实验1 培养基母液的配制
培养基配制
（2）无机微量(100倍液，配制500ml） 无机微量(100倍液，配制500ml） 倍液 500ml 药品名称 MnSO4 ·4H2O 4H ZnSO4 ·7H2O 7H CuSO4 ·5H2O 5H H3BO3 Na2MoO4 ·2H2O 2 KI CoCl2· 6H2O 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 50倍称量 配方用量mg/L 扩大50倍称量mg 1150 22.3 8.6 0.025 6.2 0.25 0.83 0.025 430 1.25 310 12. 12.5 41. 41.5 1.25 定容于500ml 定容于500ml 蒸馏水中。 蒸馏水中。每 升培养基吸此 液10ml
四、实验步骤
1、接种前的准备：如实验一准备的培养基等； 接种室的准备（超净台的准备） 2 2、培养材料表面灭菌：洗涤、清理；（此处 开始在超净台上操作）75%酒精浸泡30秒， 倒出酒精；0.1%升汞5-8 min，倒出升汞； 无菌水洗涤3-5次，无菌水浸泡备用。
四、实验步骤
3、接种：取出叶片置于培养皿中的滤纸上， 吸取水分，剪去被升汞杀死的叶片边缘，将 叶片剪成适当大小（3-5mm见方），接种到 适当培养基中。重新包扎好瓶口，写好标签 （时间、材料等） 4、培养观察：置于培养室或培养箱中培养， 温度25度左右，光照16小时，照度20003000lux。第一周注意观察污染情况，随时 清理污染的培养瓶，记录污染率及生长情况。
实验三 月季的快繁
一、实验目的：对月季茎段进行快繁 ，掌握 利用茎段作为外植体进行无性繁殖的方法 二、实验用品： 1、仪器用具：超净工作台、接种器具（实验 一已灭菌）酒精灯、酒精棉球 2、试剂：实验一准备的培养基、0.1%升汞、 75%酒精、吐温、无菌水 三、实验材料：植物茎段（月季）
培养基母液的制备
配制2升MS+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，阐述母液配制，培养基配制的全过程（1）母液配制：1确定制备的培养基为MS+琼脂0.6%+蔗糖3%为大量元素培养基，应注意溶解和添加顺序，防止沉淀。
2确定各母液的浓缩倍数，大量母液一般为浓缩10倍有机母液浓缩100倍，即所需配制的大量母液为200ml 微量元素20ml，铁盐20ml，有机元素20ml。
3根据公式：药品称取量（mg）=配方用量x浓缩倍数x母液体积计算出各药品的用量，即琼脂12g、蔗糖60g4用普通天平（1/100）称量药品，称号后的药品要分别放置。
5将药品分别放入烧杯中，分别溶解，经充分溶解后再混匀。
6将混合后的溶液移入容量瓶中，进行定容。
7混合均匀后，将母液转入试剂瓶。
8在试剂瓶上贴上标签，注明母液名称，浓缩和配制日期。
9放入冰箱中低温（2~4度）保存。
（2）培养基的配制：1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别为大量：200ml 微量20ml 铁盐20ml 有机20ml 琼脂12g 蔗糖60g。
2在容器内装相当于1/3左右的纯水，加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，最后加入称量的蔗糖并搅拌均匀。
3加水定容至2L，再搅拌均匀。
4调整培养基的pH5将配制好的培养基尽快分装。
6将分装后的培养基进行封口7用高压灭菌锅进行灭菌。
现在需要你配制2升MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+琼脂0.6%+蔗糖3%的固体培养基，已知大量元素母液10倍，微量元素母液100倍，铁盐50倍，有机物母液50倍，6-BA母液1mg/ml，NAA母液0.1mg/ml，请你阐述培养基的配制及灭菌的全部过程。
1根据配方计算所需的各母液，琼脂及蔗糖的量分别：为大量元素母液200ml，微量元素20ml，有机物40ml，6-BA4ml，NAA2ml，琼脂12g，60g.2在容器内装相当于1/3左右的纯水，在依次加入称好的琼脂粉，并将其加热溶解再次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物母液，6-BA，NAA，蔗糖。
实验一 培养基的配制与灭菌
铁盐
有机物质 2,4-D
200倍液
100倍液 1.0 mg/ml
5 ml
10ml 1ml
——
5 ml
10ml ——
5 ml
10ml 1ml
NAA
KT 蔗糖
1.0 mg/ml
1.0 mg/ml 30 g
0.2ml
1.0ml 30 g
——
—— 30 g
0.1ml 30 g
琼脂
pH值
8g
5.8
8g
5.8
8g
五、作业要求：完成实验报告，回答下面的思考题 1、根据以下所给母液浓度、蔗糖和琼脂量，配制烟草愈伤组织诱 导和培养的培养基（MS1），按MS配方（Murashige and Skoog, 1962）计算各种母液吸取量或药品的直接称量量。 2、简述高压蒸气灭菌的步骤；培养基采用高压蒸气灭菌应注意哪 些事项？
药品名称
母液倍或母 液浓度 （mg/ml）
配制1 L培养基 配制0.25 L培养基所需母液量(ml) 所需母液量(ml) 或质量（g） 或直接称量量（g） MS 1 MS 2 MS 3
大量元素 微量元素 铁盐 有机物质 2,4-D NAA KT 蔗糖 琼脂 pH值
10倍液 100倍液 200倍液 100倍液 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 1.0 mg/ml 30 g 8g 5.8
5.8
——
5.8
1）在烧杯内放入一定量的蒸馏水，用量筒或移液枪按上述表 格内配方加入各种母液及激素。 2）加入蔗糖30g，待蔗糖溶解后（可搅拌）加水定容至1L。 3）调节PH值，用酸度计测量PH值至5.8，常用1mol/l的HCl或 NaOH调整。 4）在MS1和MS2中加入琼脂8g，加热溶解，溶解过程中不断 搅拌，加热时烧杯口上盖上锡箔纸，防止水分过度蒸发。 5）分装：将配好的培养基及时分装到小三角瓶中，防止凝固 ，每瓶约30ml-40ml（约覆盖瓶底），分装时不要沾壁口。 6）封口：用封口膜将将三角瓶封口。
