植物中蛋白质的测定
农作物籽实中蛋白质测定方法
农作物籽实中蛋白质测定方法
农作物籽实中蛋白质的测定方法主要有以下步骤：
1. 样品消煮：称取一定量的烘干样品（过0.25mm筛子），放入开氏瓶或消煮管中，加入混合催化剂18g，加几滴水湿润后，加入5mL 浓H2SO4，小心轻摇后加塞放置过夜。
盖上小漏斗，将消煮管放置在消煮炉或电炉上，开始时用小火加热，当消煮液呈棕色时，提高温度，消煮至溶液呈清亮带浅蓝色时，再加热约10min，取下冷却至温热。
将消煮液无损地转入100mL容量瓶中，冷却至室温后定容并放置澄清。
2. 氮的测定：用移液管吸取澄清待测液5.00mL或10.00mL放入半微量定氮仪中进行定氮（以下操作同土壤全氮的测定）。
同时作空白试验，校正试剂和滴定误差，并做核对试验。
3. 结果计算：粗蛋白质（干基）(%)=（V-V。
）×c×14×10-3×分取倍数×k×100/m。
以上是农作物籽实中蛋白质的测定方法，供您参考。
实际操作中请根据具体设备和条件进行调整。
同时请注意，由于消煮过程会涉及到浓硫酸等强酸和高温操作，请务必在专业人员的指导下进行，注意安全。
植物组织中可溶性蛋白质含量的测定
实验8 植物组织中可溶性蛋白质含量的测定Ⅰ．斐林-酚试剂法 [原理] 斐林(Folin)-酚试剂法结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应，其中包括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，颜色深浅与蛋白含量成正相关。
在650nm时比色测定的灵敏度比双缩脲法高100倍。
由于肤键显色效果增强，从而减少了因蛋白质种类引起的偏差。
该法适于微量蛋白的测定(范围为5～l00μg蛋白质)。
[材料、仪器设备及试剂](一)材料各种植物材料。
(二)仪器设备 722分光光度计，离心机，恒温水浴，定量加样器，冷凝回流装置一套，研钵，离心管，刻度移液管，微量滴定管，试管等。
(三)试剂 (1)0．5mol／L Na0H。
(2)斐林-酚试剂甲液：由A、B两种溶液组成：A液：4％碳酸钠(Na2C03)溶液与0.2mol/L氢氧化钠(Na0H)溶液等体积混合。
B液：1％硫酸铜(CuS04·5H20)溶液与2％酒石酸钾钠溶液等体积混合。
使用前将A与B按50:1的比例混合即成，此试剂只能在使用当天配制。
(3)斐林-酚试剂乙液：称取钨酸钠(Na2W04。
H20)100g，钼酸钠(Na2Mo04·2H20)25g，加蒸馏水700ml溶解于1500mL的圆底烧瓶中。
之后加入85％的H3PO450mL，浓Hcl 100 mL，安上回流装置(使用磨口接头，若用软木塞或橡皮塞时，就必须用锡铂纸包起来)，使其慢慢沸腾10h。
冷却后加入硫酸锂（Li2SO4.H2O）150g,蒸馏水50ml，溴水2-3滴，打开瓶口煮沸15min，以逐出过量的溴，冷却后溶液呈黄色（若仍绿色，须再滴加几滴溴水，继续煮沸15min）。
待冷却后稀释至1000ml，过滤入棕色瓶中保存。
使用时大约加水1倍，使最终浓度相当于1mol/L酸度。
因此在使用前应进行标定。
大豆中蛋白质含量的测定实验报告
大豆中蛋白质含量的测定实验报告大豆是一种富含蛋白质的植物，因此对大豆中蛋白质含量的测定非常重要。
本实验旨在通过化学方法测定大豆中蛋白质的含量，并对结果进行分析和讨论。
实验材料和仪器：1. 大豆样品2. 硫酸钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 酸性消化液5. NaOH溶液6. 氮气吹扫装置7. 精密天平8. 恒温水浴9. 离心机10. 紫外分光光度计实验步骤：1. 准备大豆样品：将大豆磨成粉末，并将其过筛以获得均匀的颗粒大小。
2. 水解反应：取一定量的大豆样品加入酸性消化液中，放入恒温水浴中进行水解反应，使蛋白质完全水解为氨基酸。
3. 碱解反应：将水解后的溶液中加入适量的NaOH溶液，使溶液呈碱性，以便将其他干扰物质转化为不溶性沉淀。
4. 沉淀处理：将碱解后的溶液进行离心处理，将沉淀分离出来。
5. 沉淀洗涤：用硫酸钠溶液对沉淀进行洗涤，去除杂质。
6. 干燥：将洗涤后的沉淀放入烘箱中干燥，直至恒定质量。
7. 称重：使用精密天平称取干燥后的沉淀质量。
8. 光度计测定：将一定量的沉淀溶解于适量的NaOH溶液中，使用紫外分光光度计测定溶液的吸光度。
9. 蛋白质含量计算：根据标准曲线，计算出大豆中蛋白质的含量。
实验结果与分析：根据实验测定，我们得到了大豆样品中蛋白质的含量。
通过对标准曲线的分析，我们可以得知大豆样品中蛋白质的浓度。
从实验结果中可以看出，大豆中蛋白质的含量较高，这也符合我们对大豆富含蛋白质的认识。
在实验中，我们采用了水解和碱解的方法，这是常用的蛋白质测定方法之一。
水解反应将蛋白质水解为氨基酸，使其更容易测定；碱解反应则将其他干扰物质转化为不溶性沉淀，方便后续步骤的进行。
为了准确测定大豆中蛋白质的含量，我们进行了沉淀处理和洗涤步骤，以去除杂质。
这些步骤的目的是提高测定的准确性和精确度。
同时，干燥步骤的进行可以保证质量的恒定，进一步提高测定结果的可靠性。
通过紫外分光光度计的测定，我们可以得到溶液的吸光度，进而计算出蛋白质的浓度。
