胶乳免疫比浊法和免疫学法
胶乳免疫比浊法与荧光免疫层析法的原理
胶乳免疫比浊法与荧光免疫层析法的原理胶乳免疫比浊法与荧光免疫层析法是两种常用的免疫学检测方法,它们在医学领域中起着重要的作用。
胶乳免疫比浊法主要利用抗原与特定抗体结合后,使得溶液浑浊度增加的特性,通过比浊度的变化来判断样品中是否含有特定抗体或抗原。
而荧光免疫层析法则是利用特定荧光标记的抗体与抗原结合后,在荧光检测器上显示荧光信号的原理。
这两种方法在实际应用中各有优劣之处,本文将对这两种方法的原理、应用和发展进行探讨。
首先,胶乳免疫比浊法是一种比较传统的免疫学检测方法,其原理比较简单,操作相对容易。
在这种方法中,首先需要将待检测的抗原与特异性抗体混合,形成抗原-抗体复合物。
当复合物形成后,会导致溶液的浑浊度增加,通过光学方法检测溶液的浊度变化,从而判断样品中是否含有特定的抗体或抗原。
这种方法具有灵敏度高、速度快和成本低的特点,被广泛应用于临床、生物学和环境监测等领域。
然而,胶乳免疫比浊法也存在一些局限性,例如其灵敏度有一定的限制,只能检测较高浓度的抗原或抗体。
另外,由于比浊法是通过测定溶液的浑浊度来判断样品中的抗原或抗体,对于复杂样品的检测可能存在干扰。
因此,在一些需要更高灵敏度和特异性的应用场景下,研究人员开始寻找更加先进的免疫检测方法,其中荧光免疫层析法便是一种备受关注的新型技术。
荧光免疫层析法是一种结合了免疫学和荧光技术的先进检测方法,其原理是利用特定荧光标记的抗体与抗原结合后,在荧光检测器上显示荧光信号。
荧光免疫层析法具有灵敏度高、特异性好、多样性强等优势,被广泛用于生物医学、食品安全和环境监测等领域。
相比于胶乳免疫比浊法,荧光免疫层析法具有更高的灵敏度和特异性,能够检测到低浓度的抗原或抗体,并且可以应用于更加复杂的样品中。
荧光免疫层析法的应用范围也在不断扩大,不仅可以用于传统的生物学检测领域,还可以应用于分子诊断、药物研究和生化反应动力学等领域。
在医学诊断领域,荧光免疫层析法已经成为一种常用的检测方法,可以用于检测各种疾病的标志物,如癌症标志物、感染性疾病的诊断等。
5章 沉淀反应(免疫学)
3.方法评价
操作简便。 灵敏度较高,比双扩高约10倍。 分辨率低于双扩。
4. 临床应用
常用于抗原或抗体的定性分析、效价测定和纯度鉴 定等
(二) 火箭免疫电泳
火箭免疫电泳 是将单向免疫扩散和电泳相结合,在电场中
加速定向扩散的单向免疫扩散技术,由于其沉淀形
似火箭,故称为火箭电泳。
1. 基本原理
一、透射免疫比浊法
(transmission turbidimetry)
(一) 基本原理
抗原抗体结合后形成的CIC引起液体介质出 现浊度改变,光线的透过量减少,被吸收 光线量与CIC形成量呈正相关,依所测吸光 度值推算待测抗原的量 。
二、散射免疫比浊法
(nephelometry)
1967年, Ritchie等
方法稳定、简便的方法,不需特别仪器设 备,重复性好,但灵敏度稍差(1.25mg/L)。
(四)临床应用
1.血清学诊断:出现沉淀线,表明存在相应的Ag或Ab.
2.
免疫化学分析:浓度、分子量、纯度、反应性 沉淀线靠近抗原孔,提示抗体含量高;反之则反
出现多条沉淀线,则说明抗原和抗体皆不是单 一成分。可用于鉴定抗原或抗体的纯度。
三、速率抑制免疫比浊法
(rate inhibition immunoturbidimetry)
是一种竞争性结合试验,主要用于测定半抗原和 药物等小分子物质。
试验时先将一定量的已知半抗原-载体(大分子) 与限量的特异性抗体发生反应,生成的免疫复合 物可形成一定的速率散射峰值。
待测抗原与抗体竞争结合,速率散射峰值降低, 降低程度与标本中的待测半抗原成正比。
第5章 沉淀反应 Precipitation
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中,均匀一致的胶乳颗 粒,吸附抗体后,当遇到相应抗原时,则 发生凝集,单个胶乳颗粒在入射光波长之 内,光线可透过,当两个胶乳凝集时,则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比,与抗原量成正比。
(a)带抗体的胶乳在波长之内可透过光线; (b)结合后,则形成光线衰减
2. 海德堡(heidelberger)曲线理 论
2 抗体的质量
(1)特异性高 (2)效价高 (3)亲和力高 (4)抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类(磷酸盐缓冲液)
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用:消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层,促进抗原、抗体分子 靠近,结合形成大分子复合物。
(二)类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理:
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC),当光线透过反应溶液时,由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收,引起透射光减 少,免疫复合物量越多,透射光越少,即光线 吸收越多,可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比,当抗体量固定时,与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线,可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度=————————×校准液浓度(g/L)