MS培养基母液的配制与保存
实验一MS培养基母液的配制与保存一、目的要求1、通过MS培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能；2、掌握培养基各种母液的保存方法。
二、仪器与用具1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱；2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签；3、试剂：95%酒精，0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。
三、方法步骤（一）母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：（1）保证各物质成分的准确性；（2）便于配置时快速移取；（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（10×）称10升量溶解在1升蒸馏水中。
配1升培养基取母液100ml。
化学药品1升量10升量（10×）50升量（50×）①NH4NO31650 mg 16.5g②KNO31900 mg 19.0g③CaCl2·2H2O （CaCl2）440 mg （） 4.4g④MgSO4·7H2O（MgSO4）370 mg （） 3.7g⑤KH2PO4170 mg 1.7g2、MS微量元素母液（100×）称10升量溶解在100ml蒸馏水中。
配1升培养基取母液10ml。
化学药品1升量10升量100升量（100×）①MnSO4·4H2O（MnSO4·H2O）22.3mg（21.4 mg）223mg（214 mg）②ZnSO4·7H2O8.6 mg 86mg③H3BO3 6.2 mg 62 mg④KI 0.83 mg 8.3 mg⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg 2.5mg⑥CuSO4·5H2O0.025 mg 0.25mg⑦CoCl2·6H2O0.025mg 0.25mg注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0.25 mg×10=2.5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0.25 mg的量。
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基母液的配制
植物组织培养基是培养植物细胞、组织和器官的基础培养介质。
配制
植物组织培养基的母液可以按照以下步骤进行：
1. 准备所需的化学品和试剂，包括无机盐、有机添加剂、维生素和其
他辅助物质。
这些化学品可以根据不同的植物种类和培养目的进行选择。
2. 称取所需的化学品，并依次加入无菌蒸馏水中。
搅拌溶解，直到所
有化学品完全溶解。
3. 调节pH值。
使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以使用酸
或碱来调节pH值，直到达到所需的pH范围。
4. 向溶液中添加琼脂糖或琼脂糖替代物，作为凝胶剂。
溶解并搅拌直
到完全溶解。
5. 过滤溶液，以去除悬浮固体和杂质。
使用无菌滤纸或滤器进行过滤。
6. 灭菌。
将过滤后的溶液装入无菌烧瓶或容器中，使用高压灭菌器或
自动压力锅进行灭菌，通常在121℃高压下灭菌20-30分钟。
7. 灭菌后，将培养基倒入无菌培养瓶中，密封并保存在冰箱中或低温
环境中。
以上是植物组织培养基母液的配制步骤，具体的操作和配方可以根据
不同的要求和实验目的进行调整。
实验一MS培养基的配制
实验一MS培养基的配制一、实验目的：了解MS培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验材料与仪器：电子天平、量筒、烧杯、玻璃棒、组培瓶、移液器、6种母液、白沙糖、琼脂、氢氧化钠、盐酸、酸度计或pH试纸。
三、实验方法与步骤1、母液配制（1）大量元素(母液Ⅰ) (2) 微量元素(母液Ⅱ) (3) 铁盐(母液Ⅲ) (4) 有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 和ⅣB (5) 植物生长调节物质(6－BA，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。
2、1 L固体MS培养基配制（1）用电子天平称出8 g琼脂粉和 30 g蔗糖放在烧杯中，加入少量的蒸馏水在微波炉中加热使之溶解。
（2）用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 ml，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB 各10ml。
（3）最后用蒸馏水定容到1 L；用 2 mol/L NaOH 或 2 mol/LHCL 溶液调节培养基的 pH 值至 5.8～6.0。
（4）用量筒量取100ml液体培养基分装在组培瓶里，再用移液器取适量的6－BA和NAA放入组培瓶里。
（5）在 1.1kg/cm2 压力（约 121℃）高压灭菌锅中灭菌 15～20 min；灭菌后，放置于室温自然冷却凝固待用。
3、实验分组本实验分五组，每组负责配制一组培养基组合：（1）MS+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（2）MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA（3）MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（4）MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA（5）MS+3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA4、其他需要灭菌的实验材料剪刀、镊子、蒸馏水、滤纸、培养皿、组培瓶。
