EDU-细胞增殖检测
EDU染色
Edu掺入法检测细胞增殖
1.取对数生长期细胞，以每孔4000个细胞接种于96孔板中，培养至对数生长期；
2.用细胞培养基按1000：1的比例稀释Edu溶液（试剂A），制备适量50μM的Edu培养基；
3.每孔加入100μL 50μM Edu培养基孵育1h，弃培养基；
4.PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟；
5.每孔加入100μL细胞固定液（即含4%多聚甲醛的PBS）室温孵育30min；
6.每孔加入2mg/mL甘氨酸，脱色摇床孵育5min后，弃甘氨酸溶液；
7.每孔加入100μLPBS，脱色摇床清洗5min，弃PBS；
8.每孔加入100μL渗透剂（0.5%Triton X-100的PBS）脱色摇床孵育10min；PBS清洗1次，5min;
9.每孔加入100μL的1mg/mL DAPI，避光、室温、脱色摇床孵育10min，弃染色反应液；
10.每孔每次加入100μLPBS清洗1~3次；染色完成后，荧光显微镜检测。
edu细胞增殖实验原理
edu细胞增殖实验原理
细胞增殖实验是一种用于研究生物细胞生长的基础实验。
它是通
过在适宜的培养条件下，通过定期观察和计数细胞的数量和形态变化，来研究细胞分裂和生长的过程。
在实验中，通常采用细胞培养技术，将细胞种植在营养丰富的培
养基中，确保细胞具有足够的营养和生长条件。
然后在特定时间点，
使用显微镜观察细胞的增殖情况，计数细胞数量和评估其形态变化。
细胞增殖实验的主要原理是通过研究不同条件下细胞增殖的变化，来推测影响细胞生长和正常功能的因素。
例如，可以研究不同营养成
分对细胞生长的影响，探索某些药物或遗传学变异对细胞增殖和功能
的影响等。
在实验过程中，需要注意一些因素以保证实验结果的准确性和可
靠性。
首先，需要使用高品质的培养基及其他细胞培养试剂，以确保
细胞生长环境的稳定性和一致性。
此外，还需定期检查细胞培养条件，包括温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度等环境参数。
同时，还需用显
微镜进行精确地观察和定量测量细胞生长状态，以保证实验数据的准
确性和可重复性。
总之，细胞增殖实验是生物学研究中最基础的实验之一。
通过定
量和定性地研究细胞生长和分裂的变化，可以得出某些生化、生物物
理和遗传学方面的结论，这对深入理解细胞功能和疾病发生机制有重
要意义。
EDU检测细胞增殖
图5 采用EdU标记干细胞进行示踪实验
文献实例：
EdU标记ADSC细胞移植情况（红色： EdU；蓝色：DAPI；绿色：α-SMA抗 体）
5) Lin G, Wang G, et al. Cytotherapy. 2010.(细胞示踪)
C10314 Cell-LightTM EdU DNA Proliferation in vivo Detection
对递减，利用流式细胞仪在４８８ｎｍ激发光和荧光检测通道可对其进行分析。 Ｂｒｄｕ检测法
Ｂｒｄｕ中文全名５－溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在ＤＮＡ合 成期（Ｓ期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Ｂｒｄｕ单克隆抗体，ＩＣＣ染色，显示增 殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研 究细胞动力学有重要意义。
Br
DNA变性后，BrdU才能与 其抗体进行结合
检测相关荧光光谱图：
Ribobio
Apollo ® 567 光谱图 Apollo ® 643 光谱图 Hoechst33342光谱图
Cell-Light™ EdU 细胞增殖检测
1) 在细胞水平上EdU对增殖细胞的标记
Ribobio
利用EdU检测细胞新合成的DNA，同时结合细胞核标记物进行双重或 多重标记，判断增殖细胞的种类，增殖速度，全面分析增殖细胞的定 位、分布。
EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)
Cell-Light™ EdU 检测原理
在DNA合成过程中，EdU可取 代脱氧胸腺嘧啶核苷（T）插 入DNA链。
Ribobio
EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)
细胞增殖检测方法
细胞增殖检测方法
细胞增殖是细胞数量的增加和分裂的过程，对于检测细胞增殖的方法有很多种。
以下是一些常见的细胞增殖检测方法：
1. 细胞计数：通过显微镜观察和手工计数细胞数量，或使用自动化细胞计数仪进行细胞计数。