三种常见蛋白质含量测定方法
三种常见蛋白质含量测定方法
蛋白质含量是决定植物质量的重要因素，在植物栽培及种子货架上，精确掌握植物蛋白质含量，进而为植物中品质和效用性提供重要的评价依据。
目前，研究常用的植物蛋白质含量测定方法有Kjeldahl法，Bradford法和Lowry法等三种。
Kjeldahl法是一种多功能性的蛋白质定量方法，它可以测定含氮量甚至微量有机氮，此法在测定蛋白质含量方面易于操作，测试效率高， get精度也较高。
该法简单地以氨作为氮源，以硫酸释放氨，用硫酸钠将氨碱中的氨携带，然后进行缓冲及蒸发水解，最后通过酚酞形成深蓝色络合物对氮进行定量，从而间接的得到蛋白质的含量。
Bradford法同样是一种多用途的法子，它能够直接测定蛋白质中的色氨酸及胆羧酸含量，该方法的操作简便，使用成本低，测试效率高，可在一个小时内达到较高精度的测定结果。
Bradford法原理是将蛋白质及它的沉淀由蛋白质合酶结合至二价铬J络合物，从而形成一种光电的特异性比色反应。
Lowry法也是一种多功能性的定量方法，该方法能测定有机物中蛋白质、氨基酸等氮含量，以及各种物质中的亲合体，操作过程简单，精度也较高，比Kjeldahl法快7倍以上，Lowry法原理是蛋白质分解成其中的氨基酸，通过对色比色反应，底物络合过程自络合金属，再经冷酰膦处理，酰膦中色素降解，形成比色荧光，定量检测氮含量，从而间接得到蛋白质含量。
以上就是蛋白质含量测定常见三种方法。
从Kjeldahl法，Bradford法和Lowry法等三种方法，人们可以很好地掌握植物蛋白质含量，进而为植物中品质和效用性提供重要的评价依据。
植物蛋白质含量测定（考马斯亮蓝法）
【仪器与用具】
分光光度计，10ml 量筒 1 支；研体；10ml 容量瓶 1 支；1ml 刻度吸管 3 支；10ml 具塞刻度试管 14 支。 【试剂】
（1）牛血清白蛋白 配成 1000μg/ml 和 100μg/ml；
（2）考马斯亮蓝 G-250：称取 100mg 考马斯亮蓝 G-250 溶于 50ml 90%乙醇中，加入 85%（W/V）磷酸 100ml，最后用蒸馏水定容至 1000ml。此溶液在常温下可放置一个月；
（3）90%乙醇；（4）磷酸（85%，W/V）。 【方法】
1.标准曲线的绘制
（1）0～100μg/ml 标准曲线的制作取 6 支试管，按表 28-1 数据配制 0～100μg/ml 血清白蛋白液各 1ml。 准确吸取所配各管溶液 0.1ml，分别放入 10ml 具塞试管中，加入 5ml 考马斯亮蓝 G-250 试剂，盖塞，反 转混合数次，放置 2min 后，在 595nm 下比色，绘制标准曲线。 表 28-1 配制 0～100μg/ml 血清白蛋白液
【原理】
考马斯亮蓝 G-250 测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝 G-250 在游离态下呈红色，当它与 蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在 465nm，后者在 595nm。在一定蛋白质浓度范围内（0～ 100μg/ml），蛋白质－色素结合物在 595nm 波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定 量测定。蛋白质与考马斯亮蓝 G-250 结合在 2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物 在室温下 1h 内保持稳定。该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。
植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。 在研究每一种酶的作用时，常以比活（酶活力单位／mg 蛋白）表示酶活力大小及酶制剂纯度。因此，测定 植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。常用测定方法有 Lowry 法和考马斯亮蓝 G-250 染料结 合法。本实验将分别介绍这两种方法。
设计性实验报告植物可溶性蛋白质和糖含量的测定
设计性实验报告题目植物可溶性蛋白质和糖含量的测定课程名称：基础生物化学实验实验学期：2011至2012学年第一学期植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定摘要本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。
结果表明：生菜的蛋白质含量为5.88（mg/g），糖含量为0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为0.2926（mg/g），糖含量为0.2126g/100g。
即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。
