高中生物实验 叶绿体的分离和荧光观察 实验报告
高中生物 实验二 密度梯度离心法分离提纯叶绿体及叶绿体荧光观察
叶
绿 体
叶 脉
叶 肉 细 胞
菠菜叶横切图（10×40）
保卫细胞
叶绿体
菠菜表皮细胞
（匀浆后，示表皮细胞、保卫细胞、叶绿体。 10×40）
蔗糖梯度离心分离菠菜叶绿体（10×40）
菠菜叶肉细胞、表皮细胞（匀浆后10×40）
（叶绿体浓度过大）
荧光显微镜的光路及主要部件
光源 激发光挡片 激发光滤色镜 分色镜
实验二 密度梯度离心法分离提 纯叶绿体及叶绿体荧光观察
一、实验目的
学习密度梯度法，分离提纯菠菜叶 绿体及叶绿体的荧光显微镜观察。
二、实验原理
一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗 粒的大小、形状和密度，也同离心力以及 悬浮介质的粘度有关；
用两种浓度的蔗糖溶液制成的梯度，在 离心条件下，叶绿体和比它沉降系数小 的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降 系数较大的细胞组分沉到离心管底部， 这样，可粗 器材：光学显微镜、台式高速冷冻离心机，
研钵、剪刀、托盘、玻皿等 3. 试剂： （1）匀浆介质（0.25 mol/L蔗糖、
0.05 mol/L Tris-HCI缓冲液，pH7.4） （2）50%蔗糖溶液，（3）15%蔗糖溶 液。
四、实验步骤
1. 洗净菠菜叶，尽可能使它干燥，去掉叶柄、 主脉后，称取2~3g，剪碎置研钵中。
2. 加入10ml匀浆介质于研钵中，研磨成糜状。 3. 用双层纱布过滤捣碎液到烧杯中。 4. 将滤液倒于离心管内，500rpm离心10min，
轻轻吸取上清液。
5. 先将50%蔗糖溶液0.4ml加入离心管，再取 15%蔗糖溶液0.4ml小心沿管壁缓缓注入， 不能搅动50%蔗糖液面，使两种溶液界面 可见，制成密度梯度。
6. 加入0.4ml上清液，严格平衡离心管后，用 水平转头8000r/min离心，20min。
实验二叶绿体的分离与荧光观察
叶绿体荧光产生的机制
荧光产生
叶绿体在接受光能后，将能量转化为活跃的化学能，这个过程会产生荧光。荧光是一种光发射现象，发生在叶绿 素和其他色素分子吸收光能后。
荧光类型
根据荧光产生的机制，可以将荧光分为自发性荧光和诱导荧光。自发性荧光是指色素分子自发地吸收光能后产生 的荧光；诱导荧光是指通过外部刺激使色素分子吸收光能后产生的荧光。
叶绿体的分离
01
02
03
04
制备匀浆
将新鲜叶片洗净后剪碎，加入 适量的磷酸缓冲液，用匀浆器
充分研磨的转速和时间进行离心分离，
使叶绿体沉淀到底部。
吸取上清液
将上清液吸出，留下叶绿体沉 淀。
重悬浮
将叶绿体沉淀重新悬浮在适量 的溶液中，以便进行后续的荧
光观察。
实验二叶绿体的分 离与荧光观察
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 实验结论
01
CATALOGUE
实验目的
掌握叶绿体的分离技术
叶绿体的分离
通过离心、密度梯度离心等技术，从植物组织中分离出叶绿 体。
叶绿体纯化
通过过滤、洗涤等步骤，去除杂质，获得纯度较高的叶绿体 。
了解叶绿体荧光的基本原理
叶绿体分离的原理与方法
原理
叶绿体分离主要依据其密度和大小差异进行。常用的分离方法有差速离心法和密度梯度离心法。差速 离心法是通过逐渐增加离心速度，使不同大小和密度的细胞器分批分离；密度梯度离心法则是在介质 中形成密度梯度，使不同密度的细胞器在梯度中停留并形成不同的区带。
方法
叶绿体分离通常包括细胞破碎、差速离心或密度梯度离心、洗涤和重悬浮等步骤。根据实验需求，可 以选择适当的方法分离纯化叶绿体。
实验三 叶绿体的分离与荧光观察
实验三叶绿体的分离与荧光观察一、实验目的1．了解差速离心法分离细胞成分的一般原理和方法。
2．掌握从植物叶组织中分离叶绿体的方法。
3．熟悉荧光显微镜的使用方法，并观察叶绿体的自发荧光和次生荧光。
4．熟悉利用叶绿体得率来测量叶绿素含量。
二、实验原理叶绿体是是植物细胞中由双层膜围成，含有叶绿素能进行光合作用的能量转换细胞器。
由于具有这一重要功能，所以它一直是植物学、细胞生物学和遗传学等的重要研究对象。
植物细胞被细胞壁所包围，因此实验中必须破碎细胞壁的同时保持叶绿体的完整。
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器。
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离叶绿体等细胞器的常用方法。
差速离心就是根据一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，及离心力以及悬浮介质的粘度等因素进行的。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35 mol/L氯化钠或0.4 mol/L蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损坏。
先将匀浆液在1 000 rpm的条件下离心2 min（以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞），然后在 3 000 rpm的条件下离心5 min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。
分离过程最好在0～4℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。
有些生物体内的物质受激光照射后可直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光为次生荧光（或间接荧光）。
叶绿体含有的叶绿素发出火红色荧光属于自发荧光，叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光属于次生荧光。
三、实验仪器、材料和试剂1．设备与器材。
叶绿体的分离及荧光观察
什么是荧光 ?