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
心肌酶胶乳免疫比浊法与化学发光法区别
心肌酶胶乳免疫比浊法与化学发光法是两种常用的心肌酶检测方法,它们在临床诊断和疾病监测中扮演着重要的角色。
本文将分别从原理、优缺点、应用范围等方面对这两种方法进行比较,旨在帮助读者更好地理解它们之间的区别。
一、原理1.心肌酶胶乳免疫比浊法心肌酶胶乳免疫比浊法,简称比浊法,是一种通过观察免疫反应产生的胶乳复合物在溶液中形成的浊度变化来检测心肌酶活性的方法。
该方法主要依赖于心肌酶与抗体结合后形成可见的胶乳颗粒。
2.化学发光法化学发光法是利用顺式/异构酶的化学发光底物,在酶的作用下产生的化学发光信号来检测心肌酶活性的方法。
该方法的原理是通过测定化学发光物质的发光强度来定量检测心肌酶。
二、优缺点1.心肌酶胶乳免疫比浊法(1)优点:操作简单、成本较低、对仪器要求不高、可靠性高,适用于一般临床检测。
(2)缺点:受样本浑浊度和脂质干扰较大,不适用于脂质较高样本测定。
2.化学发光法(1)优点:敏感度高、准确性好、对样本干扰小,适用于各种样本类型的心肌酶检测。
(2)缺点:设备和试剂成本较高、操作复杂、对环境条件要求高,适用性稍受限制。
三、应用范围1.心肌酶胶乳免疫比浊法心肌酶胶乳免疫比浊法适用于一般临床心肌酶检测,如急性心肌梗死、心肌炎等疾病的诊断和疗效监测。
2.化学发光法化学发光法适用于对心肌酶活性要求较高的临床检测,尤其是一些特殊样本类型或对准确度要求较高的疾病监测。
心肌酶胶乳免疫比浊法与化学发光法各有其特点和适用范围,医务人员可以根据具体的临床需求选择合适的检测方法,以确保诊断和治疗工作的顺利进行。
心肌酶是一种重要的生物标志物,在心肌细胞损伤后会释放到血液中。
对心肌酶活性的检测能够有效地帮助医务人员诊断心肌梗死、心肌炎等疾病,并且监测治疗效果。
心肌酶胶乳免疫比浊法和化学发光法作为常用的心肌酶检测方法,各自具有一定的优势和局限性。
接下来将详细探讨这两种方法的原理、优缺点以及应用范围。
一、原理1.心肌酶胶乳免疫比浊法心肌酶胶乳免疫比浊法是一种通过免疫反应产生的胶乳复合物在溶液中形成的浊度变化来检测心肌酶活性的方法。
糖化血红蛋白测定试剂盒综述资料
糖化血红蛋白测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)
综述资料
目录
目录 (1)
1.产品预期用途 (1)
1.1产品预期用途 (1)
1.2与预期用途相关的临床适应症背景情况 (1)
1.3相关的临床或实验室诊断方法等 (1)
2. 产品描述 (1)
2.1技术原理 (1)
2.2主要原料及来源 (1)
2.3主要生产工艺过程 (2)
2.3.1 仪器设备 (2)
2.3.2 领料 (2)
2.3.3 R1配制 (2)
2.3.4 R2a的配制 (2)
2.3.5 R2b的配制 (3)
2.3.6 R3的配制 (3)
2.3.7 半成品检验 (3)
2.3.8 分装和密封 (3)
2.3.9 贴标 (3)
2.3.10 包装 (3)
2.3.11 成品检验 (3)
2.3.12 贮存 (3)
3. 试剂盒主要研究结果总结和评价 (3)
3.1.主要研究结果简述 (3)
3.2.试剂盒主要性能指标 (4)
3.2.1空白吸光度 (4)
3.2.2准确度评价 (4)
3.2.3分析灵敏度 (4)
3.2.4 重复性 (4)
3.2.5 批间差 (4)
3.2.6测定范围 (4)
3.2.7 相关性 (4)
3.2.8 试剂效期稳定性 (4)
3.2.9试剂开盖稳定性 (4)
4.有关生物安全性方面的说明 (4)
5.其它 (4)
5.1同类产品在国内外批准上市情况 (4)
5.2相关产品所采用的技术方法临床应用情况 (5)。
常用免疫学检验检测技术
• 6、捕获法测IgM抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间 接ELISA一般仅适用于检测IgG抗体。如用酶标记的抗 人IgM作为二抗进行间接ELISA测定IgM抗体,标本中 同时存在的不同浓度的IgG抗体将与IgM抗体竞争,而 使结合在固相抗原上的IGM抗体相应减少。另外标本 中如含有类风湿因子、也会产生干扰。因此用一般的 间接法测定IgM抗体不能得到准确的结果。
• (二)酶联免疫电转移印斑法
• Burnette于1981年建立酶联免疫电转移印斑法 (enzyme linked immunolectrotransfer blot, EITB),并称之为西部印斑(Western blot). EITB分三个阶段进行。
第一阶段为SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDSPAGE)。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷, 在聚丙烯酞胺凝胶中从阴极向阳极泳动,分子量 越小,泳动速度越快。此阶段分离效果肉眼不可 见(只有在染色后才显出电泳区带).
