生化分离技术复习题

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生化分离技术考试复习题库(含详细答案)

《生化分离》考试复习题库一、选择题1.下列不是超临界萃取工艺的方法是（）。

A 等温法B 等压法C 吸附法D 交换法2.影响絮凝效果的因素有很多，但不包括（）。

A 絮凝剂的浓度B 溶液pH值C 溶液含氧量D 搅拌速度和时间3.葡聚糖凝胶色谱属于排阻色谱，在化合物分离中，先被洗脱下来的为（）。

A 杂质B 小分子化合物C 大分子化合物D 两者同时下来4.当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（）。

A 增大B 减小C 先增大，后减小D 先减小，后增大5.下列不能提高发酵液过滤效率的措施是（）。

A 增大滤过面积B 降低料液温度C 加压或减压D 加入助滤剂6.下列方法中，哪项不属于改善发酵液过滤特性的方法A 调节等电点B 降低温度C 添加表面活性物质D 添加助滤剂7.助滤剂应具有以下性质（）A 颗粒均匀、柔软、可压缩B 颗粒均匀、坚硬、不可压缩C 粒度分布广、坚硬、不可压缩D 颗粒均匀、可压缩、易变形8.在发酵液中除去杂蛋白质的方法，不包括（）A 沉淀法B 变性法C 吸附法D 萃取法9.下列关于速率区带离心法说法不正确的是（）A 样品可被分离成一系列的样品组分区带B 离心前需于离心管内先装入正密度梯度介质C 离心时间越长越好D 一般应用在物质大小相异而密度相同的情况10.助滤剂是一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。

以下不属于助滤剂的是（）A 氯化钙B 纤维素C 炭粒D 硅藻土11.细胞破碎的方法可分为机械法和非机械法两大类，下列不属于机械法的是（）A 加入金属螯合剂B 高压匀浆法C 超声破碎法D 珠磨法12.萃取操作是利用原料液中各组分（）的差异实现分离的操作。

A 溶剂中的溶解度B 沸点C 挥发度D 密度13.两相溶剂萃取法的原理为：A 根据物质在两相溶剂中的分配系数不同B 根据物质的熔点不同C 根据物质的沸点不同D 根据物质的类型不同14.下列溶液不是双水相的是（）。

A PEG/葡聚糖B PEG/磷酸盐C PEG/硫酸铵D 磷酸盐/硫酸铵15.在萃取操作中，分离系数越小，组分（）分离。

现代生化技术复习题

现代⽣化技术复习题. 第⼀章提取与分离技术⼀、名词解释1、机械破碎法2、物理破碎法3、温度差破碎法4、压⼒差破碎法5、超声波破碎法6、渗透压变化法7、化学破碎法8、酶促（学）破碎法9、⾃溶法10、抽提11、盐溶12、盐析13、沉淀分离法14、分段盐析15、K S分段盐析16、β分段盐析17、等电点沉淀法18、有机溶剂沉淀法19、复合沉淀法20、⾦属盐沉淀法21、选择性变性沉淀法⼆、填空题1、细胞破碎的⽅法有、和。

2、机械破碎法按照使⽤机械的不同可分为、和。

3、常⽤的物理破碎法有、和等。

4、常⽤的压⼒差破碎法有、和等。

5、化学破碎法采⽤的表⾯活性剂有和两种。

其中之⼀按其带电荷性质⼜可分为和两种。

6、根据抽提时所采⽤的溶剂或溶液的不同。

抽提的⽅法主要有、、和等7、常⽤的沉淀分析法有、、、、和等。

8、常⽤的⾦属盐沉淀法有和。

9、蛋⽩质盐析时，带⼊⼤量盐离⼦杂质，可采⽤、和⽅法脱盐。

10、要分离和提纯核酸过程中，常⽤来沉淀DNA和RNA。

11、常⽤的使蛋⽩质沉淀的⽅法有、、、和等。

12、三、是⾮题（对的打√、错的打×）1、渗透压变化法可⽤于⾰兰⽒阳性菌的破碎。

（）2、有机溶剂破碎细胞主要是使细胞膜磷脂结构破坏，从⽽使细胞膜的透过性增强。

（）3、⽤化学法破碎细胞提取酶时，经常⽤离⼦型表⾯活性剂。

（）4、⽤化学法破碎细胞提取酶时，⽤⾮离⼦型表⾯活性剂最好。

（）5、对于具有细胞壁结构的细胞采⽤酶法破碎时，应根据细胞壁结构选择不同的酶。

（）6、酸性物质易溶于酸性溶剂中，碱性物质易溶于碱性溶液中。

（）7、在等电点时两性电解质溶解度最⼩。

（）8、抽提两性电解质时应避开其等电点。

（）四、选择题1、利⽤突然降压法破碎⾰兰⽒阴性⼤肠杆菌应选择期的细胞破碎效果最佳。

A 调整期B 对数⽣长期C 平衡期D衰退期2、提取膜结合酶采⽤法破碎细胞最佳。

A ⾼压冲击法B 突然降压法C 渗透压变化法3、超声波破碎法最适合于破碎。

生化分离技术

一、名词解释（3分×5＝15分）⒈生化分离技术:从含有目标产物的发酵液、酶反应液或动植物细胞培养液中，提取精制并加工制成高纯度的、符合规定要求的各种产品技术，又称为下游加工技术⒉包涵体：蛋白质分子本身及与其周围的杂蛋白、核酸等形成不溶性的无活性的聚集体，其中大部分是克隆表达的目标产物蛋白。