物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态（基态）时释放出的光。
三、荧光显微镜的成像原理
01
保持固有的荧光特性
02
荧光波长＞激发波长
03
荧光强度极小于激发光的强度
04
有不同程度的衰减
05
荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率
四、荧光的性质
五、荧光显微术应用
常用的细胞破碎方法
方法
技术
原理
效果
成本
举例
机 械 法
匀浆法
细胞被搅拌器劈碎或受剪切力而破碎
适中
适中
动植物组织或细胞
研磨法
细胞被研磨物磨碎
适中
便宜
植物组织
超声波法
用超声波的空穴作用使细胞破碎
剧烈
昂贵
细胞悬浮液小规模处理
珠磨破碎法
细胞被玻璃珠或铁珠捣碎
剧烈
便宜
细胞悬浮液和植物细胞大规模处理
化 学 法
渗透冲击
生物绘图 1．要求：细胞和组织绘图是根据显微镜下的观察内容绘制的，因此，首先要充分观察了解所绘材料的特点、排列及比例。选择有代表性的、典型的部位进行绘图。客观真实地反映材料的自然状态。即生物绘图要求具备高度的科学性和真实感，形态正确、比例适当、清晰美观。 2、用线条和圆点来完成全图。如，用线条描绘细胞壁与膜。用“点”表示明暗和颜色的深浅，给予立体感 3、不要只孤独的绘制一个细胞，要表现出显微镜下还有其他细胞的存在，
介质梯度应预先形成 ，离心前将样品小心铺放在密度梯度溶液表面、底部或中间，离心后形成区带。
介质梯度不需预先制备，离心时把密度均一的介质液和样品混合后装入离心管，通过离心自形成梯度，让颗粒在梯度中进行再分配。
叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验报告
叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验报告叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验⽬的：1、通过植物细胞叶绿体的分离与纯化，了解细胞器分离与纯化的原理和⽅法2、熟悉荧光显微镜的使⽤⽅法，观察叶绿体的⾃发荧光和间接荧光实验原理：差速离⼼法⽤于分离⼤⼩不同的物体。
在差速离⼼中细胞器沉降的顺序为：细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质⽹与⾼尔基体、醉后为核糖核蛋⽩复合体。
密度梯度离⼼法是⽤⼀定的介质在离⼼管内形成连续的密度梯度，将细胞悬浮液或匀浆置于介质的顶部，通过离⼼⼒的作⽤使细胞或细胞器分层、分离，最后不同密度的细胞或细胞器位于与⾃⾝密度相同的沉降区带中。
叶绿体是⼀种⽐较⼤的细胞器，利⽤差速离⼼即可分离收集，然后⽤密度梯度离⼼纯化，便可⽤于各种研究。
实验⽤品：新鲜菠菜、提取缓冲液、蔗糖溶液、0.01%吖啶橙、离⼼机、电⼦天平、荧光显微镜、剪⼑、研钵、移液管、漏⽃、滴管、10ml离⼼管实验步骤：1、选取新鲜嫩绿菠菜叶，去叶梗及粗脉，洗净擦⼲，称30克放于150ml 0.35M.Nacl溶液中2、将液、叶同装⼊组织捣碎机中，匀浆3-5分钟，转速5000r/min3、将匀浆⽤纱布（6层）过滤于500ml烧杯中4、取滤液4ml在1000r/min下离⼼2min5、取上层清液在3000r/min下离⼼5min（沉淀为叶绿体和细胞核混合物）6、将沉淀⽤2-3mlMnacl液悬浮7、取⼀滴悬液滴⽚，加盖玻⽚后显微镜下观察8、另取⼀滴悬液滴⽚，再滴加⼀滴0.01%吖啶橙染料，混匀，盖上盖玻⽚，在荧光显微镜下观察实验结果：普通显微镜下，叶绿体呈橄榄形，绿⾊，⾼倍镜下可看到基粒（深绿⾊⼩颗粒）。
荧光显微镜下，叶绿体⾃发荧光为“⽕红⾊”，次⽣荧光为“橘红⾊”分析与讨论：1、捣碎叶⽚式时时间不宜过长，否则会破坏叶绿体2、⽤荧光显微镜找到物象后，要先拍照后观察，因为荧光会逐渐变弱。
高中生物 实验四：叶绿体的分离与荧光观察
6.沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。 7.取叶绿体悬液1滴置于载玻片上，加盖玻片后用普通光 学显微镜观察。使用荧光显微镜观时，将叶绿体悬液滴在 无荧光的载玻片上，再滴加1滴0.01%吖啶橙荧光染料， 盖上无荧光的盖玻片后即可观察。
8.观察叶绿体的形态结构、测量1~5个叶绿体的长轴和短
【ห้องสมุดไป่ตู้验原理】
某些物质在一定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光 能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间 内放射出比照射光波长更长的光（如可见光），这种光就
称为荧光。若停止供能，荧光现象立即停止。有些生物体
内的物质受激发光照射后，可直接发出荧光（称为自发荧 光），如叶绿素的火红色荧光。有的生物材料本身不发荧 光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光（称为间接荧 光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光本实验利用 荧光显微镜对发荧光的叶绿体进行观察。
实验四：叶绿体的分离与荧光 观察
【实验目的】
了解叶绿体分离的一般原理和方法，并熟悉应用 荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。
【实验原理】