2. 细胞增殖染料：使用细胞增殖染料，如溴化乙锭（BrdU）或五溴乙酰胺（EdU），将其添加到培养基中，然后检测细胞摄取或转化这些染料的程度，以评估细胞增殖。
3. MTT试验：MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基-2H-四唑酮）试验通过测量细胞的代谢活力来评估细胞增殖。
MTT试剂会被活细胞还原为紫色的甲基噻唑咪唑离子，可以使用分光光度计测量产生的紫色产物的吸光度来确定细胞的增殖能力。
4. 细胞周期分析：通过流式细胞术检测细胞的DNA含量，可以确定细胞处于哪个细胞周期阶段，并评估细胞的增殖能力。
5. 细胞增殖标记：通过使用荧光标记物或融合蛋白来标记增殖细胞。
例如，使用荧光标记的抗体来检测细胞核内的增殖相关标记物，如Ki-67。
6. 实时细胞分析：使用实时细胞分析系统，如X-Celligence系统，可以通过记录电极传感器阻抗的变化来监测细胞的生长和扩张情况，从而评估细胞增殖。
这些方法可以单独或结合使用，以获得更全面和准确的细胞增殖信息。
EdU细胞增殖检测法的操作教程（附文献）
EdU细胞增殖检测法的操作教程（附文献）细胞增殖的能力是评价细胞、代谢、生理、病理状况、细胞活性、基因毒性等的重要指标之一。
细胞增殖虽然与多种因素有关，比如细胞代谢活性、与细胞增殖相关的蛋白表达、ATP的浓度等等，但是检测细胞增殖现象的zui直接zui准确的方法就是用荧光探针直接检测遗传物质DNA的合成，这种方法是研究细胞增殖、信号通路、DNA修复及分化等等方向常用的方法。
目前，基于DNA的合成原理，人们zui初开发了工具是BrdU染色法, 但是这种方法操作耗时长，往往需要过夜处理细胞，操作繁杂，比如需要DNA变性、抗原修复以及抗原抗体反应等操作，后来在BrdU的基础上，人们开发出了革命性的探针--EdU，这种方法不需要繁杂的操作，节约时间，且反应更灵敏和准确。
并且与MTT/WST-1或者CCK-8这种依靠化学显色法只能得到一个折线图的方法相比，EdU 细胞增殖检测法可以得到高清细胞增殖现象数据图，可视化展示数据、更直观、更具视觉效果!EdU的检测原理是什么？EdU可以说是一款革命性的细胞增殖状态检测方法与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比，EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，有效地避免了样品损伤，有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况，具有更高的灵敏度和更快的检测速度。
EdU细胞增殖检测法的操作教程一、首先用 EdU 来标记细胞注意:本实验样本是Hela 细胞，如果使用其它类型的细胞，实验可能需要做调整。
建议 EdU 起始浓度是10 µM，或者根据细胞类型设置几个梯度预实验摸索zui佳EdU浓度，再进行正式实验。
1.在六孔板里的盖玻片上培养细胞，使其生长至所需密度后处理细胞；2.用 10 mM EdU 溶液在无血清培养基中制备 2x EdU 工作溶液；3.预热 2x EdU 溶液，然后将 2x EdU 溶液添加到等体积含有实验细胞的培养基中，获得 1x EdU 溶液。
EdU
［ 关键词］ Ｅ ｄ Ｕ； Ｂ ｒ ｄ Ｕ； 细 胞 增 殖 ［ 中 图分 类 号 ］ Ｒ 一 １ ［ 文献标识码 ］ Ａ ［ 文章编号］ １ ６ ７ １ — ８ ３ ４ ８ （ ２ ０ １ ５ ） ３ ２ — ４ ５ ８ １ — ０ ３ Ａ５ ４ ９细 胞 上 进 行 了 测 试 ＿ １ 。 。 Ａｎ ｄ ｅ ｒ ｓ ｅ ｎ等 ＿ ２ 的研 究 发 现 ，
Ｅ ｄ Ｕ 使 用 浓 度 很 可 能 会 限制 其 对 细胞 增 殖 的影 响 。
３ Ｂ ｒ ｄ Ｕ 检 测 增 殖 细 胞 的 特 点 及 原 理
Ｂ ｒ ｄ Ｕ 是 另 一 种 嘧 啶类 似 物 ， 其 化 学 结 构 特 点 是 溴 替 代 了
Ｅ ｄ Ｕ是一种胸 腺嘧 啶核苷 的类 似物 ， 其 化 学 结 构 特 点 是 脱 氧 胸 腺 嘧 啶 环 上 与 ５位 Ｃ原 子 相 连 的 甲 基 被 乙 炔 基 取 代 ， 在 ｓ期 细 胞 增 殖 时 可 作 为 底 物 掺 入 到 正 在 复 制 的 Ｄ Ｎ Ａ 链 中，
结 合其 他 细 胞标 记 物 进 行 双 重 染 色 ， 可 判 断细 胞 种 类 及 增 值 速 度， 对 研 究 细 胞 动 力 学 有 重 要 意 义 。 目前 ， Ｂ ｒ ｄ Ｕ 标 记 新 合 成 ＤＮＡ 的 方法 在 动 物 细 胞 组 织 的 肿 瘤 生 物 学 、 遗传学 、 分 子 生 物
通 过 与 染 料 的 共 轭 反 应 可 以 进 行 高 效 快 速 的 细 胞 增 殖 检 测 ］ ， 其 中， 乙炔 基 能 够 与 一 种 荧 光 标 记 的小 分 子 叠 氮 化 合 物