⒊结晶：固体物质以晶体状态从气相或液相中析出的过程，是相态变化过程，通过结晶最终实现相态的平衡⒋凝胶色谱：又称体积排阻色谱、分子筛色谱。

是利用凝胶粒子为固定相，根据料液中溶质相对分子质量的差别进行分离的液相色谱。

⒌絮凝作用：利用带有许多活性官能团的高分子线状化合物吸附多少个微粒的能力，通过架桥作用讲许多微粒聚集在一起，形成粗大松散絮团的过程。

⒍蒸发：溶液中的溶剂会啊进入气相中的过程。

其实质是溶液中的溶剂由液态变成气态，进而与溶液中溶质实现分离过程。

⒎浓差极化:在膜分离过程中，由于水和小分子溶质透过膜，大分子溶质被截留在膜表面出聚积，使得膜表面上被截留大分子溶质浓度增大，高于主体中大分子溶质浓度，这种现象称为浓差极化⒏晶习：指在一定环境中，晶体的外部形态。

⒐分离度：相邻两色谱峰保留值之差与两组分色谱峰峰底宽度的比值。

⒑干燥：通过气化而使湿物料中水分除去的方法。

四、问答题（30分）⒈青霉素发酵液预处理的目的是什么？生产中采用哪些方法？（10分）答：①除去无极离子或蛋白质②鼓式真空过滤机⒉简述薄层层析板的制备方法及薄层层析操作方法。

（10分）答：①制备：调浆、涂布、取洁静的干燥载玻片均匀涂层干燥、将载玻片水平放置，室温子下自然晾干活化70烘干30min。

切断电源，带载玻片面温度下降至不烫手时取出。

②在大小适当的玻璃板上，均匀涂上吸附剂，厚度在一毫米以内，然后在距底边1。

5厘米处点上样品溶液，形成一个小点，称为“原点”。

再将薄层板置于盛有动相溶剂的玻缸内（此溶剂称为“展开溶剂”，玻缸称为“展开槽”）。

当溶剂沿薄层扩散到距原点以上一定距离时（一般10—12厘米），取出薄层板，记录展开溶剂扩展前沿距原点的距离A。

生物分离工程期末复习题

填空题1.为了提高最终产品的回收率一是（提高每步分离效率），二是（减少分离步骤）。

2.评价一个分离过程效率的三个主要标准是：（浓缩率），（分离系数）和（产品回收程度）3.生物产品的分离过程包括发酵液的预处理和（液固分离）,（产品的提取），（产品的精制）和（产品的加工处理）。

4.生化反应所起的作用是产生目的产物，指标是（产率）和（转化率），而生物分离解决的是如何从反应液中获取这些物质，涉及的是（收率）和（纯度）。

5.生物分离的主要任务：从发酵液和细胞培养液中以（最高的效率），（理想的纯度）和（最小的能耗）把目的产物分离出来。

6.生物分离过程的特点包括：（生物分离过程的体系特殊），（生物分离过程的工艺流程特殊），（生物分离过程的成本特殊）。

7.物质分离的本质是识别混合物中不同溶质间（物理），（化学）和（生物）性质的差别利用能识别这些差别的（分离介质）和扩大这些差别的（分离设备）8.性质不同的溶质在分离操作中具有不同的（传质速率）和或（平衡状态）9.平衡分离是根据溶质在两相间（分配平衡）的差异实现分离；溶质达到分配。

平衡为扩散传质过程，推动力仅取决于系统的（热力学性质）。

10.差速分离是利用外力驱动溶质迁移产生的（速度差）进行分离的方法。

1.在细胞分离中，细胞的密度越（大），细胞培养液的密度越（小），则细胞沉降2.区带离心包括（差速）区带离心和（等密度）区带离心。

3.为使过滤进行的顺利通常要加入（惰性助滤剂）。

4.发酵液常用的固液分离方法有（离心）和（过滤）等。

5.常用离心设备可分为（离心沉降）和（离心过滤）两大类；6.常用的工业絮凝剂有（无机絮凝剂）和（有机絮凝剂）两大类。

7.工业生产中常用的助滤剂有（硅藻土）和（珍珠岩粉）。

8.重力沉降过程中，固体颗粒受到（重力），（浮力），（摩擦阻力）的作用，固体匀速下降时，三个力的关系（重力=浮力+摩擦阻力）。

9.发酵液预处理的方法包括：（凝集），（絮凝），（加热法）；（调节pH法），（加水稀释法），加入（助滤剂）和（吸附剂）。

生化分离工程技术复习题

一、填空题1. 生物产品的分离包括，，和。

2. 发酵液常用的固液分离方法有: 和等。

3. 离心设备从形式上可分为，，等型式。

4. 亲和吸附原理包括，和三步。

5. 多糖基离子交换剂包括和两大类。

6. 工业上常用的超滤装置有，，和。

7. 影响吸附的主要因素有，，，，和。

8. 离子交换树脂由，和组成。

9. 电泳用凝胶制备时，过硫酸铵的作用是；甲叉双丙烯酰胺的作用是；TEMED的作用是；11、超临界流体的特点是与气体有相似的，与液体有相似的；12、离子交换树脂的合成方法有和两大类；13、常用的化学细胞破碎方法有，，，和；14、离子交换分离操作中，常用的洗脱方法有和；15、等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是依据其的不同；17、亲和吸附原理包括，和三步。

