《生物化学》课程实验指导
生物化学实验指导
实验一植物DNA的提取与测定一、目的本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA的原理和方法，进一步了解DNA的性质。
二、原理细胞中的DNA绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。
DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl溶液为例：RNP在0.14 mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP的溶解则随之不断增加。
当NaCl浓度大于1mol/L时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2倍，因此通常可用1.4 mol/L NaCl提取DNA。
为了得到纯的DNA制品，可用适量的RNase处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA的提取主要有两种方法：1．CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。
2．SDS法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠）使DNA与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
生物化学实验指导
二、结果及讨论
【参考范围】 1、波长的检测：在 529nm ± 1nm 处有最大吸收值为合格。 2、杂光的检测：T% ≤ 5%为合格。 3、比色皿配套：Tmax % – Tmin% ≤ 0. 5% 为合格比色皿配套。 【注意事项】 1、722 型分光光度计的使用方法：选定检测波长，置调节模式为透光率 T，将某一盛装参比介质 的空白比色皿置于光路，打开遮光板，调 0%T，盖上遮光板调 100%T，再将盛装待测液体的比色皿置 于光路，测出 T 值，或置调节模式为吸光度 A，即可测出 A 值。注意每次测定均需重新调 0%T、100%T。 2、在杂光检测中，用于调 0%T 的黑纸片应完好无孔洞，否则会导致假合格现象。 3、使用比色皿时，其盛装液体不能超过总体积的 2/3，也不宜少于 1/2，且在检测前必须用擦镜纸 将比色皿外的液体擦拭干净。
糖标准溶液管：第 2、3 号管。注意稀释后要混匀。
2 号管
3 号管
110mmol/L 葡萄糖液（μl）
100
50
D.W.（μl）
50
50
葡萄糖液浓度（mmol/L）
பைடு நூலகம்
73.33
55
2、再将第 2、3 号管分别取 50μl，加 D.W.50μl 依次作等倍稀释（各 4 管），得到 8 种较低浓度的
葡萄糖标准溶液，稀释方法见下图：
实验一 分光光度计性能检测
【实验目的】 1、掌握分光光度计的性能检测，包括波长检测、杂光检测以及比色皿配对。 2、掌握分光光度计的使用方法。 【实验原理】 1、波长检测：⑴可见光区域的黄光波段比较狭窄，适用于光度计波长的粗测；⑵镨钕滤光片在
生物化学实验指导实验一蛋白质的性质实验（一）（呈色反应）一、目的1
生物化学实验指导实验一蛋白质的性质实验（一）（呈色反应）一、目的1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式。
2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、虽色反应：(一)双缩脱反应：1.原理：尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。
双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。
可用于蛋白质的定性或定量测定。
一切蛋白质或二肽以上的多肽部有双纳脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
2.试剂：(1)尿索： 10克(2)10%氢氧化钠溶液 250毫升(3)1%硫酸铜溶液 60毫升(4)2％卵清蛋白溶液 80毫升3.操作方法：取少量尿素结晶，放在干燥试管中。
用微火加热使尿素熔化。
熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。
冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。
观察出现的粉红颜色。
避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10％氢氧化钠溶液约2毫升，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇，观察紫玫色的出现。
(二)茚三酮反应1.原理：除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。
该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。
反应机理如下：此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
2.试剂：(1)蛋白质溶液 100毫升2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)0.5％甘氨酸溶液 80毫升(3)0.1％茚三酮水溶液 50毫升(4)0.1％茚三酮—乙醇溶液 20毫升3.操作方法：(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