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，能发生 特有的能量转换。利用低速离心机可以分离叶绿 体，其分离在等渗溶液（0.35mol/L氯化钠或 0.4mol/L蔗糖溶液）中进行，目的是为了防止渗 透压的改变引起叶绿体的损伤。将匀浆液在 1000r/min离心，去除其中的组织残渣和一些未 被破碎的完整细胞，然后，3000r/min离心，可 获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。在室温 下进行分离要迅速。
【仪器、材料与试剂】
仪器：普通离心机，组织捣碎机，天平，荧光显微镜，显微 镜，载玻片，盖玻片，镊子，接种针，目镜测微尺，物镜测 微尺，恒温箱，培养皿，滤纸，试管，试管架，移液管，滴 管，烧杯，无荧光载片，盖玻片，离心管。 材料：菠菜叶片
叶绿体的染色与观察 实验报告
细胞生物学实验报告叶绿体的分离与荧光观察1.实验目的：通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
观察叶绿体自发荧光和次生荧光，熟悉荧光显微镜的使用方法。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、荧光显微镜、载玻片、盖玻片、胶头滴管、离心管、离心机、组织捣碎机、（2）实验药品：NaCl溶液、吖定橙染液（3）实验材料：菠菜3.实验原理：（1）将组织匀浆悬浮在等渗介质中进行差速离心是分离细胞器的常用方法。
差速离心是指将组织悬液放在离心机中，依次增加离心场力、离心时间，以达到分离的目的。
一个颗粒在离心场中的沉降速率取决与颗粒的大小、形状和密度，也与离心力以及悬浮介质的黏度有关。
在一给定的离心场中，同一时间，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
依次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批称将在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
对于植物细胞而言，分离过程最好在0-5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。
动物细胞应冷冻离心。
（2）荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光物质进行观测的一种技术。
其原理基于光致发光。
光致发光是指某种物质被一定的波长照射时，吸收一定的光能进入激发态，从激发态回到基态时，就会以电离辐射的形式释放能量的现象。
如果其释放的激发光的波长比照射光的波长长，且时间小于10-8s以内，这种激发光即可成为荧光。
（3）荧光显微镜比普通显微镜多出的结构是阻断滤片、双色镜和激发滤片。
荧光显微镜有两个光源，一个是激发光源，一般是高压汞灯（发射光的波长在500nm左右）和氙灯；另一个是普通光源，一般采用卤灯泡（发射光的波长在500-600nm左右）。
（4）本实验采用的染料是吖定橙染液。
吖定橙染液是一种核酸染料。
当调节激发光波长为488nm时，吖定橙染液结合于DNA中，其发射波长为540nm，呈绿色；结合于RNA中，发射波长为610nm，呈红色。
当用吖定橙染液对细胞染色后并置于共聚焦显微镜下观察，即可观察到细胞核呈绿色，而细胞质呈红色。
叶绿体的分离、纯化及荧光观察
叶绿体的分离、纯化及荧光观察科目细胞生物学实验姓名*** 系年级2011级生物基地学号***日期2013.05.16 同组者***叶绿体的分离、纯化及荧光观察【实验目的】1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。
【实验原理】将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。
一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。
通过控制离心力和离心时间等因素，不同的细胞器可以通过阶梯离心的方式得到分离。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。
依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部．分批收集即可获得各种亚细胞组分。
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
将匀浆液在1000r/min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。
然后，3000r/min 的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
分离过程最好在0—5℃的条件下进行：如果在室温下，要迅速分离和观察。
荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察的一种技术。
某些物质在—定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光．若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
叶绿体的荧光染色与观察
姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目叶绿体的分离与荧光观察【实验题目】叶绿体的分离与荧光观察【实验目的】1、通过对植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光3、熟悉荧光显微镜的使用方法。
