流式细胞仪

7四向高速分选。 一次可同时分选四群 或两群不同性质的细 胞群。
进样仓

样品管支架震动混匀 样本，保证在长时间 分选时，样本细胞可 以持续悬 浮 。
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使用前不需要调整液滴断裂时间。 原因：SWEETSPOT 系统，可自动调节液 滴振荡频率，使液滴断裂处于最佳状态 。
自动样品保护功能。 原因： SWEETSPOT 系统，感知液流中 阻塞物的形成，自动关闭分选机制。
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高速分选。 FACSAria设计的石英杯喷嘴系统， 一秒钟可以振荡形成90000——100000个液 滴，可分选70000个细胞，并可从中分选 出30000个感兴趣的细胞。而普通的流式 细胞仪只能分选15000个左右的细胞。
色彩表达程序 多色荧光分析程序 细胞ＤＮＡ分析程序 分选控制程序 单克隆分选程序
一 通 常 流 式 细 胞 仪 的 构 造 原 理
二 实 验 结 果 的 数 据 分 析
三 常 用 的 荧 光 染 料
四 最 新
的 构 造 优 点
五 应 用 流 式 细 胞 仪 可 开 展 的 项 目
BDFACSAria

四 计算机系统
作用：用于控制整个仪器的运行和数据采集 分析．
五
数据转换处理系统
本系统是计算机运行的软件系统，包括以下六 个方面。
检测数据分析软 件
用于细胞表型分析
可对不同细胞不同颜色加以区别 用于多表达抗原的细胞群分类分析 对细胞周期凋亡多倍体ＤＮＡ分析 用于设置分选条件，控制分选纯度 实现单细胞在培养板上的定位分选
大差别与改进，我们这一部分先讲述通常光学系统， BD FACSAria将在后面详 细讲解
以往流式细胞仪的光学系统
一 光学系统
1.
光学系统是流式细胞仪最重要的组成部 分．
２光学系统由一系列的光采集和光滤过的镜 片构成． 激光光源 单色器（一般指带通滤片BP,百度文库叫滤光片） 双色器（也叫双色反光镜、分光镜）
流式细胞仪
一 通 常 流 式 细 胞 仪 的 组 成 及 原 理
二 实 验 结 果 的 数 据 分 析
三 常 用 的 荧 光 染 料
四 最 新
的 构 造 及 优 点
五 应 用 流 式 细 胞 仪 可 开 展 的 项 目
BDFACSAria
通常流式细胞仪的组成部分
一 二 三 四 五 光学系统（BD FACSAria 光学系统与以往流式细胞仪相比有很 ） 液流系统 电子系统 计算机系统 数据转化处理系统
气溶胶控制系统 AMO配件

AMO气溶胶控制系统是为 了控制气溶胶。在样本分 选时，进样 仓和分选收集 室都是密封的，工作时由 废液吸引器产生负压。为 了减少生物污染机会，样 本更换时，仪器会 清洗进 样管路。气溶胶控制系统 可以进行额外的气溶胶处 理，清除分选 收集室内的 气溶胶。AMO上装有孔径 滤膜，可以吸收气溶胶颗 粒。
二维散点图与等高线图的比较
三维图
一 通 常 流 式 细 胞 仪 的 构 造 原 理
二 实 验 结 果 的 数 据 分 析
三 常 用 的 荧 光 染 料
四 最 新
的 构 造 优 点
五 应 用 流 式 细 胞 仪 可 开 展 的 项 目
BDFACSAria
常用的荧光染料
FITC：异硫氰基荧光素。激发激光波长 488nm.发射波长 520nm附近。发绿色荧光。使用530左右的BP，可得到最 佳荧光检测信号。 PE：藻红蛋白。激发光488nm,发射光576nm,发黄色荧光，用 585nm左右的BP，可检测到最佳信号。 APC：别藻青蛋白，是天然的可进行光合作用的自然荧光色 素，激发光633nm,发射光660nm,发红光，用660nm左右 BP检测。 PERCP:多甲藻叶绿素蛋白。488——〉677nm. Texas red；德州红，发橙色光。 PE- Texas red：藻红蛋白德州红偶联物。发橙光。 太平洋蓝：UV为激发光，它产生的荧光信号很强。蓝色光。
单参数直方图
双参数直方图及设门
设门
设门是伴随数据的图形化分析而产生的，它 指在细胞分布图中指定一个范围或区域， 对其中的细胞进行单参数或多参数的分析。 它可以是矩形门，圆形门，多边形门，任意 形状门等。
散点图及其在两个坐标轴上的投影
400 300 200 100
100 200 300 400
八角形荧光信号接收器
这样，BD FACSAria流式细胞仪就可 以同时检测总共15个独立的细胞 参数。这种全新的光学装置大大 提高了样本获取时所得细胞信息 的数量和质量。
先进的液流系统
液流系统是BD FACSAria 流式细胞仪的另一核心技术。 新型的液流系统车控制着鞘 液、洗液和废液流，而盛有 鞘液、洗液和废液的容器内 是没有压力的。 这种一体化 的液流系统车独立可以提供 空气压力，并控制真空状态， 完全不需要其它任何外部辅 助设备。BD 液流系统车上 装有4个10 L大桶，3个5 L小 桶，
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独特的节约设计 与 传统的 流式细胞仪相比，BD FACSARIA的集 成设计减小了仪器的体积，节省空间，它不需 要任何的辅助设备，唯一的需要就是一个标准 的电源插孔，而不再需要庞大的水冷激光器， 用低频率激光仍可以获得很好的荧光灵敏度和 分选性能。液流系统完全由液流系统车独立控 制。无论在设计还是操作方面，ARIA都是一个 创新。
通常流式细胞仪光路模拟实图
各种滤片按材质分类
彩色玻璃滤片
也叫吸收光片，由混入 染料的玻璃或塑料组 成
镀膜滤片
也叫干涉滤片，在玻璃 或石英基质上镀一层 薄薄的绝缘材料，注 意放置方向。
以往流式细胞仪的光学系统
以往流式细胞仪的光学系统

