生物化学实验报告

生物化学实验报告蛋白质的定量测定

第四组

2015.10.15

姓名：XXX

学号：XXXXXXXX

学院：XXXXXXXXXXXXX 班级: XXXXXXXXX

蛋白质的定量测定（BCA试剂盒法）

一、实验内容：蛋白质的定量测定

二、实验目的：求知蛋白液浓度

三、实验器材：96孔板、微版比色仪、酶标仪、定量移液器及吸头、离心管、H2O、WR、不同浓度的BSA标准品。

四、实验步骤

1、配制不同浓度蛋白标准品：

取0.5ml离心管6个，以96孔板为支架

离心管编号 1 2 3 4 5 6

蛋白终浓度

(ug/ml)

800 400 200 100 50 25

H2O(ul) 160 100 100 100 100 100

4000ug/ml BSA(ul) 40 取管1

中100

取管2

中100

取管3中

100

取管4

中100

取管5

中100 管1混匀后取100ul于管2中，依此倍比稀释

2、配制工作液

（标准品6个+空白1+待测1）·平行孔2个·200ul=3200ul 取10ml离心管1个

BCA Reagent 5ml

Cu Reagent 100ul

3、加样：96孔板

H2O 800 400 200 100 50 25 待测

H2O 800 400 200 100 50 25 待测

每孔25ul不同浓度蛋白+200ul工作液，先加蛋白工作液

4、预温烘箱40℃

5、40℃30min（盖盖孵育，以免蒸发），放至常温后，570nm读

数

6、标准曲线绘制（Excel表）

第一组0.791 0.396 0.199 0.071 0.064 0.008 0.472

第二组0.814 0.411 0.215 0.077 0.054 0.011 0.358

吸光度X轴0.8025 0.4035 0.207 0.074 0.059 0.0095 0.415

标准品浓度Y

800 400 200 100 50 25 Y=413.40 轴

五、实验结果

溶液吸光度和浓度呈正比关系，待测样品吸光度平均值为X=0.415，

则Y=413.40得出待测样品蛋白浓度为413.40ug/ml。