《生物化学实验指导》课件
实验操作问题
实验设备使用不当，导致设备损 坏或实验失败。
解决方法
加强实验材料管理，确保学生正 确使用和管理实验材料。
实验操作问题
实验材料管理不善，导致实验结 果受影响。
解决方法
提供设备使用说明和注意事项， 确保学生正确使用设备。
实验结果异常分析与处理
异常分析
01 实验结果与预期不符，可能存
在误差或错误。
01
02
03
实验技术原理
介绍实验所涉及的基本原 理，包括生物学、化学和 物理学原理等。
实验步骤
详细描述实验的操作流程 ，包括实验前的准备、实 验操作步骤、实验后处理 等。
注意事项
提醒实验中需要注意的事 项，以确保实验的准确性 和安全性。
实验数据分析与处理
数据收集
说明如何收集实验数据， 包括仪器的使用和数据的 记录等。
按照指导老师的安排进行实验 操作，不得擅自更改实验步骤
或使用未经批准的试剂
爱护实验室设备和器材，保持 实验室卫生整洁
02
生物化学实验基本操作
实验器材介绍与使用
实验器材
介绍生物化学实验中常用的实验 器材，如烧杯、量筒、滴管、离 心管等，并说明其用途和特点。
使用方法
详细介绍各种实验器材的使用方 法和注意事项，确保学生正确使 用，避免因操作不当造成实验误 差或安全事故。
04
生物化学实验案例分析
案例一：DNA提取与鉴定
总结词
基础实验，了解DNA提取与鉴定的基本原理和操作步骤。
详细描述
本案例介绍了DNA提取与鉴定的基本原理、实验材料、操作步骤、注意事项和 实验结果分析，旨在让学生了解DNA提取与鉴定的基本过程，掌握相关的实验 技能。
生物化学课程实验指导书
《生物化学》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1.实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2.严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3.进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。
4.实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5.实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6.使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7.做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8.实验后，要及时完成实验报告。
2006年1月目录生物化学实验细则 (1)目录 (2)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应 (3)实验2 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 (6)实验3 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (11)实验4 凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (16)实验5 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (20)实验6 唾液淀粉酶的性质和活力测定 (24)实验7生物氧化与电子传递 (25)实验8 植物体内的转氨基作用 (27)实验1 蛋白质的沉淀、变性反应（3学时）目的要求1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
3. 了解蛋白质变性与沉淀的关系。
4.了解蛋白质两性性质原理在水溶液中，蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。
但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。
生物化学实验指导：酶的活性测定实验
生物化学实验指导：酶的活性测定实验1. 引言在生物化学领域，测定酶的活性是一项重要的实验技术。
酶是生物体内参与许多生化反应的催化剂，能够加速反应速率。
通过测定酶的活性，我们可以了解其催化效率和特性。
本实验旨在教授如何测定某一种酶的活性，并提供相应步骤和分析方法。
我们选择一种常见的酶作为例子，详细介绍实验操作步骤和数据处理方法。
2. 实验材料•酶提取物•底物（适合所选酶催化反应的底物）•缓冲溶液（pH值适合所选酶催化反应的缓冲溶液）•辅助试剂（如辣根过氧化物酸）•试剂盒或相关仪器设备3. 实验步骤步骤1：制备必要溶液1.准备合适浓度并调整pH值适合实验目标的缓冲溶液。
2.准备底物溶液，确保其浓度符合实验要求。
步骤2：制备标准曲线1.准备一系列不同底物浓度的标准溶液。
2.按照指定的方法将不同底物浓度的标准溶液与酶提取物混合。
3.在一定时间间隔内，记录反应进程中释放的产物（如颜色变化）。
步骤3：样品预处理1.从所需生物样品中提取目标酶。
可以采用相关提取方法，如超声波法、机械破碎法等。
2.将提取得到的酶溶液进行适当稀释，以便后续操作过程中能够在合适浓度范围内工作。
步骤4：活性测定实验1.将提取得到的目标酶与底物溶液以及其他必要试剂加入适当容器中，形成反应体系。
2.控制温度和pH值，确保反应条件符合要求。
3.运行反应体系一段时间，并记录反应进程。
步骤5：数据处理和分析1.使用已经制备好的标准曲线，根据测试产生的光吸光度（或其他测量结果）计算出底物的浓度。
2.根据所得底物浓度和反应时间，计算出酶催化反应速率。