二、名词解释1、超临界流体萃取：2、等电点沉淀法：3、盐析沉淀法：4、亲和层析法：5、三相点：三、是非题1、冷冻升华干燥过程是将湿物料在较低的温度下，冻结成固态，然后在高度真空下，将其水分直接升华成气态的干燥过程，该方法不适合处理青霉素、生物酶等热敏性物料。

2、在膜分离过程中，由于浓差极化的形成导致膜表面溶质浓度增大，溶质的通透性降低，故在使用中要尽量减少这种情况出现。

3、层析技术根据使用目的不用可分为制备层析技术及分析层析技术。

4、分子蒸馏是一种非平衡状态下的分离操作，它与常规蒸馏技术的原理是不同的。

5、萃取是利用溶质在两项之间分配系数的不同而使溶质分离的技术，分配系数差别越小萃取效果越好。

6、凝聚和絮凝原理不同，凝聚是在中性盐作用下，由于双电层排斥电位的降低而使胶体体系不稳定的现象。

絮凝是在高分子絮凝剂的作用下，通过架桥作用，使细胞和蛋白质聚集成粗大的絮凝团的过程。

7、细胞破碎就采用一定的方法，在一定程度上破坏细胞壁和细胞膜，设法使细胞内产物最大程度地释放到液相中，破碎后的细胞浆液经分离后再采用不同的分离手段进一步纯化的方法。

四、简答题1、请结合图示简述凝胶排阻色谱（分子筛）的分离原理。

《生化分离技术》期终考试试卷

8．发酵液的预处理方法不包括：（）A．加热B．絮凝C．离心D．调pH9．其他条件相同时，优先选用何种固液分离手段：（）A．离心分离B．过滤C．沉降D．超滤10．哪种细胞破碎方法适用工业生产：（）A．高压匀浆B．超声波破碎C．渗透压冲击法D．酶解法11．盐析操作中，硫酸铵在什么情况下不能适用：（）A．酸性条件B．碱性条件C．中性条件D．和溶液酸碱度无关12．蛋白质初步提取过程，不能采用的方法是：（）A．双水相萃取B．超临界流体萃取C．有机溶剂萃取D．反胶团萃取13．丝状真菌适合采用的破碎方法是：（）A．珠磨法B．高压匀浆法C．A与B联合D．A与B均不行14．用来提取产物的溶剂称：（）A．料液B．萃取液C．萃取剂D．萃余液15．下列不是减小浓差极化有效措施的是：（）A．提高料液流速B．降低料液温度C．设置湍流促进器D．定期清洗膜16．气相色谱的载气不能用：（）A．氢气B．氦气C．氧气D．氮气17．HPLC中，下列哪种检测器不适合在梯度洗脱中使用：（）A．紫外检测器B．荧光检测器C．蒸发光散射检测器D．示差折光检测器18．下列哪个不属于初步纯化：（）A．沉淀法B．吸附法C．离子交换层析D．萃取法19．能够除去发酵液中钙，镁，铁离子的方法是：（）A．过滤B．萃取C．离子交换D．蒸馏20．有机溶剂沉淀法中，可使用的有机溶剂是：（）A．乙酸乙酯B．正丁醇C．苯D．丙酮21．有机溶剂为什么能够沉淀蛋白质：（）A．介电常数大B．介电常数小C．中和电荷D．与蛋白质发生反应22．若两性物质结合了较多阳离子，等电点pH：（）A．升高B．降低C．不变D．以上均有可能23．气相色谱柱主要有：（）A．填充柱B．毛细管柱C．A或B D．A或B及其他24．用于蛋白质分离过程中脱盐和更换缓冲液的色谱是：（）A．离子交换色谱B．亲和色谱C．凝胶过滤色谱D．反相色谱25．分子筛层析指的是：（）A．吸附层析B．分配层析C．凝胶层析D．亲和层析二、判断题（正确的打“√”，错误的打“×”；每小题1分，共10分）1．高浓度盐溶液中疏水性相互作用减小。

生化分离工程题目答案(仅供参考)

1.生化分离工程是生化工程的一个重要组成部分，它是描述回收生物产品分离过程原理和方法的一个术语，指从发酵液或酶反应液或动植物细胞培养液中分离、纯化生物产品的过程。