细胞增殖 检测方法
细胞增殖检测方法细胞增殖是指细胞在生物体内不断分裂和繁殖的过程，是生物体生长和发育的基础。
检测细胞增殖的方法有很多种，以下将详细介绍几种常见的细胞增殖检测方法。
首先，细胞计数法是最常用的细胞增殖检测方法之一。
细胞计数法主要通过显微镜观察和数数的方式，计算细胞的数量来反映细胞增殖的情况。
可以通过细胞染色或细胞标记技术使细胞在显微镜下更易于观察和区分。
细胞计数法通常需要使用专业的细胞计数仪或显微相机来帮助实施，具有操作简单、结果准确等特点。
其次，MTT法是一种在体外细胞培养中常用的细胞增殖检测方法。
MTT法基于细胞中还原剂细胞线粒体呼吸将黄色硫代唑盐（MTT）还原为紫色的可溶性产物，最后通过比色法测定细胞数目和细胞活力。
MTT法操作简单、结果稳定可靠，广泛应用于药物筛选和细胞增殖研究中。
另外，细胞增殖标记法是通过标记DNA合成阶段的细胞来检测细胞增殖的方法。
常见的细胞增殖标记法有Brdu法和EDU法。
这两种方法都是通过标记新合成的DNA分子来反映细胞增殖情况，Brdu法利用抗体检测Brdu标记的DNA，而EDU法则利用稳定的EDU（5-乙炔基-2'-脱氧尿苷）分子和荧光染料的结合来检测标记的DNA。
由于这两种方法都需要使用荧光染料或抗体检测，因此需要显微镜或流式细胞仪等设备来进行检测。
此外，细胞增殖检测还可以通过测定细胞凋亡（细胞死亡）来间接反映细胞增殖情况。
细胞凋亡是细胞自身程序性死亡的一种形式，常使用TUNEL（DNA末端标记术）法或Annexin V/PI双染法来检测细胞凋亡。
这些方法通过标记DNA 断裂或细胞膜破损来区分凋亡细胞和正常细胞，并通过荧光染料或抗体检测来反映细胞凋亡的程度。
细胞凋亡的明显增加往往意味着细胞增殖的受抑制。
总的来说，细胞增殖检测方法的选择应根据具体实验的目的、条件和资源来决定。
不同的方法各有优势和局限性，需要结合实际情况进行选择。
在细胞增殖检测中，细胞计数法是最常用的方法，MTT法和细胞增殖标记法是常见的体外检测方法，而通过检测细胞凋亡来间接反映细胞增殖情况也是一种有效的方法。
EdU法细胞增殖检测——Brdu方法的革命性突破
EdU法细胞增殖检测——Brdu方法的革命性突破细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。
其中EdU检测方法是zui新的细胞增殖检测方法。
一、什么是细胞增殖呢？细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。
单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。
多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。
二、细胞增殖的意义和方式意义：细胞增殖是生活细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征。
细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。
方式：真核生物的分裂依据过程不同有三种方式，有有丝分裂，无丝分裂，减数分裂。
其中有丝分裂是人、动物、植物、真菌等一切真核生物中的一种zui为普遍的分裂方式，是真核细胞增殖的主要方式。
减数分裂是生殖细胞形成时的一种特殊的有丝分裂。
三、关于EdU检测方法EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。
与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。
细胞增殖伴随着多细胞生物生命体运作的一生，越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测，关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。
那么到目前为止，研究细胞增殖有哪些手段呢？EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。
EdU（5-溴-2-脱氧尿嘧啶）试剂盒是一种嘧啶类似物，可以在DNA合成期整合入DNA双链。
通过以上原理图的对比，大家不难发现，EdU法检测细胞增殖，无须抗体，无变性步骤，保持细胞形态和DNA完整性，是一种简单，可靠，省事的创新方法。
抗肿瘤药物筛选——细胞水平实验丨Edu细胞增殖检测
抗肿瘤药物筛选——细胞水平实验丨Edu细胞增殖检测细胞水平的细胞增殖是生物医学领域非常重要的表型，对细胞增殖的检测是检验药物对肿瘤细胞影响的最主要检测手段。
