《生物化学》课程实验指导

《分子医学实验学》实验指导

供口腔、护理、药学各专业用

（第一版）

佛山科学技术学院医学院编

2008年6月

编写说明

《分子医学实验学》是一门集生物化学、免疫学、生物化学技术和分子生物学基本实验、科研探索和医学应用于一体的全新的综合性实验课程。其实验技术反映现代生物医学发展趋势。《分子医学实验》是基础医学实验教学的重要组成部分，是医学各本科专业的专业基础必修课。课程内容包括分子医学基本实验技术、基础实验及综合和设计性实验等部分。课程的主要目的一是强化基础知识教育，突出基本技能训练，是使学生能掌握分子医学的经典理论和基本实验，二是培养学生综合性素质，开发学生的科研潜能和创新思维。开设分子医学实验学的目的在于：1、验证和巩固理论知识，加深对理论知识的全面理解，加强记忆。2、通过实验，掌握分子医学实验学的基本操作技术，掌握层析法,电泳法,分光光度法和生物大分子制备等常用的实验方法的基本原理，熟悉分子医学实验的一般知识。3、培养学生观察、比较、思考及分析问题和解决问题的能力，使学生具备一定的动手操作能力、创新能力培养学生科学、严谨、认真工作态度及理论联系实际、实事求是的工作作风。

本实验指导11个实验项目涵盖了分子医学实验学中沉淀、离心、层析、电泳、分光光度测定等分子医学实验的基本方法，可依实验所需时间作合理组合实验，根据实验条件和教学安排适时开课。

实验室规则

1．实验前必须预习实验指导和相关理论知识，明确实验目的、原理、预期的实验结果、操作关键步骤及注意事项，计划安排实验工作时间。

2．穿白大衣准时进入实验室，保持实验室整洁安静，不得谈笑和大声说话，不准做与实验无关的事情。

3．实验时应持“三严”作风——态度严谨、思维严密、操作严格。实验中认真、仔细观察实验过程中的实验现象和结果，及时如实的做好原始记录。实验失败须重做。根据实验结果进行科学分析，写好实验报告，交指导教师批阅。

4．注意安全，不得擅自离开。使用易燃、易爆、有毒试剂和材料进行实验时，应严格遵守操作规程，防止火灾、中毒、污染、触电等事故发生，一旦发生，果断处理并立即报告教师

5．爱护公物，防止损坏，若有损坏及时报告原因并登记。公用仪器就原处使用，了解使用方法及遵守操作规程，使用后必须在仪器登记本上登记并签名。公用试剂就近量取、用毕随时放回原处。要节约水、电、煤气及试剂药品

6．实验结束，洗净器材，清整实验室，打扫卫生，检查门、窗、水、电和煤气的安全。

目录

实验一实验室基本知识和技术（5）实验二蛋白质浓度测定（双缩脲法）（21）实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质（23）附：电泳技术（27）实验四血浆清蛋白的分离纯化与鉴定（35）附：层析技术（37）实验五胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响（45）实验六脱氧核糖核酸（DNA）的提取及成分鉴定（48）实验七质粒DNA提取与纯化（51）实验八 DNA重组质粒的设计与构建（54）实验九凝集试验（61）实验十肝功能组合实验（65）附1：血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定

附2：酶联免疫吸附试验（ELISA）

实验十一免疫血清的制备（71）

实验一实验室基本知识和技术

（The basic knowledge and technology of lab）

【目的和要求】

1．掌握各种基本的生化技术、常用仪器的分类、使用及注意事项

2．熟悉生化实验室规则

3．清点洗刷实验用具。

【实验内容】

1．实验室规则

2．生物化学实验各种基本技术

3．722型分光光度计的使用

4．实验记录和实验报告

【仪器、设备】

1.烧杯

2.试管

3.刻度吸量管

4.离心管

5.滴管

6.搅棒

7.枪式移液器及其配适吸头

8.混匀器

9.恒温水浴箱

10.离心机

11．722型分光光度计，721型分光光度计

第一部分基本知识与操作

一、常用的玻璃仪器

（一）分类：常用的玻璃仪器分类有量器和容器，“量器”主要包括：量筒、量杯、容量瓶、吸管等。“容器”主要有烧瓶、烧杯、试管、试剂瓶、离心管等。量器有量入式和量出式两种形式。“量入式”用“ＴＣ”、“Ｅ”、“λ”表示，定量标记由下往上递增，测量注入量器中的液体；“量出式”用“TD”、“A”表示；定量标记由上而下递增；测量从量器中倾出的液体。

（二）玻璃仪器的洗涤、干燥

1、洗涤液：

①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。

②玻璃仪器专用洗涤液：主要成份为中性稀氯氧化剂，上海日化研究所出品

2、洗涤的要求与步骤：

要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。

步骤：

不净的器皿

洗衣粉或肥皂水刷洗

自来水冲净

达到要求？

是)

蒸馏水涮洗2—3次

(其目的是去除自来水中的杂质，故应少量多次，全面充分)

烤干或晾干、备用

注意：

对使用过的仪器应养成及时清洗的习惯，特别是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当立即用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就很不容易清除。

①新购置的玻仪：合成洗涤剂洗刷→→0.2mol/L盐酸浸泡（去除游离碱）２―６

小时→→自来水冲洗→→ＤＳ冲洗２――３次。

②一般容器：如试管、烧杯、三角烧瓶等。流水冲洗→→合成洗涤剂洗刷→→自来

水多次冲洗→→ＤＳ冲洗。

③容量分析仪器：如吸管、容量瓶、量筒、滴定管等。使用后立即浸泡水中。自

来水多次冲洗→→沥干→→铬酸洗液浸泡数小时→→自来水多次冲洗→→ＤＳ冲洗２――３次。（不能刷洗）

④比色杯：用毕立即用ＤＳ反复冲洗。洗不净时，用盐酸冲洗，再用自来水冲洗

和蒸馏水冲洗。避免用碱液或强氧化剂清洗，切忌用试管刷或粗糙纸试擦

3、玻璃仪器的干燥

一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理：

①试管、离心管、烧杯、烧瓶等普通玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤

②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且均匀，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。

③使用电吹风干燥一般玻璃仪器也很便利常用。

④下列玻璃仪器应避免烘烤：

各种计量玻仪：不可烘烤，自然干燥（容易造成器壁变形而致容量不准）。常用定量吸管很难自然干燥，可在８０至１００℃烘箱烤干。

厚壁玻仪（研钵、量筒比色杯：等）及结构复查的玻仪：易在烘烤时发生破裂，不可烘烤，自然干燥。

（自然干燥适应于不急于使用和各种计量玻仪；烘烤干燥除结构复杂、厚壁及计量玻仪外，均可。温度在１２０℃，刻度吸管温度应小于１００℃。）

二、常规操作技术及注意

（一）移液操作

用于移液操作的有奥氏吸管、移液管、刻度吸管三种吸量管及枪式移液器。

三种吸量管比较

奥氏吸管移液管刻度吸管

特点管中有一球形膨起管中有棱形膨出直筒状