【实验材料与用品】1. 器材：离心机、组织捣碎机、天平、荧光显微镜、烧杯、量筒、胶头滴管、刻度离心管六层纱布，载玻片、盖玻片等2. 材料：新鲜菠菜3. 试剂：0.35 mol/L氯化钠溶液，0.01％吖啶橙(acridine orange)【实验原理】I.叶绿体分离的原理匀浆破碎细胞：利用差速离心方法分离等渗介质中的悬浮颗粒，收集类叶绿体大小的颗粒，得到叶绿体。
差速离心:颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和颗粒大小不同的颗粒其沉降速度也不同。
依次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
叶绿体的分离应在等渗溶液中进行（0.35mol/L氯化钠溶液或0.4mol/L蔗糖溶液），以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
分离过程最好在0-5℃条件下进行：如果在室温下，要姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目叶绿体的分离与荧光观察迅速分离和观察。
II.差速离心特点：介质密度均一，速度由高到低，逐级离心；用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器；沉降顺序：核---线粒体---溶酶体和过氧化物酶体---内质网与高尔基体---核蛋白体，可将细胞器初步分离，常需要进一步通过密度梯度离心再进行分离纯化。
III.①荧光的概念光致发光：某些物质在照射下，吸收光能进入激发态，当从激发态回到基态时，可以以电磁辐射的形式释放出吸收的光能，这种现象称为“光致发光”。
紫外辐射、可见光以及红外辐射均可引起光致发光，如磷光和荧光。
叶绿体的分离与荧光观察实验报告
叶绿体的分离与荧光观察实验报告好嘞，今天咱们聊聊叶绿体的分离与荧光观察实验，这可是个既有趣又有点神秘的过程哦。
叶绿体是植物细胞里一个特别重要的小家伙，简直就是植物的太阳能工厂。
它们把阳光转化为化学能，简直像是大自然的魔法师。
今天的实验就围绕着这些小精灵来展开，让我们一起揭开它们的神秘面纱。
咱们得准备好一些材料。
可以用菠菜叶，没错，就是那种绿色的、看起来特别健康的叶子。
选几片新鲜的，感觉就像是在挑选食材一样。
咱们要把这些菠菜叶用刀剪成小块，动作要轻柔点，别把自己给划了，嘿嘿。
剪好之后，准备一个清水盆，把这些小叶子泡进去，让它们稍微放松放松，感受一下水的滋润。
水是生命之源，没错！然后，咱们得准备一台榨汁机，嗯，没错，就是那种能把东西变成液体的机器。
把泡过水的菠菜叶放进榨汁机，倒点水，加点冰块，嘿，榨汁的时候声音可真像在开派对！随着咕噜咕噜的声音，菠菜叶就变成了一杯绿色的汁液，看看这颜色，真是好看得不得了。
这可不是普通的绿色，里面有丰富的叶绿素，嗯，想想都让人开心。
咱们要把这杯绿色汁液过滤一下，把渣滓都捞出来。
用个细网筛或者纱布都行，慢慢来，别心急，毕竟好东西要慢慢来嘛。
过滤完之后，剩下的就是一杯清澈的绿色液体，咳咳，真想来一口，当然不能喝，实验可不能马虎。
现在到了最激动人心的时刻了！准备好荧光显微镜，哇，听上去就让人心跳加速。
把过滤后的液体滴到显微镜的载玻片上，咱们得轻轻地盖上盖玻片，像是在给小家伙们盖被子一样。
然后，把它放在显微镜下，慢慢转动镜头，哇，果然不负所望！当你看到那些小小的叶绿体在光下闪闪发光，简直就像星星在夜空中一闪而过，太美了，心里那个美呀，简直不敢相信自己的眼睛。
荧光显微镜真是个神奇的玩意儿，能让咱们看到那些肉眼看不见的东西，真是太酷了。
叶绿体在荧光下，仿佛是穿上了闪亮的衣服，优雅地在液体中游动，感觉它们都在跟你打招呼呢。
想想看，平时它们在叶子里默默工作，这次终于被我们发现了，心里别提多得意了。
叶绿体分离和荧光观察
叶绿体的分离及荧光观察XXX,YYY,ZZZ一、实验目的：1通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法2观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法二、实验原理：将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。
一个颗粒在离心场中的沉降速度取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
以此增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
叶绿体分离应在等渗溶液中进行，以免渗透压改变使叶绿体损伤。
将匀浆在1000r/min 的条件下离心2分钟，以除去其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。
然后，在3000r/min 的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体。
分离过程最好在0~5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。
利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照，；另外，在制作荧光显微镜标本时最好使用无荧光载玻片、盖玻片和无荧光油。
三、实验用品：1、材料：新鲜菠菜2、试剂：0.35mol/L氯化钠溶液、0.01％吖啶橙。