作为细胞水平检测增殖现象的传统方法，cck8比色法，Edu细胞增殖检测在细胞增殖检测中被广泛应用。
一、传统的肿瘤治疗方法1.外科手术治疗2.放射线治疗3.化学药物治疗众所周知，化疗会产生很多不良反应，比如：骨髓抑制(血细胞减少)、胃肠道反应、脱发、发热、皮疹、心脏毒性、肝脏毒性、神经毒性、泌尿道毒性、局部静脉炎、致畸、致突变、致癌等等。
那么持续不断地寻找更好的抗肿瘤药物势在必行。
天然产物在新药及新药先导化合物的发现中起着不可替代的作用，是结构新颖和作用独特的抗肿瘤化合物的重要来源。
美国国立癌症研究所(NCI)从1955年开始从天然产物中筛选抗肿瘤药物。
目前世界上被批准广泛使用的抗肿瘤药物中,50 %以上来源于天然产物。
那么问题来了~如何进行抗肿瘤药物的筛选？以及主要用到哪些实验方法？实际上，抗肿瘤药物的筛选体系复杂，涉及到宏观到微观水平的一系列实验。
在这里小编，就简要梳理一下抗肿瘤筛选的关键流程吧：二、动物水平的筛选流程：三、细胞水平的筛选①抑制肿瘤细胞增殖实验②诱导肿瘤细胞分化实验③诱导肿瘤细胞凋亡实验④抗肿瘤血管生成实验⑤肿瘤多药耐药性逆转实验⑥抗肿瘤侵袭和转移实验⑦诱导肿瘤细胞自噬实验四、抑制肿瘤细胞增殖实验细胞水平检测增殖现象的传统方法主要有：1）cck8比色法；2）Edu细胞增殖检测；1）cck8比色法CCK8是基于WST-8的一种细胞增殖检测方法，WST-8是一种水溶性四唑盐，常用于评估细胞的代谢活性。
在中性pH值及中间电子受体存在的情况下，被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的蓝/紫色甲臜产物（formazan）。
生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。
用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
edu dab法
关于EdU和DAB法，它们在不同的领域中有着不同的应用。
EdU是一种胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，可以在DNA合成过程中掺入，被用于检测细胞的增殖。
通过EdU与随后的点击反应，可以将EdU标记为生物素，再结合辣根过氧化物酶标记链霉亲和素，最后通过DAB显色，实现简单、快速、高灵敏地检测细胞增殖。
这种方法可以检测到细胞或组织样品中单个的增殖细胞，也可以对细胞或组织样品总体的细胞增殖情况进行定量检测。
细胞增殖能力的检测是评估细胞活性、基因毒性和抗肿瘤药物效果等的基本方法。
EdU法基于EdU掺入和后续的点击反应，无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高，是一种在BrdU 法基础上升级换代的新方法，将会逐步取代BrdU法。
而DAB则是一种由3,3'-二氨基联苯胺组成的化学物质，通常用作染料和颜料。
在许多化学反应中，DAB可以作为显色剂，用于标记特定的化学反应产物。
因此，EdU和DAB法在生物学和化学领域中都有应用，但它们的应用范围和目的不同。
在生物学中，EdU主要用于检测细胞的增殖，而DAB则用作化学反应的显色剂。
检测细胞增殖能力的方法
检测细胞增殖能力的方法细胞增殖能力是生物学和医学研究中极为重要的指标，它反映了细胞的生长、繁殖和生命活力。
本文将详细介绍几种常用的检测细胞增殖能力的方法，以供研究者参考。
一、MTT法MTT法（甲基噻唑基四唑法）是一种经典的检测细胞增殖的方法。
其原理是利用活细胞内的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为蓝紫色的甲臜，甲臜的量与活细胞数成正比。
具体步骤如下：1.将细胞接种于96孔板中；2.加入MTT溶液，培养一定时间；3.弃去上清，加入DMSO溶解甲臜；4.使用酶标仪测定吸光度，判断细胞增殖能力。
二、CCK-8法CCK-8法（细胞计数试剂盒-8）与MTT法类似，但操作更简便，毒性更低。
CCK-8试剂在细胞内被还原后生成橙色的甲臜，通过测定吸光度可以评估细胞增殖能力。
三、EdU法EdU法（5-乙炯基-2"-脱氧尿嘧啶法）是一种新兴的细胞增殖检测方法。
EdU是胸腺嘧啶类似物，可以代替胸腺嘧啶插入到DNA中。
通过荧光显微镜或流式细胞仪检测EdU标记的DNA，可以评估细胞增殖情况。
四、Brdu法Brdu法（5-溴脱氧尿嘧啶法）与EdU法类似，也是一种检测细胞增殖的经典方法。
Brdu在细胞周期中代替胸腺嘧啶插入DNA，通过免疫荧光或免疫组化方法检测Brdu标记的DNA，从而评估细胞增殖能力。
五、细胞计数法细胞计数法是最直接的检测细胞增殖能力的方法。
通过细胞计数板或流式细胞仪对细胞进行计数，可以直接得到细胞数量，从而判断细胞增殖能力。
