多个基因和环境因素共同作用所引起的遗传性疾病。
如糖尿病、癌症等。
三、遗传性疾病的诊断1. 染色体分析诊断染色体分析诊断是利用细胞学技术对人体染色体进行分析，以检测染色体结构和数量上的异常，是目前诊断某些遗传性疾病的主要手段之一。
2. 分子生物学诊断分子生物学诊断主要针对单基因遗传疾病，通过基因测序技术检测特定基因中的突变或缺失，以及疾病基因的扩增等。
例如，红细胞病的检测就是基于分子生物学诊断技术。
3. 产前诊断产前诊断包括羊膜穿刺、脐带穿刺、绒毛活检和羊水穿刺等。
其主要目的是检测出胎儿的染色体异常、单基因突变和母体血型异常等，以尽早采取措施预防或治疗。
四、结论与展望随着分子遗传学的发展，遗传性疾病的诊断方法也在不断改善。
分子遗传学技术的广泛应用，已经使人们对很多遗传性疾病有了更深入的了解，且已经获得了许多有益的成果。
未来，随着更多遗传性疾病基因的发现和治疗方法的改善，遗传性疾病的治愈将会越来越有希望。
分子生物学题库(附参考答案)
分子生物学题库（附参考答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1.关于切口平移法下述不正确的是A、可标记线性 DNAB、可标记松散螺旋 DNAC、可标记超螺旋 DNAD、可标记存在缺口的双链 DNAE、可标记随机引物正确答案：E2.在 pH 为下述何种范围时，Tm 值变化不明显A、pH 为 5~9B、pH 为 3~5C、pH 为 5~6D、pH 为 8~11E、pH 为 4~5正确答案：A3.关于SYBR Green Ⅰ 的描述，不正确的是A、荧光染料的成本低B、适用于任何反应体系C、操作亦比较简单D、特异性强E、不需要对引物或探针进行预先特殊的荧光标记正确答案：D4.PCR 反应过程中，退火温度通常比引物的Tm 值A、低5℃B、低15℃C、高5℃D、高15℃E、相等正确答案：A5.以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其他动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案：B6.关于真菌，以下描述正确的是A、真菌种类繁多，其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性，对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案：B7.标记的参与杂交反应的核酸分子称为A、变性B、探针C、杂交D、复性E、复杂性正确答案：B8.不符合分子诊断特点的是A、灵敏度高B、特异性强C、样品获取便利D、检测对象为自体基因E、易于早期诊断正确答案：D9.在下列何种情况下可考虑进行基因连锁检测方法进行基因诊断A、基因结构变化未知B、点突变C、基因片段缺失D、表达异常E、基因片段插入正确答案：A10.关于抑癌基因的说法正确的是A、呈隐性作用方式B、抑癌基因又称为肿瘤分化抑制基因C、可以使细胞丧失生长控制和正性调控功能D、是一类可编码对肿瘤形成起促进作用的蛋白质的基因E、正常情况下促进细胞增殖、抑制细胞分化正确答案：A11.变性梯度凝胶电泳的描述中错误的是A、使 DNA 双链分子局部变性B、采用梯度变性凝胶C、变性难易由核苷酸组成决定D、突变检测率高E、可确定突变位置正确答案：E12.DNA 自动化测序技术中，不正确的荧光标记方法A、用荧光染料标记引物5’端B、用荧光染料标记引物3’-OHC、用荧光染料标记终止物D、使用一种或四种不同荧光染料标记E、使荧光染料标记的核苷酸渗入到新合成的 DNA 链中正确答案：B13.PCR 中的脱氧核苷三磷酸不包括A、dATPB、dTTPC、dCTPD、dGTPE、dUTP正确答案：E14.一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称A、变性B、复杂性C、探针D、复性E、杂交正确答案：E15.珠蛋白生成障碍性贫血的主要原因是A、珠蛋白链合成速率降低B、珠蛋白基因突变导致氨基酸序列改变C、血红蛋白破坏加速D、出现异常血红蛋白 SE、铁代谢异常正确答案：A16.