• (4)加底物显色。夹心式复合物中的酶催化底物 成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原 的定性或定量。
• 在临床检验中,此法适用于检测各种蛋白质等 大分子抗原,例如乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)、甲胎蛋白(AFP)、促绒毛膜性腺 激素(HCG)等。双抗体夹心法只适用于二价或 二价以上较大分子抗原的检出和定量分析,而 不能用于半抗原等小分子的测定。
速率散射比浊法有三大特点: • 一、时间快,一般在30-60s之内就可完成测试; • 二、比较准确,因其测定形成速率,抗原多,
速率快; • 三、节省试剂。
• (三)粒子强化免疫浊度测定法
粒子强化免疫浊度测定法的基本原理是,选择 一种大小适中,均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗 体后,当遇到相应抗原时,则发生聚集,单个胶乳 颗粒在入射光波长之内,光线可透过。当两个胶乳 颗粒凝聚时,则使透射光减少,这种减少的程度与 胶乳凝集成正比,当然也与抗原量成正比。
免疫比浊分析
(三)技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
• 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间,只能测定抗原抗 体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体,并保证抗体过量。
(四)方法评价
优点: 灵敏度高,稳定性好,操作简便,结果准确 不足: ①抗体用量较大; ②溶液中存在的抗原-抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原-抗体反应的第二阶段,检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行,耗时较长。
1.抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。 诊断试剂应尽可能 溶液中免
颗粒上的抗体与抗原特异结合,引起胶乳颗粒凝
聚 ,使透射光和散射光即出现显著变化。
三、免疫胶乳比浊法
(一)原理:
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
(一)BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的 一种改良。以发光二极管作为光源,检测前
向角13~24度的散射光,然后利用硅化光电
二、免疫散射比浊法
(一) 原理 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到 光线照射后,微粒子对光线产生反射和折射而形成 散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的 大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因 素密切相关。
不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时,
(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角 度及光源的波长。 另外,要注意保证抗原浓度合适。 此外,还要选择适宜的离子强度、pH值等。
(三)速率散射比浊法(rate nephelometry) 速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动 态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
胶乳透射免疫比浊法-江苏药品不良反应监测中心
胶乳透射免疫比浊法-江苏药品不良反应监测中心附件5胱抑素C测定试剂(胶乳透射免疫比浊法)注册技术审查指导原则本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的,随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展,本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围胱抑素C测定试剂(胶乳透射免疫比浊法)是指基于透射免疫比浊法原理,利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。
目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的—1——免疫方法,如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、单向免疫扩散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等,免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。
其中透射免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、全自动生化分析仪,散射免疫比浊法需特定蛋白分析仪。
从方法学上讲,本指导原则仅适用于胶乳透射免疫比浊法,不适用于散射免疫比浊法。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》(国家食品药品监督管理总局令第5号)和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》(食药监械管〔2022〕242号),胱抑素C测定试剂(免疫比浊法)管理类别为二类,分类代号为6840。
1.产品预期用途及辅助诊断的临床适应证背景情况(1)胱抑素C的生物学特征、结构与功能、在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。
胱抑素C(CytatinC,CyC)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂,也被称为γ—微量蛋白及γ—后球蛋白,广泛存在于各种组织的——2—有核细胞和体液中,是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质,分子量为13.3KD,由122个氨基酸残基组成,可由机体所有有核细胞产生,产生率恒定。
循环血液中的CyC能自由透过肾小球,在近曲小管几乎全部被上皮细胞摄取并分解,尿中仅微量排出。
CyC水平不受性别、年龄、饮食等因素的影响,是一种反映肾小球滤过率(GFR)变化的理想内源性标志物。
当肾功能受损时,CyC在血液中的浓度随肾小球滤过率变化而变化。
第六章-免疫比浊分析PPT课件
BNⅡ、BN100特种蛋白分析分析系统
(二)ARRAY分析系统 1.测定原理 本系统属于速率散射比浊分析法,在抗体过量的 前提下,光束通过抗原抗体复合物时所产生的散 射光速率变化大小与抗原浓度成正比。
速率的峰值通过电脑处理系统转换成待测抗 原的浓度。
2.仪器基本组成
ARRAY系统由分析仪、电脑处理系统、打印 机构成,其主要构成部分为分析仪,由加液 系统、散射测浊仪、40孔样本转盘、20孔试 剂转盘、软盘驱动器等组成。
•41
• 4.单向琼脂扩散法可用于
• A.抗体定性 B.抗体定量
• C.抗原定性 D.抗原定量