六、其他方法除了以上几种方法外，还有其他检测细胞增殖能力的方法，如：1.克隆形成实验：通过测定细胞克隆的形成数量来评估细胞增殖能力；2.细胞周期分析：利用流式细胞仪检测细胞周期各阶段的细胞比例，间接反映细胞增殖能力；3.报告基因法：通过构建带有报告基因的细胞株，检测报告基因的表达水平来评估细胞增殖能力。
综上所述，检测细胞增殖能力的方法多种多样，研究者可以根据实验需求和条件选择合适的方法。
EDU实验步骤
EdU细胞增殖(细胞成像)EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，通过基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及药物的细胞增殖筛选实验。
荧光显微镜检测方法(以96孔板，A549贴壁细胞为例)细胞培养取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。
药物处理(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。
EdU标记1.1 用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50μM EdU培养基；注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度(1~10μM)；2)如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；3)配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
注：1)*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2)悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。
1.2 每孔加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基；注：1)最佳孵育时间与细胞周期相关(表2)，大多数细胞系均可采用2小时孵育时间；2)EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育时间内的营养物质持续供给(表1)；1.3 PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。
注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。
注：1)EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h孵育时间。
EDU
EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。
细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。
EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。
超越BrdU传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法需要DNA变性，抗原修复，抗原抗体过夜孵育，操作步骤复杂繁琐。
并且由于BrdU抗体分子较大，嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU 抗体结合，必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但变性的程度可能导致错误结果。
如果变性不充分，会导致BrdU难以暴露，无法检测，而且变性过程从边缘向中间渗透，会导致细胞核DNA的变性不均匀，边缘模糊不清。
如果变性过分，则会导致DNA断裂，甚至降解，导致核染不均一。
另外，不同抗体试剂公司的抗体质量不一致，造成难以确保实验重复性，且容易产生假阳性结果。
图1 BrdU需要DNA变性，但变性过分或没有变性都可能容易导致BrdU结果假阳性与BrdU方法相比，EdU检测方法无需DNA变性，无需抗原修复，无需抗原抗体反应，更简单、更灵敏、更快速、更准确，是细胞增殖检测的最佳选择。
EdU-647细胞增殖检测试剂 protocol
EdU-647细胞增殖检测试剂1、配制2X的EdU工作液：由于EdU工作液是与培养液等体积加入到孔板中，推荐的EdU终浓度为10μM (1X)，用细胞培养液1:500稀释EdU (10mM)即可得到2X的EdU工作液(20μM)。
2、将37ºC预热的2X的EdU工作液(20μM)，等体积加入6孔板中，使6孔板中的EdU终浓度变为1X。