众多肿瘤中遗传因素最突出的一种肿瘤是A、肺癌B、肝癌C、乳腺癌D、结直肠癌E、前列腺癌正确答案：D17.为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入A、ssDNAB、1 ×SSCC、10×SSCD、5×TBECE、50×TAE正确答案：A18.不属于脆性 X 综合征分子诊断人群的是A、有 FraX 体格或性格阳性征象者B、发育迟缓或自闭症的患者C、没有 FraX 家族史D、已明确母亲为携带者的婴儿E、未诊断的 MR 家族史正确答案：C19.病毒的遗传物质是A、DNAB、RNA 和蛋白质C、DNA 或 RNAD、RNA 和 DNAE、DNA 和蛋白质正确答案：C20.Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、长散在核原件D、短散在核原件E、DNA 转座子正确答案：D21.检测融合基因、确定染色体易位的首选方法是A、FISHB、RT-PCRC、实时定量 PCRD、PCRE、DNA 芯片正确答案：D22.母亲血浆中的胎儿 DNAA、占母亲血浆总 DNA 的 50%以上B、可用于检测胎儿从母亲遗传而来的线粒体 DNA 突变C、确定RhD 阳性孕妇所怀胎儿的RhD 情况D、确定胎儿是否从母亲遗传了X 连锁的基因突变E、血友病 A 的产前诊断正确答案：C23.关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5’端标记正确答案：E24.以下哪种方法是检测耐药基因突变的金标准 ( )A、PCR 技术B、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、PCR-SSCPE、DNA 测序技术正确答案：E25.5’-末端的 DNA 探针标记主要依靠的酶是A、T4 多聚核苷酸激酶B、末端转移酶C、AKPD、DNA pol ⅠE、DNA pol正确答案：A26.第三代测序技术测定人全基因组的目标：A、30 分钟的测序时间及 5 万美元的测序价格B、3 小时的测序时间及 5 千美元的测序价格C、30 分钟的测序时间及 5 千美元的测序价格D、3 分钟的测序时间及 5 千美元的测序价格E、3 小时的测序时间及 5 万美元的测序价格正确答案：D27.GeneXpert 全自动结核杆菌检测技术现可进行哪种药物的耐药检测A、乙胺丁醇B、利福平C、链霉素D、异烟肼E、吡嗪酰胺正确答案：B28.不是自动 DNA 测序仪主要系统之一的是A、测序反应系统B、电泳系统C、荧光检测系统D、探针荧光标记系统E、电脑分析系统正确答案：D29.下列哪一种病毒的遗传物质为 RNA ( )A、乙肝病毒B、乳头瘤状病毒C、疱疹病毒D、人类免疫缺陷病毒E、腺病毒正确答案：D30.关于 TaqMan 探针技术的描述，不正确的是A、R 基团与Q 基团相距较远，淬灭不彻底，本底较高B、易受到Taq DNA 聚合酶5’→3’核酸外切酶活性的影响C、操作亦比较简单D、不需要进行寡核苷酸熔解曲线分析，减少了实验时间E、解决了荧光染料技术非特异性的缺点正确答案：C31.下列属于抑癌基因的是 ( )A、sisB、rasC、c-erb-2D、mycE、p53正确答案：E32.荧光定量 PCR 反应中，Mg2+的浓度对 Taq 酶的活性是至关重要，以 DNA 或 cDNA 为模板的 PCR 反应中最好的 Mg2+浓度是A、0.2~0.5mMB、1~2mMC、2~5mMD、6~8mME、0.5~2mM正确答案：C33.有关 HPV 描述错误的是A、核酸类型为 DNAB、结构蛋白 L1 和 L2 是包膜上的主要和次要蛋白C、HPV 对皮肤和黏膜上皮细胞具有高度亲嗜性D、病毒核酸合成主要发生在棘层和颗粒层E、大多数宫颈癌组织中病毒以整合状态存在正确答案：B34.K-ras 基因最常见的激活方式是A、插入突变B、点突变C、缺失突变D、基因扩增E、染色体重排正确答案：B35.下列 DNA 序列中的胞嘧啶易发生甲基化修饰的是A、5’-CCCCCT-3’B、5’-GGGGCC-3’C、5’-CGCGCG-3’D、5’-GCACAC-3’E、5’-CTCTCCC-3’正确答案：C36.