• 5.双向琼脂扩散试验,两种受检抗原的性质完全 相同时,沉淀线出现
• A.二条直线相交叉 C.二条弧线部分融合
B.二条弧线完全融合 D.二条直线不连接
• 6.火箭免疫电泳达到终点时应
• A.火箭峰呈云雾状 B.火箭峰呈圆形
抗原抗体复合物形成时间与速率的关系
累计时间 复合物产 产生速率 生总量
5
8
—
10
13
5
15
25
12
20
60
35
25
150
90
30
230
80
35
300
70
40
360
60
45
415
55
50
450
45
55
480
30
60
500
20
•18
当抗体的浓度固定于一定范围时,复合物 形成的速率峰值的高低与抗原的含量成正比, 随着时间的延长,免疫复合物的量逐渐增多, 抗原抗体结合速度的峰值在一定的时间出现。 通过微机处理即可得到待测蛋白成份的含量。
免疫比浊法与免疫荧光定量分析法测量血清降钙素原比较
免疫比浊法与免疫荧光定量分析法测量血清降钙素原比较目的:比较免疫比浊法和免疫荧光定量分析法在测量血清降钙素原时的结果。
方法:选取把在笔者所在医院进行降钙素检测的202例浓度不同的血清降钙素,分别用浙江兰森生物科技有限公司生产的乳胶增强免疫比浊法和广州万孚生物公司生产的免疫荧光定量分析法同时进行监测,并对结果和数据进行统计学的分析。
结果:经比较,这两种方法在轻度升高组、低风险组、阴性组的浓度值方面比较,差异无统计学意义(P>0.05);在高度和中度升高组的浓度值方面比较,差异有统计学意义(P<0.05),免疫比浊法结果稍高于免疫荧光定量分析法的结果;总阳性率的比较方面,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论:免疫比浊法和免疫荧光定量分析法均可用于临床血清降钙素原的检测,且免疫荧光法操作比较简便。
[Abstract] Objective:To compare the results of the immune turbidimetric method and immunofluorescence quantitative analysis method in the measurement of serum calcitonin original.Method:202 cases of different concentrations of serum calcitonin were selected,they were all checked by zhejiang ransom biotechnology co.,LTD.Production of latex enhanced immune turbidimetry and guangzhou Wan Fu biological immunofluorescence quantitative analysis production company at the same time,the results and data statistics were analyzed.Result:the concentration values of the two methods in elevated group,the low risk group,negative group had no statistically significant(P>0.05);the concentration values of the two methods in highly group and moderately elevated group concentration had significant difference (P<0.05),immune turbidimetry results were slightly higher than the analysis results of immunofluorescence quantitative.The total positive rate of two methods had no significant difference(P>0.05).Conclusion:Immune turbidimetry and immunofluorescence quantitative analysis can be used for clinical serum calcitonin original detection,and immunofluorescence operation is more simple.[Key words] Immune turbidimetry;Immune fluorescence quantitative analysis;Serum calcitonin original降钙素原(PCT)就是降钙素的前体,是116个氨基酸所组合成的糖蛋白[1],主要是神经内分泌细胞(主要包括肺、甲状腺、胰腺组织里面的C细胞)来表达,正常生理的情况下,在血液中是检侧不到的,属于一种脓毒的诱导蛋白,可以作为炎症新的指标,在感染性疾病的鉴别、诊断、抗生素临床应用指导、病情的检测中广泛的应用。
肌钙蛋白 I(cTnI)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)说明书
肌钙蛋白I (cTnI)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)说明书【产品名称】肌钙蛋白I(cTnI)测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)【包装规格】a)试剂1:1×15mL 试剂2:1×5mL b)试剂1:2×45mL 试剂2:2×15mL c)试剂1:4×60mL 试剂2:4×20mL d)试剂1:2×60mL 试剂2:2×20mL 【预期用途】用于体外定量测定人血清中肌钙蛋白I 的含量。
肌细胞受损时,肌钙蛋白I (cTnI )立即释放入血,在胸痛发生4-6h 后,血中cTnI 水平超过正常上限,12-24h 达高峰,可持续6~10天之久。
由于cTnI 可检出微小心肌损伤,是公认的快速诊断急性心肌梗死和急性冠脉综合症(ACS )[1]。
测定肌钙蛋白I 常用于心肌细胞受损、急性心肌梗死、急性冠脉综合症的辅助诊断。
【检验原理】样本与胶乳试剂在缓冲液中混合后,其中的肌钙蛋白Ⅰ与胶乳颗粒表面的抗体结合,使相邻的胶乳颗粒彼此交联,发生凝集反应产生浊度变化,该浊度变化与样本中的肌钙蛋白的量成正相关。
【主要组成成分】试剂1主要组分磷酸盐缓冲液30mmol/L聚乙二醇(PEG )0.5%表面活性剂及稳定剂适量试剂2主要组分磷酸盐缓冲液30mmol/L抗人肌钙蛋白(cTnI )抗体乳胶颗粒适量表面活性剂及稳定剂适量注:不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。
【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2~8℃储存,有效期为12个月,生产日期、有效期见标签。
2.开口后的试剂在仪器仓中(2~8℃)可稳定30天。