3、器材：离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜、盖玻片、载玻片、烧杯等四、实验步骤：1、叶绿体的分离与观察：（1）取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗，称30g于150mL0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。
（2）利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆3~5分钟。
（3）将匀浆用六层纱布过滤于500mL烧杯中。
（4）取滤液4ml在1000r/min下离心2分钟。
弃去沉淀。
（5）将上清液在3000r/min下离心5min。
弃去上清液，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核）。
（6）将沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。
叶绿体荧光观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解叶绿体的结构和功能。
2. 掌握荧光显微镜的使用方法。
3. 通过观察叶绿体的荧光，了解光合作用的过程。
二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的细胞器，其主要功能是利用光能将水和二氧化碳转化为有机物质和氧气。
叶绿体中含有叶绿素等色素，可以吸收光能，并在荧光显微镜下观察到其自发荧光和次生荧光。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶、蒸馏水、0.35mol/L氯化钠溶液、吖啶橙荧光染料、无荧光载片和盖片。
2. 实验仪器：组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜、烧杯、量筒、滴管、刻度离心管、纱布。
四、实验步骤1. 准备叶绿体悬液：取新鲜菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称量于蒸馏水中，装入组织捣碎机。
低速匀浆，将匀浆用纱布过滤于烧杯中。
2. 离心分离：每组取滤液进行离心，弃去沉淀。
将上清液在3000r/min的条件下离心5min，弃去上清液，沉淀即含叶绿体（混有部分细胞核）。
3. 悬浮叶绿体：将沉淀用0.35mol/L氯化钠溶液悬浮。
4. 荧光显微镜观察：a. 直接荧光观察：取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在荧光显微镜下观察叶绿体的自发荧光。
b. 间接荧光观察：取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴加一滴吖啶橙荧光染料，加盖片后即可在荧光显微镜下观察叶绿体的次生荧光。
5. 菠菜叶手撕片观察：轻轻撕取新鲜嫩菠菜叶的表皮，展平置于载玻片上，加盖玻片后观察。
五、实验结果与分析1. 直接荧光观察：在荧光显微镜下，叶绿体呈现明亮的绿色荧光，表明叶绿体中含有叶绿素等色素。
2. 间接荧光观察：在荧光显微镜下，叶绿体呈现明亮的橙色荧光，表明叶绿体在吖啶橙荧光染料的作用下，发生了次生荧光反应。
3. 菠菜叶手撕片观察：在荧光显微镜下，菠菜叶表皮细胞呈现明亮的绿色荧光，表明菠菜叶表皮细胞中含有叶绿素等色素。
六、实验结论1. 叶绿体是植物细胞中进行光合作用的细胞器，其主要功能是利用光能将水和二氧化碳转化为有机物质和氧气。
【精选】实验3叶绿体的分离与荧光观察
实验三 叶绿体的分离与荧光观察
植物 细胞核 细胞 过滤 匀浆
线粒体 叶绿体 溶酶体 等
微粒体 细胞质膜 大多聚核糖 体等
核糖体亚基 小多聚核糖体 等
细胞质中 可溶部分
生命科学学院
一、实验目的：
1. 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般 原理和方法。
2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微 镜的使用方法。
三、实验用品：
1、试剂: ① 0.35mol/L 氯化钠溶液 ② 0.01%吖啶橙荧光染料。
2、材料: 新鲜菠菜 3、器材：150ml烧杯, 50ml 量筒 , 滴管 , 10ml 刻度离心管, 纱 布若干，载片和盖玻 片。 4、设备：离心机、研钵、天平、普通光学显微镜、荧光显 微镜。
四、实验方法与步骤：
3.菠菜叶徒手切片观察 ① 用单面刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削一斜面
置于载玻片上，滴加1～2滴0.35mol/L NaCl 溶液，加盖片后轻压，置于普通光镜和荧 光显微镜下观察。 ② 用同样的方法制片，滴加1～2滴0.01%吖啶 橙染液染色1min，洗去余液，加盖片后在 荧光显微镜下观察。
注意事项 ： 1、叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/L氯化钠）中进 行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。 2、分离过程最好在0～4℃下进行；如果在室温下，要迅速 分离和观察。 3、离心时，离心管要平衡。 4、凡是荧光染料都有一定毒性，请注意保护！ 5、汞灯开启后15min内不要关灯，关闭后15min内不要开启。
1.叶绿体的分离 ① 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除粗梗及叶脉，