继续孵育细胞2小时。
3、EdU标记细胞完成后，去除培养液，（离心1200rpm，6min，去上清），加入1ml固定液（4%PFA）4、去除固定液（离心），每孔用1ml PBS洗涤细胞2次，每次5分钟离心。
5、去除洗涤液，每孔用1ml通透液(含0.3% Triton X-100的PBS)，室温孵育15分钟。
6、去除通透液，每孔用1ml PBS洗涤细胞2次，每次5分钟。
7、配制Click Additive Solution：对于C0081S，用1.3ml去离子水溶解一管Click Additive，混匀至全部溶解，即为Click Additive Solution；8、配制Click反应液。
10sample：Click Reaction Buffer-4.3ml；CuSO4-200ul；Azide 647-10ul；Click AdditiveSolution-500ul。
9、去除上一步骤中的洗涤液。
每孔加入0.5ml Click反应液，轻轻摇晃混匀。
室温避光孵育30分钟。
10、细胞核染色：1X Hoechst 33342溶液的配制：○1按1:1000比例用PBS稀释Hoechst 33342(1000X)。
○2吸除洗涤液后，每孔加1X Hoechst 33342溶液1ml，室温避光孵育10分钟。
○3吸除1X Hoechst 33342溶液。
用PBS洗涤2次，每次5分钟。
11、上机检测。
细胞增殖凋亡检验方法汇总
细胞增殖、凋亡-检测方法汇总1.直接计数法面单粗暴、傻瓜式的检查方法！利用计数板或计数仪得出细该数目•然后对数目逬行比较。
方法需要对不同时间原的细胞分别固定•而后在光疑下计数,可绘制出细胞生长曲线。
而具不足之处在于无法区分壇蓿细胞与非增殖抵胞，下适合样品奴星參和评估特定亚群的情况。
2「H・TdR渗入法OH腺龜碇核百(TdR )是DNA持有的滅基「也是DNA合成的必需物氐用同位素中标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体渗入DNA合成代谢过程,通过液体闪烁计数器可迴走细胞的放射性强虐，间接放映出细胞增殖情况。
该方法优点在于敏感性高”客观性强,盍每性好.但是爲要一走设备集件，也存在放时性核素污染问题。
3、Brdu/EdU检测法Brdu&EdU均是胸腺嚅睫的衍生物r均可代替胸腺嚅噪在DNA合成期掺入细胞中。
不同的是J Brdu检测法可利用B「du专性抗体和具他細胞标记物对细'进行双重染色,可判断増殖细胞的种类及増殖速度，不仅适用于体外实验也能用于活体实验。
这个方法最大的缺点需要变性DNA才能与抗体结合,破坏了DNA双链结构r导致染色弥散、准确性降低等问题。
EdU检测法则基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性r适用于细胞増殖、细胞标记示踪筈方IEI的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,®田胞内很容易就扩散,无需DNA变性。
rdU与EdU检测优缺点综合比较BrdU EdU 检测分子大很小检测方式免疫反应化学反应影响其他标记是否DNA变性需要不需要实验时间过夜 2.5小时检测灵敏度一般灵敏4、WITT检测法&CCK8检测法MTT检测法反映细胞的能臺代谢「是检测细胞増殖活力的一种简便准确方法°其原理是在活纟田胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解为蓝紫色的水不溶性的甲瓒(Formazan ),并沉积在细胞中(死细胞无此功能。
细胞增殖 检测方法
细胞增殖检测方法
细胞增殖是指细胞数量的增加。
检测细胞增殖可以通过多种方法，其中常用的方法包括：
1. 细胞计数：使用显微镜观察细胞培养物中的细胞数量，并通过计数来得出细胞增殖情况。
2. 晶紫染色法：晶紫染色可以染色细胞核，通过观察染色后细胞数量的增加来判断细胞增殖情况。
染色后的细胞可以在显微镜下观察，并可以使用图像处理软件进行图像分析。
3. DNA含量分析：细胞增殖时DNA含量也会增加，可以通过荧光染料如荧光素琥珀酰胺（Propidium Iodide）染色，使用流式细胞仪来分析DNA含量。
4. 噻吩蓝染色法（MTT法）：MTT法使用噻吩蓝（MTT）染料可以评估细胞活性和增殖能力。
活细胞将MTT染料转化为紫色的内盐，通过溶解细胞并测量溶液的吸光度来确定细胞增殖情况。
5. 细胞增殖标记物：细胞增殖标记物如脱氧尿苷（BrdU）或5-乙酰基-2'-脱氧尿苷（EdU）可以被细胞吸收并集成到新合成的DNA中。
这样，在染色时可以使用抗-BrdU或抗-EdU抗体染色，并通过观察标记物阳性细胞的数量来评估细胞增殖情况。
以上方法都可以用于检测细胞增殖情况，选择适合实验需求的方法进行研究。