关键词可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝G-250染色法，蒽酮法，含量测定1、材料与方法1.1 蛋白质含量测定标准蛋白质溶液、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等1.2 糖含量测定200ug/ml标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架2、实验步骤蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）2.1标准曲线的绘制取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。
以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2.2样品测定2.2.1样品提取分别秤取生菜、苹果鲜样 0.25～0.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min离心10min，上清液备用。
2.2.2 吸取样品提取液1.0ml（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。
糖含量测定2.3.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。
植物蛋白质的测定方法
植物蛋白质的测定方法
测定植物蛋白质的方法可以包括以下几种：
1. Kjeldahl法：该方法是目前最常用的测定总蛋白质含量的方法。
它是基于氨基酸中的氮元素能够通过酸水解得到氨气，再通过凝集器和酸中和溶液收集氨气来测定氨气的体积，从而计算出样品中的氮含量，再乘以一个经验因子来估算样品中的蛋白质含量。
2. Bradford法：该方法是一种常用的蛋白质含量测定方法。
它
是基于蛋白质与康斯塔蓝染料形成复合物后，会改变染料的吸收光谱特性的原理。
通过测量染料在特定波长下的吸光度变化，可以间接计算出样品中的蛋白质含量。
3. Lowry法：该方法是一种比较敏感的测定蛋白质含量的方法。
它是基于蛋白质与碱式铜离子和费林试剂反应后形成紫色沉淀的原理。
通过测量沉淀的吸光度，可以间接计算出样品中的蛋白质含量。
4. BCA法：该方法是一种比较灵敏的测定蛋白质含量的方法。
它是基于蛋白质与BCA试剂中的铜离子反应产生蓝色比色产
物的原理。
通过测量比色产物的吸光度，可以间接计算出样品中的蛋白质含量。
总结起来，常用的测定植物蛋白质含量的方法包括Kjeldahl法、Bradford法、Lowry法和BCA法。
这些方法各有优缺点，根
据实验需要和样品特点选择合适的方法进行测定。
设计性实验报告植物可溶性蛋白质和糖含量的测定
设计性实验报告题目植物可溶性蛋白质和糖含量的测定课程名称：基础生物化学实验实验学期：2011至2012学年第一学期植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定摘要本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。
结果表明：生菜的蛋白质含量为5.88（mg/g），糖含量为0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为0.2926（mg/g），糖含量为0.2126g/100g。
即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。
关键词可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝G-250染色法，蒽酮法，含量测定1、材料与方法1.1 蛋白质含量测定标准蛋白质溶液、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等1.2 糖含量测定200ug/ml标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架2、实验步骤蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）2.1标准曲线的绘制取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。
以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
蛋白质含0 20 40 60 80 100量（ug）2.2样品测定2.2.1样品提取分别秤取生菜、苹果鲜样 0.25～0.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min离心10min，上清液备用。
2.2.2 吸取样品提取液1.0ml（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。
糖含量测定2.3.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。
植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定
实验四植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。
