临床微生物实验室细菌鉴定指南

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胡方芳-临床微生物标本常见细菌培养和鉴定

三细菌鉴定的基本依据
• 基本结构：形态与染色 • 生长特性：培养特性 • 细菌代谢产物：生化反应： • 细菌免疫学特征：血清学试验： • 遗传特征：分子生物学实验 • 其他：质谱分析技术、色谱分析技术等
四细菌鉴定基本步骤
• （一）挑选可疑菌落 • （二）涂片染色 • （三）生化反应试验 • （四）血清学试验 • （五）其他相关试验
• 粪便：接种血平板、SS平板和麦康凯平板置普通温箱 35℃孵育
• 脓液及创伤感染分泌物：血平板置普通温箱 35℃孵育
• 生殖道：接种血平板和淋球菌平板置CO2温箱 35℃孵育
一常见细菌培养
• 培养特性： 1 适宜生长温度：大多数病原菌35-37℃，某些在
低温（李斯特菌属 4 ℃ 缓慢生长）或高温下生长 2 气体环境：需氧菌、兼性厌氧、微需氧（5%O2、 10%CO2 如肺炎链球菌、淋病奈瑟氏菌等）、厌氧菌
菌）、辣味（金黄色葡萄球菌）等
（3）菌落溶血特征 α溶血/草绿色溶血： β溶血： γ溶血/不溶血：
链球菌的溶血现象
2 液体培养基（1）均匀浑浊生长（2）沉淀生长（3）表面生长（菌膜）
（二）涂片染色
• 染色：革兰染色：革兰阳性菌、革兰阴性菌 • 形态、大小和排列：球形、杆形、螺旋形，菌体
大小，单个、成双、葡萄状等
-
迁移生长 +
洋葱类鼻疽巴斯特其他
铜绿
- 靛基质
其他
沙雷枸橼肠杆菌嗜麦芽不动沙门其他
+
变形杆菌
大肠
革兰阴性球菌
氧化酶（+） G- Co：
脑膜炎双Co 卡他布兰汉
淋球菌
血平板 + 巧克力 + 普通平板（除卡他）

微生物炭疽芽孢杆菌细菌鉴定流程

微生物炭疽芽孢杆菌细菌鉴定流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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进行微生物炭疽芽孢杆菌的鉴定，首先要进行样本的采集。

