FISH试剂盒说明书
吉玛基因 FISH 检测服务 实验操作说明书
股票代码：430601FISH 检测服务一、检测机制：RNA FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种利用直接法荧光基团标记或间接法生物素等标记的寡聚核苷酸探针，与组织细胞中RNA 按照碱基互补原则形成靶基因与探针的杂交体，经荧光显微镜下显影目标信号，即可对测定的核酸序列如miRNA,lncRNA,circRNA 等进行相对定性、定位分析，也可通过标记不同荧光探针进行基因共定位研究。
二、服务流程：1.客户提供：靶基因信息，细胞或组织样本2.我们提供：1)探针的设计及合成2)FISH 检测实验完整步骤3)Merge 后图片及原始图片3.质量保证：设置阴性及阳性对照组，保证所提供的实验结果可信、客观、真实。
三、Fish 实验操作步骤：实验具体操作步骤可参考吉玛基因fish 试剂盒操作说明书下载网址如下：https:///operation_manual2.php?cateid=155FISH 探针设计合成细胞爬片/组织切片制备FISH 检测Confocal 拍照及结果判断股票代码：430601四、模式结果展示：分组MERGE结果某冰冻切片某石蜡组织某细胞爬片股票代码：430601五、实验常见问题及解决方案1.常规RNA FISH实验常见问题及解决方案，下载网址如下：https:///public/upload/1615961754.pdf2.RNA FISH(SA-Biotin)实验常见问题及解决方案，下载网址如下：https:///public/upload/1615961785.pdfB046-V001-20210514。
莱卡FISH说明书
FISH 技术简介（一）FISH 技术1．概要FISH是荧光现场合成的英文名称的缩写，它是一个强有力的基因评估工具，能对内层、外层细胞基因中的特定染色体畸变进行显微识别及定位。
恶性肿瘤、神经呆滞及畸形病症中全部或部分染色体的变化能被观察到。
尽管传统的分子遗传学有了进步，但是检查这些基因非平衡还是受到限制。
染色体光谱分析是全面分析这些情况的一个有效工具。
但由于难于准备临床肿瘤样品、解释复杂的重排列、决定哪些为平衡而哪些为不平衡，因而仍有局限性。
尽管KAROTYPING正逐步变得自动化，但最终结果仍依赖于操作员的判断。
正是由于这些局限，激励了荧光现场合成技术的发展。
使用染色体特定DAN探测，能对染色体上各处基因位置绘图，并作为光谱技术的补充。
荧光现场合成用于基因定位。
用一种试剂处理DNA，将DNA 双绞链解链，并引入用已知基因特征测试DNA分子，在基因的位置作合成，给探针标记荧光，因而标识了基因的位置。
FISH 技术可用于膀胱肌瘤、乳房肿瘤、脑瘤等的前期诊断。
然而，这种技术可用于整个生物学，特别是在医药、分子生物学、细胞遗传学等领域，并且，从植物科学界，如用于研究农作物的野生祖先的试验亦传来有趣的结果。
2．FISH 技术荧光是一种光，由样品对一种变波长光的反应而产生。
样品中引起荧光的分子叫做荧光物。
与激励光的光子相互作用，引起荧光物中的一个电子向一个高能量级运动，当电子跃回其原能量级时，向激励光发出不同的波长。
LEICA Q550CW 细胞遗传学工作站可产生数字化图像，而单独用显微镜不能轻松地取得。
如下是几个FISH 用于数字图像的应用：。
荧光的位置可以看到。
可决定荧光的强度及荧光物的数量。
强度的变化可反映检测环境的变化在这些应用科学中，所有的因子可能很有趣，但头一条，即位置可见是最重要的。
对同一对象，可用几个荧光探针，显示不同的特征。
每一个探针可用一束窄波长光照亮，它可产生一种长波长的荧光，因而可看到全部的探针。
两种FISH试剂盒检测羊水染色体的比较
两种FISH试剂盒检测羊水染色体的比较目的应用两种荧光原位杂交（FISH）试剂盒检测羊水染色体，比较两者在临床的应用效果。
方法采用北京金菩嘉和美国雅培Vysis生产的FISH试剂盒对30例未培养的羊水进行染色体检测，比较两者在信号强度和杂交率的差异。
结果30例样本均获得FISH检测结果，且两种试剂临床诊断符合率达到100%，杂交率无统计学意义（P>0.05）。
Vysis试剂21/13染色体荧光杂交信号较强，金菩嘉试剂18染色体信号清楚，不易融合。
结论Vysis与金菩嘉两种FISH检测试剂应用染色体异常产前诊断均可达到同样的临床诊断效果。
[Abstract] Objective Two fluorescence in situ hybridization （FISH）kits were utilized to inspectamniotic fluid chromosomes，to compare the both kits in clinical application. Methods Two fluorescence in situ hybridization （FISH）kits from Beijing GPmedical and Abbott were utilized to inspect 30 samples of amniotic fluid chromosomes.Their differences in respect of signal intensityand hybridizing were compared. Results All samples of the 30 cases were successfully detected by the both FISH kits.The hybridizing ratethere was no significant difference （P>0.05）.Vysis kits 21/13 chromosome fluorescent hybridization signal was stronger than the GP kits’.The GP kits 18 chromosomes signal was clear and not easy to fuse. Conclusion the FISH kits from the Beijing GPmedical and Abbott Vysis can make the same prenatal diagnosis for the chromosome abnormality.[Key words] Fluorescence in situ hybridization；Prenatal dignosis；Chromosomal aneuploid熒光原位原位杂交技术（FISH）基于分子细胞遗传学发展的学科，始于1998年，至今在临床研究中广泛应用，在产前诊断领域更是不断完善和推广[1-3]。
