α地中海贫血的基因诊断方法
α-地中海贫血的产前基因诊断
α-地中海贫血的产前基因诊断邬玲千;蔡珠;黄志锋;李小红;卢雨零【期刊名称】《实用妇产科杂志》【年(卷),期】2001(017)006【摘要】目的:应用PCR技术,对9例父母双方均为γ珠旦白基因缺失杂合子的胎儿进行羊水产前基因诊断.方法:聚合酶链反应(PCR)技术.结果:9例中3例胎儿表现为基因正常序列(aa/aa),4例胎儿纯合子(--/--),2例胎儿为杂合予(--/aa).B超检查疑有胎儿水肿的3例胎儿,经基因诊断仅有1例是纯合子,1例是杂合子和另1例是正常.结论:PCR在α地中海贫血胎儿产前诊断决定胎儿是否存留的最可靠的方法,宣传教育和人群筛查十分必要,尽早发现杂合子夫妻,实施有效的产前诊断是降低水肿胎出生的根本所在.【总页数】2页(P338-339)【作者】邬玲千;蔡珠;黄志锋;李小红;卢雨零【作者单位】广东韶关粤北人民医院,广东,韶关,512026;广东韶关粤北人民医院,广东,韶关,512026;广东韶关粤北人民医院,广东,韶关,512026;广东韶关粤北人民医院,广东,韶关,512026;广东韶关粤北人民医院,广东,韶关,512026【正文语种】中文【中图分类】R394【相关文献】1.地中海贫血产前筛查及产前基因诊断结果分析 [J], 钟莹;2.广东省清远市清城区地中海贫血产前基因诊断的临床研究 [J], 陈小洁; 陆小燕; 曾海莲; 蒋丽; 陶华青; 孟燕萍3.地中海贫血产前基因诊断回顾性分析 [J], 朱丽秀; 赖晓兰; 林烨; 汤一榕; 陈琦; 陈仁利; 宋一凡; 唐宝佳4.地中海贫血产前筛查及产前基因诊断结果分析 [J], 钟莹5.产前基因诊断联合健康教育知信行模式在地中海贫血患儿出生率中的应用 [J], 叶建红;蔡惠;杨婉琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
α地中海贫血分子诊断的基本方法
α地中海贫血分子诊断的基本方法α地中海贫血是一种与地中海地区有关系的血色素异常疾病，它是由一种遗传缺陷引起的，这种遗传缺陷会导致红细胞内的α珠蛋白链合成异常，从而引起贫血等症状。
对于怀疑患有α地中海贫血的患者，现代医学根据血样中血红蛋白的类型，使用多种方法对其进行诊断。
一、血片染色法血片染色法是一种诊断α地中海贫血的最简单的方法之一。
在此方法中，取一份受测血样，将其制成血片，然后进行染色，以观察红细胞内的颗粒。
如果血样中不含有α地中海贫血，则这些红细胞内的颗粒将像小颗粒一样紧密排列在一起，而如果血样中含有α地中海贫血，则这些颗粒会像较大的颗粒一样分散开来。
当医护人员观察到这种颗粒分散现象时，就可以初步推断该患者可能患有α地中海贫血。
二、血红蛋白电泳法血红蛋白电泳法是一种较为准确的诊断α地中海贫血的方法。
医护人员需要从血样中提取血红蛋白，并将其降解成单个珠蛋白链。
然后，将这些单个珠蛋白链进行电泳分离，将不同类型的珠蛋白链进行区分。
如果患者患有α地中海贫血，则电泳结果中可能会显示多种珠蛋白链类型，包括正常的α珠蛋白链和β珠蛋白链以及一些异常的珠蛋白链。
三、基因分析法基因分析法是一种最准确的诊断α地中海贫血的方法，可以准确地评估患者的DNA序列以及其中的基因突变。
医护人员只需从患者的血样中提取DNA，并进行PCR扩增，然后对扩增的产物进行测序。
通过分析DNA序列中存在的基因突变，医护人员可以准确地诊断患者患有α地中海贫血。
目前诊断α地中海贫血的基本方法包括血片染色法、血红蛋白电泳法和基因分析法。
在临床上，医护人员可以根据患者症状的严重程度以及患者的病史来选择适合的诊断方法。
对于患有α地中海贫血的患者，及时进行诊断和治疗将有助于避免因严重贫血引起的并发症。