称取10g叶片于研钵中，先加5ml 0.35mol/L NaCl 溶 液充分研磨，加至50ml，继续研磨。 ② 将匀浆用 4层纱布过滤于150ml 烧杯中。 ③ 取滤液 8ml 在 1000r/min 下离心 2min，弃去沉淀。 ④ 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液，沉 淀即为叶绿体（混有部分细胞核）。
实验1叶绿体的分离荧光分析
实验1叶绿体的分离荧光分析实验目的：1、了解叶绿体的纯化方法，并掌握一定的分离技巧；2、学习荧光光谱分析技术，并掌握荧光光谱检测仪器的使用方法；3、探究荧光光谱分析对叶绿体的鉴定和定量作用。
实验原理：叶绿体作为植物细胞中的核心细胞器，是植物中光合作用发生的关键场所。
叶绿体内含有各种不同功能的膜和蛋白质，对细胞代谢过程具有重要作用。
在本实验中，我们将使用盐溶液法分离叶绿体，并通过荧光分析方法，对其进行鉴定和定量分析。
荧光光谱是一种分析基于分子发射光的技术，常常被用于研究大分子和生物分子的结构和功能。
荧光光谱检测仪器通常包括激发和检测系统，激发系统是通过激发样品上的荧光素或荧光染料等物质，将其激发成激发态，因此会产生发射光，在检测系统上进行检测和测量。
荧光光谱可以根据出射光的波长，确定样品中不同分子的存在和浓度，对于叶绿体来说，荧光光谱可以直接测量其叶绿素的存在和浓度，从而对其进行鉴定和定量分析。
实验步骤：1、用过滤器纸过滤2 g新鲜菠菜，激光刻划液制备一个菠菜提取液。
2、在离心管中加入约10 ml叶绿体提取液，离心1200 rpm，5min收集上清液和沉淀。
3、在干净的离心管中加入1/2体积的5 mM Tris-HCl-EDTA pH 7.8缓冲液，再加入菠菜提取液，结果浅绿色。
4、用盐溶液缓慢地加入样品中，缓冲液体积5倍，轻轻摇均匀，放置5min。
6、重复上述过程2次，最终得到可见的绿色沉淀。
7、加入20 ml生理盐水，振荡均匀，放置15 min，收集上清液，得到叶绿体悬浮液。
8、使用荧光光谱检测仪器，根据指导手册进行操作，测定叶绿体的荧光光谱曲线。
实验结果：根据荧光光谱曲线，可以看出叶绿体的荧光强度在激发波长520 nm时达到峰值，在荧光波长570 nm时达到峰值，表明叶绿体中含有大量的叶绿素，且其荧光光谱曲线可以用于对其进行定量分析。
通过盐溶液提取法分离叶绿体，并使用荧光分析方法对其进行了鉴定和定量分析。
叶绿体分离与荧光染色观察
组织碎片
叶绿体经激发光波照射后，自 叶绿体次生荧光的来由, 结 普通光学显微镜下观察到 发荧光呈现火红色，因叶绿体 橘红色为叶绿体的荧光
果 叶绿体的正常结构。离心 在其悬液中呈现点状均匀分 效果，叶绿体的悬液中混
分 不纯导致混有其他组织碎 布，且悬液其他组分无自发荧 有的细胞核碎片中的核
析片
光反应,故观察到斑状分布的 酸经丫啶橙染色荧光反
火红色荧光效果
应呈现绿色
六．思考与讨论
1.注意事项 (１）要得到完整的、有活性的叶绿体,须在低温下迅速提取,涂片后立即观察,注意离心时的
时间及强度。
(２）利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察室，会收到许多因素的影响,如温度、光、 淬灭剂等。因此在进行荧光观察时应抓紧时间,必要时应立即拍照。
(３）在制作荧光显微标本时最好使用物荧光载玻片、无荧光盖玻片香柏油。 2．思考题 （１)在荧光显微镜下观察叶绿体的自发荧光时，更换滤片系统，叶绿体的颜色是否有变化? 有变化。因为叶绿体的颜色取决于发出荧光能量的高低，更换不同的滤片,激发光会不同， 叶绿体得到和辐射的能量就会不同，颜色也就会不一样 （２)游离的叶绿体和完整细胞内的叶绿体，在荧光显微镜下，颜色和荧光强度有无区别， 为什么? 有区别。因为完整细胞内的叶绿体还要进行光合作用，这会消耗掉一部分所吸收的光,所以 最后释放的荧光能量就会比游离核糖体所释放的小,颜色和荧光强度就会有差别。 (3）根据观察到的实验现象，简述自发荧光和次生荧光的区别？ 自发荧光指不需染色，只需在激发光照射下即可发荧光的现象，而次生荧光需要染色。因为 发光机制不同，所用的滤光片也会不同，最后发出的荧光颜色也会不同。 （4)叶绿体分离的原理是什么?操作过程应注意什么？ 采用的方法是差速离心法，利用不同颗粒大小、形状不同导致沉降速率不同,把叶绿体大小 的颗粒沉降出来。 叶绿体的分离应在等渗溶液（０．３5mol/L 氯化钠或０.4mol/Ｌ 蔗糖溶液）中进行，以免 渗透压的改变使叶绿体受到损伤;分离过程最好在０～4℃的条件下进行;如果在室温下，要 迅速分离和观察。 3.实验小结
实验三叶绿体的提取与观察
实验三叶绿体的提取与观察实验题目：叶绿体的分离及荧光观察 2017.10.131.结果与分析图1光学显微镜下菠菜叶绿体观察（物镜×40倍）结果描述：光学显微镜下叶绿体呈较深的绿色，椭圆或圆形;视野中还有许多叶绿体碎片和被压碎的叶绿体。
叶绿体纯度：完整叶绿体/总叶绿体=23/50=46%结果分析：由于叶绿体处于高渗溶液中，所以会失水导致颜色加深且呈圆形；视野中的叶绿体碎片是由于研磨时外力作用破坏了叶绿体，被压碎的叶绿体是由于在制作装片时有外力作用到盖玻片上使原本完整的叶绿体破碎。
由于各种因素的影响使所提取到的叶绿体遭受损坏，所以最后叶绿体的纯度较低，为46%，由此也可以得知叶绿体较脆弱，易被破坏。
图2菠菜叶绿体荧光观察（放大倍数×40）结果描述：倒置荧光显微镜观察下，叶绿体反射红光，椭圆或圆形;视野中有许多叶绿体碎片和被压碎的叶绿体。
叶绿体纯度：完整叶绿体/总叶绿体=19/50=38%结果分析：由于叶绿体处于高渗溶液中，所以失水呈圆形。