FISH说明书中文
VYSIS说明书试验程序原理21 黄Y 黄X 绿在原位杂交X绿光探针centromerregion是一种在一个细胞标本里能看见特定的核酸序列(尤其是DNA)的技术，(FISH) 包括精确的单股荧光标记DNA探针的退火与目的基因互补. 探针荧光的DNA 位点能通过直接的检测用荧光显微镜看到。
羊水标本包括间期细胞用标准的细胞遗传学方法附着在玻片上。
样本标本DNA变性，然后与CEP x/y and LSI 21 探针杂交。
在杂交后，多余的和未结合的探针被一系列洗涤所除掉。
染色体和核DNA用特殊的染料被复染，复染剂DAP发蓝光.用装上适合的激动剂与发射滤器的荧光显微镜观察CEP X/Y 和LSI 21 DNA 探针杂交，能看到强烈的橘黄光和绿色的荧光信号和蓝色的复染核。
通过显微镜检查21 X, and Y染色体点计，荧光染色区域明亮地突出于核的DNA普通的蓝色荧光(通过DAPI复染) . FISH 程序能使核的21,X,and Y染色体点计可见。
CEP X/Y DNA 探针是一种绿光和橘黄光混合物，直接标记荧光的DNA探针，分别在X和Y染色体的DXZ1 和DYZ3 区。
LSI 21 DNA 探针是一种橘黄色光直接标记的荧光DNA 探针，包含特异性DNA 序列对应位于21号染色体21q22.13 到21q22.2 区的D21S259 和D21S342 基因座.所有探针混合物都在杂交缓冲液中经过了预变性以便于应用。
本试验设计目的是用荧光原位杂交法探测和量化21,X,and Y染色体。
试剂和仪器提供的材料本试剂盒包括四种试剂，够约20次测试。
储存和处理储存未开封的试剂盒做为一个整体在-20 ℃避光，避湿.20 x SSC 应单独储存于室温。
储存探针对照玻片在一个密封的容器中在-20℃，应用干燥剂防潮.每一个未开封的试剂盒成分的失效日期标于独立的标签上。
这些储存条件适用于所有开封及未开封的组成部分。
需要但未提供的材料实验室试剂超纯甲酰胺储存于+4℃至多一个月（从收到起，具体看制造商的建议的详细信息）浓缩盐酸(12N) HCL1N 氢氧化钠纯净水(蒸馏或去离子的or Milli-Q).储存于室温中carmoy’s 固定剂(3:1 甲醇:醋酸)drierite干燥剂1x 胰蛋白酶/EDTA(0.05% 胰蛋白酶,0.53Mm EDTA -4Na 于Hanks 平衡盐溶液中without Cacl2,Mgcl2.6H2O and M gSO4-7H2O)0.56%氯化钾实验室器械荧光显微镜（装备建议的滤光器）定相对照光学显微镜预先清洁的显微镜玻片玻片加温器(45 ℃-50 ℃)22mm x22mm玻璃盖玻片(1-10ul)微升消毒枪头聚丙烯微离心管(0.5ml or 1.5ml)定时器磁力搅拌器涡流微离心机量筒水浴(67±2℃和73±1℃)空气孵化器恒温箱(37℃)菱形头划线器湿室钳子（镊子）无菌注射器(5ml)Coplin 缸(6) 建议型号:wheaton 产品.No.900620 垂直染缸PH 计和PH 试纸校准的温度计金属试管架橡胶粘固剂0.45um 孔过滤器显微镜器材和滤光器显微镜:需要epi- 照明荧光显微镜观察荧光,应该检查以确定正确操作一台显微镜判断适合的普通DNA 染色，如DAPIpropidium lodide, and 阿的平可能不适合FISH ,应该常规显微镜清洁和制造商的技术顾问做定期的调整。
荧光原位杂交FISH试剂盒
荧光原位杂交（FISH）试剂盒说明书荧光原位杂交（FISH）试剂盒说明书一、 检测原理荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization)，简称为FISH，是一种重要的非放射性原位杂交技术。
它的基本原理是：用已知的荧光素标记单链核酸为探针，按照碱基互补配对原则，与待检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA特异结合，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。
随后在荧光显微镜下对待测DNA 进行定性、定量或相对定位分析。
二、 组分和保存条件成分容量（50 tests）储存二甲苯10ml 室温20×SSC 10ml 室温蛋白酶K 20ul -20℃杂交缓冲液8ml 室温去离子甲酰胺14ml 室温DEPC水5ml -20℃DAPI 25ul -20℃目的基因探针2OD -20℃阳性对照探针2OD -20℃阴性对照探针2OD -20℃注意：1.20×SSC用一级纯水稀释成2×SSC使用。
2.二甲苯、去离子甲酰胺在通风橱使用。
3.蛋白酶K用2×SSC按照1:1000稀释。
4.探针应避光稀释并保存，且实验过程中加入探针后的操作应在避光条件下进行。
5.DAPI用PBS 按照1:1000稀释，需避光保存和使用。
三、 实验方法1. 脱蜡：1）石蜡切片在60ºC烤箱中预热30 min；2）每张切片滴加二甲苯100ul中60ºC放置20min；3）在梯度酒精中（100%、95%、90%、80%）室温孵育各10min。
2. 蛋白酶处理：1）蛋白酶K溶液预热至37ºC；2）每张切片滴加蛋白酶K溶液100ul，37ºC孵育20min；3）每张切片滴加2×SSC溶液100ul在室温下洗切片3次，每次1min；4）梯度酒精70%、80%、90%、100%（-20 ºC预冷）脱水，每次2min，空气中干燥。