CNAS-GL41临床微生物检验程序验证指南

包括显微镜检查、分离培养及鉴定、药敏试验等在内的临床微生物的检验方法（检验程序）如何验证？很多人对此非常困惑。

由CNAS2016.5.30新鲜发布的《临床微生物检验程序验证指南》犹如一盏明灯给大家指明了具体的方向。

虽然是针对认可实验室制定的指南文件，其他实验室亦可参考。

部分内容节选4.3 显微镜检查显微镜检查程序包括涂片制备、染色镜检和结果报告过程。

实验室在开展各种类型显微镜检查（如革兰染色、抗酸染色、墨汁染色等）前应对本实验室使用的检验程序进行验证，并由经培训有涂片镜检能力的实验室人员操作。

检查方法可包括手工染片法和自动化染片法。

所有样品及其盛放容器均应当作有传染性物质，并按照实验室生物安全要求进行操作。

4.3.1 验证要求显微镜检查程序的验证应包括能力验证/实验室间比对和实验室内人员比对（当多名人员从事该项目时）。

如果没有可获得的能力验证或室间质评，实验室应自行组织实验室间比对（宜与通过认可的实验室比对）。

若实验室同时开展手工染片法和自动化染片法，应进行两种方法的实验室内部比对。

4.3.2比对方案4.3.2.1 样品数量每项检查应使用至少 5 份样品进行验证，覆盖全部样品类型，无菌样品类型包含阴性和阳性结果。

实验室应优先使用已知结果的留样样品，当不可获取时可采用模拟样品。

4.3.2.2 检验程序按临床标本常规方式处理,由本岗位工作人员使用实验室检验程序进行涂片制备、染色、镜检、判读。

4.3.2.3 结果报告根据实验室程序文件规定进行结果报告，其中抗酸杆菌应根据“分级报告标准”报告镜检结果。

4.3.3 可接受标准每项检查的比对结果符合率≥80% 。

4.4.1 血培养血培养检验程序包括从病人血液采集、运送、接收、孵育及监测的全过程。

目前临床实验室广泛使用全自动血培养系统。

临床微生物实验室血培养系统性能验证的主要目的是评估系统使用的培养基能否用于培养临床常见微生物（包括酵母菌、厌氧菌、苛养菌等）以及仪器（自动化系统）能否及时检测出血液中的大部分病原菌。

细菌鉴定技术-临床微生物学跟微生物学检验资料文档

6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
【方法】：将待检菌接种于克氏双糖铁培养基（底层穿刺，上层斜面划线），35ºC，24h，观察。
【结果】：发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则上层和底层均呈黄色且有气泡产生；只发酵葡萄糖而不发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁沉淀。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨水培养基中，35ºC18-24h，加入甲基红指示剂2-3滴观察结果。
【结果】：红色为阳性，黄色为阴性。
－
+
4.V-P（Voges-Proskauer）试验
【原理】：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验阳性。若培养基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌酐，以加速其反应。
实验内容
生化反应培养基的制备。常用细菌生化反应。数字编码鉴定。
一、生化反应培养基的制备
不同生化反应需选择不同生化反应培养基。
按相应培养基配方及配制要求，制备所需生化反应培养基。
制备方法同培养基制备技术
二、常用细菌生化反应
糖发酵试验吲哚试验（靛基质试验）甲基红试验 V-P（Voges-Proskauer）试验枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验克氏双糖铁（KIA）复合试验动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于柠檬酸盐培养基中，35ºC，24-48h，观察。
【结果】：菌苔出现，培养基变为深蓝色为阳性。细菌不能生长，培养基不变色（绿色）为阴性。
6.克氏双糖铁（KIA）复合试验

临床微生物学检验理论课：02细菌鉴定试验-涂片染色

涂片抗酸染色结果观察
镜检时，油镜下仔细查遍整个涂片或至少100个视野；抗酸性菌呈红色，其它细菌及细胞呈蓝色； TB为细长，着色不均匀，可2个以上的菌形成V、Y、T
等或平行排列等。
涂片抗酸染色结果报告
结果报告，1984年国内统一暂行规定报告方式：未找到抗酸菌-；找到抗酸杆菌1或2个，全视野发现1或2个；找到抗酸杆菌+，全视野发现3-9个；找到抗酸杆菌++，全视野发现10-99个；找到抗酸杆菌+++，每视野发现1-9个：找到抗酸杆菌++++，每视野发现10个以上。
（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验
吲哚（靛基质或蛋白胨水）试验：阳性：色氨酸酶，分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚，
加入指示剂形成红色界面；阴性：加入指示剂不变色；区分普通变形杆菌（+），奇异变形杆菌（-）。
尿素分解试验：阳性：尿素分解酶分解尿素产生大量的氨，使培养基
呈碱性，加入指示剂为红色；阴性：加入指示剂不变色。
4、墨汁染色查隐球菌
新生隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、口腔及肠道中；
经呼吸道侵入人体，由肺经血行播散时，可侵犯所有脏器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜；
好发于细胞免疫功能低下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者；
临床上怀疑脑膜炎时，常抽取脑脊液检查细菌真菌、抗酸菌、隐球菌。
3、涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌
据世界卫生组织估计，全球每年增加结核病人约800万 1000万，死亡病人约300万；
全人类的三分之一即17亿人曾感染过结核杆菌；结核病人主要见于发展中国家，尤其经济落后地区；我国是结核病高发国家，广东地区发病率较高。