3.通过对不同条件组的实验数据进行比较和统计分析，可以进一步了解酶活性受到哪些因素影响。
4. 结论通过本实验指导，我们能够学会如何进行酶的活性测定实验，并熟悉基本的数据处理和分析方法。
这一实验可以为进一步探究酶催化机制、优化酶工艺等提供基础。
实践中，可以根据具体需求对该实验设计进行适当调整和补充。
生物化学实验指导
《生物化学》实验指导实验室规则一、实验目的生物化学是医学教育中的一门实践性较强的基础学科。
实验教学是过程的重要组成部分，是理论教学的延伸和补充。
实验目的是：1、初步学会生物化学实验的基本操作技能及实验研究的基本方法。
2、熟悉生物化学实验原理，了解一些临床生化检验项目。
3、培养严肃认真的工作方法、实事求是的科学态度、团结协作的工作作风和观察分析、思考、独立解决问题的能力。
二、实验基本要求实验教学包括实验前准备、实验操作、整理实验结果、书写实验报告等环节，为了提高实验效果，实现实验目的，要求学生必须做到以下几点。
（一）实验前1、仔细阅读实验指导，了解实验目的和要求，充分理解实验原理，熟悉实验步骤、操作程序和注意事项。
2、预测实验各个步骤可能得到的结果，对预期实验结果能做出合理的解释。
3、注意和估计实验中可能发生的误差，并制定防止误差的措施。
（二）实验时1、保持实验室肃静，不能进行与实验无关的活动。
2、在教师或实验技术人员的指导下，熟悉仪器的构造、性能及操作规程。
3、实验器材摆放整齐，有条不紊、装置正确。
4、按照实验步骤，严肃认真的循序操作，不能随意更动。
5、爱护公物，注意节省实验器材和药品。
注意安全，严防触电、火灾、酸碱灼伤及中毒事故的发生。
6、仔细、耐心地观察实验田中出现的现象，随时客观的记录实验结果，以免发生错误或遗漏。
实验条件应始终保持一致，如有变动,应加文字说明。
（三）实验后1、整理实验结果，书写实验报告，按时交给指导教师评阅。
2、整理实验仪器和清洗玻璃仪器，关闭仪器、设备和电源。
清点实验器材，办理借还手续。
3、做好实验室清洁卫生工作，关闭水、气阀门，切断电源，关闭门窗，确保安全。
实验一生化实验基本操作一、实验目的通过基本操作训练，学会熟练进行进行玻璃仪器洗涤；吸量管使用；溶液的混合；离心机使用；７２１型分光光度仪使用。
二、实验用品烧杯、试管；吸量管、移液管；旋涡混合（振荡）器、玻璃棒；离心机使用；７２１型分光光度仪三、实验内容及步骤（一）玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。
生物化学实验指导
第一部分生物化学与分子生物学概论本部分的内容为生物化学实验中所涉及的主要原理。
介绍如何正确记录实验过程及书写实验报告的一般规则，是训练学生进行正规实验寻林的重要内容。
普通实验技术包括玻璃仪器的洗涤，洗液的配制，吸量管的使用、混匀的方法以及过滤、离心等一般实验室技术。
实验样品的制备着重讨论在生物化学实验中，血液、尿液样品及组织材料的采集和处理，匀浆制备和组织浸出液制备。
离心分离技术、电泳原理、分光分析、层析分离技术，重点讨论这些重要技术的原理，内容则尽可能简洁扼要，作为具体实验内容的参考。
一.实验记录和实验报告的书写实验是在理论指导下的科学实践，目的在于经过实践掌握科学观察的基本方法和技能，培养学生科学思维、分析判断和解决实际问题的能力。
也是培养探求真知、尊重科学事实和真理的学风，培养科学态度的重要环节。
（一）实验记录记录实验中观察到的现象、结果和数据，及时地记录在激烈路本上。
原始数据必须准确简练、详尽、清楚。
记录时不能夹杂主观因素，在定量实验中观测的数据，如称量物的重量、滴定管的读数、光密度值等，都应设计一定的表格，依据仪器的精确度记录有效数字。
完整的实验记录包括实验日期、实验题目、目的、操作、结果。
（二）实验报告实验结束后，应及时整理和总结实验结果及记录，按照下列顺序写出实验报告：1.实验名称（The title of experiment ）：2.目的（Objective）：3.原理（Principle）：最好使用简式。
4.操作步骤（Operational procedure）：5.实验记录6.计算与结果（Calculation and Results）：7.讨论（Discussion）：对实验方法，实验结果和异常现象进行探讨和评论，以及对于实验设计的认识、体会和建议。
二、普通实验技术（一）玻璃仪器的洗涤与清洁玻璃仪器的洗涤与清洁直接影响实验结果的准确性，因此玻璃仪器的洗涤工作是很重要的。
1.新购置玻璃仪器的清洗新购置来的玻璃仪器表面附着有游离碱质，应先用肥皂水洗刷后再用流水冲洗，浸泡于I－2％HCl中过夜，取出后再用流水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2－3次，在干燥箱中烤干或自然晾干，备用。
生物化学实验指导1
生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。
留长发的同学应挽短、戴帽。
2. 整洁。
实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。
实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。
3. 安静。
实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。
4. 废物及废液处理。
实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。
但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。
少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。