二、原理（一）分离提取原理在80-85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2 mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1 mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。
（二）测定原理1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。
蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10 min后出现，而核糖在相同温度下，加热3 min后出现。
此法灵敏度高，糖含量达30 μg即可测定。
2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570 nm下有最大光吸收。
在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。
3.考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595 nm，在一定范围内（0-1000 μg /mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。
此法快速灵敏，反应在2 min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。
三、实验用品（一）实验材料：植物样品。
（二）器皿：1. 25 mL刻度试管⨯8 ，15 mL试管⨯20；2. 10 mL离心管⨯2；3. 容量瓶：50 mL⨯1 ，25 mL⨯1；4. 移液管：5 mL⨯2，2 mL⨯4，1 mL⨯2，0.1 mL⨯2；5. 恒温水浴锅；6. 离心机；7. 电子天平；8. 分光光度计。
植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定
植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定一、目的衰老是植物在长期进化和自然选择中形成的一种生物学现象，它可以在植物的细胞、器官和整体等不同水平上表现出来。
植物叶片衰老过程中，叶绿素含量下降，叶色变黄，蛋白质含量减少。
另外自由基代谢失调并在体内积累也是植物衰老的机理之一。
本实验主要是测定植物衰老过程中叶片蛋白质的变化，掌握植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白的测定原理及方法。
二、原理植物材料经Tris－HCl缓冲液研磨、离心后，可溶性蛋白质溶于上清液中，非可溶性蛋白则存在于沉淀部分。
将沉淀用碱水解，则会得到非可溶性蛋白的提取液。
蛋白质提取液与考马斯亮蓝G－250反应呈蓝色。
在一定范围内，蛋白质的含量与反应液在595nm波长的吸光度呈正比，由此可求出蛋白质的含量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片2. 仪器设备：高速冷冻离心机；分光光度计；恒温水浴；研钵（或组织捣碎机）；试管；移液管；洗耳球等；3. 试剂及配制提取液（50mmol·L－1Tris－HCl，pH7.8，含0.5 mmol·L－1MgCl2， 1 mmol·L－1EDTA，1 mmol·L－1二硫苏糖醇, 缩写：DTT）。
考马斯亮蓝溶液配制：称取考马斯亮蓝G－250 100mg，加95％乙醇50ml，和85％磷酸100ml，然后定容至1000ml。
0.15mol·L－1NaCl溶液牛血清蛋白标准母液配制:用0.15mol·L－1NaCl溶液配成100μg·ml－1牛血清蛋白标准液。
四、实验步骤1. 牛血清蛋白标准曲线的制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg的牛血清蛋白标准液。
加入表中试剂后，摇匀，以0号管为空白对照，在595nm波长处测定其吸光度（A）值。
1.2标准曲线绘制以牛血清蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 蛋白质的提取称取叶片0.3～0.5g，剪碎于冷冻过的研钵中加提取液3ml，加少量石英砂，在冰浴中快速研磨成匀浆，匀浆倒入离心管中，再用5ml提取液（分两次）将研钵中匀浆洗入离心管，然后在10000 r/ min，4℃条件下离心20min，上清液即为可溶性蛋白质提取液。
植物蛋白实验报告
一、实验目的1. 了解植物蛋白提取的基本原理和方法。
2. 掌握植物蛋白的纯化技术。
3. 分析植物蛋白的组成和性质。
二、实验原理植物蛋白是植物细胞内的一种重要有机物，具有多种生物学功能。
本实验采用水提法提取植物蛋白，通过酶解、沉淀、离心等步骤进行纯化。