尿液标本临床微生物实验室检验操作指南

检验科
婴幼儿尿液采集袋采集
由于婴幼儿不能自主控制膀胱收缩，需要用采集袋。此法很难避免会阴部正常菌群的污染，易出现假阳性，因此该方法采集的尿液培养结果阴性更有意义。如培养结果阳性，必要时可用膀胱导尿或耻骨上膀胱穿刺法采集尿液标本进一步确证有无尿路感染。
其他采集方法
其他不常用的尿液采集方法还包括回肠导管导尿采集、间歇性导尿管采集、肾盂造瘘术、输尿管造口术、膀胱镜检查术采集等。
留置导尿管尿液采集
先消毒导尿管采集部位，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液5 mL～10 mL；如果需要，将导管夹闭10 min～20 min后在管中采集尿标本。尿液标本不能通过收集袋引流管口流出的方式采集。长期留置导尿管的患者，需在更换新的导尿管后留取尿标本。
膀胱导尿采集
局部消毒后，严格采用无菌技术使用导尿管经尿道插入膀胱收集尿液，弃去最开始导出的15 mL~30 mL尿液后再收集尿液送检。注意避免将下尿道细菌经导管引入膀胱，导致继发性感染。
标本拒收
收到不合格标本，建议与临床医师联系，注明拒收的原因并退回，可要求重新留取标本，并做记录。若不合格标本无法重新留取但临床要求培养时，应在报告中注明，并强调该培养结果仅供参考。
01 标本标识与申请单不符，标识错误或没有标识
06 导尿管尖端培养
02 未提供采集时间及采集方法
07 标本送检时容器有渗漏
尿液干化学分析（与尿路感染相关指标） ➢ 白细胞酯酶：在中性粒细胞被破坏或形态改变时，尿液中仍能够检测到白细胞酯酶，可补充显微镜检查的不足。 ➢ 亚硝酸盐：阳性常见于大肠埃希菌等革兰阴性杆菌引起的尿路感染。 ➢ 尿蛋白：参考值为阴性，尿路感染时可为阳性。
尿液有形成分分析（与尿路感染相关指标） ➢ 仪器检测 ➢ 显微镜检查

微生物检验实验室细菌鉴定操作规程

微生物检验实验室细菌鉴定操作规程
1．目的
规范细菌鉴定标准操作规程。

2．适用范围
革兰阴性菌、革兰阳性菌等。

3．职责
检验人员严格执行本程序。

4．程序
4.1 观察菌落大小、颜色、气味、溶血、形态特征等，观
察内容应记录在《细菌鉴定流程表》。

4.2 涂片，革兰染色，观察染色性及细菌形态、大小和排列，球菌、杆菌或螺形菌等，观察内容记录在《细菌鉴定流程表》。

4.3 初步生化反应根据菌落特征和涂片结果选择初步生化反应，如氧化酶、触酶、凝固酶（玻片法）等。

4.4 制定细菌鉴定方案
4.4.1 仪器鉴定方案（以VITEK2为例）
革兰阴性杆菌：选择GN卡（阴性菌鉴定卡）。

革兰阳性球菌：选择GP卡（阳性菌鉴定卡）。

酵母菌：选择YST卡（酵母菌鉴定卡）。

需氧芽孢杆菌：选择BBL卡（需氧芽孢杆菌卡）。

4.4.2 手工细菌鉴定法
氧化酶阳性革兰阴性杆菌，选择非发酵鉴定生化反应组合：葡萄糖O/F、木糖、麦芽糖、硝酸盐、动力、七叶苷等生化反应。

氧化酶阴性革兰阴性杆菌，选择肠杆菌科细菌鉴定生化反应组合：触酶、硝酸盐、葡萄糖O/F、动力、乳糖、VP、吲哚、甲基红、枸橼酸盐、精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸等生化反应。