下列哪种病毒在复制过程中可产生 RNA-DNA 杂交体A、HIVB、HPVC、HBVD、HCVE、流感病毒正确答案：A37.绝大多数β-地中海贫血系由位于第 11 号染色体上的β-珠蛋白基因中的基因突变所致，下列方法中不能用于分子生物学检验的技术是A、PCR-ASOB、PCR-RDBC、基因芯片D、多重 PCRE、MOEA-PCR正确答案：D38.多基因家族的特点描述错误的是 ( )A、由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因B、通常由于突变而失活C、假基因与有功能的基因是同源的D、所有成员均产生有功能的基因产物E、可以位于同一条染色体上正确答案：D39.关于 DNA 芯片原位合成法的描述错误的是：A、也称在片合成B、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针C、包括光导原位合成法D、包括原位喷印合成法E、包括直接点样法正确答案：E40.下列方法中不能分辨野生型和突变型基因的是A、PCR-SSCPB、变性梯度凝胶电泳C、熔解曲线分析D、逆转录 PCR正确答案：D41.下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性：A、随机扩增DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案：B42.下列不是目前用于 O157：H7 型大肠埃希菌分子生物学检验方法的是A、常规 PCRB、多重 PCRC、荧光定量 PCRD、基因芯片技术E、DNA 测序正确答案：E43.未知突变的检测，下列最准确的方法是A、PCRB、RFLPC、核酸杂交D、序列测定E、ASO正确答案：D44.任意引物 PCR 的特点描述错误的是A、需预知靶基因的核苷酸序列B、通过随机引物与模板序列随机互补C、扩增后可直接得到靶基因的多态性指纹图谱D、可用于基因组 DNA 图谱构建E、可用于临床致病菌的流行病学检测、分型正确答案：A45.巢式 PCR 错误的是A、是对靶 DNA 进行二次扩增B、第二次扩增所用的模板为第一次扩增的产物C、巢式 PCR 可提高反应的灵敏度和特异性D、常用于靶基因的质和 (或) 量较低时E、第二对引物在靶序列上的位置应设计在第一对引物的外侧正确答案：E46.下列不是细菌感染性疾病分子生物学检验技术的是A、PCR-SSCPB、real-time PCRC、ELISAD、PFGEE、PAPD正确答案：C47.通过酶联级联反应检测每次核苷酸聚合所产生的ppi 的测序方法是A、化学降解法B、寡连测序C、焦磷酸测序D、边合成边测序E、双脱氧终止法正确答案：C48.以 SDA 技术检测结核杆菌时扩增靶点是A、SDAB、IS6110 和 18SrRNAC、IS6110 和 5SrRNAD、IS6110 和 16SrRNAE、IS6110 和 15SrRNA正确答案：D49.STR 法医鉴定的基础是A、基因多态性B、碱基配对原则C、蛋白质空间结构D、孟德尔遗传定律E、基因扩增技术正确答案：D50.关于 APC 基因说法不正确的是A、是一种抑癌基因B、定位于染色体 5q21 上C、通过编码 APC 蛋白发挥作用D、APC 蛋白在细胞周期进程、细胞生长调控及维持自身稳定中起着重要作用E、APC 蛋白在肿瘤发生发展的全过程中并不稳定正确答案：E51.Northern 印迹杂交可以用于A、快速确定是否存在目的基因B、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C、检测靶分子是 RNAD、用于基因定位分析E、用于阳性菌落的筛选正确答案：C52.描述 PCR-RFLP 技术在耐药突变检测方面错误的是：A、分型时间短B、技术简便C、突变要存在限制性内切酶酶切位点D、目前被广泛应用于耐药监测E、只能检测特定的突变位点正确答案：D53.单基因遗传病分子诊断的主要应用是A、产前诊断B、携带者筛查C、携带者诊断D、症状前诊断E、耐药基因检测正确答案：A54.