四、分析1.MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。
这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来。
实验一培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。
配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。
2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。
由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。
3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。
用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。
4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。
培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。
2、培养基配制时的注意事项。
四、提交实验报告附：MS培养基配方。
实验一 培养基母液的制备
二、实验目的
1、了解培养基母液的配制原理 学习和掌握培养基母液的配制方法。 2、学习和掌握培养基母液的配制方法。
三、实验原理
• 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确， 将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、 将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类 分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。 分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。 当配制培养基时， 当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母 液即可。 液即可。 • 对植物外植体进行离体培养时，要依靠培养基提供 对植物外植体进行离体培养时， 生长所需的营养成分。 生长所需的营养成分。不同材料对培养基的要求不 适当的设计和选用培养基， 同，适当的设计和选用培养基，对植物组织培养取 得成功至关重要的。 得成功至关重要的。
缓冲间(过渡室) 缓冲间(过渡室)
• （二）、无菌操作室 ）、无菌操作室
• 无菌操作室并非无菌，但应该保持清洁 无菌操作室并非无菌， • 1、超净工作台：内设紫外灯、吹风装置 超净工作台：内设紫外灯、 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上， 20分钟以上 每次实验前要用紫外灯灭菌20分钟以上，然后喷 酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机， 酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并 且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。 且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。 • 2、无菌操作用的器具：刀、镊子、剪刀、酒精灯 无菌操作用的器具： 镊子、剪刀、 等 • 3、医用小平车：推送、放置培养基用 医用小平车：推送、
• 一、实验室设计与要求 • 在进行组织培养工作之前，首先应对工作中需要那些 在进行组织培养工作之前， 基本的设备条件有全面的了解。 基本的设备条件有全面的了解。 • 实验室设计最基本应该有三个室： 实验室设计最基本应该有三个室： 准备室 无菌操作室 培养室
培养基母液的配制
培养基母液的配制植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。
一、实验目的配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。
当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。
要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。
二、实验材料仪器冰箱、电子天平(0.0001g)容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml.数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H)几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水三、实验步骤按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。
如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液:包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。
如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。
最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。
在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。
定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或502、微量元素母液:因用量少,为了称量精确和方便,常配成100倍或100倍的母液,即每种药品扩大100倍或者1000倍。
(整理)培养基母液的制备.