除了α地中海贫血的基本诊断方法，还有一些其他的辅助诊断方法可以供医护人员参考。
这些方法可以帮助医护人员更准确地确定患者患有α地中海贫血，以及确定病情的严重程度。
α-地贫基因型
α-地贫基因型
摘要：
1.α-地贫基因型的定义
2.α-地贫基因型的分类
3.α-地贫基因型的症状
4.α-地贫基因型的遗传方式
5.α-地贫基因型的检测方法
6.α-地贫基因型的预防措施
正文：
α-地贫基因型是指导致地中海贫血症的基因类型之一。
地中海贫血症是一种遗传性溶血性贫血疾病，由于珠蛋白肽链合成障碍而导致。
根据合成障碍的肽链不同，地中海贫血症可以分为α-地贫和β-地贫两种类型。
α-地贫基因型分为两种：α+地贫和α0 地贫。
α+地贫是指患者至少有一个正常的α珠蛋白基因，另一个基因突变导致α珠蛋白链合成不足。
α0 地贫则是指患者两个α珠蛋白基因都发生突变，无法合成正常的α珠蛋白链。
α-地贫基因型的症状主要表现为贫血、疲劳、消瘦、黄疸等。
长期贫血会导致机体缺氧，影响生长发育，并可能引发其他并发症。
α-地贫基因型是通过遗传方式传递的，父母双方如果都是携带者，子女有1/4 的概率患有重型α-地贫症。
因此，对于有地贫家族史的夫妇，在怀孕期间进行地贫基因检测十分重要。
地贫基因检测技术可以通过对珠蛋白基因的突变位点进行检测，明确夫妇
是否携带地贫基因，为产前诊断做好准备。
对于携带地贫基因的夫妇，可以通过遗传咨询和计划生育措施，有效预防重型地贫症或畸形患儿的出生。
总之，了解α-地贫基因型对于预防和诊断地中海贫血症具有重要意义。
地中海贫血基因的诊断标准
地中海贫血基因的诊断标准
1、β地中海贫血。
重型：红细胞的大小不等，出现异形、碎片红细胞和有核红细胞等，网织红细胞含量出现增高的现象。
中期、晚期和幼期的红细胞占大多数。
红细胞的渗透性明显减弱，HbF的含量明显增高。
通过颅骨X光线照片可以看见颅骨内外板变薄，在骨皮质间出现骨刺的状况。
轻型：成熟红细胞有轻度的变形状态，红细胞渗透脆胜减低，血红蛋白含量增高。
中间型：外周血象和骨髓象的改变和重型的状况相同，红细胞渗透脆性降低减弱，HbA2含量正常或呈逐渐增高的状态。
2、HbH地中海贫血。
轻型：红细胞的形态有轻度改变，红纽胞渗透脆性减弱，蛋白小体呈阳性，HbA2和HbF含量正常或稍低。
中间型：外周血象和骨髓象与重型相似，红细胞渗透脆性减低，HbA2及HbF含量正常。
重型：成熟红细胞形态的改变和重型β地中海贫血相同，红细胞计数明显增高，血红蛋白中几乎全都是Hb Bart's。
地中海贫血基因检测和结果分析
γ地中海贫血 δ地中海贫血 εγδ地中海贫血 溶血性异常血红蛋白（如HbS、C等） 地中海贫血样变异（如Hb CS、E等） 其他异常血红蛋白（如Hb M、Coimbra等）
.
4
地中海贫血分类
1、按照一个单倍型上的-珠蛋白基因的功能缺陷定义
0地贫（也有称地贫1） ：-珠蛋白基因完全
基因记为--/
β-地中海贫血 携带者 复合α-地中海贫血 中间型地中海贫血
δ-地中海贫血 携带者 复合α-地中海贫血
血红蛋白结构变异 携带者 复合α-地中海贫血 复合β-地中海贫血
总计
分组
阳性样本数
%
886
15.32
363
6.27
498
8.6
25
0.43
370
6.39
287
4.96
79
1.36
4
0.07
9
0.16
（--sea,-3.7,-4.2)。 β地贫：先检测点突变，然后检测少见的缺失型。
大部分β地贫都是点突变型。
.
27
血红蛋白病的筛查及.基因诊断的技术流程 28
产前地贫携带者筛查策略
产检对象（孕妇及其配偶） 血液五分类分析（关注MCV和MCH）+血红蛋白电泳（Hb A2)
同时正常 仅异常血红蛋白
必要时测序或选择其 中一种地贫检测
16
中国南方人群最为常见的地贫类型
.