结核分支杆菌的基因组特征是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：B55.下列关于细菌感染性疾病的分子生物学检验说法错误的是A、可以检测不能或不易培养、生长缓慢的病原菌B、可以实现对感染细菌的广谱快速检测C、可以对细菌进行基因分型D、可以检测病原菌耐药基因E、其检验技术都是 PCR 及其衍生技术正确答案：E56.最早应用于 HLA 基因分型的方法是A、RFLP 分型技术B、PCR-SSCP 技术C、测序技术D、PCR-SSO 技术E、PCR-SSP 技术正确答案：A57.编码 HIV 衣壳蛋白的是A、gag 基因B、vif 基因C、pol 基因D、tat 基因E、env 基因正确答案：A58.关于核酸探针的种类下列不正确的是A、cDNA 探针B、寡核苷酸探针C、基因组 DNA 探针D、RNA 探针E、双链 DNA 探针正确答案：E59.下列关于引物设计的原则中，错误的是A、两条引物的Tm 值相差尽量大B、G+C 的含量应在 45%~55%之间C、尽量避免引物二聚体的出现D、反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L 之间E、5’端可加修饰基团正确答案：A60.多重 PCR 的描述中正确的是：A、同一个模板，多种不同的引物B、相同的引物，多种不同的模板C、多个模板，多种引物D、引物的Tm 值、反应时间和温度、反应缓冲液等尽量不一致以区分不同产物E、同一反应内各扩增产物片段的大小应尽可能相同或接近正确答案：A61.PCR 反应体系的描述错误的是A、模板B、一条引物C、dNTPD、DNA 聚合酶E、缓冲液正确答案：B62.关于 FISH 在白血病的应用中说法正确的是A、主要用于白血病的初诊和复发的检测B、只适用于体液、组织切片标本C、FISH 只能检测处于分裂中期的细胞D、FISH 的灵敏度高于 PCRE、FISH 是检测融合基因、确定染色体易位的首选方法正确答案：A63.mtDNA 中基因数目为A、39 个B、27 个C、22 个D、37 个E、13 个正确答案：D64.硝酸纤维素膜最大的优点是( )A、本底低B、高结合力C、共价键结合D、非共价键结合E、脆性大正确答案：A65.要制订一个能够简洁准确的 DNA 测序方案，首先应考虑A、DNA 片段大小B、测序方法C、实验条件D、测序目的E、测序时间正确答案：E66.寡核苷酸探针的最大的优势是A、易分解B、易标记C、杂化分子稳定D、可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列E、易合成正确答案：D67.关于支原体的描述错误的是A、支原体是一类在无生命培养基中能独立生长繁殖的最小原核细胞微生物B、支原体有一个环状双链 DNAC、以二分裂方式进行繁殖D、其分裂与 DNA 复制同步E、解脲脲原体、人型支原体和生殖器支原体均可引起泌尿生殖道感染正确答案：D68.下列几种 DNA 分子的碱基组成比例，哪一种的Tm 值最高 ( )A、A+T=15%B、G+C=25%C、G+C=40%D、A+T=80%E、G+C=60%正确答案：A69.PCR 反应必需的成分是A、BSAB、DTTC、Tween20D、明胶E、Mg2+正确答案：E70.Southern 印迹杂交的描述正确的是A、不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：A71.关于非放射性探针标记，下列描述不正确的是A、对人体危害小B、可长时间使用C、酶促显色检测最常使用的酶是碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶D、灵敏度不如放射性探针E、目前应用的非放射性标志物都是抗原正确答案：E72.作为芯片固相载体的材料描述正确的是A、主要有玻片、硅片等实性材料B、不使用硝酸纤维素膜、尼龙膜及聚丙烯膜等膜性材料C、这些载体材料不需要处理，其表面存在活性基团 (如羟基或者氨基)D、可以直接固定已经合成的寡核苷酸探针E、不需要对介质表面进行化学预处理--活化正确答案：A73.