目录实验一培养基母液的制备 (1)实验二培养基的配制与灭菌 (6)实验三无菌操作及种子无菌播种 (9)实验四激素对器官分化及愈伤组织诱导的影响 (13)实验五茎尖培养与脱毒 (16)实验六有丝分裂制片技术和显微观察 (18)实验七植物多倍体细胞的诱发与鉴定 (22)实验八植物组织总DNA的提取与测定 (24)实验九毛状根培养 (27)附录 (32)实验一培养基母液的制备一、实验目的学习和掌握培养基母液的配制方法和注意事项。
二、实验原理培养基的主要成分包括无机营养物质、碳源、有机物质、植物生长物质等，由于每种培养基往往含有一二十种化合物，配制起来不仅繁琐，而且还很难达到准确和精确，尤其是生长调节物质和微量元素用量较少，难于准确称量，稍有偏差，就会影响试验结果及试验的重复性。
为解决这一问题，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
三、实验药品和试剂NH4NO3、KNO3、MgSO4·7H2O、（NH4）2SO4、NaH2PO4·H2O、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、Na2-EDTA·2H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(VB6)、盐酸硫胺素(VB1)、甘氨酸、蔗糖、琼脂四、实验仪器及用具电子天平（感量为0.0001g）、扭力天平（感量为0.01g）、烧杯（1000ml、500ml、100ml、50ml）、量筒（500ml、25ml）、容量瓶（1000ml、500ml、100ml）、试剂瓶（1000ml、500ml、100ml）、药勺、玻棒、电炉、石棉网。
实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
其他常用试剂的保存
配制好的其他试剂应保存在密封的玻璃瓶中 ，并放置在阴凉干燥处。避免阳光直射和高 温环境，以防变质。对于一些易挥发或易氧 化的试剂，应特别注意密封保存和使用。
04
实验操作流程与注意事项
03
04
配制好的培养基应尽快使用，避 免长时间存放。
实验安全须知
避免直接接触培养基和化学试剂，如不慎接 触，应立即用大量清水冲洗。
对于有毒有害的化学试剂，应遵循相关规定 进行操作和处理，不得随意倾倒或排放。
在实验过程中，应注意防范火灾、爆炸等安 全事故，遵循实验室安全规定。
05
实验结果与数据分析
03
常用试剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制
根据实验需求，将植物生长调节剂溶解于相应的溶剂中，如 水、乙醇等。按照所需的浓度进行配制，并充分摇匀。
植物生长调节剂的保存
配制好的植物生长调节剂应保存在低温、避光、干燥的环境 中，避免长时间暴露在空气中，以防氧化失效。
无机盐与微量元素的配制与保存
实验过程中严格控制了操作步 骤和试剂质量，确保了实验结 果的准确性和可靠性。
实验结果符合预期，证明了实 验方案的有效性和可行性。
实验中存在的问题与改进建议
实验中存在试剂配制误差和操 作不规范的问题，可能导致实
验结果的不准确。
建议加强实验操作规范性培 训，提高实验人员的操作水 平，确保试剂配制的准确性
熟悉实验操作流程与注意事项
实验操作流程
准备所需试剂和器材→按照配方配制 母液和常用试剂→过滤除菌→分装→ 储存。
实验1 培养基母液的配制
实验1、培养基母液的配制一、实验目的1、了解植物组织与细胞培养基的基本类型和组成。
2、掌握植物组织与细胞培养基各种母液的配制方法。
二、实验原理离体植物组织和细胞的生长、分化所需要的营养物质都是由培养基供给。
基本培养基通常包括大量元素、微量元素、有机物以及糖和水，完全培养基是在基本培养基的基础上，附加植物生长调节剂、椰乳、香蕉汁、番茄汁等天然提取物。
迄今为止，基本培养基的配方已有几百种，但较常用的有一二十种，如MS、White、N6、B5等。
实验用的培养基一般是先配成10-100倍的母液，用时再按配方配制培养基。
二、实验用品1、实验器材：冰箱、电炉、电子天平、移液管、量筒、烧杯（1000mL、500mL、50mL）、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶（1000mL）、标签纸等。
2、实验试剂：MS培养基配方中的19种试剂，2,4-D，KT，NaOH，HCl，95%乙醇，HgCl2，次氯酸钠，蒸馏水等。
三、实验方法1、大量元素母液的配制按表1-1计算并称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL，即为10倍的大量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
表1-1 MS培养基大量元素母液试的配制注意1: ①称取量的值（mg）=规定量(mg/L)×扩大倍数×母液体积(L)②每称量一种试剂，都要在备注栏中相应的部分做好标记，比如写上日期和划出“√”。
注意2：①为避免沉淀现象发生，应将Ca 2+、SO42-、Mg 2+和H 2PO 4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合；②CaCl 2·2H 2O 要在最后单独加入，在溶解CaCl 2·2H 2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO 2，以防沉淀。