17
二、地中海贫血的致病机制
血红蛋白
链
链
红细胞 链
铁链 血红素
●胎儿血红蛋白主要由两条珠蛋白链、两条珠蛋白链组成，还含有 γ链、ɛ链、ζ链组成
●成年人的血红蛋白由两条珠蛋白链和两条珠蛋白链组成
α 地中海贫血的基因诊断方法
α 地中海贫血的基因诊断方法
α地中海贫血的基因诊断方法包括以下几种：
1. 直接用α探针进行斑点杂交，自显影后根据斑点深浅的不同可以对α地贫作出诊断。
2. 利用PCR技术进行诊断，即在α基因缺失范围内设计一对引物，然后PCR扩增胎儿的DNA，如为Barts水肿胎，则无扩增产物，电泳后无任何带纹，从而可建议进行人工流产。
但此法不能诊断其它类型的地贫（除非另设计引物用作PCR）。
通过这些基因诊断方法，可以有效地对α地中海贫血进行诊断，并提供相应的治疗建议。
α地中海贫血3种点突变基因检测（CS、QS、WS）项目简介
α地中海贫⾎3种点突变基因检测（CS、QS、WS）项⽬
简介
α地中海贫⾎3种点突变基因检测（CS、QS、WS）
项⽬简介
地中海贫⾎是全球⼴为流⾏的遗传性溶⾎性疾病，属于常染⾊体隐性遗传的⼈类⾎红蛋⽩病，全世界⾄少有3.45亿⼈携带地中海贫⾎的致病基因。
全球地中海贫⾎基因携带者频率⾼达2.62%，包括中国南⽅在内的东南亚地区，印度次⼤陆、地中海地区、中东、北⾮和太平洋地区都是该病的⾼发地区，尤其我国⼴西的携带率⾼达24%、⼴东⾼达11%。
由于携带者没有症状，然⽽婚配的下⼀代却有1/4的机会罹患严重溶⾎性贫⾎症状的重症地中海贫⾎，因⽽构成了严重的公共健康问题。
⽬前，对此类遗传病尚⽆有效的治疗⽅法，但通过产前诊断可避免重症地中海贫⾎患⼉的出⽣，这是⽬前国际上公认的⾸选预防措施。
临床意义：
地中海贫⾎基因突变位点众多，α地中海贫⾎基因突变类型主要为缺失，点突变⽐较少见，本项⽬针对相对常见的三个α地中海贫⾎基因点突变进⾏检测，可作为地中海筛查和诊断的辅助检测。
适检情况
1、地贫基因全套查⽆α地贫基因缺失，但患者有地贫临床表现，需进⼀步检测较为常见的三种α地贫基因点突变
2、家族中有地中海贫⾎疾病的⾼危⼈群，联合地贫基因全套进⾏较全⾯的筛查
标本采集要求
1、填写地贫基因检测的专⽤申请单。
2、EDTA抗凝管取全⾎2ml，2-8℃保存，当天送检
临床项⽬收费标准。
α-地中海贫血缺失型基因
α-地中海贫血缺失型基因全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：α-地中海贫血（alpha-thalassemia）是一种常见的遗传性血液疾病，通常限制于中东、地中海等地的人群中。
该病主要是由于α-地中海贫血缺失型基因的存在而导致的。
α-地中海贫血是一种非常复杂的疾病，包括α-重链（HBA1和HBA2）的合成障碍，导致α-地中海贫血患者无法正常合成α-地中海贫血基因。
α-地中海贫血包括四种不同类型，即α_铁链中导致的全/部分缺失、α_铁链中的某个位点缺失、含有稳定型的异质体以及在α分解产物形成中的血红蛋白异常。
目前世界各地普遍流行这种疾病，并伴随着高风险和潜在的病理发展。
对于α-地中海贫血的患者而言，由于缺失了半常规α_地中海贫血基因而导致的相应贫血症状非常明显。
对于患有α-地中海贫血的患者，需要通过基因检测来明确诊断。
在临床诊断中，可以通过检测α-地中海贫血相关基因的异常来确定患者是否患有该疾病。
随着医学技术的不断发展，对于α-地中海贫血的诊断和治疗都有了显著的提高。
一旦被确诊患有α-地中海贫血，患者需要接受专业医生的指导和治疗。
必须注意避免一些非常规治疗方法，同时患者也需要保持健康的生活方式，包括锻炼、饮食和规律生活。
在治疗方面，可以采用输血、脾切除术等方法来缓解症状，但是医生建议患者务必遵守医嘱。
α-地中海贫血是一种常见的遗传性疾病，对于患者来说需要及时进行基因检测和诊断，并在医生的指导下进行治疗。
希望未来医学领域可以进一步提高对于α-地中海贫血的诊断和治疗水平，为患者提供更好的帮助和支持。