检测靶序列是 DNA 的技术是：A、Southern 杂交B、Western 杂交C、Northern 杂交D、Eastern 杂交E、杂交淋巴瘤正确答案：A74.目前的 DNA 自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约A、50bpB、100bpC、500bpD、1000bpE、2000bp正确答案：D75.在人类基因组 DNA 序列中，DNA 甲基化主要发生在A、腺嘌呤的 N-6 位B、胞嘧啶的 N-4 位C、鸟嘌呤的 N-7 位D、胞嘧啶的 C-5 位E、鸟嘌呤的 C-5 位正确答案：D76.有关微卫星的描述正确的是A、散在重复序列的一种B、10~100bp 组成的重复单位C、主要存在于着丝粒区域，通常不被转录D、形式为 (CA) n/ (TG) n、 (AG) n、 (CAG) n 等E、又称为可变数目串联重复序列 (VNTR)正确答案：D77.关于逆转录 PCR 的描述，不正确的是A、首先应将 RNA 转化为 cDNA 才能进行 PCRB、除了使用DNA 聚合酶外，还应使用逆转录酶C、模板为 RNAD、oligo-d (T) 理论上可以将所有的 mRNA 进行逆转录反应E、逆转录酶不需要引物进行逆转录反应正确答案：E78.以下不是原癌基因的特点的是A、广泛存在于生物界，是细胞生长必不可少的B、在进化过程中，基因序列呈高度保守性C、通过表达产物 DNA 来实现功能D、在某些因素的作用下会形成能够致瘤的癌基因E、对正常细胞不仅无害，而且是细胞发育、组织再生、创伤愈合等所必需正确答案：C79.PCR-ASO 描述错误的是A、需要寡核苷酸探针B、检测点突变的技术C、PCR 产物必须电泳分离D、需正常和异常两种探针E、需严格控制杂交条件正确答案：C80.下列不是片段性突变引起原因的是A、基因重排B、碱基插入C、碱基缺失D、碱基扩增E、转录异常正确答案：E81.在核酸检测体系中加入内质控，其作用不是监控的是A、试剂失效或 Taq 酶活性降低所致的假阴性B、标本中抑制物或干扰物所致的假阴性C、样本吸取错误所致的假阴性D、仪器故障如扩增仪孔间温度差异所致的假阴性E、核酸提取效率太低所致的假阴性正确答案：C82.第一代 DNA 测序技术的核心技术是A、Sanger 的双脱氧链终止法B、Maxam 和 Gilbert 的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR 技术E、DNA 自动分析技术正确答案：A83.目前测序读长最大的测序反应：A、边合成边测序B、化学裂解法C、双脱氧终止法D、连接测序E、焦磷酸测序正确答案：C84.以下对镰刀状红细胞贫血症叙述正确的是 ( )A、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成缬氨酸残基B、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成苯丙氨酸残基C、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成丝氨酸残基D、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成异亮氨酸残基E、血红蛋白的β链第 6 位由谷氨酸残基变成甘氨酸残基正确答案：A85.转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案：D86.HBV DNA 中最大的一个开放阅读框是A、P 基因区B、S 基因区C、X 基因区D、前 S1 基因区E、C 基因区正确答案：A87.HCV 的核酸是A、+ssRNAB、dsRNAC、dsDNAE、-ssRNA正确答案：A88.第二代测序技术一般不用到A、双脱氧链终止法B、文库接头C、高通量的并行 PCRD、高通量的并行测序反应E、高性能计算机对测序数据进行拼接和分析正确答案：A89.硝酸纤维素和PVDF 膜结合蛋白主要靠( )A、疏水作用B、氢键作用C、离子键作用D、盐键作用E、酯键作用正确答案：A90.