火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。
5. 试剂与标准溶液。
取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。
取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。
取样时，应注意用多少取多少。
如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。
7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。
调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。
8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。
如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。
9. 防火。
勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。
若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。
10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。
实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。
生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。
实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。
例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。
一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。
因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。
如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。
生物化学实验指导
生物化学实验指导李峰李荣张建平编湖南文理学院生命科学系前言生物化学实验是以生物为研究对象，利用生物化学的原理和方法，阐明生物体内化学分子的结构与化学反应的机理，从分子水平探讨生命现象的本质，并为人类服务的一门实验科学，是生物科学、农学、动物科学专业、生命学科相关专业本科生及与湖南省中学生物学教师及科技人员重要的专业基础技术。
它是在植物生物学、动物生物学、微生物学等普通生物学实验有比较全面了解及一定基础训练基础上开设的实验技术。
旨在培养具有现代生物学知识，掌握现代生物化学技术的创新人才培养具有现代生物学知识前沿、掌握现代生物学基本技术，具有综合设计、创新实验能力的创新人才。
《生物化学实验指导》是熊大胜教授主持的“生物学基础实验‘531’课程体系研究”的实验教材之一。
生物化学实验模块按生物化学及生化大实验的实验功能构建，承担《生物化学实验》及《生物化学与分子生物学大实验》。
生物化学实验模块以提高学生应用生物化学原理和方法，解决生产实践中的实际问题为目标，改革以往生物化学实验教学大纲，从加强基础的观点出发，侧重于学生基本技能，综合能力，创新能力三个层次的培养，同时也注意增加一些新近发展起来的重要的生物化学研究方法和技术。
生物化学实验模块共包括15个实验。
实验注重加强学生基本技能的培养，使学生掌握蛋白质和核酸的基本结构及组分鉴定方法；掌握蛋白质性质的综合测定，了解蛋白质沉淀和变性等重要概念；掌握最常用的蛋白质制备、分离和纯化过程和方法；通过淀粉酶的提取，活性测定以及淀粉酶动力学分析实验，加深对酶的特性认识；进一步熟悉掌握微量滴定法的基本操作技术；注重培养学生综合能力，通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作，掌握氨基酸含量的测定方法；掌握核酸的提取过程以及核酸含量和纯度的测定技术；熟悉掌握电泳技术的基本原理和操作技术；血糖的定量测定和脂肪酸的β－氧化实验，掌握有关物质代谢中生理生化指标的测定方法；在生化大实验中开设了《总RNA的提取及鉴定》和《半定量RT-PCR检测基因的表达差异》两个综合性大实验；本实验模块还开设了为期6周的选修开放项目《基因的克隆、鉴定及生物信息学分析》（创新实验），使学生更好的将基础知识与专业技术衔接。
生物化学实验指导
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。
（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。
（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。
（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。
（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。
移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。
（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。
离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。
（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