2.生物技术下游加工过程的一般步骤和单元操作:(1) 发酵液的预处理与固液分离选用的单元操作有限，一般选用过滤和离心的方法，有时也伴有沉降操作，错流过滤也较为常用。

对非外泌性产物，还需进行细胞破碎。

(2) 初步纯化（或称产物的提取）通过一个和几个单元操作以除去与目标产物性质有很大差异的杂质，提高了产物的浓度和质量。

单元操作如吸附、萃取和沉淀。

(3) 高度纯化（或称产物的精制）选用的单元操作有限，所用的技术对产物有高度的选择性，典型的单元操作有层析、电泳和沉淀等。

(4) 成品加工产物的最终用途和要求，决定了最终的加工方法，浓缩和结晶常常是操作的关键。

3.工艺设计原则是什么？1）技术路线、工艺流程尽量简单化、集成化，尽量降低成本；2）将完整工艺划分为不同的操作单元；3）采用成熟技术与可靠设备；4）纯化开始前编写、备好书面标准操作程序等技术文件；5）适宜的检测方法。

4.简述本课程所介绍的公用设施及设备。

1）洁净空气制备系统。

空气调节的目的主要是通风以及通过各种空气处理（如净化、加热或冷却、加湿或除湿等）来维持室内适宜的温度环境。

①洁净空气调节系统的组成：小规模、单分区洁净空气调节系统；中大规模、多分区洁净空气调节系统两类②空气净化和空气过滤器：由于不同的洁净室对洁净级别的要求不同，因此采用不同种类的空气过滤器，有初效中效高效静电过滤四种方式过滤器。

2）洁净室及洁净空气调节系统的测定①洁净室，包括乱流和层流洁净室②洁净室的物理指标和生物学指标：温度、相对湿度、噪度、照度、静压差、层流风速、换气次数。

③洁净空气调节系统的测定和调整：A：空气调节系统的空气平衡测定和调整:N=QB：洁净室参数的测定：a)室内温度和相对湿度的测定b）室内静压差的测定c）室内洁净度的测定d)室内浮游菌和沉降菌的测定e）室内噪声的测定f）室内噪度的测定3）低温环境系统：制冷技术应用的三个温区：低温（-120℃），中温(-120℃~5℃)、高温①冷库制冷系统的基本组成：冷冻压缩机、冷凝器、蒸发皿、水冷却皿以及其他组件②冷库的类型：由保温围护系统、冷冻系统、电控网络系统等组成的用于冷冻、冷藏的成套设备。

生化分离技术复习

名词解释：生化分离技术：是指从含有目标产物的发酵液、酶反应液或动植物细胞培养液中，提取、精制并加工制成高纯度的、符合规定要求的各种生物技术产品的技术，又称为下游加工技术。

生物技术产品：是指在生产过程应用微生物发酵技术、酶反应技术、动植物细胞培养技术等生化反应技术制得的产品。

细胞破碎：是指选用物理、化学、酶或机械的方法来破坏微生物菌体的细胞壁或细胞膜，释放其中的目标产物。

蛋白质复性：是指变性的包涵体蛋白质在适当条件下使伸展的肽键形成特定三维结构，使无活性的分子成为具有特定生物学功能的蛋白质。

用溶剂从溶液中抽提物质叫液-液萃取，也称溶剂萃取。

经典的液-液萃取指的是有机溶剂萃取.带溶剂是指能和产物形成复合物，促使产物更易溶于有机溶剂相中，在一定条件下又要容易分解的物质。

超临界流体(SCF)萃取是利用超临界流体作为萃取剂，对物质进行溶解和分离的过程。

超临界流体(SCF)是处于临界温度和临界压力以上的非凝聚性的高密度流体。

反胶团（reversed micelles）是表面活性剂在非极性有机溶剂中亲水性基团自发地向内聚集而成的，内含微小水滴的，空间尺度仅为纳米级的集合型胶体。

吸附：利用吸附剂对液体或气体中某一(些)组分具有选择性吸附的能力，使其富集在吸附剂表面。

实质是溶质从液相或气相转移到吸附剂表面的过程。

离子交换技术：是根据某些溶质能解离为阳离子或阴离子的特性，利用离子交换剂与不同离子结合力强弱的差异，将溶质暂时交换到离子交换剂上，然后用合适的洗脱或再生剂将溶质离子交换下来，使溶质从原溶液中得到分离、浓缩或提纯的操作技术。

洗脱：离子交换完成后，将树脂吸附的物质释放出来重新转入溶液的过程称作洗脱。

树脂的毒化：树脂失去交换性能后不能用一般的再生手段重获交换能力的现象称为树脂的毒化。

浓差极化：在膜分离过程中，由于水和小分子溶质透过膜，大分子溶质被截留而在膜表面处聚积，使得膜表面上被截留的大分子溶质浓度增大，高于主体中大分子溶质的浓度，这种现象称为浓差极化。