【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200;日立HITACHI 7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT 008AS 型;贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821;佳能TBA-FX8/TBA-120FR /TBA-2000FR ;罗氏cobas 8000c 702/cobas 8000c 701/cobas 8000c 502;西门子SIEMENS ADVIA 1800/ADVIA 2400;雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200;西森美康SYSMEX BM6010/C ;科华KHB 卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ZY-1280;迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/CS-1400;迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M ;颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480;赛诺迈德SUNMATIK-9050型;雷杜Chemray 420;英诺华D280;特康TC6010L ;锦瑞GS400;普康6066。
体外诊断试剂胶乳比浊法学习
胶乳免疫比浊法相关知识很多公司开展了荧光胶乳免疫层析做定量分析及胶乳增强免疫比浊分析项目,关注胶乳标记技术得技术人员越来越多。
本人总结了部分胶乳微球标记技术,并加以分类,以便朋友们查阅:胶乳微球物理吸附:反应微球带磺酸基、羧基、醛基表面得都就是疏水微球,都可以用来设计被动吸附蛋白。
磺酸基微球表面含带有负电荷得磺酸基团,pka大约为2,因此在酸性pH保持稳定。
醛基微球表面也带有磺酸基团,但能与蛋白行程共价键、羧基微球表面含带负电荷得羧基基团,在pH5.0以上时保持稳定。
带有疏水基团得蛋白得吸附与配位结合,就是最简单与直接得标记方法。
这种方法中,微球溶液与含目标蛋白得溶液混合,反应后,未结合得游离蛋白通过清洗步骤除去,从而获得胶体蛋白复合物。
疏水吸附方法只能用于疏水微球(硫酸盐、羧基、醛基表面修饰得微球)。
醛基表面修饰微球就是一个特例,其疏水吸附结果取决于后来得共价结合。
虽然物理吸附就是不依赖pH得,但反应缓冲液得pH对蛋白得结构有非常大得影响,从而影响蛋白吸附到微球上得反应效率。
一般,在被吸附蛋白等电点附近pH时,物理吸附效率会很高。
反应步骤:1、用反应缓冲液系数蛋白到10mg/ml;2、用反应缓冲液系数胶乳微球到1%;3、将蛋白溶液加入到胶乳微球溶液中,10ml胶乳中加入1ml蛋白溶液。
室温搅拌孵育2hr;4。
离心或超滤,除去未结合蛋白;ﻫ5。
将微球蛋白复合物用储存缓冲液溶解。
注意事项:1。
最优蛋白标记量影响因素1)有效比表面积:粒径减小时,比表面积/mg微球值得增加;2)胶体稳定性:蛋白对胶乳有稳定与去稳定作用;ﻫ3)免疫反应:最近标记量由免疫反应需要决定。
2、胶乳微球中加入蛋白后,快速搅拌混合,利于反应均衡、反应体积就是1ml时,可用移液器吸取蛋白加入微球中,并吹打数次。
如果反应体积较大时,用烧杯,边搅拌边加入蛋白,3、储存缓冲液与反应缓冲液不同时,抗体有脱落得可能;ﻫ4.表面活性剂能使得抗体从胶乳中脱落,所以应避免加入。
胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测CEA和AFP的结果对比
收稿日期:2020G08G09基金项目:国家自然科学基金(81660123)作者简介:谌秋华(1974 ),女,硕士,副主任技师,主要从事临床基因检测和肿瘤标志物检验的研究.通信作者:谢联斌,副主任医师,E Gm a i l :l i a n b i n x i e @s i n a .c o m .胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测C E A 和A F P 的结果对比谌秋华a ,陈燕玲a ,谢联斌b(中国人民解放军庐山康复疗养中心a .检验科;b .肿瘤科,江西九江332000)摘要:目的㊀比较胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清肿瘤标志物的结果.方法㊀选取的210名受试者为2015年7月至2020年4月收治的结直肠癌患者(n =124)和同期体检的健康人群(n =86).受试者均清晨采集全血标本,分别应用胶乳增强透射免疫比浊法㊁电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原(C E A )㊁甲胎蛋白(A F P )水平,比较两种检测方法的检测结果,并对结果进行P e a r s o n 相关性分析和肿瘤诊断的R O C 曲线下面积分析.结果㊀两种方法的检测值比较差异无统计学意义(P >0.05).P e a r s o n 直线相关性分析显示两种方法的检测值呈正相关(r C E A =0.733㊁r A F P =0.669,P <0.01).R O C 曲线分析显示,胶乳增强透射免疫比浊法检测C E A ㊁A F P 的结果在诊断肿瘤中的A U C 分别为0.674㊁0.655,电化学发光免疫分析法检测C E A ㊁A F P 的结果在诊断肿瘤中的A U C 分别为0.606㊁0.639,差异均有统计学意义(P <0.001).结论㊀胶乳增强透射免疫比浊法㊁电化学发光免疫分析法检测血清肿瘤标志物的结果基本一致,相关性良好,均有助于提升临床肿瘤疾病的诊断准确性.关键词:胶乳增强透射免疫比浊法;电化学发光免疫分析法;癌胚抗原;甲胎蛋白中图分类号:R 446.1㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:2095G4727(2020)06-0025-04D O I :10.13764/j.c n k i .n c d m.2020.06.006C o m p a r i s o no fL a t e xE n h a n c e d I m m u n o t u r b i d i m e t r y a n d E l e c t r o c h e m i c a l L u m i n e s c e n c e I m m u n o a s s a y fo r D e t e c t i o no fC E Aa n dA F PC H E N Q i u Gh u a a ,C H E NY a n Gl i n g a ,X I EL i a n Gb i n b(a .D e p a r t m e n t o f L a b o r a t o r y M e d i c i n e ;b .D e p a r t m e n tO f O n c o l o g y ,L u s h a n R e h a b i l i t a t i o na n dR e c u p e r a t i o nC e n t e r o f P L A ,J i u j i a n g 332000,C h i n a )A B S T R A C T :O b je c t i v e ㊀T oc o m p a r e t h e r e s u l t sof s e r u mt u m o rm a r k e r sd e t e c t e db y t r a n s m i s Gs i o ni mm u n o t u r b i d i m e t r y a n de l e c t r o l u m i n e s c e n c ei mm u n o a s s a y.M e t h o d s ㊀O n e h u n d r e d a n d t w e n t y -f