生物化学实验指导电子版
生物化学实验指导电子版生物化学实验指导一、试剂1. 氯仿：用于芳香族化合物的溶解、清洗；2. 硫酸：用于提取溶液中的某些物质，同时也作为能溶解蛋白质的酸性溶剂；3. 乙酸：用于碱化反应，可能提升蛋白质的溶解性；4. 盐酸：用于常温下蛋白质的溶解；5. 磷酸：用于常温下极酸性物质的溶解；6. 氯化钾：用于静电，渗析，也用于调节溶液酸碱度；7. 硝酸铵：用于碱化反应，可以提高某些物质的溶解度；8. 碳酸二铵：用于碱化反应，也可以帮助提高溶液中某些物质的溶解度；9. 氯化钠：用于溶液稀释，也可以作为是pH调节剂；10. 氢氧化钠：用于调节溶液的酸碱度；二、器材1. 酸性硫酸铜滴定池：用于检测溶液中硫酸盐的浓度；2. 温度控制仪：用于控制反应温度；3. 硅胶色谱柱：用于分离混合液中的物质；4. 浴室：用于沸煮某类蛋白；5. 真空泵：用于将液体抽出；6. 多管共振探头：用于测定比色法中的较高浓度；7. 比色杯：用于比色现象；8. 高效液相色谱仪：用于快速地分离多种物质；9. 微型反应釜：用于芳香族化合物的反应；10. 微量称量管：用于精确称量少量物质；三、步骤1. 准备：将所需试剂和器材准备好；2. 溶解：使用氯仿等溶剂将芳香族化合物溶解；3. 提取：用硫酸和乙酸将混合液中的物质进行提取；4. 能谱检测：采用高效液相色谱仪，对混合液进行谱线检测；5. 碱化反应：利用硝酸铵或其他碱性物质进行溶液的碱化反应；6. 比色：用比色杯分析混合物中物质浓度；7. 极化：利用多管共振探头检测混合液中的蛋白质浓度；8. 冷却：将比色法中高浓度物质稀释后，再加入冰水将温度控制在冰点以下；9. 沸煮：将某类蛋白放入温度控制仪能控制的浴室中，进行沸煮；10. 离心：利用真空泵将液体从比色杯中离心，以便收集蛋白质沉淀。
《生物化学》课程实验教学大纲
《生物化学》课程实验教学大纲课程名称：生物化学课程编号：437007总学时：82 总学分： 4.5开设时间：第三学期适用专业：生物技术、食品科学与工程主撰人：审核人：一、实验性质、目的与任务1、生物化学实验是以生物为研究对象，利用生物化学的原理和方法，阐明生物生长，发育，遗传变异机制，揭示生命现象和本质，并为人类服务的一门实验科学，是农学、食品科学与工程专业、生物技术学科相关专业本科生及与中学生物学教师及科技人员重要的专业基础技术。
2、本课程是在植物生物学、动物生物学、微生物学等普通生物学实验有比较全面了解及一定基础训练基础上而开设的实验技术实验，是生物技术、农学、食品科学与工程专业的专业基础课，是深入学习上述三个专业专业知识的必备课程。
3、掌握层析技术、核酸的分离及组分鉴定、酶的特性、透析技术、等电点分离蛋白质等生物化学技术。
二、教学基本要求：1、掌握还原糖与非还原糖的鉴别方法；2、掌握测定酶的最适pH、最适温度等的方法；3、掌握蛋白质与糖的透析技术；4、掌握层析原理、蛋白质层析方法；5、掌握等电点纯化蛋白质的方法；6、掌握核酸组分鉴定的方法；7、掌握滴定法测定Vit C的方法（还原型Vit C的测定方法）。
三、实验项目与类型：四、实验教学内容及学时分配：实验一糖类的颜色反应4学时1、实验目的了解糖类颜色反应的原理；学习应用糖类颜色反应鉴别还原糖与非还原糖的方法。
2、方法原理（1）Molish（莫氏）反应糖与强酸的作用形成糠醛及其衍生物。
糠醛及其衍生物与α-萘酚反应作用生成紫色的化合物，原理是羰基于酚类进行了缩合，这样，将糖与浓酸作用后再与α-萘酚反应作用就能生成紫色的化合物，可鉴别糖（多羟、醛基）。
Molish反应非常灵敏，0.001%葡萄糖和0.0001%蔗糖即能呈现阳性反应。
因此，不可使碎纸屑或滤纸毛混入样品中。
过浓的糖溶液，由于硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈紫色。
需稀释糖溶液后重做。
《生物化学实验》课程标准
5.树立密切合作的风气，在实验中进一步提高学生的科学素质修养。
三、课程内容与教学要求
本实验课的技能要求分为知道、理解、掌握、学会四个层次。这四个层次的一般涵义表述如下：
知道———是指对这门学科和学科知识点的认知。
实验名称
分配
学时
实验
属性
开出
要求
教与学的方法建议
实验一、基本操作及氨基酸、蛋白质一般理化性质
4
基础
必做
技术指导，操作训练
实验二、生化样品的制备
4
综合
选做
技术指导，操作训练
实验三、蛋白质的提取分离
4
综合
选做
技术指导，操作训练
实验四、核酸分离制备与鉴定
6
综合
必做
技术指导，操作训练
实验五、氨基酸的纸层析
4
4
综合
必做
技术指导，操作训练
实验十一、PAGE－等电点聚焦电泳
8
综合
选做
技术指导，操作训练
实验十二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
8
综合
必做
技术指导，操作训练
实验十三、对流免疫电泳测定胎儿甲种蛋白质
8
设计
开放实验
学生设计，教师指导
实验十四、蛋白质的浓度测定(双缩脲法)
4
综合
必做
技术指导，操作训练
实验十五、蛋白质的浓度测定（考马斯亮蓝法）
√
√
实验十六、微量凯氏定氮试验
实验内容
教学要求
知道
理解
掌握
学会
1消化
生物化学实验指导.pdf
的要求进行独立操作与观察。 3．独立操作与观察 除个别实验分组进行外，一般由学生个人独立进行操作和观察。在实
验中要按实验指导认真操作，仔细观察，作好记录。 4．示教 每次的实验都备有示教内容，其目的是帮助学生了解某些实验中的难点，扩大在
液面处，眼睛平视标线，加溶剂至液体凹与标线相切，盖瓶塞倒转，使气泡升到顶，将瓶震荡数次，再倒
置，重复操作 10 次以上，才能混合均匀。（注意：不再定容了，防止溶液漏掉）