鲑鱼(C4)ELISA试剂盒说明书
鲑鱼(C4)ELISA试剂盒说明书鲑鱼(C4)ELISA试剂盒说明书检测范围96T40ng/L -1200ng/L鲑鱼(C4)ELISA试剂盒说明书使用目的本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中降钙素原（PCT）含量。
鲑鱼(C4)ELISA试剂盒说明书Specimen requirements1 specimen collection as soon as possible to carry out the extraction, extraction according to the relevant literature, the extraction should be carried out as soon as possible after the experiment. If you can not immediately carry out the test, the specimen can be stored at -20 degrees C, but should avoid repeated freezing and thawing2 could not detect the NaN3 containing samples, because NaN3 inhibited the activity of horseradish peroxidase (HRP).Salmon (C4) ELISA reagent box manual operation step 2. Add: are respectively arranged in the blank hole (blank control wells without sample and ELISA, the rest of the each step of the operation is same), standard orifice, test sample hole. The enzyme labeled packet is in standard accurate sample of 50 UL, the tested sample hole Zhongxian sample dilution 40 g l, and then to be measured is added 10 mu l of sample (sample final dilution degrees for 5 times). The sample is added to the bottom of the enzyme labeled plate hole, as far as possible without touching the wall of the hole.3 temperature Education: with the sealing plate membrane sealing plate 37 degrees Celsius for 30 minutes.4 solution: 30 times the concentration of the washing liquid with distilled water 30 times diluted standby5. Washing: be careful torn off the seal plate membrane, discard liquid, drying, washing liquid to fill each hole, standing for 30 seconds after the discard, repeat 5 times, pat dry.6 enzymes: each hole is added to the enzyme labeled reagent 50 mu L, except the blank hole.7 Wen Yu: operation with 3.8 washing: operation with 5.9 Color: each hole to add the color agent A50 L, and then add the color agent B50 L, gently shake mix, 37 degrees to avoid light color 15 minutes.10 termination: 50 mu l per hole plus end solution, termination reaction (at this time blue, yellow).11: the determination of blank air zero absorbance at 450nm in order to measure the hole (OD). The determination should be carried out within 15 minutes after the鲑鱼(C4)ELISA试剂盒说明书计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
斑马鱼(Zebra fish)脂联素(ADPN)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断斑马鱼（Zebra fish）脂联素（ADPN）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被脂联素（ADPN）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的脂联素（ADPN）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、100、200、400、800、1600ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