实验过程中，通过检测蛋白质的纯度和含量，分析植物蛋白的组成和性质。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 植物原料（大豆、花生、小麦等）- 0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.0）- 1mol/L NaCl溶液- 30%硫酸铵溶液- 1%十二烷基硫酸钠（SDS）- 0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 6.8）- 5%三氯乙酸溶液- 0.5mol/L醋酸铵溶液2. 仪器：- 研钵- 研杵- 离心机- 超声波清洗器- 电热恒温水浴锅- 紫外可见分光光度计- 离心管- 容量瓶- 移液器四、实验方法1. 植物蛋白提取（1）将植物原料洗净、烘干、粉碎，过40目筛。
（2）称取适量粉末，加入0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.0）。
（3）超声处理30min，使蛋白质充分溶解。
（4）离心（3000r/min，10min），取上清液。
2. 植物蛋白纯化（1）将上清液加入30%硫酸铵溶液，使蛋白质沉淀。
（2）离心（3000r/min，10min），收集沉淀。
（3）用0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.0）溶解沉淀，调节蛋白质浓度至1mg/mL。
（4）加入1%十二烷基硫酸钠（SDS），使蛋白质变性。
（5）离心（10000r/min，10min），收集沉淀。
（6）用0.1mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 6.8）溶解沉淀，调节蛋白质浓度至1mg/mL。
（7）加入5%三氯乙酸溶液，使蛋白质沉淀。
（8）离心（3000r/min，10min），收集沉淀。
（9）用0.5mol/L醋酸铵溶液溶解沉淀，调节蛋白质浓度至1mg/mL。
实验五：植物组织蛋白质提取与含量测定
1.4
1.0 5 Y
1.9
1.0 5 Z
四、实验步骤
三、样品蛋白质含量测定
2. 蛋白质含量测定：
两个原则来选择合适稀释倍数： 样品A595不能超过标准蛋白的最大A595值；
去除最小吸光度，选择中间吸光度。
将待测液最佳A595值(Y)代入标准曲线所得方程式中求出待测液中蛋白含量（X）
3. 蛋白质含量计算：
添加
• 按下页表所示依次加入各种试剂；
• 震荡，混匀； • 室温下静置5 min;
混匀
静置
测定 绘制
• λ =595 nm处测各管吸光度； • 绘制标准曲线，X=标准BSA含量，Y=吸光度，
四、实验步骤
一、标准曲线制作 管号 BSA(mL) 0.9%NaCl(mL) 0 0 1.0 1 0.2 0.8 2 0.4 0.6 3 0.6 0.4 4 0.8 0.2 5 1.0 1.0
定容
• 上清定容，用0.9% NaCl定容至10 mL(样品液)，
四、实验步骤
三、样品蛋白质含量测定
1. 样品液的稀释：
管号
稀释倍数（n） 样品液
1
5 0.2
2
10 0.1
3
15 0.1
4
20 0.1
0.9% NaCl
待测液 G-250(mL) A595
0.8
1.0 5 W
0.9
1.0 5 X
G-250(mL)
蛋白含量（ug）
5
0
5
20
5
40
5
60
5
80
5
100
5
X
振荡混匀，静置5 min，以0号管为空白对照 A595
植物叶片可溶性蛋白含量测定
植物叶片可溶性蛋白含量测定注意点:1，考马斯亮蓝G-250所配溶液不稳定，所以每次实验都必须新配，且必须新做标准曲线;2，考马斯亮蓝G-250配制完毕，如果发现溶液中有絮状沉淀，可以试用滤纸过滤后使用，如果实验中发现使用过滤后的考马斯亮蓝G-250溶液在与样品接触后短时间内便又发生絮凝，基本上推测该考马斯亮蓝G-250过期(比较容易出现)。
原理植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类，测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标。
在研究每一种酶的作用时，常以比活(酶活力单位,mg 蛋白)表示酶活力大小及酶制剂纯度。
因此，测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目。
常用测定方法有Lowry法和考马斯亮蓝G-250染料结合法。
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。
在一定蛋白质浓度范围内(0,100μg/ml)，蛋白质,色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。
故可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1h内保持稳定。
该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。
试剂(1)牛血清白蛋白配成100μg/ml;(2)考马斯亮蓝G-250:称取100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 90%乙醇中，加入85%(W/V)磷酸100ml，最后用蒸馏水定容至1000ml。