另外，CaCl 2·2H 2O 放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
③如遇沉淀，缓慢加入（注意搅拌）1mol/L 的Hcl 将其溶解。
2、微量元素母液的配制按表1-2计算并用分析天平称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL ，即为100倍的微量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
植物细胞工程实验 (1)
植物细胞工程实验一 培养基母液的制备一、实验目的与意义学习和掌握培养基母液的配制方法。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
二、实验器材电子天平（称量为0.0001g ）、电子天平（称量为0.01g ）、烧杯（500ml 、100ml 、50ml ）、容量瓶（1000ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、细口瓶（1000 ml 、100 ml 、50 ml 、25 ml ）、药勺、玻璃棒、电炉。
三、实验药品NH 4NO 3、KNO 3、CaCl 2·2H 2O 、MgSO 4·7H 2O 、KH 2PO 4、KI 、 H 3BO 3、 MnSO 4·4H 2O 、 ZnSO 4·7H 2O 、 Na 2MoO 4·2H 2O 、CuSO 4·5H 2O 、CoCl 2·6H 2O 、FeSO 4·7H 2O 、Na 2-EDTA·2H 2O 、肌醇 、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B 6)、盐酸硫胺素(维生素B 1)、甘氨酸。
四、实验步骤每种母液均配制500ml ，各成分的质量如下： 1、大量元素母液的配制表1 MS 培养基大量元素母液制备序号 药品名称培养基浓度（mg/L ）扩大20称量(mg)备注1 NH 4NO 3 1650 16500 蒸馏水定容至500ml2 KNO3 1900 19000 3 CaCl 2·2H 2O 440 44004 MgSO 4·7H 2O 370 37005 KH 2PO 41701700各成分按照表1培养基浓度含量扩大20倍，用称量为0.01g 的电子天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到500ml 的容量瓶中，即为20倍的大量元素母液。
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法一、实验目的1.了解无菌操作2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。
药品：NH4NO、KNO3CaCI2 •2H2O MgS04・ 7H2Q KH2PO、KI、H3BO3MnSO44H2O ZnSO4•7H2ONa2MoO4?H2O CuSO45H2OCoCI2 •6H2OFeSO4 7H2O Na2-EDTA・ 2H2O肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇（维生素B6）、盐酸硫胺素（维生素B1）、甘氨酸。
四、实验步骤1 、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。
后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中,即为10倍的大量元素母液。
到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。
表1 MS培养基大量元素母液制备注意:(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+ SO42-、Mg 2+和H2PO4-等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。
为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。
特别应将Ca2+、SO42—、Mg2十和H2PO4 一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
(2)CaCI2 • 2H2O 要在最后单独加入，在溶解 CaCI2 • 2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的 CO2以防沉淀。
另外，CaCI2 • 2H2O 放 入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
2、微量元素母液的配制MS 培养基的微量元素无机盐由7种化合物(除Fe )组成。
MS培养基的配制-母液法
• 配好的培养基一般放置1-2条观察无菌落 后方可使用
• 配好的培养基在15-20℃存放,并尽快在 一个月内使用
组培室的卫生?