鱼过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析(ELISA)
鱼过氧化氢酶（CAT）酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鱼血清，血浆及相关液体样本中过氧化氢酶（CAT）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼过氧化氢酶（CA T）水平。
用纯化的鱼过氧化氢酶（CA T）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入过氧化氢酶（CA T），再与HRP标记的过氧化氢酶（CAT）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CA T）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鱼过氧化氢酶（CAT）的浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
FISH实验标准操作程序(FISH实验资料一)
FISH实验标准操作程序（成都新基因格实验室内部完整版）一实验目的通过荧光原位杂交实验，辅助临床医疗诊断：提高优生优育（产前诊断中的应用）、提前预防及治疗病患（产后诊断及膀胱癌诊断等）、对肿瘤确诊病人评估预后及中位生存期、无病痛生存期(Dsease-Free Srvival,DFS)，指导用药及治疗方案（针对乳腺癌、胃癌患者的HER-2基因诊断，针对CML患者的bcr/abl融合基因诊断等）。
二实验原理利用DNA碱基对的互补性，将直接标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的目标样本的DNA(玻片上的标本)杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体的情况 三仪器设备及耗材（一） 仪器设备：①：全自动分子杂交仪②：荧光显微镜及分析软件③：恒温水浴箱3个以上（小型号）④：冰箱2台（提供试剂和标本存放，4摄氏度和-20摄氏度）⑤：离心机（用于羊水标本以及血液标本，绒毛标本处理过程的离心）⑥：通风橱（配固定液，等操作）⑦：迷你离心机（探针，缓冲液的离心。
可离1.5ml管、0.2ml管）⑧：考普林瓶15个（FISH实验中盛放各种试剂，溶液）⑨：移液枪（5ml，1000ul，200ul，10ul）放于杂交室和制备室。
10：震荡混匀器11：计时器，温度计，温度湿度显示器。
12：载玻片盒（用于存放已经FISH实验后的FISH片子）13：洗耳球，吸量管（10ml）,烧杯，容量瓶，电子天平，常用天平称。
（二）耗材：载玻片（最好，带磨砂的，写用铅笔患者编号，因为不带磨砂的贴标签会被乙醇洗掉。
）大盖玻片（方形，用于镜检）小盖玻片（方形或圆形，圆形佳，用于分子杂交时候封片）离心管（10ml，1.5ml，200ul）3ml一次性吸管个人防护用品,标签纸等。
四实验样本及试剂样本：外周血，骨髓血，羊水，尿液，病理组织切片等。
试剂：4%NaOH液、0.1%NP-40、20XSSC、2XSSC、0.075M Kcl、1M Hcl、PBS缓冲液、0.08mg/ml 胃蛋白酶工作液、200ug/ml蛋白酶K工作液、检测试剂盒等。
鱼甲状腺素(T4)ELISA试剂盒使用说明书
鱼甲状腺素(T4)ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鱼血清，血浆及相关液体样本中鱼甲状腺素(T4)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼甲状腺素(T4)水平。
用纯化的鱼甲状腺素(T4)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入甲状腺素(T4)，再与HRP 标记的甲状腺素(T4)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的甲状腺素(T4)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鱼甲状腺素(T4)浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
FISH试验操作步骤FISH试剂1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成
FISH实验操作步骤FISH试剂（1）1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成，储存于4℃；（2）20×SSC（pH7.0）；（3）2×SSC，由20×SSC溶液稀释而成；FISH试剂（1）1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成，储存于4℃；（2）20×SSC（pH7.0）；（3）2×SSC，由20×SSC溶液稀释而成；（4）25mg/ml蛋白酶K消化液。
（5）变性液(70％甲酰胺+2×SSC，pH7.0)：4ml20×SSC；8ml蒸馏水；28ml甲酰胺。
每次新鲜配制。
（6）杂交后洗涤液：20×SSC4ml；蒸馏水16ml；甲酰胺20ml。
每次新鲜配制。
调节pH前升至室温。
实验步骤1、脱蜡：1）二甲苯脱蜡3次，每次5min；2）100％酒精两次，每次2min；3）移出酒精，斜置切片，标记末段向下，空气干燥。
2、蛋白酶处理:1）每个染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配制方法如下：2×SSC40ml倒人Facal管，在水浴槽中预热。
将消化酶液加入管内，摇动直到酶溶解。