此溶液在常温下可放置一个月;(3)90%乙醇;(4)磷酸(85%，W/V)。
方法1.标准曲线的绘制(1)0,100μg/ml标准曲线的制作取6支试管，按表28-1数据配制0,100μg/ml血清白蛋白液各1ml。
准确吸取所配各管溶液0.1ml，分别放入10ml 具塞试管中，加入5ml考马斯亮蓝G-250试剂，盖塞，反转混合数次，放置2min 后，在595nm下比色，绘制标准曲线。
植物中蛋白质的测定优秀课件
0.085 0.181 0.261 0.354 0.438 0.317
各管浓
度
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2
？
mg/ml
操作步骤
3.在坐标纸上以各管蛋白质 含量为横坐标，光吸收值为纵坐 标，绘制标准曲线。
计算
从标准管中选一管与测定管光吸收值接
近值，按公式
C测
C标A测 A标
计算待测血清样本的蛋白质浓度，从上
分析天平
具塞三角瓶
离心机
摇床
操作步骤
<一>.样品处理
1.0.25 g小麦面粉＋2ml四氯化碳； 2.加塞，在摇床上振摇30分钟， 使之充分混匀、反应，然后于实验台上 静置10分钟；
操作步骤
3.离心，4000dr/min，离心15分钟； 4.取上清液比色
操作步骤
<二>标准曲线的制作与 样品中蛋白质的测定
测定范围为1－10mg蛋白质/ml。 干扰这一测定的物质主要有：
硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
实验材料与仪器
1.仪器和材料： 分光光度计、 7支试管、 1mL 刻度吸管3支、 移液器、坐标纸、摇床、离心机、 具塞三角瓶、分析天平。
2.试剂：四氯化碳溶液、少 许面粉、双缩脲试剂、9 g/L的 NaCl溶液、蛋白质标准液 （10 g/L)。
植物中蛋白质的测定食品中蛋白质的测定植物中的蛋白质蛋白质含量测定蛋白质测定蛋白质含量的测定蛋白质等电点的测定蛋白质测定方法蛋白质含量测定方法测定蛋白质的方法
植物中蛋白质的测定
肽的功能
由于多肽这类生物 活性物质是生命活动重 要的参与者，它影响和 调节着细胞与细胞，组 织与组织间的生理活动， 并且反馈着细胞与组织 的化学反应信息。
实验七 植物组织中可溶性蛋白质
实验七植物组织中可溶性蛋白质、可溶性糖含量的测定I、植物组织中可溶性蛋白质的测定一、原理由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm 波长处。
在此波长范围内，蛋白质溶液的光密度OD280nm 与其浓度呈正比关系，可作定量测定。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料植物叶片（二）仪器设备紫外分光光度计、分析天平、离心机、恒温水浴锅、研钵、移液管等（三）试剂0.1 mol/L pH7.0 磷酸液三、实验步骤1．样品中蛋白质的提取称取植物叶片0.5~1.0 g放入研钵中，加入2mL 0.1 mol/L的磷酸缓冲液，研磨成匀浆，转移至15mL 离心管中，再用6mL磷酸缓冲液分次洗涤研钵，洗涤液收集于同一离心管中，在室温（20~25℃）下放置05~1.0h,以充分提取，然后在4000 r/min离心10 min，将上清液转入25 mL容量瓶中，并以磷酸缓冲液定容至刻度，即得待测样品提取液。
2．样品中蛋白质含量的测定取适量稀释后的蛋白质提取液，在紫外分光光度计上，分别于280 nm和260 nm波长条件下（以磷酸缓冲液为空白对照），测定提取液的吸收值，代入公式即可计算出样品中蛋白质的含量。
四、结果计算样品中蛋白质的浓度（mg/mL）=（1.45A280—0.74A260）×稀释倍数式中：1.45 和0.74 ——校正值。
A 280 ——蛋白质溶液在280 nm 处的吸光度。
A 260 ——蛋白质溶液在260 nm 处的吸光度Ⅱ、植物组织中可溶性糖的测定--蒽酮法一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
实验三、植物组织中可溶性蛋白质含量的测定
植物组织中可溶性蛋白质含量的测定--考马斯亮蓝G – 250染色法一、原理考马斯亮蓝G – 250 （ Coomas sie brilli ant blue ，G-250 ）法是利用蛋白质–染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。
考马斯亮蓝G-250 存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。
它和蛋白质通过范德瓦尔键结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律。
此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变成蓝色形式，最大光吸收由465 nm 变成595 nm ，通过测定595 nm 处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约 2 min 即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定 1 h ，之后，蛋白质–染料复合物发生聚合并沉淀出来。
