高中生物实验 叶绿体的分离和荧光观察 实验报告

实验十一叶绿体的分离和荧光观察

一．实验目的

了解细胞匀浆和差速离心分级分离细胞组分的原理。了解提取叶绿体的基本原理及其过程，通过光学显微镜的观察了解体外分离的叶绿体的一般

形态，增加对叶绿体的感性认识。

掌握吖啶橙染色叶绿体的方法。

掌握显微数码拍照的方法。

二．实验内容

提取叶绿体，吖啶橙染色，观察染色结果。

显微数码拍照。

三．实验原理

将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。

在一定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部。叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/LNacl或0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行。离心后可得沉淀的叶绿体。

四．实验方法与步骤

1．取嫩叶3g，洗净去柄去叶脉，剪碎放入研钵中。

2．加4ml0.35mol/LNacl，研磨匀浆，尼龙布过滤于离心管中1ml。

3．1000rpm离心2分钟弃去沉淀。

4．3000rpm离心15分钟，弃去上清液，将沉淀用少量0.35mNacl悬浮。

5．提取叶绿体观察：①普通光镜②荧光光镜③加吖啶橙。

6．撕取叶表皮观察：①普通光镜②荧光光镜③加吖啶橙。

a．在普通光镜下，可看到叶绿体为绿色椒榄形，在高倍镜下看到叶绿体内部含有较深的绿色的绿色小颗粒即基粒。

b．在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光。

c．加入吖啶橙染后，叶绿体可发也桔红色荧光。而其中混有的细胞核发

出绿色荧光菠菜叶手切片观察。

d．在普通光镜下可以看到三种细胞：表皮细胞：为边缘吐锯齿表的鳞片状细胞。保卫细胞：为构成气孔的成对存在的肾形细胞。叶肉细胞：为排成栅状的长形和椭圆形细胞。

5．显微数码拍照。

五．实验结果