疑不动杆菌氧化酶阴性革兰阴性杆菌，选择非发酵鉴定生化反应组合。

革兰阳性球菌，选择革兰阳性球菌鉴定生化反应组合：触酶、葡萄糖O/F、胆汁七叶苷、蔗糖、木糖、甘露醇、硝酸盐、脲酶等。

临床微生物的鉴定与药敏

抗生素。
加强耐药监测
医疗机构应建立耐药监测系统，对临床分离的细菌进行耐药性监测，及时发现和报告耐药菌株。
提高感染控制水平
医疗机构应加强感染控制措施，如手卫生、隔离患者、环境清洁等，以减少耐药细菌的传播。
研发新型抗生素
鼓励和支持科研机构和企业研发新型抗生素，以应对日益严
重的细菌耐药性问题。
全基因组测序在临床微生物鉴定中的应用
总结词
全基因组测序技术能够提供微生物的全基因组信息，对于鉴定未知病原微生物和了解其基因组变异具有重要意义。
VS
详细描述
全基因组测序技术通过直接测定微生物基因组的序列，能够全面了解微生物的基因组结构和变异情况，从而鉴定出未知病原微生物。该技术还能够发现微生物对抗生素的耐药基因，为临床治疗提供重要参考。
通过检测微生物中特定酶的活性，判断其生化特性，进而鉴定微生物种类。
代谢产物分析
分析微生物在生化反应中产生的代谢产物，如糖类、脂肪、蛋白质等，进行鉴定。
微生物的分子生物学鉴定
DNA指纹技术
利用限制性内切酶切割DNA，形成独特的DNA指纹图谱，用于鉴定微生物种类。
基因测序
对微生物的基因组进行测序，通过比对已知基因序列，确定微生物的种属和亚种。
人工智能在临床微生物药敏试验中的应用
总结词
人工智能技术能够通过分析微生物的药敏试验数据，快速预测出微生物对不同药物的敏感性，为临床治疗提供精准用药方案。
详细描述
人工智能技术通过机器学习和深度学习算法，对大量药敏试验数据进行训练和学习，从而建立起预测模型。该模型可以根据新的药敏试验数据，快速预测出微生物对不同药物的敏感性，为临床医生提供精准用药方案。人工智能技术的应用能够提高药敏试验的准

临床微生物标本的送检与采样指南

临床微生物标本的送检与采样指南呼吸道标本采集及运输一、上呼吸道标本1、送检指征上呼吸道感染包括咽炎、喉炎、会厌炎等，凡具有以下情况任何一项者疑似患者。

1.1 病毒性普通感冒伴有明显咽痛时，怀疑为咽部链球菌感染，应做细菌培养。

1.2 细菌性咽-扁桃体炎：明显咽痛、咽部发红、畏寒、发热，体温可达39°C以上。

1.3 喉咙痛、咳嗽、喉部有脓样分泌物等临床症状。

1.4 上呼吸道感染易并发鼻窦炎、中耳炎、气管-支气管炎，需送相应部位分泌物或痰液进行细菌培养。

2、标本采集上呼吸道标本包括鼻、鼻咽、咽拭子标本。

应根据临床表现和感染部位的不同有选择性的采集标本，以便更好地分离出病原菌。

采集时应选择无菌、不含抑制剂的棉拭子，预先用无菌生理盐水或营养肉汤蘸湿拭子，并直取感染部位，减少污染。

2.1 鼻拭子的采集：最好使用扩鼻器，先用拭子拭去鼻黏膜表面的分泌物并丢弃，用第2个试子蘸取无菌生理盐水或营养肉汤，插入鼻孔采集病灶标本。

2.2 咽拭子的采集：采集标本时患者先用清水漱口，由检查者将舌向外拉，使腭垂尽可能向外牵引，用无菌的鼻咽拭子（一端弯曲的金属棉拭）由口腔进入，越过舌根到咽后壁或腭垂后侧，采集鼻咽红肿处标本，取材后小心将试子退出，立即放人无菌试管内。