第十二章生化分离技术与应用-习题

第十二章生化分离技术和应用一、选择题⒈下列哪种方法可用于测定蛋白质的分子量（）A、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法；B、280/260nm紫外吸收比值；C、凯氏定氮法；D、荧光分光光度法；E、Folin酚试剂法⒉氨基酸和蛋白质共有的理化性质为（）A、胶体性质；B、两性性质；C、沉淀性质；D、变性性质；E、双缩脲性质⒊蛋白质溶液的稳定因素为（）A、蛋白质溶液为真溶液；B、蛋白质在溶液中做布朗运动；C、蛋白质分子表面带有水化膜和同性电荷；D、蛋白质溶液的黏度大；E、以上都不对⒋关于蛋白质在等电点时的特性描述，哪项是错误的？（）A、导电性最小；B、溶解度最小；C、黏度减小；D、电泳迁移率最小；E、以上都不对⒌今有①、②、③、④、四种蛋白质的混合液，等电点分别为：5.0、8.6、6.8和9.2 ，在pH8.6的条件下进行电泳分离，四种蛋白质电泳区带自正极的排列顺序为：（）A、①、③、②、④；B、①、②、③、④；C、④、②、③、①；D、③、②、①、④；E、②、④、③、①；⒍盐析沉淀蛋白质的原理为（）A、中和电荷，破坏水化膜；B、与蛋白质结合成不溶性盐；C、次级键断裂，蛋白质构象改变；D、调节蛋白质溶液的等电点；E、以上都不是⒎关于下列多肽Glu-His-Arg-Val-Lys-Asp的叙述，哪个是错的？（）A、在pH12时，在电场中向阳极移动；B、在pH3时，在电场中向阴极移动；C、在pH5时，在电场中向阴极移动；D、在pH11时，在电场中向阴极移动；E、该肽的等电点大约在pH8⒏用下列方法测定蛋白质含量，哪一种方法需要完整的肽键（）A、双缩脲反应；B、凯氏定氮；C、紫外吸收；D、茚三酮；E、奈氏试剂⒐蛋白质用硫酸铵沉淀后，可选用透析法除去硫酸铵，要确定硫酸铵是否从透析袋中除净，你选用下列哪一种试剂检查（）A、茚三酮试剂；B、奈氏试剂；C、双缩脲试剂；D、Folin-酚试剂；E、斐林试剂⒑将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来，这种技术属于（）A、吸附层析；B、离子交换层析；C、分配层析；D、亲和层析；E、凝胶过滤⒒若用电泳分离Gly-Lys、Asp-Val和Ala-His三种二肽，在下列哪个pH值条件下电泳最合适（）A、pH2以下；B、pH2-4；C、pH7-9；D、pH10-12；E、pH12以上；⒓进行疏水层析时，以下哪种条件比较合适？（）A、在有机溶剂存在时上柱，低盐溶液洗脱；B、在有机溶剂存在时上柱，高盐溶液洗脱；C、在低盐条件下上柱，高盐溶液洗脱；D、在高盐条件下上柱，按低盐、水和有剂溶剂顺序洗脱；E、低盐缓冲液上柱，低盐洗脱⒔对一个富含His残基的蛋白质，在使用离子交换层析时应优先考虑（）A、严格控制蛋白质上样液的浓度；B、严格控制盐浓度；C、严格控制NaCl的浓度；D、严格控制洗脱液的pH值；E、严格控制洗脱液的体积⒕定性鉴定20种氨基酸的双向纸层析是（）A、交换层析；B、亲合层析；C、分配层析；D、薄层层析二、判断是非⒈用凝胶过滤法分离蛋白质时，总是分子质量大的蛋白质首先被洗脱下来。

生化分离技术复习1..

绪论.生化分离技术：是指从含有目标产物的发酵液、酶反应液或动植物细胞培养液中，提取、精制并加工制成高纯度的、符合规定要求的各种生物技术产品的技术，又称为下游加工技术。

生物技术产品：是指在生产过程应用微生物发酵技术、酶反应技术、动植物细胞培养技术等生化反应技术制得的产品。

生物技术产品有哪些特点：生物技术产品有些是胞内产品，有些是胞外产物; 通常是由产物浓度很低的发酵液或培养液中提取的; 生物技术产品的稳定性差，易随时间变化，如易受空气氧化、微生物污染、蛋白质水解、自身水解等; 生物技术产品的生产多为分批操作，生物变异性大，各批发酵液或培养液不尽相同。

生化分离技术按其分离原理可分为机械分离与传质分离两大类。

生化分离过程主要包括哪几个方面？生化分离过程主要包括四个方面：①原料液的预处理和固液分离；②初步纯化（提取）；③高度纯化（精制）；④产品加工这四个步骤。

第一章固液分离技术排斥电位和产生吸附架桥作用的双重机制是絮凝的主要原因。

发酵液的相对纯化方法有哪些？固液分离的目的：除去固体杂质，得到溶液；分离掉溶液获得固体。

固液分离方法：过滤、沉降改善过滤性能的方法工艺上一般采用如下方法：降低混合液粘度、增大被分离颗粒的粒度、加入助滤剂、提高离心机的转速或提高操作压力、增大真空度、降低滤饼层厚度、除去滤饼第二章细胞破碎细胞破碎是指选用物理、化学、酶或机械的方法来破坏微生物菌体的细胞壁或细胞膜，释放其中的目标产物。