视野中的叶绿体碎片完整叶绿体被压碎叶绿体叶绿体碎片完整叶绿体被压碎叶绿体叶绿体碎片是由于研磨时外力作用破坏了叶绿体，被压碎的叶绿体是由于在制作装片时有外力作用到盖玻片上使原本完整的叶绿体破碎。
荧光观察下，叶绿体纯度比光学显微镜观察下要低，原因可能是，光学显微镜视野较倒置荧光显微镜视野模糊，使光学显微镜视野里许多叶绿体碎片无法观察到，从而使总体叶绿体数目变少，纯度升高。
也有可能由于所选取的视野不同而导致的。
2.回答问题①根据结果，得到的叶绿体仍然是不纯的。
还是用差速离心方法，你如何将你得到的叶绿体进一步纯化？将实验所得的叶绿体进一步以1000rpm与3000rpm的中间值1500rpm的转速离心5min，各取其上清液与沉淀在显微镜下观察叶绿体的数量，含叶绿体较多的一组为进一步纯化的叶绿体。
若想得到更纯的叶绿体，可以按照以上步骤进一步取转速的中间值对上一步纯化的叶绿体进行离心，观察上清液与沉淀的叶绿体含量，取叶绿体含量较多的一组。
叶绿体的分离与荧光观察实验报告
山东大学实验报告姓名：徐静班级：10级生命基地学号：201000140121 科目：细胞实验题目：叶绿体的分离与荧光观察同组者：张姗田娜王安琪一．实验目的1、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
2、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。
二．实验原理叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。
由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。
叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
叶肉细胞中的叶绿体内含叶绿素，使植物呈现绿色。
叶绿体是细胞内扁平的椭球形或球形的三个双层膜细胞器之一，叶绿体内基粒是光合作用的场所。
高等植物（如葫芦藓）的叶绿体呈椭球状，在不同的光照条件下，叶绿体可以运动，改变椭球体的方向，这样既能接受较多的光照，又不至于被强光灼伤。
在弱光下，叶绿体以其椭球体的正面朝向光源；在强光下，叶绿体以其椭球体的侧面朝向光源。
因此，在不同光照条件下采集的葫芦藓,观察到其小叶内叶绿体的形状不完全一样。
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。
一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。
在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。
依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
沉降顺序为：细胞核线粒体溶酶体与过氧化氢酶体内质网与高尔基体核蛋白体。
叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35 mol／L氯化钠或0.4 mol／L蔗糖溶液)中进行．以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。
将匀浆液在1000 r／min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。
然后，在3000 r／min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。
实验五叶绿体的分离与荧光观察
一. 实验目的
• 1 ．通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞 器分离的一般原理与方法；了解差速离心 Differential centrifugation特点与用途
• 2 ．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。
二 实验原理
• 采用差速离心分离细胞器；
– 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶 体——内质网与高基体——核蛋白体；
• 2．材料
– 新鲜菠菜叶
• 3．试剂
– 氯化钠溶液
四、实验方法
• （一）叶绿体的分离与观察 1. 取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称30g，分批放入研钵。 2. 加入氯化钠溶液， 共150ml，研磨，制成匀浆； 3. 将匀浆用６层纱布过滤于烧杯中； 4. 取滤液４ml在1000r/min离心２min，取上清； 5. 上清液3000r/min离心５min．去上清，沉淀即为叶绿体； 6. 加氯化钠溶液悬浮沉淀； 7. 取叶绿体悬液１滴于载玻片上，加盖片： 8. 普通光镜下观察；荧光显微镜下演示 • （二）菠菜叶徒手切片观察 • 新嫩菠菜叶斜切面１片，氯化钠溶液１滴；加盖片轻压：光镜下观察叶绿体
在表皮细胞和保卫细胞中的分布；荧光显微镜下演示。
五 实验结果与分析
• 1．简述：叶绿体的分离原理和方法； • 2 ．绘图：菠菜叶肉细胞的形态，显示叶绿
体。
The End
谢谢您的聆听！
期待您的指正！
• 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 • 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察 其形态