【字数：318】第二篇示例：α-地中海贫血缺失型基因，是一种遗传性疾病，主要影响血红蛋白的合成，导致患者出现贫血症状。
该疾病是地中海贫血的一种类型，通常在婴儿期或儿童期就会出现症状。
本文将介绍α-地中海贫血缺失型基因的相关知识，包括病因、症状、诊断和治疗等方面。
α-地中海贫血缺失型基因是由于α-珠蛋白基因的一种变异而导致的遗传性疾病。
地中海贫血的检查方法
地中海贫血的检查方法
地中海贫血的检查方法包括以下几个方面：
1. 血液常规检查：测定血红蛋白（Hb）水平、红细胞（RBC）计数、红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白含量（MCH）等指标，通过这些指标可以初步判断是否存在地中海贫血的可能。
2. 血红蛋白电泳：血红蛋白电泳是诊断地中海贫血最重要的检查方法之一，能够明确地中海贫血的类型，包括α地中海贫血、β地中海贫血等。
3. DNA检测：通过检测患者的基因突变，如β基因突变、α基因突变等，可以确诊地中海贫血，还能够帮助判断地中海贫血的基因型。
4. 骨髓检查：如果血液检查结果存在异常，医生可能会建议进行骨髓检查，通过骨髓中的红细胞生成情况来判断贫血的原因和严重程度。
除了上述检查方法，医生还可以根据患者的临床表现、家族史、肝脾功能等综合考虑地中海贫血的可能性，并结合其他相关检查来做出最终的诊断。
请注意，以上内容仅供参考，具体的检查方法需由医生根据实际情况进行判断和指导。
地中海贫血的基因诊断与产前筛查
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ选择性终止妊娠
对于确诊患有严重地中海贫血的胎 儿，父母可以选择性终止妊娠，避 免患儿出生后面临的痛苦和负担。
优生优育
产前筛查有助于实现优生优育，提 高人口整体遗传素质。
产前筛查的策略
01
02
03
综合评估
结合家族遗传史、临床表 现、实验室检查等多方面 信息进行综合评估。
基因检测
采用先进的基因检测技术 ，如PCR、基因芯片等， 对孕妇及胎儿进行地中海 贫血相关基因检测。
地中海贫血的基因诊断与产前筛查
汇报人：XXX 2023-11-23
目 录
• 地中海贫血概述 • 基因诊断的原理与技术 • 产前筛查的策略与流程 • 案例分析与讨论 • 前景展望
01
地中海贫血概述
定义和类型
定义
地中海贫血是一种遗传性血液疾病， 主要表现为贫血、骨骼变形和发育不 良等症状。它是由基因突变导致血红 蛋白合成异常引起的。
4. 胎儿基因检测
在孕妇同意的前提下，通过无创产前检测（NIPT）或 羊膜腔穿刺等方式获取胎儿遗传物质，进行地中海贫血 基因检测。
5. 结果解读与遗传咨询
对检测结果进行解读，评估胎儿患病风险，为孕妇提供 针对性的遗传咨询和建议。
6. 后续跟进与关怀
对确诊患有地中海贫血的胎儿家庭，提供心理支持、生 育建议和后续治疗指导等综合关怀服务。
联合筛查
与其他遗传性血液病进行 联合筛查，提高筛查准确 性和效率。
地中海贫血的产前筛查流程
1. 遗传咨询
对孕妇进行遗传咨询，了解家族遗传史和个人病史，评 估地中海贫血风险。
2. 临床检查
对孕妇进行临床检查，观察是否有地中海贫血相关症状 。
男方地中海贫血筛查方法？
男方地中海贫血筛查方法？地中海贫血这种病其实是很常见的一种疾病。
对于这样专业的名词可能很多人是不知道什么意思的。
虽然听起来好像挺复杂的，但是简单的说就是一种隐性的遗传病。
很多打算要宝宝的父母去医院体检的时候听说过地中海贫血，现在详细说说男性患有地中海贫血的筛查方法吧。
地贫的诊断主要依据临床表现、实验室检查和基因诊断。
重型α地贫胎儿，又称 Bart"s水肿胎，因4个α基因全部缺失，α珠蛋白链不能合成，常于怀孕中期开始发病，表现为胎儿全身水肿，心脏畸形，体腔积液，胎盘巨大而水肿，多于怀孕晚期死于宫内。
即使能怀孕至足月，也多于出生后数分钟内死亡，而且孕妇常合并妊高征，胎盘早剥，子痫抽搐，产时或产后大出血等产科危重并发症。
另一种次严重的α地贫，又称血红蛋白H病，与重型β地贫表现相似或贫血症状稍轻，这两类地贫在胎儿期无特殊临床表现，可以怀孕至足月分娩，出生时与正常胎儿几无分别，多于生后6个月左右开始发病。