需要注意的是，不同的方法可能具有不同的准确性和敏感性，因此在实验设计和数据分析过程中需要谨慎操作。
edu实验解读
EDU实验是一种用于研究细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的技术。
通过EDU实验，可以定量测定细胞增殖速率和细胞周期，还可以研究细胞分化和细胞凋亡等现象。
在EDU实验中，通常会在特定的培养条件下，将标记有EDU的核苷酸引入细胞中，通过与DNA的结合，标记出DNA复制的区域。
随后，通过一系列的固定、洗涤和染色步骤，使用抗体检测出标记的DNA区域，最终通过显微镜观察和图像分析技术，对细胞的增殖情况进行定量分析。
通过EDU实验，可以获得许多有价值的信息，例如细胞增殖速率、细胞周期各时相的长度、细胞分化的方向和程度、细胞凋亡的发生和分布等。
这些信息对于理解细胞生命活动的规律和机制具有重要的意义，对于研究疾病的发生和发展机制、药物研发和癌症治疗等领域也具有广泛的应用价值。
EDU_细胞增殖检测
EDU_细胞增殖检测荧光显微镜检测方法(以96孔板，A549贴壁细胞为例)细胞培养取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。
药物处理(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。
EdU标记1.1 用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50μM EdU培养基；注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度(1~10μM)；2)如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；3)配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
表1 EdU培养基及染色反应液的使用量参考96孔板*48孔板24孔板12孔板6孔板 5.5 cm 小皿EdU培养基100 μl150 μl200 μl300 μl500 μl 2 mL 染色反应液100 μl150 μl200 μl300 μl500 μl 2 mL注：1)*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2)悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。
1.2 每孔加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基；注：1)最佳孵育时间与细胞周期相关(表2)，大多数细胞系均可采用2小时孵育时间；2)EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育时间内的营养物质持续供给(表1)；1.3 PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。
注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。
表2 EdU孵育时间设定参考3T3Hela HEK293*细胞系人胚胎细胞酵母细胞人成纤维细胞人宫颈癌细胞人胚肾细胞系人神经细胞细胞周期~30min~3h~18h~21h～25h~5d 孵育时间5min20min2h2h2h1d注：1)EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h孵育时间。
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荧光显微镜检测方法(以96孔板，A549贴壁细胞为例)
细胞培养
取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。
药物处理
(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。
EdU标记
1.1 用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50μM EdU培养基；
注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度(1~10μM)；
2)如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；
3)配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。