• 定期消毒,熏蒸 • 组培污染物的处理 • 污染的培养材料或培
养瓶,灭菌后洗涤 • 升汞等,回收后集中
灭菌温度与灭菌时间和培养基体积的关系
培养基的配制（母液法）
• 培养基配制过程 • /v_show/id_XMTE2Nzg
3MjA=.html • /player.php/sid/XM
TE2Nzg3MjA=/v.swf
0.025
25
铁盐
Na2-EDTA
37.3
3730
FeSO4˙4H2O
27.8
100
2780
1000
10
微生素等
Gly VB1 VB2 VB6 肌醇
2.0
100
0. 1
5
0.5
525
100
5000
母液的配制
• 以MS培养基为例，其母液如下： • MS大量组份（扩大20倍）； • MS微量（扩大1000倍）； • MS有机组分（扩大50倍）； • MS铁盐（扩大100倍）；
2，配制分工：
• 1.配制母液 • MS大量------第1组 • MS微量------第2组 • MS有机------第3组 • MS铁盐------第4组 • 6-BA母液（50mL;1mg/ml） ------第5组 • NAA母液（50mL;1mg/ml） ------第6组 • 2,4-D母液（50mL,1mg/,mL)---第7组 • 0.1% 溶液升汞，2000mL ---第8组 • 来苏尔液—1000MmL-----第9组 • 75%酒精 ------------1000mL---第10组
培养基母液的配制方法
培养基母液的配制方法培养基是用于细胞培养的基础营养物质，它为细胞提供适当的营养和环境条件，以促进细胞的生长和繁殖。
培养基母液是制备培养基的初始液体，下面是一种常见的培养基母液的配制方法。
配制培养基母液的材料和设备：1.高质量的培养基成分：如氨基酸、维生素、无机盐、糖、有机酸等。
2.纯净的水：可以使用去离子水或高纯水。
3.称量器具：称量天平、量筒等。
4.搅拌装置：磁力搅拌器或振荡器等。
5.固液分离装置：滤纸、滤膜或离心管等。
6.灭菌工具：如高压灭菌锅、紫外线灭菌仪等。
具体步骤如下：步骤1：准备工作-清洗和消毒工作台和必要的玻璃器皿，如量筒、烧杯、磁力搅拌器等。
-检查所需材料和设备是否完整，以防止操作过程中的中断。
步骤2：配制培养基1.按照所需培养基配方中各成分的质量比例，用称量天平准确称量各成分。
2.使用量筒或烧杯，加入适量的纯净水。
3.将已称量的培养基成分加入水中。
根据配方要求的顺序，加入各成分并充分搅拌混合。
4.搅拌速度和时间根据配方要求进行调整，使各成分充分溶解并均匀分布。
步骤3：过滤和灭菌1.准备好合适的滤纸或滤膜，并放置在过滤装置中。
可以根据需要使用多次过滤或组合过滤器设备以获得更好的过滤效果。
2.调整过滤装置的设置，使培养基缓慢通过过滤器，以避免气泡的产生。
可以使用真空过滤或重力过滤方法，根据实际情况进行选择。
3.检查过滤结果，确保培养基没有异物或沉淀物。
4.准备好灭菌容器，如离心管或高压灭菌锅。
将过滤后的培养基倒入容器中，并盖好盖子。
5.使用适当的灭菌设备对培养基进行灭菌处理。
可以使用高压灭菌锅、摇床灭菌、紫外线灭菌等方法。
步骤4：保存和使用1.灭菌后的培养基母液应存放在适当的条件下，如低温、阴凉和无光照的环境中，以保持其质量。
2.在使用前，应对培养基进行适当的质量控制，如pH值检测、无菌条件下培养等。
总结：以上是一个常见的培养基母液的配制方法。
在实际操作中还要根据所需培养基的种类和配方进行合理选择和调整。
培养基母液配制
一.大量元素(10倍液)：称取下列药品分别溶解定容到1升后，加到5升存储瓶中。
KNO3 95gNH4NO3 82.5gKH2PO4 8.5gMgSO4•7H2O 18.5gCaCl2•2H2O 22.0g注意事项：1配置母液前要仔细清洗存储容器2.应按照顺序分别彻底溶解后混合，每加完一种药品，摇动存储瓶使其混合均匀；3.溶解时最好加热，以便充分溶解，避免沉淀的产生；4.夏季要用新制的蒸馏水，并加热，这样可以避免因为水中带菌量过大而产生沉淀，同时可以减缓绿藻的生成；5.沉淀的产生一是由于溶解不充分就混合造成的（浑浊型沉淀），所以配置时一定不要急；二是由于长菌而产生絮状沉淀，所以要用新制的蒸馏水并加热。
二.微量元素母液的配制(100倍)：取少量(200-300ml)温水依次加入下列药品，每加一种药品后搅拌溶解，最后定容到1L：KI 0.083gH3BO3 0.62gZnSO4*7H2O 0.86gNaMoO4*2H2O 0.025gCuSO4*5H2O 0.0025gCoCl2*6H2O 0.0025gMnSO4*4H2O 2.23g (MnSO4*H2O 1.69g)注意：配好后在室温下放置10 h以上再放入冰箱保存，即刻放入冰箱易产生结晶沉淀。
配制过程中产生沉淀的原因有：1. 前一个没彻底溶解就加入了后一个药品；2. 蒸馏水pH 值过高，可加几滴盐酸校正。
三.甘氨酸和肌醇的配制(100倍):甘氨酸: 0.2g溶解定容到一升; 肌醇: 10g溶解定容到一升。
四.铁盐的配制（100倍）:称取EDTA 3.73 g , FeSO4·7H2O 2.78 g , 分别溶解后混合定容到1L,放入棕色细口瓶中,室温放置10 h以上（防止结晶沉淀），然后放入4℃冰箱。
