CLSI微量稀释法

最小抑菌浓度(MIC)测定

以肺炎链球菌ATCC49619 为质控菌株，采用美国临床和实验室标准化委员会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法，MIC值参照国家临床实验室委员会2002年标准。抗菌药物稀释范围（毫克/毫升）：氨苄青霉素（1–16）、头孢噻呋（0.03–8）、环丙沙星（0.015–4），红霉素（0.125–16）、氟苯尼考（0.12–32），青霉素（0.015–8）、大观霉素（1–256），四环素(0.06–32)、泰妙菌素（0.25–32）、替米考星（2–64）、甲氧苄啶和磺胺甲恶唑（0.015–8）。每株菌液接种于含不同药物浓度的96 孔微量板中，35 ℃培养20–24 h ，观察结果，同时以A TCC27090 和

ATCC25922 作为抗菌药物的敏感性试验质控菌株。

1.5 最小抑菌浓度(MIC)测定以肺炎链球菌ATCC49619 为质控菌株，采用美国临床和实验

室标准化委员会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法，检测临床上常用的19种抗生素对红斑丹毒

丝菌安徽分离株的MIC。

1.5.1 菌株活化将红斑丹毒丝菌安徽分离株接种于3 mL BHI肉汤(含5%犊牛血清)中，37℃振荡(120 r/min)培养12 h，在对数生长期(600 nm吸光度为0.883)分别在BHI琼脂平板中传

代两次，挑取单菌落划线接种到CAMHA上，培养18-24 h，再挑取单菌落接种于含5%胎

牛血清的CAMHB中，培养至浊度为0.5麦氏比浊单位，此时菌液浓度约为5×108 CFU/mL，用CAMHB做1：1000稀释备用。

1.5.2 抗菌药物储存液的制备称取各种抗生素粉末，根据药物的理化性质及使用说明进行稀释配制，分别配制成终浓度为1280 μg/mL的药物储存液，分装至1.5mL EP管中，用封口膜封口后存至-80℃冰箱保存备用，可保存半年时间内不失活，避免反复冻融。

1.5.3 MIC的测定在96孔微量稀释板中连续倍比稀释药物储存液，药物初始浓度为128 μg/mL，得到一系列100μL药物梯度稀释液(药物浓度范围为128~0.0625 μg/mL)，空白对照只加100 μL培养基，阴性对照加菌悬液和培养基的混合物100μL。置于35℃温箱中培养24 h。在读取所测试菌株的MIC前，检查阴性对照管的细菌生长情况是否良好，同时检查空白对照是

否污染，质控菌株的MIC值是否处于质控范围。肉眼观察没有细菌生长的最低药物浓度即

为该药物的MIC，每组试验重复三次。根据CLSI提供的人用抗生素的判定标准(M45-A2)

进行结果判定[6](表1)。

表1 MIC的判定标准

Table 1 MIC's criteria

抗生素种类

抗生素名称

MIC(μg/mL )

肺炎链球菌ATCC49619范围 StreptococcuspneumoniaeATC

C 49619 range

敏感

中敏 耐药

Antibiotics Antibiotics Name sensitive Sensitized Resistance 青霉素类Penicillins 青霉素（PEN ） ≤0.12 0.25~2 ≥4 0.25~1 氨苄青霉素(AMP) ≤0.25 0.5~4 ≥8 0.06~0.26 头孢类Cephalosporins

头孢曲松(CRO) ≤1 2 ≥4 0.03~0.12 头孢噻肟(CTX) ≤1 2 ≥4 0.03~0.12 头孢唑啉(CFZ)

≤1 2~32 ≥32 0.03~0.12 大环内酯类Macrolides 红霉素(ERY) ≤0.25 0.5 ≥1 0.03~0.12 泰乐霉素泰(TYL) ≤0.25 0.5 ≥1 0.03~0.12 喹诺酮类Quinolones

环丙沙星(CIP) ≤1 2 ≥4 0.25~1 加替沙星(GAT) ≤1 2 ≥4 0.015~0.06 氧氟沙星(OFX) ≤1 2 ≥4 1~4 恩诺沙星（ENR ）

≤0.25 0.5~1 ≥2 0.015~0.06 林克酰胺类Lincosamides 克林霉素(CLI) ≤0.25 0.5~1 ≥2 0.03~0.12 林肯霉素(LIN) ≤0.25 0.5~1 ≥2 0.03~0.12 四环素类Tetracycline 四环素(TET) ≤4 8 ≥16 0.06~0.5 强力霉素(DOX) ≤4 8 ≥16 0.015~0.12 氨基糖苷类 Aminoglycosides

庆大霉素(GEN) ≤2 4 ≥8 2~8 链霉素(STR) ≤2 4~32 ≥64 2~8 卡那霉素(KAN)

≤2 4~32 ≥64 2~8 氯霉素类Chloramphenicol

氯霉素(CHL)

≤8

16

≥32

2~8