和分布；
Differential centrifugation
High speed
Low speed
Hale Waihona Puke 、实验用品• 1．器材– 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、 离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、 盖玻片
生物实验-叶绿体的分离与荧光观察
实验、叶绿体的分离与荧光观察实验目的1. 通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。
2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。
实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。
叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体到损伤。
将匀浆液1000r/min的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。
然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。
分离过程最好在0~5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。
利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间, 有必要时立即拍照。
另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。
实验用品一、器材1.主要设备: 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。
2.小型器材: 500ml烧杯2个, 250ml量筒1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试管架5个，纱布若干，无荧光载片和盖片各4片。
二、材料新鲜菠菜。
三、试剂0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridine orange)。
实验方法一、叶绿体的分离与观察1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。
2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3~5min。
3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。
4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min。
弃去沉淀。
5. 将上清液在3000r/min下离心5min。
弃去上清液，沉淀即不叶绿体(混有部分细胞核)。
6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮、7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。
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实验十一叶绿体的分离和荧光观察
一．实验目的
了解细胞匀浆和差速离心分级分离细胞组分的原理。
了解提取叶绿体的基本原理及其过程，通过光学显微镜的观察了解体外分离的叶绿体的一般
形态，增加对叶绿体的感性认识。
掌握吖啶橙染色叶绿体的方法。
掌握显微数码拍照的方法。
二．实验内容
提取叶绿体，吖啶橙染色，观察染色结果。
显微数码拍照。
三．实验原理
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。
在一定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。
依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部。
叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/LNacl或0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行。
离心后可得沉淀的叶绿体。
四．实验方法与步骤
1．取嫩叶3g，洗净去柄去叶脉，剪碎放入研钵中。
2．加4ml0.35mol/LNacl，研磨匀浆，尼龙布过滤于离心管中1ml。
3．1000rpm离心2分钟弃去沉淀。
4．3000rpm离心15分钟，弃去上清液，将沉淀用少量0.35mNacl悬浮。
5．提取叶绿体观察：①普通光镜②荧光光镜③加吖啶橙。
6．撕取叶表皮观察：①普通光镜②荧光光镜③加吖啶橙。
a．在普通光镜下，可看到叶绿体为绿色椒榄形，在高倍镜下看到叶绿体内部含有较深的绿色的绿色小颗粒即基粒。
b．在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光。
c．加入吖啶橙染后，叶绿体可发也桔红色荧光。
而其中混有的细胞核发
出绿色荧光菠菜叶手切片观察。
d．在普通光镜下可以看到三种细胞：表皮细胞：为边缘吐锯齿表的鳞片状细胞。
保卫细胞：为构成气孔的成对存在的肾形细胞。
叶肉细胞：为排成栅状的长形和椭圆形细胞。
5．显微数码拍照。
五．实验结果。