表现为进行性溶血性贫血，血色素可低至2-4g/dl，肝脾肿大，脸色萎黄，苍白无力。
此病目前国内外尚无有效的治疗方法，仅能依靠输血维持生命。
由于极易发生各种并发症，多于青少年期死亡，给家庭和社会带来沉重的负担。
地中海贫血的遗传方式夫妇双方若同为轻型地贫(即地贫基因携带者)，怀孕以后，对子代的遗传几率是： 1/4为正常胎儿，1/2为轻型地贫(同父母一样)，而1/4为重型地贫患者。
地中海贫血的遗传与性别无关，男胎女胎发病机率均等。
其实很多即将结婚或者要宝宝的家庭来说，如果男性地中海贫血筛查出来有轻度的贫血是不用担心的。
重要的是要重视起来，最后在这里要呼吁广大朋友们结婚之前记得去做个婚前检查，这样对他人对自己都是很好的。
介绍的筛查方法一定有效的。
地贫基因检测实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景地中海贫血（Thalassemia）是一种由于珠蛋白基因缺陷引起的遗传性溶血性贫血病。
根据珠蛋白基因突变的不同，地中海贫血可分为α-地中海贫血和β-地中海贫血两大类。
本实验旨在通过分子生物学技术对疑似地中海贫血患者进行基因检测，以确定其基因型，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验目的1. 确定疑似地中海贫血患者的基因型。
2. 为临床诊断和治疗提供科学依据。
三、实验材料1. 样本：疑似地中海贫血患者的血液样本。
2. 试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、DNA测序试剂盒等。
3. 仪器：PCR仪、电泳仪、测序仪等。
四、实验方法1. 样本DNA提取：采用DNA提取试剂盒提取疑似地中海贫血患者的血液样本DNA。
2. PCR扩增：根据α-地中海贫血和β-地中海贫血的基因突变位点，设计特异性引物，进行PCR扩增。
3. PCR产物检测：通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，观察条带情况。
4. DNA测序：对扩增产物进行DNA测序，确定基因突变位点。
5. 基因型分析：根据测序结果，分析疑似地中海贫血患者的基因型。
五、实验结果1. 样本DNA提取：成功提取疑似地中海贫血患者的血液样本DNA。
2. PCR扩增：成功扩增出α-地中海贫血和β-地中海贫血的基因片段。
3. PCR产物检测：电泳结果显示，扩增产物大小与预期相符。
4. DNA测序：测序结果显示，疑似地中海贫血患者的基因存在突变。
5. 基因型分析：根据测序结果，确定疑似地中海贫血患者的基因型为α-地中海贫血杂合子。
六、讨论与分析1. α-地中海贫血是一种常染色体隐性遗传病，主要由于α-珠蛋白基因缺陷引起。
本实验通过PCR和DNA测序技术，成功检测出疑似地中海贫血患者的基因突变，为临床诊断提供了依据。
2. α-地中海贫血的基因型可分为纯合子和杂合子。
本实验结果显示，疑似地中海贫血患者的基因型为α-地中海贫血杂合子，提示其可能表现为轻型α-地中海贫血或无症状携带者。
α-地中海贫血的产前诊断
三、实验方法
羊水提取胎儿核酸通过PCR， 然后电泳分析，把胎儿核酸与正常 核酸对比分析，得出产前诊断。
四、实验流程
胎儿羊水样本核酸获取；
DNA提取物PCR扩增； 扩增后的DAN凝胶电泳； 电泳结果分析得出结论；
五、实验预期结果及产前指导
• 结果正常，所怀胎儿不会患地中海贫血。 • ɑ+地贫杂合子，胎儿表现正常，但是后代 可能患病。 • ɑ0地贫杂合子，胎儿出生后有一定程度地 贫表现，建议打掉胎儿怀下胎。 • HbH病患儿，地贫患者，建议打掉胎儿怀 下胎。
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DNA提取物PCR扩增