五.维生素B的配制（100倍）：改良MT：VB1（盐酸硫氨素）1g, MS： 10mgVB6 (盐酸吡哆素) 1g , 50mgVB5 (烟酸) 0.5g, 50mg分别称取顺序溶解在温热的蒸馏水中，定容到1升。
培养基母液配制
培养基母液的配制（一）激素母液由于多数生长调节物质难溶于水，因此配法各不相同，激素母液可以在2~4℃冰箱中保存。
在配制药品前，应准备好一定容积的小烧杯、玻璃棒，用纯净水冲洗干净方可使用：1、IAA、IBA、GA3、ZT可先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中，贴上标签。
2、2,4-D、KT、可用少量10%的Noah溶解，再加水定容。
3、6-BA可用少量1mol/LHCl溶解后，再加水定容。
4、NAA可溶于热水或少量95%酒精中，再加水定容至一定体积。
5、1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2,4-D，用少量1mol/LNaOH溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
6、1mg/ml的6BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/LNaOH溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
7、1mg/ml的NAA的配制：称取0.1gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml容量瓶中。
8、1mol/L的HCl的配制：量取83.3ml盐酸加水稀释定容至1L。
（一般、组培室用量少，配制500ml即可，即：称取盐酸41.65ml稀释定容至500ml。
配制盐酸时。
需要带口罩、戴手套。
）9、10%的NaOH的配制：称取10gNaOH，加少量纯净水溶解，然后定容到100ml容量瓶中。
10、HgCl2 的配制：称量1g的HgCl2，加热水后进行溶解定容至1L。
二、培养基配制配错培养基造成的危害比组培技术中其他任何失误都大。
因此，配制培养基和称取其他成分必须绝对小心。
为了降低配错培养基的风险，最好准备一张纸，详细地写出配制培养基过程中所需的成分和配置步骤。
每配完一种成分或配完一种母液，划掉相应的记录。
1、一般而言，分化配方的配制：除萱草琼脂为5.5g/L外，其它植物为琼脂5g/L。
白糖为30g/L。
母液粉为4.74g/L。
用自己配制的母液配培养基时，大量母液（1号）50ml/L，微量（2~5号为5 ml/L）。
植物培养基母液的配制
实验1 培养基母液的配制一、实验目的掌握培养基母液的配制方法。
二、实验原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为MS 大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长调节物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具和药品电子分析天平、扭力天平、烧杯（50mL、100mL、500mL、1000mL）、量筒（1000mL、100mL、25mL）、容量瓶（1000mL、500mL、100mL）、磨口试剂瓶（500mL、1000mL）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉（1000W）、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质2，4-D、NAA、6-BA 等。
四、培养基母液的配制过程首先，按书中MS培养基的配方，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后分别进行药品称取和母液配制。
具体操作如下：（1）MS大量元素母液（20倍）的配制。
按照MS培养基的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
配制时先用量筒量取蒸馏水大约800mL，放入1000mL的烧杯中，依次分别称取：NH4NO3 33g 、KNO3 38g、KH2PO4 3.4g、MgSO4.7H2O 7.4g 、CaCl2.2H2O8.8g,按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，然后倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名，置于4摄氏度冰箱保存备用。
配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为50mL。
（2）MS微量元素母液（100倍）的配制。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验1、培养基母液的配制
一、实验目的
1、了解植物组织与细胞培养基的基本类型和组成。
2、掌握植物组织与细胞培养基各种母液的配制方法。
二、实验原理