细胞破碎的方法有哪些？各有何特点？一、球磨破碎特点：适用范围较广；但有效能量利用率很低，设计操作时应充分考虑冷却系统的热交换能力；影响破碎率的操作参数较多，过程优化设计较复杂。

二、高压匀浆法特点：适用于酵母和大多数细菌细胞的破碎，不宜用于团状或丝状菌的破碎，易堵塞；由于操作中温度会升高，需对料液作冷却处理，保护目的产物活性。

三、超声破碎法特点：是很强烈的破碎方法；适用范围广；但有效能量利用率极低，对冷却要求相当苛刻，不易放大，多在实验室使用。

生化分离技术考试题目

第一章1.1何谓生化分离技术的集成化概念？请举例加以说明。

1) 利用已有的和新近开发的生化分离技术，将下游过程中的有关单元进行有效组合(集成);2) 或把两种以上的分离技术合成为一种更有效的分离技术，达到提高产品收率、降低过程能耗和增加生产效益的目标；例子⑴多种分离、纯化技术相结合，包括新、老技术的相互渗透与融合，形成所谓融合技术；⑵生化分离技术（下游技术）与发酵工艺（上游技术）相结合或称耦合，形成系统工程；1.2说明生化分离的主要步骤并指出胞内产物和胞外产物的分离纯化流程不同之处①材料及处理来源丰富，含量相对较高，杂质尽可能少②目的物的提取将目的物从材料中以溶解状态释放出来，方法与存在部位及状态有关③分离纯化核心操作，须据目的物的理化性质，生物性质及具体条件定④浓缩，结晶，干燥⑤保存整个过程应有快速灵敏准确的分析方法来衡量效果（收率、纯度）（胞内外的区别就是在于破壁）2.1简要说明常用细胞破碎的主要方法、原理、特点、适用范围及细胞破碎今后的发展方向。

①胞捣碎法，原理：机械运动产生剪切力适用于动植物组织②高速匀浆法，破碎程度较上法好，且机械剪切力对生物大分子的破坏较小，处理量大。

原理：利用高压使细胞悬浮液通过针型阀，由于突然的减压和高速冲击撞击环使细胞破碎。

适用于：较柔软、易分散的组织细胞。

③研磨法和珠磨法适用于微生物与植物细胞④挤压瓶适用于细菌（G-）⑤超声破碎⑦物理法（反复冻融动物材料、渗透压冲击细胞壁脆弱的微生物、急冷骤热（细菌病毒等热不敏感的物质））⑧干燥法（热空气干燥法适用于酵母，真空干燥法适用于细菌，冷冻干燥法适用于不稳定的酶）⑨化学法，1、溶剂处理法丙酮、氯仿、甲苯等脂溶性溶剂可溶解胞膜上脂质化合物，使细胞结构破坏。

2、表面活性剂法添加如十二烷基磺酸钠、去氧胆酸钠等，通过破坏细胞膜而破碎细胞，释放目的物。

此法常需与其它方法结合应用⑩酶解法，1．自溶法，将欲破碎细胞在一定条件（pH、T）下保温一定时间，通过细胞本身存在的酶系的作用，将细胞破坏，使胞内物质释放。

生化分离工程期末考试

第一章绪论1、生物分离工程：从发酵液或酶反应液或动植物培养液中分离、纯化生物产品的过程。

2、生化分离工程的特点：①目标产物浓度低、杂质含量高；②物料体系复杂——多相，非牛顿流体；③目标产物稳定性差；④分离过程可变性；⑤质量要求高⑥产品价格与产物浓度呈反比第二章发酵液的预处理和固液分离1、预处理的目的：促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率。

2、预处理的方法：凝聚和絮凝、加热法、调节悬浮液的PH值、杂蛋白的去处、高价无机离子的去除、助滤剂和反应剂。

3、凝聚：指在投加的化学物质作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成１mm 大小块状凝聚体的过程。

机理：1）中和粒子表面电荷；2）消除双电层结构；3）破坏水化膜。

4、絮凝：指使用絮凝剂将胶体粒子交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。

其中絮凝剂主要起架桥作用。

机理：架桥作用。

采用絮凝法可形成粗大的絮凝体，使发酵液较易分离。

5、絮凝的影响因素：1.发酵液的性质；2.絮凝剂的浓度，最佳用量为粒子表面积约有一半被聚合物覆盖；3.絮凝剂的分子量；4.pH 控制；5.搅拌速度。

6、混凝：对于带负电荷的菌体或蛋白质来说，采用阳离子型高分子絮凝剂同时具有降低胶粒双电层电位和产生吸附桥架的双重机理，单独使用可达到较好絮凝效果；对于非离子型和阴离子型高分子絮凝剂，要采用凝聚和絮凝双重机理才能提高过滤效果。

这种包括凝聚和絮凝机理的过程，称为混凝。

7、杂蛋白的去除方法：沉淀法（等电点沉淀法、酸碱调节）、变性法（蛋白质从有规则的排列变成不规则结构的过程称为变性）、吸附法（加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去）。