2 液体稀释 用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，再按上法进行。如果稀释时产生热量，可先
于小烧杯中加少量溶剂溶解，冷却后移到容量瓶中，再按上法进行。
用容量瓶定容后，装入试剂瓶，帖上标签。
标签应注明以下内容：药品浓度，名称，配制人和日期等。
（六）清理实验场所。
（二） 缓冲溶液的配制
1 概念
由一定物质组成的溶液，在加入一定量的酸或碱时，其氢离子浓度改变甚微或基本不变，此种溶液称
为缓冲溶液；这种作用称为缓冲作用；其溶液内所含物质称为缓冲剂，调节缓冲剂的比例可以配置成各种
【实验用品】
1．材料： 2．器材和仪器：烧杯，容量瓶，量筒，玻璃棒，试剂瓶。 3．试剂：NaH2PO4·2H2O，Na2HPO4·12H2O。
【方法步骤】
（一） 溶液的配制步骤 （一）实验准备
1 准备所需的药品和玻璃仪器。 2 洗涤。 （二）计算 1 百分比浓度计算：
（1） G/V 比 如：配 1%NaCl, 称 1 g NaCl 溶于 100 mL 水。 （2） V/V 比 如：配 75%乙醇 100 mL，乙醇 100 mL×75%=75 mL，蒸馏水 25 mL。 （3） G/G 比 用的较少，如计算灰分中某种元素如 Fe 的含量。 2 摩尔浓度的计算：(药品的分子量一般在标签中注明)
《生物化学》实验指导(8个实验)
《生物化学》实验指导(8个实验)生物化学实验指导吕杰编著新疆大学资源与环境科学学院生态学教研室内容介绍《生物化学实验指导》是新疆大学资源与环境科学学院《生物化学》课程组的教师在参考国内重点院校、科研院所的生物化学实验与实习教材的基础上，结合教师的教学经验汇编而成。
该实习指导围绕教学大纲设计了8个实验内容。
目目录实验一氨基酸纸层析4实验二DNS-CL法测定N末端氨基酸5实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度7实验四酪蛋白的制备8实验五葡萄糖标准曲线的绘制10实验六酵母蔗糖酶的提取及活力测定12实验七酵母RNA的分离及组分鉴定14实验八维生素C的定量测定16 实验一一氨基酸纸层析一、实验目的1、通过氨基酸的纸层析分离，学习纸层析的基本原理和操作方法。
二、实验原理纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。
由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。
缺点是展开时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。
三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：标准氨基酸溶液2、仪器:层析缸，层析纸，毛细管，天平，吹风机等。
3、、试剂：（1）氨基酸标准溶液：0.1M丙氨酸和0.1M谷氨酸标准溶液。
（2）溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇匀；（3）0.1%的茚三酮丙酮溶液；茚三酮15克，丙酮100毫升四、实验步骤：纸层析(1)取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm处，用铅笔轻轻的各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm画一个+作为点样位置，共5个点。
生物化学实验指导
氧化亚铜也极不稳定，易被空气中的氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免亚甲 基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。
（3）滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入 反应溶液中。
五 还原糖的计算 六 撰写实验报告及实验效果分析
实验三 蛋白质性质（一）——蛋白质及氨基酸的呈色反应 一 实验目的
一、蛋白质盐析作用 1. 取蛋白质溶液 5ml，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合静置几 分钟，球蛋白即析出。 2. 将上述混合液过滤，滤液中加硫酸铵粉末，至不再溶解，析出的即为清蛋白。再加 水稀释，观察是否溶解。 二、乙醇沉淀蛋白质 取蛋白质溶液 1ml，加晶体 NaCl 少许，待溶解后再加入 95%乙醇 2ml 混匀。观察有无 沉淀析出。 三、重金属盐沉淀蛋白质 取试管 2 支，各加蛋白质 2ml，一管内滴加 1%醋酸铅溶液，另一管内滴加 1%CuSO4 溶液，至有沉淀生成。 四、生物碱试剂沉淀蛋白质
在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖 还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：
反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于
观察滴定终点。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2OK2Cu2
学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 二 实验原理
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所 含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白质物 质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果来决定被测物是否是蛋白质。颜 色反应是一些常用蛋白质定性测定的依据。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