o u rc o l o r e c t a l c a n c e r p a t i e n t sa d m i t t e dt ob e t w e e nJ u l y 2015a n d A pr i l2020a n d86h e a l t h y s u b j e c t sw h o c a m e t o t h eh o s p i t a l f o r p h y s i c a l e x a m i n a t i o nd u r i n g th e s a m e p e r i o dw e r e s e l e c t e d i n t h i s s t u d y .W h o l e b l o o d s a m p l e sw e r e c o l l e c t e d i n t h em o r n i n g.S e r u ml e v e l s o f c a r c i n o Ge m b r y o n i c a n t i g e n (C E A )a n d a l p h a f e t o p r o t e i n (A F P )w e r e d e t e c t e db y l a t e x e n h a n c e d t r a n s m i s Gs i o n i mm u n o t u r b i d i m e t r y a n de l e c t r o c h e m i c a l l u m i n o u s i mm u n o a s s a y .P e a r s o nc o r r e l a t i o na n a l y Gs i sw a s c o n d u c t e d a n d t h e a r e a u n d e rR O Cc u r v e o f t u m o r d i a g n o s i sw a s a n a l y z e d .R e s u l t s ㊀T h e r e w e r en os i gn i f i c a n td i f f e r e n c e s i ns e r u m C E A a n d A F Pc o n c e n t r a t i o n sb e t w e e nl a t e xe n h a n c e d t r a n s m i s s i o ni mm u n o t u r b i d i m e t r y a n de l e c t r o c h e m i c a l l u m i n e s c e n c ei mm u n o a s s a y (P >0.05).52南昌大学学报(医学版)2020年第60卷第6期㊀J o u r n a l o fN a n c h a n g U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e s )2020,V o l .60N o .6L i n e a r c o r r e l a t i o na n a l y s i s s h o w e d t h a t s e r u m C E Aa n dA F P l e v e l s d e t e c t e db y t h e t w om e t h o d s w e r e s i g n i f i c a n t l yp o s i t i v e l y c o r r e l a t e d(R=0.733a n d0.669,r e s p e c t i v e l y;P<0.001).R O Cc u r v e a n a l y s i s s h o w e d t h a t t h eA U C s o f C E Aa n dA F Pd e t e c t e db y l a t e x e n h a n c e d t r a n s m i s s i o n i mm uGn o t u r b i d i m e t r y i n t u m o r d i a g n o s i s(0.674a n d0.655,r e s p e c t i v e l y)w e r eh i g h e r t h a n t h o s e o fC E A a n dA F Pd e t e c t e db y e l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c e i mm u n o a s s a y(0.606a n d0.639,r e s p e c t i v e l y)(P<0.01).C o n c l u s i o n㊀T h e r e s u l t so f l a t e xe n h a n c e dt r a n s m i s s i o n i mm u n o t u r b i d i m e t r y a n de l e c t r oGc h e m i c a l l u m i n e s c e n c e i mm u n o a s s a y w e r e b a s i c a l l y c o n s i s t e n t a n d d i s p l a y e d a g o o d c o r r e l a t i o n f o r t h e d e t e c t i o n o f s e r u mt u m o rm a r k e r s.B o t hm e t h o d s a r e h e l p f u l t o i m p r o v e t h e d i a g n o s t i c a c c u r aGc y o f t u m o r d i s e a s e s.K E Y W O R D S:l a t e xe n h a n c e di mm u n o t u r b i d i m e t r y;e l e c t r o c h e m i l u m i n e s c e n c ei mm u n o a s s a y;c a r c i n o e m b r y o n i c a n t i g e n;a l p h a f e t o p r o t e i n㊀㊀癌胚抗原(C E A)是首先从结肠癌和胚胎组织中提取出的一种肿瘤相关抗原,属于细胞膜结构蛋白,存在于细胞浆中,可通过细胞膜分泌到细胞外进入血液中[1].临床实践证实,C E A可以作为结肠癌㊁肺癌㊁乳腺癌以及其他多种恶性肿瘤的特异性标志物,在恶性肿瘤的鉴别诊断㊁病情监测㊁疗效评价等方面均具有重要的临床价值[2].甲胎蛋白(A F P)是一种糖蛋白,属于白蛋白家族,在胎儿血液循环中的水平较高,出生后2~3个月时A F P被白蛋白替代,血液中水平较低[3].A F P具有多种生物学功能,如免疫抑制㊁淋巴细胞诱导凋亡等,其与多种肿瘤的发生发展密切相关,可作为多种肿瘤的阳性检测参考指标[4].本研究比较胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法对C E A和A F P的检测结果,旨在为临床血清肿瘤标志物检测方法的选择提供参考.1㊀资料与方法1.1㊀一般资料本研究210名受试者为中国人民解放军庐山康复疗养中心2015年7月至2020年4月期间收治的124例结直肠癌患者和在此期间来院进行体检的86例健康人群.