2）37℃水浴槽中预热染色缸和蛋白酶K溶液。
37℃孵育20min。
3）×SSC在室温下漂洗切片3次，每次1min。
4）梯度酒精脱水（-20℃预冷）。
3、变性：1）每一个立式染色缸配制40ml变性溶液；2）78℃水浴槽中平衡预热混合液染色缸；3）78℃孵育8min；4）即移入-20℃预冷70%酒精的染色缸内2min，再依次移入80%、90%和100%的-20℃预冷酒精内，每缸2min；5）空气干燥。
4、杂交：1）准备探针；2）取一个较大的湿盒，交叉放置切片；3）滴10μl探针在切片的组织上，加盖玻片；4）盖上湿盒盖，37℃孵育12h～16h。
杂交后的水洗：5）镊子小心去除盖玻片；6）43℃预热杂交后水洗溶液40ml水洗切片15min；7）2×SSC(37℃)洗两次，每次10min；8）切片放人染色缸的1×PBS内待检测，勿使切片干燥。
学生实验FISH操作步骤
FISH实验操作步骤（教员版）一、第一天（FISH一）：染色体制备实验前准备：1.KCL低渗液37℃预热2.载玻片4℃预冷实验步骤：同学生实验指导步骤要求：两人一组，每人制片一张，一张进行吉姆莎染色，一张第二天进行FISH杂交，记住细胞位置（便于第二天杂交定位），玻片自然风干，室温过夜二、第二天（FISH二）：FISH杂交实验前准备：1.胃蛋白酶37℃水浴预热30分钟2.打开病理烘漂仪，将漂片，摊片、烘片均设置到85℃实验步骤（未注明温度均为室温）：1.水合：将染色体制备的玻片于PBS中浸泡5 min。
2. 固定：4%的甲醛-PBS，2min。
3.漂洗： PBS洗3次，每次2min。
4.消化： 37℃胃蛋白酶消化10min。
5.漂洗： PBS洗2次，每次2min。
6.再固定：4%的甲醛-PBS，2min。
7.漂洗： PBS洗3次，每次2min。
8. 梯度乙醇脱水：在70％、95％、100％乙醇各脱水5min。
9. 在空气中干燥玻片10.预热：将载玻片、盖玻片、杂交液、枪头盒于85℃预热5min11. 变性：加12ul杂交液至载玻片细胞处，盖上盖玻片，在85℃变性3-10min,避光。
注：变性温度在（80℃-90℃均可，不得低于75℃）此后步骤均避光。
12.杂交：37℃，避光杂交1小时。
13. 漂洗：37℃，杂交洗液1洗2次，每次15min。
14．漂洗及复染：37℃，杂交洗液2洗3次，每次5min。
第二次洗涤后，取出载片，稍干，加10ulDAPI，盖上盖玻片复染5分钟，再进行第三次洗涤。
15. 脱水：在70％、95％、100％乙醇各脱水5min，空气中干燥爬片。
16. 封片，荧光显微镜下观察结果。
注：本实验15步不做，14步完后直接封片，4度避光保存待观察。
FISH实验器材：一、试剂（用后及时补充）1.PBS 2瓶2.中性甲醛 1瓶3.O.O1M HCL 200ml,用时直接加入200ul蛋白酶混匀4.探针 1管，常温放置，用前5分钟预热5.杂交洗液1 1瓶6.杂交洗液2 1瓶7.梯度酒精各1瓶8.封片剂 1瓶9.DAPI 1管(已稀释，直接使用)10.镜头油 1瓶（荧光显微镜实验室）二、器材1.载玻片2.盖玻片3.镊子 2把4.手套5.卷纸6.湿盒 2个7.抗原修复盒 8个注意：1.课前清点补充试剂及耗材；2. 提前打开烘漂仪、水浴锅及空调3.胃蛋白酶需临时配制；4. 显微镜油只在观察荧光时用。
p53基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书
p53基因检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书【产品名称】通用名称：p53基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）英文名称：FISH detection Kit for the p53 gene【包装规格】10人份/盒、20人份/盒【预期用途】本产品用于检血液、骨髓、尿液等组织样本中细胞p53基因缺失情况。
以辅助诊断和治疗。
【检验原理】荧光原位杂交法（Fluorescent In Situ Hybridization，FISH）能够使细胞中特定的核苷酸片段通过荧光而清楚的呈现，FISH试验过程中包含了双链DNA的解链，荧光标记的DNA探针能够与目标序列结合[2-3]。
杂交完成之后，多余的探针被清洗掉，同时，细胞核被复染剂4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色会发出蓝色的荧光。
本试剂盒包含一组探针：CEP17(绿色)位点和p53（红色）位点及FISH操作配套试剂。
正常细胞信号方式：每个细胞显示两个绿色信号及两个红色信号（即2G2R）。
异常细胞信号方式：细胞中出现两个绿色信号且红色信号少于两个。
【主要组成成分】【储存条件及有效期】p53/CEP17探针及DAPI于-20℃避光、密封储存；不应与有毒、有污染和有不良气味的物品混存；开封后，探针及DAPI 24小时内可在2-8℃避光、密封储存；24小时内不能使用完的，请放置于-20℃±3℃避光、密封储存；自生产之日起有效期为一年。
【适用仪器】本试剂盒探针杂交需在杂交仪上进行杂交，如ThermoBrite。
本试剂盒探针需在荧光显微镜下观察并分析结果。
所需荧光显微镜的配置包括：物镜：在FISH分析上，使用100×消色差浸油类型物镜可取得满意效果。
镜油：在浸油式物镜上使用的镜油应为低水平自发荧光配方，并专门在荧光显微镜上使用。
滤光片：建议客户处客使用探针前向滤片组供应商了解所使用的滤片组的详细情况，以便选择与标记荧光染料相适应的滤片组。
鲑鱼降钙素(SCT)ELISA试剂盒使用说明书
鲑鱼降钙素(SCT)ELISA试剂盒使用说明书鲑鱼降钙素(SCT)ELISA试剂盒使用说明书ELISA试剂盒规格：(1) 规格：96T 可以测90个样，5个标准孔，1个空白孔(2) 规格：48T 可以测42个样，5个标准孔，1个空白孔Elisa试剂盒种属:马铃薯,鹿,羊,鸡,鸭,鱼,人,大鼠,小鼠,豚鼠,仓鼠,裸鼠,兔子, 猪,犬,猴,马,牛等动植物。
