分离小鼠表皮和真皮细胞的方法

成鼠分离角化细胞

取皮

1.颈椎脱臼处死小鼠

2.逆着毛发生长方向剪掉小鼠背毛

3.用无菌的解剖工具取下小鼠背部皮肤

4.真皮面向上至于10cm皿中

注意：此时皮肤组织可在冰上放置5-6h，不影响后面的细胞分离。

酶解

5.灭菌。将皮肤依次置于200ml碘伏中2min，70%乙醇中1min，70%乙醇中1min，无菌

PBS中1min

6.真皮面向上置于10cm皿中

7.用无菌的解剖的刮去真皮的脂肪组织和肌肉

注意：尽量刮干净，否则影响制备细胞的质量。

8.10ml的0.25%胰酶，使表皮向上悬于胰酶中，4℃过夜或者37℃2h

分离细胞

9.将组织放入培养皿盖中，表皮向上

10.手术镊压住组织边缘，用无菌手术刀将表皮从真皮上刮除

11.扔掉真皮，将表皮切碎

12.将切碎的表皮放入50ml的Falcon管中，加入8ml胰酶

13.移液器吹打组织悬液至组织块分解。约30~60s

14.加入16mlFAD低钙完全培养基，50μm的细胞过滤器过滤。

注意：过滤器中剩余的组织可用来分离毛发。

15.RT500g离心8min。

16.移除上清

17.8mlFAD低钙完全培养基重悬细胞，转移至14ml无菌Corning管中，500g离心8min

18.4ml加了BSA的PBS重悬细胞

19.取50μl细胞悬液，加入50μl的台盼蓝，计数

20.培养。

胎鼠或初生小鼠分离真皮细胞（E16.5到Day2的小鼠）

准备：0.25%无EDTA胰酶与dispase酶1:1混合液

1.70%乙醇浸泡手术器械进行消毒

2.颈椎脱臼处死小鼠

3.依次置于200ml碘伏中2min，70%乙醇中1min，70%乙醇中1min，无菌PBS中1min灭

菌消毒

4.剪去四肢，尾巴以及头部

5.剥离皮肤，刮除真皮下的多余组织

注意：不要刮太厉害

6.0.25%无EDTA胰酶与dispase酶1:1混合液消化。5只初生小鼠皮肤可置于一个10cm大

皿中，加入15ml混合液，37℃1h

7.手术刀刮除表皮。刮下的表皮可用于分离表皮细胞。每只小鼠可得到约3x106个表皮细

胞

8.将真皮剪碎。0.25%的胶原酶37℃消化至少1h，UP to 2h

9.将消化的细胞悬液转移至10ml离心管中，大力震荡至得到单细胞悬液

10.70μm的过滤器过滤细胞

11.收集滤过的悬液，500g离心4min

12.洗3次

13.计数，接种细胞