其中男125例,女85例;年龄26~76岁,中位年龄47.4岁;消化系统肿瘤73例,呼吸系统肿瘤51例.本研究符合知情同意原则.1.2㊀检测方法1.2.1㊀胶乳增强透射免疫比浊法清晨空腹收集受试者全血标本,收集血清后,应用全自动生化分析仪(日本H I T A C H I公司生产,型号:7180)进行胶乳增强透射免疫比浊法检测.C E A㊁A F P胶乳增强透射免疫比浊法检测试剂盒均购于北京九强生物技术股份有限公司,检测操作步骤严格按照试剂盒说明书进行.检测仪器的状态和质量控制情况均良好.1.2.2㊀电化学发光免疫分析法清晨空腹收集受试者全血标本,收集血清后,应用电化学发光仪(德国R O C H E公司生产,型号: C o b a s e411)进行电化学发光免疫分析法检测.C E A㊁A F P电化学发光免疫分析法检测试剂盒均购于德国R O C H E公司,检测操作步骤严格按照试剂盒说明书进行.检测仪器的状态和质量控制情况均良好.1.3㊀观察指标分别比较应用胶乳增强透射免疫比浊法㊁电化学发光免疫分析法检测血清中C E A㊁A F P的水平.将两种检测方法的C E A㊁A F P检测结果进行P e a rGs o n相关性分析.分别对两种检测方法检测血清中C E A㊁A F P水平诊断肿瘤的受试者工作特征曲线(R O C曲线)进行分析,统计R O C曲线下面积(A U C).1.4㊀统计学方法采用S P S S25.0统计学软件进行数据的处理和分析,符合正态分布的计量资料用xʃs表示,两样本间比较采用t检验.相关性分析采用P e a r s o n相关性分析的方法.用受试者工作特征曲线(R O C曲线)分析各指标对消化道出血诊断的准确性.曲线下面积(A U C)采用Z检验.以P<0.05为差异有统计学意义.2㊀结果2.1㊀两种检测方法检测结果比较两种检测方法所得C E A㊁A F P值比较,差异无统计学意义(P>0.05).见表1.62南昌大学学报(医学版)2020年12月,第60卷第6期表1㊀两种检测方法C E A ㊁A F P 值的比较n =210,x ʃs方法C E A/(n g m L -1)A F P/(n g m L -1)胶乳增强透射免疫比浊法2.54ʃ0.652.29ʃ0.37电化学发光免疫分析法㊀2.49ʃ0.542.31ʃ0.41t 0.8570.525P0.3920.6002.2㊀两种检测方法检测C E A ㊁A F P 的相关性分析P e a r s o n 直线相关性分析结果显示,两种方法检测所得C E A ㊁A F P 值呈正相关(r =0.733㊁0.669,P <0.01).见图1 2.电化学发光免疫分析法CEA/(ng ·mL -1)r =0.733P <0.0154321043215电化学发光免疫分析法AFP/(ng ·mL -1)r =0.669P <0.0154321043215胶乳增强透射免疫比浊法图1㊀两种检测方法检测C E A 的相关性分析胶乳增强透射免疫比浊法图2㊀两种检测方法检测A F P 的相关性分析2.3㊀两种检测方法检测C E A ㊁A F P 诊断肿瘤的R O C 曲线分别将C E A ㊁A F P 纳入肿瘤诊断的R O C 曲线分析中.胶乳增强透射免疫比浊法检测C E A ㊁A F P 的结果在诊断肿瘤中的A U C 分别为0.674㊁0.655,差异均有统计学意义(P <0.001),见表2㊁图3A .电化学发光免疫分析法检测C E A ㊁A F P 的结果在诊断肿瘤中的A U C 分别为0.606㊁0.639,差异均有统计学意义(P <0.001).见表3㊁图3B .表2㊀胶乳增强透射免疫比浊法A U C 统计结果检验结果变量A U C 标准错误P渐近95%置信区间下限上限C E A 0.6740.077<0.0010.3540.836A F P0.6550.089<0.0010.3620.841表3㊀电化学发光免疫分析法A U C 统计结果检验结果变量A U C 标准错误P渐近95%置信区间下限上限C E A 0.6060.054<0.0010.3320.874A F P0.6390.061<0.0010.3450.856敏感度A0.80.60.40.21.01.00.80.60.40.20CEA AFP 参考线敏感度B0.80.60.40.21.01.00.80.60.40.2CEAAFP 参考线1G特异性1G特异性A :胶乳增强透射免疫比浊法;B :电化学发光免疫分析法.图3㊀两种方法检测血清中C E A ㊁A F P 诊断肿瘤的R O C 曲线3㊀讨论㊀㊀临床检验学中检测血清中C E A ㊁A F P 的方法较多,如酶联免疫吸附试验㊁电化学发光免疫分析法㊁胶乳增强透射免疫比浊法等.酶联免疫吸附试验的操作比较简单,费用较低,临床可广泛应用,特72谌秋华等:胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测C E A 和A F P 的结果对比别适用于基层医院对肿瘤患者的筛查,但该方法的检测敏感性较低,准确度和稳定性并不十分理想,因此检测的结果与金标准之间存在一定的差距[5].电化学发光免疫分析法起源于20世纪90年代,本质上是一种新型标记免疫分析方法,实验原理是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段,通过将一些容易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上,再通过这些标记物的增强放大效应来显示反应体系中抗原或抗体的性质与含量[6G7].电化学发光免疫分析法的检测速度较快,检测结果的准确度较高,应用广泛,且实验的过程具有较高的自动化的特点,因此在临床相关指标的检测中应用较为广泛[8G9].然而,电化学发光免疫分析法所使用的设备和试剂目前均需进口,因此价格较为昂贵,导致临床应用存在一定的局限性.胶乳增强透射免疫比浊法是将液相内的沉淀反应与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一种指标分析技术[10G11].当抗原㊁抗体在特定的电解质溶液中进行反应时,将形成小分子免疫复合物(免疫复合物微粒),导致反应液出现一定的浊度,经过相关的仪器检测后,可通过吸光度来进行分析(待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关关系),与相应的标准曲线进行对照后,即可计算得出血清中相关检测指标的水平[12G13].胶乳增强透射免疫比浊法具有操作简单㊁反应迅速㊁成本低廉的优势,检测过程不需要使用价格昂贵的仪器,实验试剂无需进口,因此在临床上值得推广使用[14].本研究结果中,分别应用胶乳增强透射免疫比浊法㊁电化学发光免疫分析法检测血清中C E A㊁A F P水平,检测结果显示两种检测方法检测得到的血清C E A㊁A F P浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05).相关性分析结果也显示,胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清中C E A㊁A F P的结果均具有明显正相关关系(r=0.733㊁0.669,P<0.01).以上均说明胶乳增强透射免疫比浊法在血清C E A㊁A F P浓度的检测方面,其检测结果与电化学发光免疫分析法相比较基本相当.在临床肿瘤的诊断中,笔者分别将C E A㊁A F P纳入肿瘤诊断的R O C曲线分析中,分析结果发现:两种检测方法检测血清中C E A的结果在肿瘤诊断中的A U C 值分别为0.674㊁0.606,差异均有统计学意义(P<0.01);两种检测方法检测血清中A F P的结果在肿瘤诊断中的A U C值分别为0.655㊁0.639,差异均有统计学意义(P<0.01).