《分子医学实验学》实验指导供口腔、护理、药学各专业用（第一版）佛山科学技术学院医学院编2008年6月编写说明《分子医学实验学》是一门集生物化学、免疫学、生物化学技术和分子生物学基本实验、科研探索和医学应用于一体的全新的综合性实验课程。
其实验技术反映现代生物医学发展趋势。
《分子医学实验》是基础医学实验教学的重要组成部分，是医学各本科专业的专业基础必修课。
课程内容包括分子医学基本实验技术、基础实验及综合和设计性实验等部分。
课程的主要目的一是强化基础知识教育，突出基本技能训练，是使学生能掌握分子医学的经典理论和基本实验，二是培养学生综合性素质，开发学生的科研潜能和创新思维。
开设分子医学实验学的目的在于：1、验证和巩固理论知识，加深对理论知识的全面理解，加强记忆。
2、通过实验，掌握分子医学实验学的基本操作技术，掌握层析法,电泳法,分光光度法和生物大分子制备等常用的实验方法的基本原理，熟悉分子医学实验的一般知识。
3、培养学生观察、比较、思考及分析问题和解决问题的能力，使学生具备一定的动手操作能力、创新能力培养学生科学、严谨、认真工作态度及理论联系实际、实事求是的工作作风。
本实验指导11个实验项目涵盖了分子医学实验学中沉淀、离心、层析、电泳、分光光度测定等分子医学实验的基本方法，可依实验所需时间作合理组合实验，根据实验条件和教学安排适时开课。
实验室规则1．实验前必须预习实验指导和相关理论知识，明确实验目的、原理、预期的实验结果、操作关键步骤及注意事项，计划安排实验工作时间。
2．穿白大衣准时进入实验室，保持实验室整洁安静，不得谈笑和大声说话，不准做与实验无关的事情。
3．实验时应持“三严”作风——态度严谨、思维严密、操作严格。
实验中认真、仔细观察实验过程中的实验现象和结果，及时如实的做好原始记录。
实验失败须重做。
根据实验结果进行科学分析，写好实验报告，交指导教师批阅。
4．注意安全，不得擅自离开。
使用易燃、易爆、有毒试剂和材料进行实验时，应严格遵守操作规程，防止火灾、中毒、污染、触电等事故发生，一旦发生，果断处理并立即报告教师5．爱护公物，防止损坏，若有损坏及时报告原因并登记。
公用仪器就原处使用，了解使用方法及遵守操作规程，使用后必须在仪器登记本上登记并签名。
公用试剂就近量取、用毕随时放回原处。
要节约水、电、煤气及试剂药品6．实验结束，洗净器材，清整实验室，打扫卫生，检查门、窗、水、电和煤气的安全。
目录实验一实验室基本知识和技术（5）实验二蛋白质浓度测定（双缩脲法）（21）实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质（23）附：电泳技术（27）实验四血浆清蛋白的分离纯化与鉴定（35）附：层析技术（37）实验五胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响（45）实验六脱氧核糖核酸（DNA）的提取及成分鉴定（48）实验七质粒DNA提取与纯化（51）实验八 DNA重组质粒的设计与构建（54）实验九凝集试验（61）实验十肝功能组合实验（65）附1：血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定附2：酶联免疫吸附试验（ELISA）实验十一免疫血清的制备（71）实验一实验室基本知识和技术（The basic knowledge and technology of lab）【目的和要求】1．掌握各种基本的生化技术、常用仪器的分类、使用及注意事项2．熟悉生化实验室规则3．清点洗刷实验用具。
【实验内容】1．实验室规则2．生物化学实验各种基本技术3．722型分光光度计的使用4．实验记录和实验报告【仪器、设备】1.烧杯2.试管3.刻度吸量管4.离心管5.滴管6.搅棒7.枪式移液器及其配适吸头8.混匀器9.恒温水浴箱10.离心机11．722型分光光度计，721型分光光度计第一部分基本知识与操作一、常用的玻璃仪器（一）分类：常用的玻璃仪器分类有量器和容器，“量器”主要包括：量筒、量杯、容量瓶、吸管等。
“容器”主要有烧瓶、烧杯、试管、试剂瓶、离心管等。
量器有量入式和量出式两种形式。
“量入式”用“ＴＣ”、“Ｅ”、“λ”表示，定量标记由下往上递增，测量注入量器中的液体；“量出式”用“TD”、“A”表示；定量标记由上而下递增；测量从量器中倾出的液体。
（二）玻璃仪器的洗涤、干燥1、洗涤液：①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。
②玻璃仪器专用洗涤液：主要成份为中性稀氯氧化剂，上海日化研究所出品2、洗涤的要求与步骤：要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。
步骤：不净的器皿洗衣粉或肥皂水刷洗自来水冲净达到要求？是)蒸馏水涮洗2—3次(其目的是去除自来水中的杂质，故应少量多次，全面充分)烤干或晾干、备用注意：对使用过的仪器应养成及时清洗的习惯，特别是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当立即用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就很不容易清除。
①新购置的玻仪：合成洗涤剂洗刷→→0.2mol/L盐酸浸泡（去除游离碱）２―６小时→→自来水冲洗→→ＤＳ冲洗２――３次。
②一般容器：如试管、烧杯、三角烧瓶等。
流水冲洗→→合成洗涤剂洗刷→→自来水多次冲洗→→ＤＳ冲洗。
③容量分析仪器：如吸管、容量瓶、量筒、滴定管等。
使用后立即浸泡水中。