若咽部明显发红或有假膜存在时，应在局部擦拭取标本（最好拭子从膜底下擦拭）。

采集标本可在咽部多点采集标本，以提高检出率。

若无局部病变或做带菌者测试应于咽部或扁桃体上擦拭。

3、采集时间及频率3.1 检查时间：应于抗菌药物应用之前。

时间上无严格限制，但咽部是呼吸和食物的通路，也应晨起后采集为佳。

3.2 采集频率：重复采集标本的频率一般每日最多1次。

4、标本的运输标本采集后应立即送检，室温运送时间小于2小时，如果不能立即接种，必须装在无菌运送培养基中，避免由于干燥而使某些细菌死亡。

检测淋病奈瑟菌或脑膜炎奈瑟菌的拭子应放人含碳的转运培养基，采集后2小时内接种平板，以防细菌死亡。

临床微生物标本采集和送检指南

二、临床微生物标本采集和送检的挑战
在临床微生物标本采集和送检过程中，可能会遇到以下挑战和问题： 1、如何正确采集微生物标本
二、临床微生物标本采集和送检的挑战
2、如何妥善保存标本，避免污染和交叉感染 3、如何及时、安全地将标本运送至实验室 4、如何与实验室保持密切，确保检测结果的准确性
三、临床微生物标本采集和送检的具体方法和步骤
三、标本运送
2、防止污染：在运送过程中，应确保标本不受污染。使用清洁、干燥的容器存放标本，并封闭容器以防止细菌、病毒等微生物的侵入。
三、标本运送
3、及时送达：标本应在采集后尽快送至实验室进行检测，以确保检测结果的准确性。如有特殊情况需延迟送检，应告知实验室技术人员并妥善保存标本。
三、标本运送
四、临床微生物标本采集和送检的建议
3、建立有效的沟通渠道，加强与实验室、医生之间的协作和信息共享，及时调整治疗方案。
四、临床微生物标本采集和送检的建议
4、针对具有传染性的标本，应严格遵守相关规定，确保运输、处理等过程的安全性。
5、借助信息化手段，如电子病历、远程诊断等，提高临床微生物标本采集和送检的效率和质量。
4、记录信息：在运送过程中，应记录标本的相关信息，包括采集时间、送检时间、接收人员等，以便实验室技术人员对标本进行跟踪和管理。
四、常见问题及处理方法
四、常见问题及处理方法
1、采血困难：如遇采血困难，可适当调整采血部位或改变采血方式，如更换采血针或调整患者体位。如仍无法采血，可咨询医生或实验室技术人员寻求帮助。
四、常见问题及处理方法
4、标识错误：如遇标识错误，应立即纠正并重新标识标本。同时，对可能造成标识错误的原因进行分析和总结，以避免类似错误再次发生。