8、固液分离的方法：过滤、离心、膜分离、双水相萃取、扩张床吸附。

9、影响发酵液固液分离的因素：1）发酵液中悬浮离子的大小；2）发酵液的黏度（固液分离速度通常与粘度成反比，粘度越大，固液分离越困难。

）10、过滤:借助于过滤介质，在一定的压力差ΔP作用下，使悬浮液中的液体通过介质的孔道，而固体颗粒被截留在介质上，从而实现固液分离的单元操作。

生物化学：第十章生化分离技术与应用-习题

⽣物化学：第⼗章⽣化分离技术与应⽤-习题第⼗章⽣化分离技术和应⽤⼀、选择题⒈下列哪种⽅法可⽤于测定蛋⽩质的分⼦量（）A、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法；B、280/260nm紫外吸收⽐值；C、凯⽒定氮法；D、荧光分光光度法；E、Folin酚试剂法⒉氨基酸和蛋⽩质共有的理化性质为（）A、胶体性质；B、两性性质；C、沉淀性质；D、变性性质；E、双缩脲性质⒊蛋⽩质溶液的稳定因素为（）A、蛋⽩质溶液为真溶液；B、蛋⽩质在溶液中做布朗运动；C、蛋⽩质分⼦表⾯带有⽔化膜和同性电荷；D、蛋⽩质溶液的黏度⼤；E、以上都不对⒋关于蛋⽩质在等电点时的特性描述，哪项是错误的？（）A、导电性最⼩；B、溶解度最⼩；C、黏度减⼩；D、电泳迁移率最⼩；E、以上都不对⒌今有①、②、③、④、四种蛋⽩质的混合液，等电点分别为：5.0、8.6、6.8和9.2 ，在pH8.6的条件下进⾏电泳分离，四种蛋⽩质电泳区带⾃正极的排列顺序为：（）A、①、③、②、④；B、①、②、③、④；C、④、②、③、①；D、③、②、①、④；E、②、④、③、①；⒍盐析沉淀蛋⽩质的原理为（）A、中和电荷，破坏⽔化膜；B、与蛋⽩质结合成不溶性盐；C、次级键断裂，蛋⽩质构象改变；D、调节蛋⽩质溶液的等电点；E、以上都不是⒎关于下列多肽Glu-His-Arg-Val-Lys-Asp的叙述，哪个是错的？（）A、在pH12时，在电场中向阳极移动；B、在pH3时，在电场中向阴极移动；C、在pH5时，在电场中向阴极移动；D、在pH11时，在电场中向阴极移动；E、该肽的等电点⼤约在pH8⒏⽤下列⽅法测定蛋⽩质含量，哪⼀种⽅法需要完整的肽键（）A、双缩脲反应；B、凯⽒定氮；C、紫外吸收；D、茚三酮；E、奈⽒试剂⒐蛋⽩质⽤硫酸铵沉淀后，可选⽤透析法除去硫酸铵，要确定硫酸铵是否从透析袋中除净，你选⽤下列哪⼀种试剂检查（）A、茚三酮试剂；B、奈⽒试剂；C、双缩脲试剂；D、Folin-酚试剂；E、斐林试剂⒑将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋⽩质样品中分离出来，这种技术属于（）A、吸附层析；B、离⼦交换层析；C、分配层析；D、亲和层析；E、凝胶过滤⒒若⽤电泳分离Gly-Lys、Asp-Val和Ala-His三种⼆肽，在下列哪个pH值条件下电泳最合适（）A、pH2以下；B、pH2-4；C、pH7-9；D、pH10-12；E、pH12以上；⒓进⾏疏⽔层析时，以下哪种条件⽐较合适？（）A、在有机溶剂存在时上柱，低盐溶液洗脱；B、在有机溶剂存在时上柱，⾼盐溶液洗脱；C、在低盐条件下上柱，⾼盐溶液洗脱；D、在⾼盐条件下上柱，按低盐、⽔和有剂溶剂顺序洗脱；E、低盐缓冲液上柱，低盐洗脱⒔对⼀个富含His残基的蛋⽩质，在使⽤离⼦交换层析时应优先考虑（）A、严格控制蛋⽩质上样液的浓度；B、严格控制盐浓度；C、严格控制NaCl的浓度；D、严格控制洗脱液的pH值；E、严格控制洗脱液的体积⒕定性鉴定20种氨基酸的双向纸层析是（）A、交换层析；B、亲合层析；C、分配层析；D、薄层层析⼆、判断是⾮⒈⽤凝胶过滤法分离蛋⽩质时，总是分⼦质量⼤的蛋⽩质⾸先被洗脱下来。