关于梅毒螺旋体的实验室检测，下列描述正确的是A、分子生物学方法是耐药基因分析和流行学研究的首选方法B、镜检法简便，特异性高，但不能用于皮肤黏膜损害的早期诊断C、诊断梅毒的传统方法是体外培养D、血清学检查普遍用于梅毒的筛查、疗效观察和流行病学检查，对早期梅毒诊断敏感E、分子生物学方法不能早期诊断梅毒感染正确答案：A91.纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8，可使比值降低的是 ( ) ：B、牛血清白蛋白C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案：A92.能发出γ-射线的放射性核素是A、3HB、14CC、32PD、35SE、125I正确答案：E93.定点诱发突变可以通过以下哪个过程获得：A、PCRB、LCRC、RT-PCRD、SSCPE、ASO正确答案：A94.在人类基因组中，编码序列占的比例为A、3%B、21%C、5%D、23%E、1.5%正确答案：E95.当标本核酸量非常低难以扩增时，可采用的 PCR 技术是A、逆转录 PCRB、转录介导扩增C、原位 PCRD、巢式 PCRE、荧光 PCR正确答案：D96.聚合酶链式反应是一种A、体外特异转录 RNA 的过程B、体外翻译蛋白质的过程C、体外特异转录 DNA 的过程D、体外特异复制 DNA 的过程E、体内特异复制 DNA 的过程正确答案：C97.下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案：C98.唯一一个在结肠上皮增殖过程中起看门作用的基因是A、MCC 基因B、DCC 基因C、APC 基因D、p53 基因E、HNPCC 基因正确答案：C99.线粒体基因组与核基因组之间，下面描述不正确的是A、线粒体基因组与核基因组分别在不同的位置进行自主复制和转录，之间互不影响B、mtDNA 突变可引起编码蛋白功能障碍，影响细胞呼吸、氧化功能，进而影响核 DNA 的表达C、mtDNA 自主性复制，但复制所需的酶、调控因子等由核基因编码D、二者虽在地理位置上独立，但二者之间关系十分密切E、线粒体基因组与核基因组之间存在“交叉对话” ，相互影响，相互协调正确答案：A100.下列属于抑癌基因的是 ( )A、rasB、mycC、c-erb-2D、sisE、Rb正确答案：E。
分子诊断临床应用-遗传性疾病的分子诊断精选全文
因此
是否存在BK病毒感染，形态学仅作为筛查 实验。
病毒核酸定量可有效地动态观察病毒核酸 的复制。
BK病毒核酸定量检测
用于检测BK病毒是否复制 为是否需要进行病理学检查提供依据 监测疾病和评价治疗效果 预防间质性肾病，防止移植远期失败
二、遗传性疾病的分子诊断
分子诊断能够检出家系中的致病基因 携带者或高危个体，能够在胎儿出生前判 断其是否为患者，因此分子诊断是降低单 基因遗传病发病率的根本措施。
BK病毒复制的检测 血、尿中BK病毒核酸定量检测 尿液中decoy细胞检查 尿沉渣涂片原位杂交 组织病理学检查（判断肾脏间质性肾病）
肾脏移植术后病人BK病毒检测的研究
对象 瑞金医院肾脏移植术后2个月~3年的患者95例 正常人标本60例 研究方法 尿沉渣细胞形态学检测 血、尿中BK 病毒DNA的定量检测
BK病毒于1971年首次从肾脏移植受体的尿液 中分离出。病毒主要在宿主的细胞核内进行 复制。
在美国，10岁以上的正常人群中60%～80%有BK 病毒感染史。
感染的病毒多潜伏于肾小管上皮细胞和尿道上 皮细胞中。
BK病毒的重新激活大部分是由于免疫机制缺陷 或大量使用免疫抑制剂后。
肾脏移植术后大量使用免疫抑制剂，使BK病毒重 新激活，大量复制。
一、基因检测在感染性疾病中的应用
SARS相关冠状病毒的分子诊断
2003年4月，香港研究者Peiris等报告了50 例严重 型急性呼吸道综合征(serious acute respiratory syndrome, SARS) 病人的临床表现和病毒学研究 结果。
一种新的冠状病毒 (Coronavirus) 是SARS的致病 原因。 (Lancet, 2003, 361: 9365)