PCR引物，分别为： αU:5′ AACTCGGTCGTCCCCACTGTCGTC3′ αM:5′GACACGTTCCAATACGCTTA3′; αD:5′ATATATGGGTCTGGAGTGTATC3′ Taq DNA聚合酶 4×dNTPs 模板DNA
PCR循环仪进行DNA扩增，按照下列循环条件： 37℃10min→94℃5min→(97℃45s→60℃75s→72℃150s )×35次循环→72℃5min→4℃保存 （或准备电泳）。
α-地贫的产前诊断实验
一、实验原理
ɑ珠蛋白基因突变或者缺失导致ɑ珠蛋白合 成障碍而引起的溶血性贫血。 根据不同的缺失程度分为4型： Hb bart’s 胎儿综合征 HbH病 标准型ɑ地贫 静止型ɑ地贫 此4型都伴有有不同程度的ɑ珠蛋白基因 缺失可通过PCR技术胎儿进行产前诊断。
二、实验材料
妊娠16~20周孕妇羊水
结论分析
正常DNA作为模板获得1条 1.8kb带； HhH胎儿DNA模板获得1.3和 1.6kb（或者1.3和2.0）两条 带； 轻型地贫DNA模板获得1.8和 1.3两条带； 静止型地贫患者1.8和 1.6（或 者 1.8 和2.0）；
地中海贫血基因诊断的依据
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导语：对于地中海贫血这一个词语相信很多人们都非常的害怕，因为毕竟这一个词语意识着它都具有遗传的因素，有关于地中海贫血，这个问题现在引起了
对于地中海贫血这一个词语相信很多人们都非常的害怕，因为毕竟这一个词语意识着它都具有遗传的因素，有关于地中海贫血，这个问题现在引起了很多人们的关注，在平时的生活当中就有一些有关于地中海海贫血的人群，对于这样的人们，自己的家人都是非常担心和害怕的，今天就给大家讲述一下有关于地中海贫血基因诊断的依据，这样的医学知识？
地中海贫血的临床诊断的方法：
一、骨髓象
对于诊断地中海贫血这一问题时，也要注意增生活跃或明显活跃，红系细胞增生，以中幼、晚幼红细胞增生为主，成熟红细胞有靶形，异形变。
骨髓细胞外铁及铁粒幼细胞增多。
骨髓活检显示红系增生显著，幼红细胞多聚集呈红细胞造血岛，聚集团内有较多的原始红细胞、早幼红细胞，外周为中幼红细胞、晚幼红细胞。
骨髓间质无异常。
二、血象
大家一定要特别的重视地中海贫血的诊断这一问题，而贫血为小细胞低色素性，Hb常0.10，嗜多色性细胞及嗜碱性点彩红细胞易见，可见豪周小体，较多红细胞出现HbH沉淀包涵体。
网织红细胞增高或正常。
三、其他检查
血红蛋白电泳HbA2>0.035，HbF>0.02或出现HbH区带。
红细胞渗透脆性减低。
基因分析出现α/β肽链合成比例，重症β/α0.5(全血)。
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地中海贫血的筛查、实验诊断技术和治疗
2. 微量血红蛋白电泳
设备：电泳仪，电泳槽 试剂：浸醋纤膜用Tris缓冲液，电泳槽用硼酸缓 冲液，丽春红染液 溶血液制备：常用四氯化碳溶血法：去血浆→生 理盐水洗杂质→蒸馏水溶血→四氯化碳溶解提 取脂溶性物质→离心得Hb液。 电泳：取膜条，加溶血液于阴极端，然后电泳 20-30分钟。 染色：取出膜条，丽春红染液，染数分钟，然后 用3%醋酸溶液洗干净，可观察结果。
地中海贫血的筛查、实 验诊断技术和治疗
一、地中海贫血的筛查
地贫筛查目的： 诊断出所有携带地贫基因 者，重型和中间型地贫易诊断， 因此最主要的是查出不被重视 的轻型地贫和静止型地贫基因 携带者。
正常人群地贫筛查步骤：
首先是血细胞分析 除了静止型 α 地贫基因携带者 （ α 地贫 2 ）外， MCV，MCH基本 上都低于正常。
常见的4种α 地贫基因突变。
二、地中海贫血诊断实验技术
1.红细胞脆性试验（一管法）
试剂： 0.32%NaCL缓冲液（以1%NaCL缓 冲液32ml于100ml容器中，加入重蒸馏水至 刻度。 方法：取0.32%NaCL缓冲液2.5ml于小试管 中，吸取全血10ul加入试管中，用吸管吸 取溶液来回洗涤3次，再颠倒混匀，5分钟 后观察结果。