提示分别使用胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清中C E A㊁A F P的结果,在肿瘤诊断中的价值基本一致.综上所述,胶乳增强透射免疫比浊法对血清C E A㊁A F P的检测结果与电化学发光免疫分析法的检测结果基本一致,且具有操作简单㊁成本低廉的优点,其检测结果可以为临床肿瘤的诊断提供参考.参考文献:[1]㊀C A L I S T EX,L A S E RA,D A R L I N GR3r d.C E Av s.s t e n t i n p aGt i e n t sw i t h a c u t e s t r o k e s:a r e t h e y e q u a l l y e f f e c t i v e?[J].J C a rGd i o v a s c S u r g(T o r i n o),2020,61(2):133G142.[2]㊀G A B A K,R I N G L E BP A,H A L L I D A Y A.A s y m p t o m a t i cc aGr o t i d s t e n o s i s:i n t e r v e n t i o no rb e s tm e d i c a l t h e r a p y?[J].C u r r N e u r o lN e u r o s c i R e p,2018,18(11):80.[3]㊀周彬,陆惠波,侯凯哲.血清甲胎蛋白㊁甲胎蛋白异质体与肝癌患者的近期疗效和预后的关系及其诊断价值分析[J].国际消化病杂志,2020,40(1):63G66,70.[4]㊀梁海清,王勇,纪永健,等.不同A 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K效应及与干化学法的一致性比较[J].中国中西医结合肾病杂志,2020,21(3):221G223.(责任编辑:罗芳)82南昌大学学报(医学版)2020年12月,第60卷第6期。
06第六章 免疫比浊分析
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第六章
免疫比浊分析
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
(一)BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的一种
改良。以发光二极管作为光源,检测前向角
13~24度的散射光,然后利用硅化光电二极 管接收散射光信号,经过微电脑处理,与标 准曲线进行比较,最后转换成待检物质的浓 度。
复合物产 产生速率 生总量
8 13 25 60 150 230 300 360 415 450 480 500 — 5 12 35 90 80 70 60 55 45 30 20
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免疫比浊分析
(二)技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关,需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。此外,要保证待测样本血清的性 状符合要求,如严重脂血等即为不合格样本。
4
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免疫比浊分析
在抗原或抗体量一定的条件下,可以利用比 浊仪在光源的光路方向上测定透射光强度与 入射光强度的比值或吸光度,来判断待测抗 原的量,这种方法称为透射比浊法 。
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免疫比浊分析
透射免疫比浊法光路图
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第六章
免疫比浊分析
(二)技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
影响检测结果,因此需要选择均匀一致的
胶乳颗粒。此外,试剂需要加保护剂以提
高其稳定性,所用器皿要洁净,避免杂质 微粒的干扰。
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第六章
免疫比浊分析
(三)方法学评价 该法敏感度高,试剂稳定,个体免疫复 合物对结果影响也小,因此结果稳定、可 靠,特异性好,精确度高,且不需要特殊
沉淀反应、免疫电泳
一.液体内沉淀试验
(一)絮状沉淀反应
(flocculation)
抗原、抗体特异性结合,在电解质存 在的情况下出现肉眼可见的絮状/块状 沉淀
既可在试管内进行,也可在玻片上进行。 用于:玻片法常用于定性测定
试管法:半定量测定
在沉淀反应前,应测试抗原、抗体间最适 比例,方法有抗原稀释法、抗体稀释法、 方阵滴定等。
增浊剂(促聚剂):PEG、Tween-20可促进
IC快速形成
免疫比浊方法分类
透射免疫比浊 散射免疫比浊 胶乳免疫比浊
1. 透射免疫比浊法
原理: 缓冲液中,先加入已知过量Ab, 然后加入待测Ag,AgAb复合物的量随Ag 量的增加而增加,反应液的浊度亦随之增 加,与一系列标准品对照,即可算出未知 Ag含量。
本法不易选择适用的乳胶,同时Ab与胶 乳结合也困难。
二.凝胶内沉淀试验
在凝胶介质(琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶) 中进行的沉淀反应
原理
可溶性抗原与相应抗体在电解质 存在下,在琼脂基质中扩散,当两者 相遇,比例恰当时结合,可出现肉眼 可见的沉淀线/沉淀环。
(一)双向琼脂扩散试验
(简称 双扩
double immunodiffusion)
方法:
已知定量Ab+琼脂混合,制板 在玻板一端打孔、加梯度Ag
电泳
根据所知样品梯度含量绘制标准曲线
查出待测样品含量
-
+
1
2
3 4
5
待测
火箭免疫电泳
优点与用途:
与单扩相同,已知Ab定量检测Ag (IgG/IgA/IgM),时间短,敏感度高(ng/ml)。
(三)免疫电泳 (immunoelectrophoresis)
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胶乳免疫比浊法和免疫学法
首先,让我们来谈谈胶乳免疫比浊法。
胶乳免疫比浊法是一种常用的免疫学检测方法,它利用胶乳颗粒作为载体,将抗原或抗体与胶乳颗粒偶联,形成胶乳免疫复合物。
当抗原与抗体结合时,会形成较大的颗粒团簇,从而导致溶液的浊度增加。
通过测量溶液的浊度变化,可以间接地定量检测抗原或抗体的存在量。
这种方法操作简便,灵敏度高,被广泛用于临床诊断和科研实验中。
其次,让我们来谈谈免疫学法。
免疫学法是一种通过检测免疫反应来识别和测定抗原或抗体的方法。
免疫学法包括很多种技术,比如ELISA(酶联免疫吸附实验)、免疫印迹、免疫荧光等。
这些方法都是基于免疫反应原理,通过抗原与抗体的特异性结合来进行检测。
免疫学法可以用于检测感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤标志物等,具有高度的特异性和灵敏度。
总的来说,胶乳免疫比浊法和免疫学法都是用于检测抗原和抗体的实验方法,它们在原理和应用上有所不同,但都在医学诊断和科研领域发挥着重要作用。
希望这些信息能够帮助你更好地理解这两种方法。