离体植物组织和细胞的生长、分化所需要的营养物质都是由培养基供给。
基本培养基通常包括大量元素、微量元素、有机物以及糖和水，完全培养基是在基本培养基的基础上，附加植物生长调节剂、椰乳、香蕉汁、番茄汁等天然提取物。
迄今为止，基本培养基的配方已有几百种，但较常用的有一二十种，如MS、White、N6、B5等。
实验用的培养基一般是先配成10-100倍的母液，用时再按配方配制培养基。
二、实验用品
1、实验器材：冰箱、电炉、电子天平、移液管、量筒、烧杯（1000mL、500mL、50mL）、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶（1000mL）、标签纸等。
2、实验试剂：MS培养基配方中的19种试剂，2,4-D，KT，NaOH，HCl，95%乙醇，HgCl2，次氯酸钠，蒸馏水等。
三、实验方法
1、大量元素母液的配制
按表1-1计算并称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL，即为10倍的大量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
表1-1 MS培养基大量元素母液试的配制
注意1: ①称取量的值（mg）=规定量(mg/L)×扩大倍数×母液体积(L)
②每称量一种试剂，都要在备注栏中相应的部分做好标记，比如写上日期和划出“√”。
注意2：
①为避免沉淀现象发生，应将Ca 2+、SO42-、Mg 2+和H 2PO 4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合；
②CaCl 2·2H 2O 要在最后单独加入，在溶解CaCl 2·2H 2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO 2，以防沉淀。
另外，CaCl 2·2H 2O 放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
③如遇沉淀，缓慢加入（注意搅拌）1mol/L 的Hcl 将其溶解。
2、微量元素母液的配制
按表1-2计算并用分析天平称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL ，即为100倍的微量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。
表1-2 MS 培养基微量元素母液的配制
3、铁盐母液的配制
MS 培养基硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。
配制时，按照表1-3的数据称取，分别用蒸馏水加热搅拌溶解至沸腾，然后将二者混合，磁力搅拌器搅拌冷却至室温。
棕色试剂瓶储存，贴好标签。
再冷藏。
表1-3 MS 培养基铁盐母液的配制
4、有机母液的配制
MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇。
配制时，按照表1-4中的数据依次用电子天平称量，蒸馏水溶解。
表1-4 MS培养基有机母液的配制
注意：由于有机母液营养丰富，极易污染，所以配制时最好用无菌蒸馏水溶解
5、激素母液的配制
（1）细胞分裂素母液：取100mg的KT粉末，置于干燥烧杯内，加入少量95%乙醇，加3-4滴1mol/L的HCl溶解，然后缓慢加入100mL蒸馏水，并最终转入容量瓶定容至200mL。
6-BA同此。
（2）生长素母液：称取100mg2,4-D粉末，置于干燥烧杯内，加入少量0.1mol/L 的NaOH使其完全溶解，然后缓慢加入100mL蒸馏水，并最终转入容量瓶定容至200mL。
NAA同此。
表1-5 激素母液的配制
注意事项：
将配制好的各种母液分别倒入试剂瓶中，贴好标签，注明母液名称、倍数、日期、配制人等，置于0-4℃冰箱中保存。
若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。
6、常用几种药剂的配制
（1）1mol/L HCl 和1mol/L NaOH的配制
①1mol/L HCl的配制：量取38%、比重为1.19的HCl 8.06mL加蒸馏水定容至100mL。
要求配制的摩尔浓度×需配制的体积×原酸分子量
V=----------------------------------------------------------------------
原酸的百分浓度×原酸的比重×1000
②1mol/L NaOH的配制：
称取NaCl 4g，用少量蒸馏水溶解，再定容至100mL。
（2）70%酒精、75%酒精的配制
①70%酒精配制：量取95%的酒精70mL加水定容到95mL。
②75%酒精配制：量取95%的酒精75mL加水定容到95mL。
（3）常用消毒剂的配制
①0.1%HgCl2（升汞溶液）：称取2g HgCl2用少许水溶解，定容至2000mL。
②20%次氯酸钠溶液：称取100g次氯酸钠（NaClO）用少许水溶解，定容至500mL。
四、学生操作内容
各组按顺序配制培养基母液各0.5升、植物生长调节剂原液200mL、常用药剂2000mL。