鲑鱼降钙素(SCT)ELISA试剂盒使用说明书The experimental contents and methods1 in microtiter plates per hole adding test specimens of 50 L, with positive and negative control of the2 holes, each hole by adding positive (or negative) control of the 1 drops, and the blank control 1 hole.2 per hole adding enzyme conjugate 1 drops (except blank control), mixing, seal plate, 37 DEG C and then incubated for 30 minutes.3 discard hole liquid, washing liquid filled the hole, standing for 5 seconds, repeated 5 times after drying, pat dry.4 per hole Jiaxian reagent A and B solution 1 drops, mixing, sealing plate, 37 DEG C and then incubated for 15 minutes.5 per hole adding stop solution 1 drops, mixing.6 using the microtiter plate reader, the wavelength of 450nm, first with a blank hole zero, and then read the hole od.本试剂仅供研究使用标本：全血试验原理：HLA- B27试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知HLA-B27浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
FISH介绍中文
VYSIS说明书试验程序原理21 黄Y 黄X 绿在原位杂交X绿光探针centromerregion是一种在一个细胞标本里能看见特定的核酸序列(尤其是DNA)的技术，(FISH) 包括精确的单股荧光标记DNA探针的退火与目的基因互补. 探针荧光的DNA 位点能通过直接的检测用荧光显微镜看到。
羊水标本包括间期细胞用标准的细胞遗传学方法附着在玻片上。
样本标本DNA变性，然后与CEP x/y and LSI 21 探针杂交。
在杂交后，多余的和未结合的探针被一系列洗涤所除掉。
染色体和核DNA用特殊的染料被复染，复染剂DAP发蓝光.用装上适合的激动剂与发射滤器的荧光显微镜观察CEP X/Y 和LSI 21 DNA 探针杂交，能看到强烈的橘黄光和绿色的荧光信号和蓝色的复染核。
通过显微镜检查21 X, and Y染色体点计，荧光染色区域明亮地突出于核的DNA普通的蓝色荧光(通过DAPI复染) . FISH 程序能使核的21,X,and Y染色体点计可见。
CEP X/Y DNA 探针是一种绿光和橘黄光混合物，直接标记荧光的DNA探针，分别在X和Y染色体的DXZ1 和DYZ3 区。
LSI 21 DNA 探针是一种橘黄色光直接标记的荧光DNA 探针，包含特异性DNA 序列对应位于21号染色体21q22.13 到21q22.2 区的D21S259 和D21S342 基因座.所有探针混合物都在杂交缓冲液中经过了预变性以便于应用。
本试验设计目的是用荧光原位杂交法探测和量化21,X,and Y染色体。
试剂和仪器提供的材料本试剂盒包括四种试剂，够约20次测试。
储存和处理储存未开封的试剂盒做为一个整体在-20 ℃避光，避湿.20 x SSC 应单独储存于室温。
储存探针对照玻片在一个密封的容器中在-20℃，应用干燥剂防潮.每一个未开封的试剂盒成分的失效日期标于独立的标签上。
这些储存条件适用于所有开封及未开封的组成部分。
需要但未提供的材料实验室试剂超纯甲酰胺储存于+4℃至多一个月（从收到起，具体看制造商的建议的详细信息）浓缩盐酸(12N) HCL1N 氢氧化钠纯净水(蒸馏或去离子的or Milli-Q).储存于室温中carmoy’s 固定剂(3:1 甲醇:醋酸)drierite干燥剂1x 胰蛋白酶/EDTA(0.05% 胰蛋白酶,0.53Mm EDTA -4Na 于Hanks 平衡盐溶液中without Cacl2,Mgcl2.6H2O and M gSO4-7H2O)0.56%氯化钾实验室器械荧光显微镜（装备建议的滤光器）定相对照光学显微镜预先清洁的显微镜玻片玻片加温器(45 ℃-50 ℃)22mm x22mm玻璃盖玻片(1-10ul)微升消毒枪头聚丙烯微离心管(0.5ml or 1.5ml)定时器磁力搅拌器涡流微离心机量筒水浴(67±2℃和73±1℃)空气孵化器恒温箱(37℃)菱形头划线器湿室钳子（镊子）无菌注射器(5ml)Coplin 缸(6) 建议型号:wheaton 产品.No.900620 垂直染缸PH 计和PH 试纸校准的温度计金属试管架橡胶粘固剂0.45um 孔过滤器显微镜器材和滤光器显微镜:需要epi- 照明荧光显微镜观察荧光,应该检查以确定正确操作一台显微镜判断适合的普通DNA 染色，如DAPIpropidium lodide, and 阿的平可能不适合FISH ,应该常规显微镜清洁和制造商的技术顾问做定期的调整。
鲑鱼补体蛋白3(C3)elisa试剂盒使用方法
鲑鱼补体蛋白3（C3）elisa试剂盒使用方法鲑鱼补体蛋白3（C3）elisa试剂盒说明书elisa试剂盒常见构成部分：1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶为HRP和ALP。
2）抗体：在ELISA中应用的抗体可分为多克隆抗体（多抗）和单克隆抗体（单抗）。