5.全自动电泳仪用于Hb电泳及 HbA2和HbF测定
目前国内使用的主要有 ▲美国生产的Helena 电泳仪、扫描仪 和分析系统。 ▲法国生产的Sebia电泳仪、扫描仪和 分析系统。 ▲国产的金桑特电泳仪、扫描仪和分 析系统。
6.高效液相色谱仪用于地贫和 血红蛋白病的检测
国际地贫协会和美国化学学会推荐使 用，直接测出HbA2和HbF值，6分钟左 右出一个结果，变异系数小，准确可 信，操作方便，结果判断简单，既可 单个做也可成批大量做，一次可放100 个样品。已知血红蛋白病大多可有特 别波型，易诊断。
地中海贫血的产前诊断
Prenatal Diagnosis of Thalassanemia
概念
地中海贫血是由于珠蛋白缺失或缺陷使某种珠 蛋白链合成受到抑制而引起的溶血性贫血,为 全球最大的单基因遗传病 在中国好发于广东、广西、湖南、四川、湖北 等南方省市
血红蛋白的组成
发育阶段
胚胎
胎儿
血红蛋白
Genetic Counseling
Couples came or came alone Conditions/disorders Progress Risk/chance Amino/CV test Test’s accuracy Test’s limitation Options: positive, what to do? negative, back to the limitation
α地贫产前诊断适应证
双方均为α地贫东南亚型（--SEA/αα），有 1/4机会生育巴氏水肿胎。 一方α地贫东南亚型（--SEA/αα），一方标 准型2，有1/2机会生育HbH 患儿。 一方为α地贫东南亚型（--SEA/αα），另一 方为αTα（突变型如CS,QS),有1/4机会生育 症状较重的 HbH 患儿。
ABO血型不合
母血型O型 父血型A、B、或 AB型 发生率：占妊娠总数的20-25%，而发生ABO 溶血的仅占其中的10% 与胎次关系：ABO溶血常发生在第一胎， Rh 溶血常发生在第二胎以上。 临床表现：黄疸出现早，出生后24-48小时内。 重症可发生死胎、重度黄疸、重度贫血。
抗体检测
Hb Bart’s胎儿水肿综合征
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Hale Waihona Puke 变。根 据临床表现又将其分为静止 型（ －
、 ｔｏ ｔ、 Ⅸ’／ｔ ） 标准 型 ｃ ｃ
（－ｏ ｔ 一 、 ０ Ｏ、（ ｃ ） 血 红 蛋 白 ｝病 （－Ｏ 、－一 一 ｔ、 Ⅸ 仅 ／ ｃ 【Ｌ ｚ ￣ 、 一／ ｛ 一 ｔ 一 ／ ／
莫 宗平 喻 长顺 胡朝 晖 冯文 莉
仅 ／ｍ 合并 ８珠蛋 白基 因异 常 ， ｃ 同时成功的对该家 系的其 他成员做 出了相应 的突变类型诊 断。该方法 由于存在费 时费力
Ｏ地 中海贫血 是世 界上 最常见 的血 液 系统 遗传 病之 一 ， ｔ 该
疾 病是 由于 珠蛋 白的基 因缺 失或功 能障碍 ， 导致 ｅ 珠蛋 白肽 ｔ
增 片段 大小此法能很好 地 区分正 常杂合 子和 纯合 子个体 ， 用 可
于检 测 基 因 的 大 片 段 缺 失 。段 山 等 应 用 此 技 术 成 功 的 区 分
了一 、 【 、 三种 常见缺 失 突变 。ｕｕ等 一 。 ０ 。运用 此 技术 分 三管多重 Ｇ ｐＰ Ｒ成功 的检测 了一 ， ０ ， ＭＤ 一 Ｉ， ＴＡ， ａ．Ｃ ． 【 （ ） 一 Ｅ ， Ｆ 一 ＨＩ Ｌ
） Ｈ ａｔ 肿胎儿综合征 （－一） 与 ｂＢ ｒ水 一 一 四类。其 中症 状最 重的 为 ／ ＨｂＢ ｒ水肿胎 儿综合征 ， ａ ｔ 患儿通 常不 能存活 。其 次为血 红蛋 白 Ｈ病 （ Ｈ） 其 临床表现 往往轻 重不一 ， 常非缺 失 型 Ｈ Ｈ Ｈｂ ， 通 ｂ 患者 的临床表现往 往 比缺失 型 Ｈ Ｈ 患者 更 为严重 。 由于 目前 ｂ
结果 可靠 ， 稳定性 高。不失 为一种 Ｐ Ｒ诊断方法 的补充或佐证 ， Ｃ