此法灵敏度高，易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。
其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物材料。
（二）试剂1. 标准蛋白质溶液（100μg／mL 牛血清白蛋白）：称取牛血清蛋白25 mg ，加水溶解并定容至100 mL ，吸取上述溶液40 mL ，用蒸馏水稀释至100 mL 即可。
2. 考马斯亮蓝试剂：称取100 mg 考马斯亮蓝G-250 ，溶于50 mL 90 ％乙醇中，加入100 mL 85 ％（W ／V ）的磷酸，再用蒸馏水定容到1000 mL ，贮于棕色瓶中。
常温下可保存一个月。
（三）仪器设备分光光度计，离心机，研钵，烧杯，量瓶，移液管，试管等。
三、实验步骤1. 标准曲线的绘制取 6 支试管，按下表加入试剂，摇匀，向各管中加入 5 mL 考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置 5 min 左右，以0 号试管为空白对照，在595 nm 下比色测定吸光度。
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……
……
很早以来科学家就 想把它们应用到人们的日 常饮食中，作为营养补充剂和功能因 子，用以影响或改善人们的营养代谢、 脂肪代谢、糖代谢、调节神经系统等。
测定方法
测定面粉中蛋白质的含量
双缩脲比色法
一 原理
半微量凯氏滴氮法（水蒸气蒸馏法） 二 试剂
Folin-酚试剂法 三 操作步骤
四 计算 紫外吸收法
1.0.25 g小麦面粉＋2ml四氯化碳； 2.加塞，在摇床上振摇30分钟， 使之充分混匀、反应，然后于实验台上 静置10分钟；
操作步骤
3.离心，4000dr/min，离心15分钟；
4.取上清液比色
操作步骤
<二>标准曲线的制作与
样品中蛋白质的测定
1.取7支试管，编号，按照表1 数据操作。 2.利用分光ห้องสมุดไป่ตู้度计测光吸收值 并记录。
原理
3.测定： 在一定的浓度范围内， 紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量呈 线性关系。而与蛋白质分子量及氨基 酸成分无关，故可在540 nm处比色再 与同样处理的标准蛋白质来比较测定 蛋白质含量。 测定范围为1－10mg蛋白质/ml。 干扰这一测定的物质主要有： 硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
肽的功能
由于多肽这类生 物活性物质是生命活动 重要的参与者，它影响 和调节着细胞与细胞， 组织与组织间的生理活 动，并且反馈着细胞与 组织的化学反应信息。
功能肽是由氨基酸构成， 活性高，在极微量的使用下， 都能发挥作用，它们在人体内 被利用后迅速的被代谢，最终 变为氨基酸和水，无残留，无 副作用。
4 0.354
4 0.438
4 0.317
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2
？
操作步骤
3.在坐标纸上以各管蛋白质 含量为横坐标，光吸收值为纵坐 标，绘制标准曲线。
计算
从标准管中选一管与测定管光吸收值接 近值，按公式 C C标A测 测 A标 计算待测血清样本的蛋白质浓度，从上 可选 A测= 0.317 g/L，C标=0.354 g/L， A标=1.6 g/L；则得到：C测=1.432 g/L。
五 注意事项 考马斯亮蓝染色法
双缩脲比色法
测定面粉中蛋白质的含量
一 原理 二 实验材料与仪器 三 操作步骤
四 计算
五 注意事项
原理
1.双缩脲（NH2CONHCONH2）是两 个尿素分子经180 ℃左右加热，放出 一个分子氨后得到的产物。
原理
2.在强碱性溶液中，双缩脲与 CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲 反应。凡具有两个肽键或两个直接连 接的肽键，或能过一个中间碳原子相 连的肽键，这类化合物都有双缩脲反 应。
实验材料与仪器
1.仪器和材料： 分光光度计、 7支试管、 1mL 刻度吸管3支、 移液器、坐标纸、摇床、离心机、 具塞三角瓶、分析天平。 2.试剂：四氯化碳溶液、少 许面粉、双缩脲试剂、9 g/L的 NaCl溶液、蛋白质标准液 （10 g/L)。
分析天平
具塞三角瓶
离心机
摇床
操作步骤
<一>.样品处理
表1
标准管 测定管 4 5 6
管号 试剂
蛋白质 标准液 (10mg/ mL)
0
1 2 3
-
0.2
0.4
0.6
0.8
1
-
面粉溶 液上清 液mL
氯化钠 溶液 mL 双缩脲 试剂 mL λ 光吸 收值 各管浓 度 mg/ml
-
-
-
-
-
-
1
1
0.8
0.6
0.4
0.2
-
-
4 0
4 0.085
4 0.181
4 0.261
注意事项
• 1.本实验是定量实验，要求所有玻 璃仪器必须清洁，整齐、干燥。蛋白 质标准液和淀粉上清液取量必须准确。 • 2.各管加好样后必须充分混匀。 • 3.显色反应需在20到30min才完成。
谢谢观赏