3）抗原：在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。
重要有三类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。
4 人E选择素（ESelectin/CD62E）检测试剂盒包被：将免疫活性物质（抗原或抗体）结合于固相载体上的过程称为包被。
常用的料子有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素生物素间接包被法5）固相载体：固相载体是ELISA中用以分别结合标记物和游离标记物的重要手段，应与各种免疫活性物质有良好的结合性能而且不更改其免疫活性。
常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。
鲑鱼补体蛋白3（C3）elisa试剂盒样本试验前准备：ELISA试剂盒液体样本：包含血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培育上清等。
（1）血清室温血液自然凝固1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。
认真收集上清。
保管过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：应依据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合1020分钟后，离心20分钟左右（20003000转/分）。
认真收集上清。
保管过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：用无菌管收集。
离心20分钟左右（20003000转/分）。
认真收集上清。
保管过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培育上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（20003000转/分）。
认真收集上清。
（5）培育细胞检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.27.4）稀释细胞悬液，细胞浓度实现100万/ml左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
FISH荧光原位杂交操作说明
简便、快捷、准确－临床诊断中的FISH检测FISH（即荧光原位杂交）技术作为分子诊断的重要工具，在科研和临床诊断领域都有着广泛的应用。
FISH检测是利用荧光基团标记DNA探针，再将标记的DNA 探针与样本DNA进行原位杂交，最后在荧光显微镜下对荧光信号进行计数，以此作为诊断的依据。
FISH的操作简便快捷，结果直观准确，因此FISH成了许多疾病诊断的首选工具。
下面我们将从探针的设计，样本的制备，原位杂交和检测结果的观察等几个方面简单介绍FISH的操作。
探针是FISH检测灵敏度和准确性的关键。
FISH检测的准确性来源于探针的设计。
FISH能否应用于某一领域也取决于是否具有相应的探针。
用于FISH检测的探针必须具备很高的特异性，能特异性地识别特定的基因或染色体上特定的片断。
而且FISH的探针必须能经受原位杂交的处理而不变性。
荧光基团的标记也直接影响了检测的灵敏度和原位杂交结探针的预备1.让探针加热至室温，降低探针的粘度，使用合适的移液管2.振荡混合。
用微型离心机将内容物离心（1-3秒）至底部。
轻轻振荡再次混匀3.注意：该探针已经经过变性可直接与样本片子反应。
若探针是非降解型，需进行73℃5分钟的变性杂交1.在片子上，将10μL的CEP18/X/Y混合探针加到一个反应区，将10μ的LLSI13/21混合探针加至另一个反应区。
将22mm×22mm的盖玻片立刻覆盖反应区，使探针溶液弥漫整个覆盖区。
气泡会干扰杂交，因此必须排除气泡果的检测方式。
以著名的探针生产商Vysis公司的LSI系列探针为例：LSI系列探针来源于BAC大片断基因组文库，探针所覆盖的染色体片断总长可达100Kb－400Kb，保证了探针的高特异性和极强的荧光信号；荧光基团采用直接标记法标记，不同波长的荧光基团使探针在荧光显微镜下呈现多种荧光信号，借此我们可以一次检测多个染色体或基因的异常；由于探针具有极强的荧光信号因而对FISH结果的检测也采用直接检测法，即在荧光显微镜下直接观察FISH的信号，而无需抗原－抗体反应对荧光信号进行放大。
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FISH试剂盒说明书
FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧光显微镜检测→结果分析。
FISH(fluorescence in situ hybridization)荧光标记的原位杂交技术
试剂和说明
提供的材料
一盒包含4种试剂，可做20次试验，一次检测22mm×22mm靶区。
X/Y DNA探针盒：
X/Y DNA探针（已提前变性）：﹣20℃避光保存
DAPIⅡ复染剂：﹣20℃避光保存
NP-40：﹣25~﹣30℃
22×SSC：﹣20℃~﹣25℃
储存和处理
未开封X/Y DNA试剂盒﹣20℃避光干燥处保存。
20×SSC盐和NP-40可以单独储存于室温。
阳性对照片应在-20 ℃条件下，密封加干燥剂保存。
需要但公司不提供的材料
实验室试剂超纯甲酰胺
100%乙醇，室温储存浓缩的（12N）盐酸 1N氢氧化钠
纯净水（蒸馏水或去离子水或Milli-Q），室温储存固定剂（3:1 甲醇：乙酸）每日新鲜配置 Drierite(商品名，干燥用无水硫酸)和液氮
实验室设备
荧光显微镜设备和推荐的滤光片
相差光学显微镜
预清洁的显微镜玻片
载玻片加热器（45℃-50℃）
22mm×22mm玻璃盖玻片
可调容积吸管（1-10ul）和无菌微量移液管头