自来水多次冲洗→→沥干→→铬酸洗液浸泡数小时→→自来水多次冲洗→→ＤＳ冲洗２――３次。
（不能刷洗）④比色杯：用毕立即用ＤＳ反复冲洗。
洗不净时，用盐酸冲洗，再用自来水冲洗和蒸馏水冲洗。
避免用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙纸试擦3、玻璃仪器的干燥一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理：①试管、离心管、烧杯、烧瓶等普通玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。
烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且均匀，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。
③使用电吹风干燥一般玻璃仪器也很便利常用。
④下列玻璃仪器应避免烘烤：各种计量玻仪：不可烘烤，自然干燥（容易造成器壁变形而致容量不准）。
常用定量吸管很难自然干燥，可在８０至１００℃烘箱烤干。
厚壁玻仪（研钵、量筒比色杯：等）及结构复查的玻仪：易在烘烤时发生破裂，不可烘烤，自然干燥。
（自然干燥适应于不急于使用和各种计量玻仪；烘烤干燥除结构复杂、厚壁及计量玻仪外，均可。
温度在１２０℃，刻度吸管温度应小于１００℃。
）二、常规操作技术及注意（一）移液操作用于移液操作的有奥氏吸管、移液管、刻度吸管三种吸量管及枪式移液器。
三种吸量管比较奥氏吸管移液管刻度吸管特点管中有一球形膨起管中有棱形膨出直筒状只有一个刻度只有一个刻度有多个刻度准确度最高次之再次之应用适用于吸取标准液吸取标准液生化实验中广泛使用或粘稠性血标本管尖液吹不吹吹（完全流出式）停留15秒不吹（不完全流出式）流速愈慢愈好慢流出快流出1、吸量管的使用①吸量管的选择：·在一次完成转移的前提下，应选用容量较小的吸量管·对于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管②操作(见图1—1)·用洗耳球将液体吸至超过标线·移开洗耳球，迅速用食指压紧管口·必要时将管尖端外围拭净·调液面至标线·放开食指，使液体流入容器·将最后液滴沿器壁而下或吹出③读数(见图1—2)·吸量管保持垂直·视线与液面应水平·管中液面与刻度线应呈切线使用注意：持管方式；管尖插入液面的深度；吸液；读数（认刻度，准确读数，注意无色液与有色液读数之区别）；放液（吹与不吹之分，注：对于刻度由上至下的吸量管应尽量使用上端刻度管尖残液是否需吹出，看清标记）。
2、枪式定量移液器的使用①抢式移液器的结构(见图3) （1. 液体吸放钮2．体积选取钮3. 体积、显示4．枪头排放钮5. 枪头排放器6．枪头接嘴）其内部柱塞分2段行程，第1档为吸液，第2档为放液，手感十分清楚。
种类：固定式和可调式规格：0.5――10000ul不等②操作(见图1—4)·正式使用之前，要连续按动数次，使管内空气同工作环境空气交换，保持管内工作负压恒定·调体积选取钮至所需值，在移液管下端插上塑料吸嘴，轻轻扭转以保证所密·垂直持握枪式移液器外壳，按下大拇指至第1档·将吸嘴垂直地浸入所需取样液内，深度为2~3毫米，徐徐松开大拇指，使之返回原来位置。
·停留1――2秒，平缓地将移液管取出，同时应避免吸嘴与任何东西碰撞。
·将吸液嘴移至加样容器壁上，缓慢按动按手至第一档，将液体排了。
停留1秒（粘性较高的溶液停留时间可长些）。
紧接着再将按手按至第二档，排出吸嘴里的全部液体。
（要求动作连）。
·完全排出液体后，小心地连同吸嘴沿着容器壁向上滑动取出。
·再放松按手，使之返回原来位置，即完成一次操作。
如需移取另一样品，按枪头排放钮，更换枪头注意：·移液器是精密量取，不允许将移液器直接与液体接触。
·不使用时也应插上塑料吸嘴，以免液体或染色液吸入移液器内，导致阻塞。
·移取过程中应控制速度，力度。
·塑料吸嘴可经受100℃高温高压消毒。
（二）混匀操作(1)旋转法：手持容器，使溶液作离心旋转(2)指弹法：一手执试管上端，另一手轻弹试管下部，：使其中液体作涡旋运动。
(3)搅动法：使用玻璃棒搅边；多用于溶解烧杯中的固体。
(4)混匀器法：将试管置于混匀器的振动盘上，逐渐用力下压，使内容物旋转。
(5)倒转混匀：适用于具塞的容器，如容量瓶、具塞量筒及具塞离心管等。
操作时，将容器反复倒转。
试管内的液量太多，也可利用倒转混匀法，外面包以玻璃纸塞住管口，然后用手指按住橡皮塞将试管反复倒转，溶液即可充分混匀。
(6)吸管混匀法：用吸管将溶液反复吸吹数次，以达到混匀的目的。
（三）加热与保温操作1、加热(见图1~5；图1~6)2、保温①使用恒温水浴箱，调节温度设定钮至需要的温度。
②水浴箱中水要足量。
③实验过程中应随时监测温度，并及时调节。
（四）离心操作离心沉淀法：当颗粒小而不均一，沉淀粘稠或容积小又需精确定量时，往往采用离心沉降法。
1、离心前检查：①取出所有套管，起动空载的离心机，看是否转动平稳。
②检查套管有无软垫，是否完好，内部有无异物。
③离心管与套管是否匹配。
2、平衡：将一对离心管放入套管，置于天平两侧，用滴管较轻一侧的离心管与套管之间加水至两侧平衡(离心管及其内溶液量不能差别过大)3、离心：将等重的两管置于离心机中的对称位置，调转速调节钮，逐渐增加转速至所需值，计时，离心结束后，将套管中的水倒净，所有套管放回离心机中。
4、使用注意①根据需要选择合适的转速、时间；②选择合适的离心管，做到对称平衡；③启动时应由低速慢慢加至所需速度④离心结束关机后，应让其自然停止，不可用手或其它物品强迫停止（五）点收仪器根据仪器清单，逐项查点是否完好(如有缺损向教师声明及时补充更换)第二部分分光光度法当光线通过透明溶液介质时，其幅射能量有部分被溶液吸收，一部分透过，所以光线射出溶液介质之后光能被减少。