配件自动细胞定位分选装置（ACDU）可以 将定量细胞定位分选在微孔板或载玻片上。
液流系统车
液流系统
液流系统车
内置缓冲容器
石英杯流动幻灯片 37检测池

液流系统把鞘液从液流系统车输送到BD FACSAria系统的内置缓冲 容器内，然后再泵入到石英杯流动检测池中。这个内置缓冲容器里总 是充满鞘液，可以保持鞘液压力恒定，不受任何外部压力改变的影响。 因此，鞘液压力与鞘液桶内液面高低无关，同时，也可以随时排除鞘 液产生的气泡。
一 通 常 流 式 细 胞 仪 的 构 造 原 理
二 实 验 结 果 的 数 据 分 析
三 常 用 的 荧 光 染 料
四 最 新
的 构 造 优 点
五 展应 的用 项流 目式 细 胞 仪 可 开
BDFACSAria
应用流式细胞仪可以开展的项目
1. 2. 3.
4.
5.
6.
7.
常规免疫功能的检测 检测细胞周期，倍体，凋亡。 白血病与淋巴瘤的免疫分型。 对造血干细胞的检测。 对PNH的检测。 强直性脊椎炎的检测。 其他项目。
一 通 常 流 式 细 胞 仪 的 构 造 原 理
二 实 验 结 果 的 数 据 分 析
三 常 用 的 荧 光 染 料
四 造最 优新 点
的 构
五 应 用 流 式 细 胞 仪 可 开 展 的 项 目
BDFACSAria
BD FACSAria 高速流式细胞分选仪
FACSARIA的优点
一 光学系统：以往的流式细胞仪在使用以前 必须调整光路，而FACSARIA则不需要调 整光路，操作简便。 原因： FACSARIA实现了完全的固定光路 系统，直接可使照射到达准确位置。下图
各种滤片按用途分类
光学系统彩图
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以往流式细胞仪的光学系统
二 液流系统
流式细胞分选
三 电子系统
光电转换器件
光电二极管
光电倍增管ＰＭＴ
信号处理电路

通常的模拟电路更适合处理电压信号，而 不是电流信号，而二极管和ＰＭＴ仅能将 光学信号转化为电流信号．
光信号 电压脉冲信 前置放大电路 ＰＭＴ 电流信号 号
BD FACSARIA 是世界上第一台使用石英 杯流动检测池的流式细胞仪。 使用石英杯流动检测池有两个优点； 一，提高了激光的激发效率。 二，增强了发射光信号的收集。（结合图 13）

在普通的空气中液流受激光激 发的流式细胞分选仪中，液流 高频振动常常会产生信号噪音， 而BD FACSAria则完全消除了 这一弊端。BD FACSAria产生 液滴的高频振动发生在石英杯 流动池的底部喷嘴处，也就是 在样本与激光的正交点之后， 这样就不会干扰激光与样本流 的聚焦，因而不会产生干扰噪 音。检测就更加准确。 BD FACSAria流式细胞仪可以 使用70 μm或100 μm的喷嘴，满 足了绝大多数细胞分选的需要。
荧光标记
1 结合方式： 共价键结合。如FITC，PE 不十分稳定。 嵌入性结合。如PI，EB。嵌 入到核酸分子碱基对之间， 因此 十分牢靠。 静电力结合。极弱。
通常检测的荧光光谱范围
绿色荧光 黄色荧光
橙色荧光 红色荧光
510---540nm
560-----580nm
605-----635nm 650nm以上
488nm、633nm、407nm激发光束聚焦光路
BDFACSAIRA光学系统与以往光学 系统的对比
BD FACSAria八角形光信号接收器 示意图 （取代以往分支结构）
原理：反射比透射的效率更高。减少荧光投 射次数，降低能量损失。
BD FACSAria光学信号收集系统
三角形荧光信号接收器
633 nm和407 nm的激光激发信号的 检测器，每个激光器产生的荧光 信号接收器可以检测3个荧光信 号。再加上前向角散射光信号 八角形荧光信号接收器是488 nm激 光激发信号的检测器，可以检测 多达7个荧光信号以及侧向角散 射光信号
１单色器：在每一个荧光信号的检测通路中，都有 一个特定的滤片．它可以使特定的波长通过。 2 双色器：也叫分光镜，或双色反光镜．与单色 器不同，双色器可以对细胞信号进行多色分析。
协助理解：双色器先将连续光谱根据波长一分为 二进行筛选，可以通过的光可能为一色或多色荧 光，单色器是继双色器之后使用，对已被双色镜 分离出的单色荧光进行更严格筛选，使荧光特性 更强#8. 光学系统彩图。