聚丙烯微量离心管（0.5ml或1.5ml）
计时器磁力搅拌器漩涡混合器微量离心机刻度量筒
水浴锅（67±2℃和73±1℃）有氧培养箱（42℃）钻石笔湿盒镊子
一次性注射器（5ml）
染色缸（6）建议型号：Wheaton Product.No.900620竖式染色缸
pH剂和pH试纸温度计
金属丝试管架橡胶胶水
0.45um细孔过滤设备
工作液的准备
20×SSC
66g 20×SSC
200ml 纯化水
250ml 最终量
彻底混合，用pH计室温下测pH。
如果需要，用浓盐酸调pH到5.3。
加纯水至总量250ml。
通过0.45um孔径的过滤设备过滤。
室温储存6个月。
变性液
49ml 甲酰胺
7ml 20×SSC pH 5.3
14ml 纯化水 70ml 最终量
充分混合，放置于玻璃染缸。
用pH计室温下测pH。
确保pH在7.0-8.0。
储存于有盖容器2-8℃。
可最多使用1周。
每次用前测定pH。
乙醇洗液
用100%乙醇和纯化水v/v稀释70%，85%。
盖紧容器盖子室温下储存。
若未发生蒸发或因过量使用所致溶液稀释，可使用1周。
0.4×SSC洗液
950ml 纯化水
20ml 20×SSC pH 5.3
1000ml 最终量
彻底混合。
用pH计室温下测pH，用1N氢氧化钠调pH至7.0-7.5。
加纯水至总量1000ml。
通过0.45um孔径的过滤设备过滤。
未使用过的液体室温储存6个月。
使用过的液体当日丢弃。
0.1%NP-40在2×SSC中
100ml 20×SSC pH 5.3
849ml 纯化水
1ml NP-40
1000ml 最终量
彻底混合，用pH计室温下测pH，用1N氢氧化钠调pH至7.0-7.5.加纯水至总量1000ml。
通过0.45um孔径的过滤设备过滤。
加入70ml至染缸中保持室温。
未使用的液体于加盖容器中室温储存6个月。
使用过的液体当日丢弃。
标本收集、处理、储存和玻片准备
标本收集和处理
FISH测试步骤
标本DNA变性：
1. 在准备玻片前将杂交湿盒（一个密闭容器）置于42℃培养箱预热至42℃。
2. 加入变性液至玻片染色缸并于73±1℃水浴至少30min。
使用前测量温度。
3. 标本DNA变性：将准备好的玻片浸泡在73±1℃变性液中5min。
每一个玻片染色缸一
次不要放入超过4张玻片。
4. 用镊子将玻片从变性液中移出并立即置于室温下70%酒精洗液。
摇动玻片除去甲酰胺。
让玻片立于酒精洗液中1min。
5. 从70%酒精中移出玻片，依次用85%、100%酒精重复步骤4。
6. 晾干多余的酒精：用吸墨纸触及玻片底边并用实验室擦拭纸擦拭玻片下面。
P5
7. 在滴加探针溶液前，将玻片置于45-50℃载玻片加热器上不超过2min。
注意：如果在探针准备好之前玻片已备好超过2min，玻片应保留在100%酒精广口瓶内。
在将玻片置于玻片加热器前不要风干。
探针准备
1. 将探针在室温复温，以降低其粘度便于准确吸取。
2. 涡流混合。
在微量离心机轻微离心1-3s，使内容物沉于试管底部。
再次轻轻涡流混合。
注意：探针是提前变性的，在标本玻片上滴于靶区。
杂交
1. 将10ul探针溶液滴于玻片的靶区。
立即将22mm×22mm盖玻片覆盖于探针溶液上使溶液在盖玻片下均匀扩散。
气泡会干扰杂交，应避免。
注意：在盖上盖玻片前勿将探针溶液滴在多个靶区。
2. 将玻片置于提前预热至42℃的杂交湿盒中，盖紧湿盒的盖子。
3. 将杂交湿盒放于42℃培养箱，杂交过程至少30min。
注意：在一些标本中，为获取更强的信号，也许需要更长的杂交时间。
可能过夜培养（长达16小时）。
超过1小时的培养，盖玻片必须用橡胶胶水一类的可清除密封剂密封，杂交湿盒必须加湿。
过程如下:
用5ml注射器抽橡胶胶水。
在盖玻片和玻片周围涂少量橡胶胶水，从而形成密封圈。
将玻片置于加湿的杂交湿盒中（一个密闭容器,内置一片浸湿的吸墨纸或在容器内侧贴1in.×3in.纸巾）。
用密闭门关盖湿盒，培养1-16小时。
培养后，从玻片上除去橡胶胶水。
杂交后洗涤
1. 加入0.4×SSC（pH7.0-7.5）至玻片染色缸中。
将玻片染色缸放于73±1℃水浴中至少30min 或者直至溶液温度达到73±1℃，以预热0.4×SSC溶液。
注意：如果一次杂交的玻片数量超过4片，必须分批次洗涤。
每次洗涤前洗液温度必须回至73±1℃。
2. 从第一张玻片的靶区移去盖玻片并立即将玻片置于含0.4×SSC玻片染色缸中。
摇动玻片1-3秒。
重复操作剩下3张玻片，73±1℃温育2min。
注意：在新加入玻片前不要移去盖玻片？在最后一张玻片加入水浴后开始计时2min。
3. 从水浴中拿出所有玻片放于室温2×SSC/0.1%NP-40缸中50-60s。
玻片放置于水浴后摇动
1-3s。
4. 在暗处风干玻片（密闭抽屉或含架子的密闭橱柜）。
5. 用10ul的DAPIⅡ复染液滴于玻片靶区，覆盖盖玻片。
在信号计数前将玻片储存于暗处。
储存在﹣20℃的暗处储存杂交玻片（含盖玻片）。
在此条件下玻片可以储存12个月而没有荧光信号强度的显著丢失。
若要延长储存时间，需将盖玻片密封以防干燥同时﹣20℃储存。
信号计数评估玻片
用以下标准评估：探针信号强度：信号应明亮，清晰，可计。
信号应为明亮紧凑的椭圆形或线性弥散的椭圆形。
背景：黑暗，无荧光颗粒，无朦胧。
交叉杂交/目标特异性：探针应只在目标上杂交和显影（X染色体着丝点或Y染色体的Yq12）需评估中期分裂相以发现交叉杂交和非目标序列。
至少有98%的细胞应表现1个或更多信号。
（参看以下信号计数指南）
问题解决指南，处理新鲜玻片。
选择最佳视野和可计数的细胞核
用25×物镜扫视杂交区域，观察标本分布。
挑选标本分布稀疏，无间期与中期分裂相重叠处，视野内可见间期或中期分裂相。
避免细胞密集，重叠，或单个核的核边界不清。
避免丛密细胞区。
只计数信号清晰的细胞。
计数
用40×或63×物镜，选定视野的左上区，从左至右，计数每个可计数中期分裂相细胞（计数＞20个）的信号数或每个可计数间期细胞核（计数＞500个）边界内的信号数。
计数200个间期细胞核后若有5%以上无杂交信号则杂交失败。