生化分离技术复习题及答案

离心技术1、什么是离心技术？这种技术主要应用于哪些方面？离心技术是分子生物学和生物化学研究中不可缺少的一种技术。

它是利用物质沉降系数、密度、浮力等方面的差别，用强大的离心力场将其分离、浓缩、纯化和鉴定的技术。

离心技术既可以是制备性的也可以是分析性的。

处理的样品可多可少（几千L至0.2mL以下），应用范围十分广泛。

这项技术应用很广，诸如分离出化学反应后的沉淀物，天然的生物大分子、无机物、有机物，在生物化学以及其它的生物学领域常用来收集细胞、细胞器及生物大分子物质。

2、离心机的种类有哪些？主要性能如何？根据性能，离心机分为三种类型，即低速离心机（转速在2000～6000r/min之间，最大RCF可达6000g）、高速离心机（转速在18000～25000r/min之间，最大RCF 可达60 000g）、超速离心机（转速在40 000～100 000r/min之间，最大RCF可达803 000g）。

超速离心机按性能又分为分析型、制备型和分析制备型三类。

3、超速离心机主要由哪四个部分构成？分析性离心机构造的特点是什么？超速离心机主要由驱动和速度控制、温度控制、真空系统和转头四部分组成。

分析性离心机使用了特殊设计的转头和光学检测系统，以便连续地监视物质在一个离心场中的沉降过程。

从而确定其物理性质。

分析性超速离心机的转头是椭圆形的，以避免应力集中于孔处。

此转头通过一个有柔性的轴联接到一个高速的驱动装置上，转头在一个冷冻的和真空的腔中旋转，转头上有2～6个装离心杯的小室，离心杯是扇形石英的，可以上下透光，离心机中装有一个光学系统，在整个离心期间都能通过紫外吸收或折射率的变化监测离心杯中沉降着的物质，在预定的期间可以拍摄沉降物质的照片，在分析离心杯中物质沉降情况时，在重颗粒和轻颗粒之间形成的界面就像一个折射的透镜，结果在检测系统的照像底板上产生了一个“峰”，由于沉降不断进行，界面向前推进，因此峰也移动，从峰移动的速度可以计算出样品颗粒的沉降速度。

生化分离技术考试复习题库(含详细答案)

《生化分离》考试复习题库一、选择题1.下列不是超临界萃取工艺的方法是（）。

A 等温法B 等压法C 吸附法D 交换法2.影响絮凝效果的因素有很多，但不包括（）。

A 絮凝剂的浓度B 溶液pH值C 溶液含氧量D 搅拌速度和时间3.葡聚糖凝胶色谱属于排阻色谱，在化合物分离中，先被洗脱下来的为（）。

A 杂质B 小分子化合物C 大分子化合物D 两者同时下来4.当向蛋白质纯溶液中加入中性盐时，蛋白质溶解度（）。

A 增大B 减小C 先增大，后减小D 先减小，后增大5.下列不能提高发酵液过滤效率的措施是（）。

A PEG/葡聚糖B PEG/磷酸盐C PEG/硫酸铵D 磷酸盐/硫酸铵15.在萃取操作中，分离系数越小，组分（）分离。

生化分离技术试题及答案

浙江理工成教院期终考试《生化分离技术》试卷A试卷教学站年级班级学号姓名一、填空题（每空1分，共21分）。

1、生化分离是从生物材料、微生物的发酵液或动植物细胞的培养液中分离并纯化有关生化产品的过程，一般采用如下工艺流程：发酵液→（）→细胞分离→（细胞破碎→细胞碎片分离）→（）→（）→成品加工。

2、提取的产物在细胞内，选用细胞破碎法；在细胞膜附近则可用细胞破碎法；提取的产物与细胞壁或膜相结合时，可选用机械法和化学法相结合的细胞破碎法。

3、发酵液的预处理目的主要包括改变和。

4、典型的工业过滤设备有和。

5、反萃取是将目标产物从转入的过程。

6、超临界流体萃取的溶剂可分为非极性和极性溶剂两种，常用的极性溶剂有和、非极性有。

7、按膜的孔径的大小分类，可将膜分为、、和等。

8、冻干操作过程包括：、和。

二、判断题（每题1分，共15分）1、盐析是指向蛋白质溶液中加入某些浓的中性盐后，使蛋白质凝聚而从溶液中析出，以达到分离、提纯生物大分子的目的。

（）2、常用的盐析剂有葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺、明胶等。

（）3、萃取是利用化合物在两种互不相容的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另一种溶剂中，经过反复多次的萃取，将绝大部分化合物提取出来的方法。

（）4、双水相萃取的体系的两相是不含有水分的。

（)5、膜分离操作中，所有溶质均被透过液传送到膜表面上，不能完全透过膜的溶质受到膜的截留作用，在膜表面附近浓度升高，这种现象叫做浓差极化。

（）6、凝胶色谱是利用不同生物分子的电离能力不同而达到物质分离目的的。

（）7、离子交换色谱是利用不同分子的大小不同而达到物质分离目的的。

（）8、亲和色谱是利用生物分子之间的亲和力的不同而达到物质分离目的的。

（）9、要增加目的物的溶解度，往往要在目的物的等电点附近进行提取。

（）10、蛋白质类的生物大分子在盐析过程中，最好在高温下进行，因为温度高会增加其溶解度。

（）11、蛋白质为两性电解质，改变pH可以改变其电荷性质，pH大于pI，蛋白质带正电荷。

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