微生物学检查步骤

微生物学检查步骤临床微生物学实验室接到标本后应立即进行微生物学检验。

主要包括直接镜检、检测特异性抗原或病原体成分、进行分离培养和鉴定、体外药敏试验等。

（一）直接镜检1.初步诊断；2.指导进一步检出步骤和鉴定方法的选择；3.评价标本的质量。

（二）快速诊断快速检测病原体成分主要是指特异性抗原和核酸检测。

特异性抗原检测包括免疫荧光技术、胶乳凝集试验、酶免疫技术、对流免疫电泳、化学发光免疫测定等。

（免疫学检验技术）核酸检测包括核酸探针杂交、PCR技术。

（分子生物学检验技术）其他快速检测法还有气-液相色谱法、化学发光、生物发光测定法和基因或蛋白微型阵列芯片技术等。

（三）直接药敏试验鉴定结果快，但结果不明确，故分离出纯培养物后应再作体外药物敏感试验。

（四）常规检验1.分离培养：通常由正常无菌部位采取的标本接种血平板，置于空气或含5％～10％CO2的气缸中培养，大部分细菌可于24～48h生长良好。

若原始培养为阴性，但据镜检结果和临床信息提示可能有病原菌存在，则应再采集大量标本，离心浓缩或溶解离心法处理，取沉淀接种营养丰富的需氧或厌氧培养基来培养。

对于存在正常菌群部位采集的标本，分离时应采用选择培养基以利于病原菌生长，也可加某些抗生素抑制污染菌的生长。

对于某些感染标本中发现的细菌，如尿路感染的尿液中检出大肠埃希菌，可能是病原菌，也可能是污染菌或正常菌群，其临床意义的确定有赖于定量培养法。

2.鉴定：分离出的细菌一般应经过细菌形态、菌落特点、生化反应、血清学试验、动物接种等鉴定。

目前尚有某些微量鉴定系统，其鉴定快速、简便，值得推广。

如用于鉴定肠杆菌科的20E，鉴定非发酵菌的20NE及鉴定厌氧菌的20A等。

3.体外纯菌药物敏感性试验：常用方法包括抑菌试验、杀菌试验、医学。

教育网整理联合药敏试验和检测细菌产生的抗生素灭活酶等。

（五）报告①直接镜检要求2h报告，说明标本是否合格，发现微生物情况和特点；②初步鉴定和直接药敏结果于24h或次晨报告，报告可能的病原菌和直接药敏结果；③最后鉴定和细菌药敏结果一般不超过3天，还规定除血培养外，所有送检标本必须在24h内预报。

微生物鉴定

临床微生物实验室细菌鉴定指南一．细菌的鉴定步骤1．鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。

2．对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。

（我们这里一般都是预先纯化培养）3．对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。

要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。

4．按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。

另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。

5．复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。

⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。

首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。

第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(H2O2实验)：a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。

b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。

要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。

c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。

d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。

临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。

⑶．氧化酶实验（Kovac实验）：a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。

微生物检验实验室军团菌属检验标准操作规程

微生物检验实验室军团菌属检验标准操作规程1. 概述军团菌属细菌是一群病死率较高的急性呼吸道传染病的病原菌，该菌属包括45个种（60多个血清型），已从人体分离出的有嗜肺军团菌、米克戴德军团菌、波兹曼军团菌等20种。

嗜肺军团菌是军团菌属的代表种。

2. 标本类型痰等标本。

3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阴性纤细小杆菌。

荧光显微镜下可见被荧光抗体包被的发亮菌体。

3.2 培养特性在缓冲活性炭酵母提取物琼脂（BCYE）培养基上，本菌生长缓慢，应每日观察生长情况，在BCYE 上需要3~5日方可见菌落，数日后增大到4~5mm，菌落呈灰白色，有光泽。

3.3 生化反应大部分菌株氧化酶试验阳性，不分解糖类，动力、明胶、马尿酸钠试验阳性，触酶试验阳性，多数菌株产生β-内酰胺酶。

3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阴性细小杆菌，有多形性，苏丹黑染色可显蓝黑色或蓝灰色脂肪滴。

在BCYEα平板上3~5日形成蓝灰色、有光泽的菌落。

普通琼脂平板上不生长。

3.4.2 根据在BCYEα琼脂上生长的菌落，在紫外线365nm灯光照射下产生红色荧光可推断为红色军团菌；产生蓝白色荧光，如氧化酶阳性，则为博氏和其他军团菌，如氧化酶阴性，则为杜氏、戈氏、彻氏、图森山军团菌；产生无色荧光，则根据马尿酸水解、氧化酶及其他生化反应进一步鉴定。

3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色革兰阴性杆菌。

3.5.2 鉴定直接荧光抗体染色，生化反应。

4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。

5.质量控制见《质量管理程序》。

6.检验结果解释与分析本菌虽然营养要求和培养环境要求严格，但在外环境分布较广，并可长期存活，致使通过污染水源空气而传播致病。

从临床或环境标本中分离军团菌时，需先对标本作酸处理（军团菌耐酸而其他杂菌则易被酸杀灭），并使用选择性琼脂平板（在BCYEα琼脂平板上加入抗生素等抑制杂菌），以提高军团菌的检出率。