表1 EdU培养基及染色反应液的使用量参考
注：1)*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；
2)悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。
1.2 每孔加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基；
注：1)最佳孵育时间与细胞周期相关(表2)，大多数细胞系均可采用2小时孵育时间；
2)EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育时间内的营养物质持续供给(表1)；
1.3 PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。
注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。
表2 EdU孵育时间设定参考
注：1)EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h孵育时间。
孵育时间越长，细胞增殖数量就越多；
2)*考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响，具体实验的细胞群体细胞周期会有所变化。
表3细胞实验EdU孵育浓度及时间参考
注：如果您有采用BrdU进行实验的经验，可以参照BrdU实验的相关参数进行EdU实验。
细胞固定化
2.1 每孔加入50μL 细胞固定液(即含4% 多聚甲醛的PBS)室温孵育30分钟，弃固定液；注：1)低浓度的多聚甲醛有利于细胞结构的保持，当需要抗体染色时，需采用Triton X-100透化细胞以利于抗体进入细胞内。
2)可采用其他方式进行细胞固定。
2.2 每孔加入50μL 2 mg/mL 甘氨酸，脱色摇床孵育5分钟后，弃甘氨酸溶液；
注：目的是中和多聚甲醛，保证染色反应体系，当采用其他方式进行细胞固定时可酌情省略此步骤；
2.3 每孔加入100 μL PBS，脱色摇床清洗5分钟，弃PBS；
2.4 (加强)每孔加入100μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS)脱色摇床孵育10分钟;PBS清洗1次，5分钟。
注：当实验需要进行其他抗体染色时，或由于某些细胞类型对染料的吸附性较高，可能需要增强细胞膜通透性。
普通细胞可以省略。
Apollo染色
3.1 每孔加入100 μL的1X Apollo®染色反应液(表3)，避光、室温、脱色摇床孵育30分钟后，弃染色反应液；
注：1)染色液用量与细胞量相关，以覆盖细胞为宜(表1)；
2)孵育时间可以进行适当调整，调整范围为10~30分钟。
表4 Apollo®染色反应液的配置参考(现用现配)
注：1)*表示通常配制的Apollo®反应液的体积足以进行5～10个孔(96孔板)染色；
2)按顺序配制适量1X Apollo®染色反应液，以免破坏正常的反应体系(现用现配，30分钟用完)；
3)试剂E 为白色粉末，较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需更换；粉末较难准确称量，称量误差范围可稍微放宽，但不应超过±20%。
3.2 加入100 μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS) 脱色摇床清洗2~3次，每次10分钟，弃渗透剂；
3.3 (加强)每孔每次加入100 μL 甲醇清洗1~2次，每次5分钟；PBS清洗1次，每次5分钟。
注：由于某些细胞对染料的吸附性较高，需采用加强方式洗脱以降低染料背景。
普通实验可以省略。
DNA染色
4.1 用去离子水按100：1的比例稀释试剂F，制备适量1X Hoechst33342反应液，避光保存；
4.2 每孔加入100 μL 1X Hoechst 33342反应液，避光、室温、脱色摇床孵育30分钟后，弃染色反应液；
4.3 每孔每次加入100 μL PBS清洗1~3次；
4.4 客户可选择进行其他染色步骤，否则每孔加入100 μL PBS保存待用。
其他染色(自备)
(可选)客户可以根据实验需要进行细胞表面或细胞内抗原的抗体染色(注：染料兼容性请参照表4)。
图像获取及分析
建议染色完成后立即进行观测;如果条件限制，请避光4℃湿润保存待测，但不应超过3天。
注：调试仪器时，请将曝光时间调整为30ms左右，尽量不要>1s。
表5配套染料的相关波长信息
注：1)*荧光显微镜宜采用Hoechst 33342及Apollo® 567进行DNA复制活性检测；
2)激光共聚焦显微镜采用Apollo® 567或Apollo® 643均可。