必要 时可作 为 Ｐ Ｒ诊 断的确认手段 。 Ｃ ２ ．多重 Ｐ Ｒ结合 溶解 曲线分 析 ： 技术 运用 双链 Ｄ Ａ能 Ｃ 该 Ｎ 特异结合荧光染料 Ｓ ＲＧ ｅｎＩ以及不 同双链 Ｄ Ａ具 有不 同的 Ｂ ．ｒｅ Ｎ 解链 温度 的特点 。Ｍ ｎｏ ｇｅ ｕ ｋｎｄ ｅ等 。 运 用此 技术 将 Ｐ Ｒ引物分 。 Ｃ 别设计在断裂点 的侧翼 以及 断裂 点的内部 （ 扩增 和 ０ ） 【 经单 ２ 管多重 Ｐ Ｒ后产物行溶解 曲线 分析 ， Ｃ 结果显示 ＿ ｍ 、 Ｓ 、 与 － 一Ｅ Ｔ Ａ ０ Ｌ ２的溶解温度分别 为 （９ ９±０２ ℃、 ８ ． ０ ５ ｏ （２ ８± ７． ． ） （ ９４± ． ）Ｃ、 ９ ． ０ ２ ｏ （５ ０± ． ） ， ． ）Ｃ、８ ． ０ ２ ℃ 各地 中海 贫血 基 因型 特定 的溶解 温度 之间无交叉 ， 成功的鉴定 了各缺失 型。该 方法具有 简捷 ， 快速的
特点 ， 由于整个 反应过程均是在闭 盖的情况下进行 ， 且 降低 了污
染 。同时该技术可检测单碱基 的突变 、 小片段插入或者缺失 。 ３ ．缺 口 Ｐ Ｒ（ ａ —Ｃ 结 合片 段大 小分析 ： ａ —Ｃ Ｃ Ｇ ｐＰ Ｒ） Ｇ ｐＰ Ｒ最 早
由中国台湾学者 Ｃ ａｇ等 建立 。其 原理 为 ： ｈｎ 设计 引物 和缺 失 序列的两侧翼序列互补 ， 由于 基 因的缺失 突变使 本来 正 常相 距遥远位于断裂点两 侧翼 较远 的引物 变得很 近 ， 以至 于能扩 增 出特定长度的片段 ； 另外一对 引物则位于 缺失 区域 ， 这样在杂 合
中华 临 床 医师 杂 志 （ 电子 版 ）０ ２年 ２月第 ６卷第 ３期 ２１
Ｃ ｉ Ｃｉｉａ ｓＥｅｔ ｎｃＥ ｉｏ ）Ｆ ｂｕｒ ， １ ， ０． ， ｏ３ ｈｎＪ ｌ ｃ ｎ（ ｌｃ ｏｉ ｄｔ ｎ ，ｅｒａｙ１２ ２ Ｖ Ｊ６ Ｎ ． ｎｉ ｒ ｉ ０
・
综 述
・
Ｃ 地 中海 贫 血 的 基 因诊 断 ： ｔ 疗法
人 类的 ０珠蛋 白基 因位 于第 ｌ 【 ６号染 色体 短臂 末端 的 仅珠 蛋 白基 因簇 中 ， 该基 因簇包 括 ２个重 复的 ｏ基 因（ 【 仪 ） 一 ｔ ０ ２和 １ 、 个胚胎 期类 基因 （ ） 三个假基 因（ １ ｃ Ｏ ｔ） 一个功 、 、 、 ｏ 和 １ 能未 名 的 Ｏ 。其 排 列顺 序 为 ５一 一 １ １ ‘ 一 ２ ．ｘ一 一１０－ ｔ ｌ以 ｄ ．１３。 ￣ （
链 合成减少或不合 成 引 起 。该 病 高发 于 从 地 中海 沿岸 的意 大 利、 希腊 、 马耳他 、 塞浦 路斯 到东南 亚各 国 的广 大 地 区。我 国南
方 也是本病的高发地 区Ｌ 。 】
及需使用放射 同位 素的缺 点 ， 虽然 近年来 已用 非放射 性物质 取
代放射性 同位 素 ， 因该 方法 不 经过 靶 片段 的扩 增 ， 以需 要 但 所 Ｄ Ａ量较大。因而限制了其在常规诊断 中的应用 。同时 因该 法 Ｎ
根据分 子缺陷可将其分 为 ： 因大 片段 的缺失 型 地 中海 贫血 基
和少数几个 核苷 酸的插入与缺失或单 个碱 基替换 的非缺失 型 地 中海贫血两 大类。而就一 个单倍 体而 言 ， 根据 珠 蛋 白合成 减少 的程度 ， ｄ地 中海 贫 血可 为两 类缺 陷 ： １ 地 中海贫 血 １ （） （ 地 中海贫 血） 特 点为缺 失两个 ｔ 因（ ） ｄ珠 蛋 白肽链 。 ， Ｘ基 一／ ， 合成完全受 阻 ； 地中海贫 血基 因具有 明显 的种族 与地 理分 布 。 特征 ， 国最 常见 的为 一 极 少见 一 Ｈ 而＿ Ｉ 我 瓠， Ｔ ， ＿Ｌ Ｆ 则更 罕见 ； ２ ｏ （ ）ｌ 地 中海贫 ２ Ｏ （ｔ 中海贫血 ） 缺失 一个 ０基 因或一个 ０基 因发 地 ， 【 【 生点 突变或 少数几 个碱 基 的缺失 或插 入引起 （ａ 、 ．／ ） 表 现 ， 为 Ｏ珠蛋 白肽链合成 部分受 阻 。我 国最常见 的 地 中海贫 血 ｔ 基 因为－ 、 缺失 型 突 变 以及 Ｈ Ｓ Ｈ Ｓ ＨｂＷＳ点 突 一 ｂＣ 、 ｂＱ 、