临床微生物学检验技术

二、染色标本
· 细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌的形态、大小、排列方式外，还可根据染色反应将细菌进行分类，因此染色标本的检查在细菌的初步鉴定中应用最广，起着非常重要的作用。
· （一）常用染料：酸性染料、碱性染料、复合染料。 · （二）常用的染色方法：革兰染色、抗酸染色、
荧光染色。
革兰染色
三、生化反应
（一）碳水化合物的代谢试验 1.糖（醇、苷）类发酵试验
原理：不同种类细菌含有发酵不同糖（醇、苷）类的酶，因而对各种糖（醇、苷）类的代谢能力也有所不同，即使能分解某种糖（醇、苷）类，其代谢产物可因菌种而异。检查细菌对培养基中所含糖（醇、苷）降解后产酸或产酸产气的能力，可用以鉴定细菌种类。
方法：将待试菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨水中， 35℃孵育48~96h后，于5ml培养基中滴加5~6滴甲基红指示剂，立即观察结果。
结果判定：呈现红色者为阳性，桔黄色为阴性，桔红色为弱阳性。
应用：常用于肠杆菌科内某些种属的鉴别，如大肠埃希菌和产气肠杆菌，前者为阳性，后者为阴性。肠杆菌属和哈夫尼亚菌属为阴性，而沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属和变形杆菌属等为阳性。
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革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结
晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色；而革
兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形
成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。
2. 染色方法
1 标本涂片、干燥和固定。 2 染色：在已固定细菌涂片上滴加结晶紫染液数滴，室温作用1min，用细流水轻轻冲洗，甩去积水。再滴加碘液数滴，室温作用1min，冲洗。滴加95%酒精数滴，轻轻摇动玻片几秒钟，使均匀脱色，然后斜持玻片，使脱掉的染料随酒精流去，再滴加酒精，直到流下的酒精无色为止（约需30s），立即用细流水将酒精冲掉。再滴加稀释石炭酸复红液复染约30s后用细流水冲洗。 3 标本染色后，晾干或用吸水纸吸干，滴香柏油后用油镜观察。

细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程

细菌、霉菌、酵母菌检查标准操作规程细菌、霉菌、酵母菌检查是微生物学实验室常用的一项技术，用于确定食品、饮料、药品、环境样品等中是否存在这些微生物。

细菌、霉菌、酵母菌都是常见的微生物，它们在生物学和工业上具有重要的作用。

本文将以标准操作规程的形式详细介绍细菌、霉菌、酵母菌检查的步骤和要求。

一、实验前准备1.环境准备：实验室环境要保持清洁、无尘、无飞虫等干扰因素，确保实验的准确性。

2.器材准备：准备好必要的实验器材，包括培养基、试剂、仪器设备等。

3.样品准备：样品应遵循卫生标准及实验要求，确保样品的可靠性和代表性。

二、样品处理1.样品消毒：将样品进行适当的消毒处理，以消除外源性微生物的干扰。

2.预培养：将样品接种到含有适宜培养基的试管中，进行预培养，以增加微生物的数量。

三、分离与纯化1.罩口接种：将样品中微生物接种到含有相应培养基的平板上，通过罩口接种的方式，避免次生污染。

2.培养条件：根据微生物的特性，设置适宜的培养温度、时间和培养基组成等条件，促进微生物的生长。

3.单菌分离：观察接种后的菌落形态和特征，选取单菌落转接到新的培养基上，以实现纯化。

四、鉴定与检测1.形态观察：观察菌落形态、边缘、颜色、透明度等特征，与已知细菌、霉菌、酵母菌的特征进行比对。

2.生理生化试验：通过一系列的生理生化指标和试验，如盖氏染色、革兰氏染色、培养基反应等，对菌株进行进一步鉴定。

3.分子生物学检测：采用PCR、序列比对等分子生物学技术，对菌株进行分子水平的鉴定。

五、结果处理与分析1.定量分析：根据菌落的数量和菌落形状比例，计算并报告样品中细菌、霉菌、酵母菌的数量。

2.图像记录：对鉴定结果进行拍照记录，确保结果的真实性和可追溯性。

六、质量控制1.消毒控制：实验室应定期对实验环境进行消毒处理，保持无菌状态。

2.正负对照：每次实验都应设置正、负对照，确保实验结果的准确性和可靠性。

3.重复实验：对怀疑结果的样品可以进行重复实验，验证结果的可靠性。