色谱柱常见问题与维护保养

"Better Surface Chemistry for Better Separation."

色谱柱常见故障与排除
1. 柱压问题 2. 峰形异常 3. 保留时间
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正常的色谱柱柱压升高：
1. 色谱柱老化
2. 使用了更小填料粒径、更细内径或更长的色谱柱 3. 使用了粘度更高的流动相 4. 多相系统混合梯度会带来更高的柱压。
*选择合适的流速和色谱柱温度，保证色谱柱在正常操作的压力范围之内。
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系统或操作不当引起的柱压升高：
1.色谱柱过滤筛板堵塞 2.色谱柱污染 3.保护柱或在线过滤器堵塞
*请选择合适的流动相并尽可能除去流动相或被测样品带入的杂质。
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开始
洗脱剂中 盐析出 No 断开C压 力还是高 Yes 断开B压 力还是高 Yes No
Yes Yes No
冲洗后压力还是高
No
盐洗出 •重新考虑洗脱剂的组分 •下一次进样前冲洗系统
检测器管路被堵
•清洗检测器 •更换新的管线
柱子堵
压力低于柱子可 承受的最大压力 Yes Yes
No
柱子老化 •替换新柱子 •考察柱子是否 是好的
柱子堵 替换新柱子 断开A压 力还是高 Yes 是否使用 在线过滤器 Yes 在线过滤器堵了 No 泵管路被堵 No 进样器堵
No
过滤流动相 和样品
•清洗进样阀 •替换新的进样阀 •替换泵里的过滤器 •清洗泵 •替换泵里的管线
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•清洗在线过滤器 •替换新的在线过滤器

色谱柱柱压升高的原因及解决：
（1）色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染 解决方法：如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲 洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后 再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。 （2）色谱柱头的填料被样品污染 解决方法：如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污 染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。 （3）色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出 解决方法：如确定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗使柱内盐全部溶解，再换高浓 度甲醇。 （4）流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解 解决方法：如果因pH值使用不当，很难恢复。
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色谱峰峰形异常：
1.峰分裂 2.峰前伸、峰拖尾、峰展宽 3.鬼峰 4.倒峰 5.未出峰
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峰 裂 分
• • • • •
柱污染 部分阻塞滤片 柱头塌陷 溶剂效应 检测器气泡
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裂峰——柱污染
Column: C8, 4.6 × 250 mm, 5 µm Mobile Phase:25 mM Na2HPO4 (pH3.0):MeOH=60:40(v/v) Flow Rate: 1.0 mL/min Temperature: 35 ºC Detection: UV 254 nm Sample: Filtered OTC Cold Medication: 1.伪麻黄碱 2.扑热息痛 3. 未知物 4.扑尔敏
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裂峰——柱塌陷，部分滤片堵塞
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Column: Polar Phenyl (5 µm, 120 Å, 4.6x250 mm) Mobile phase: CH3OH:0.092%H3PO4(0.04%triethylamine ,0.02% di-n-butylamine )=1.5:98.5 (v/v) Flow rate:1.0 mL/min Detector: 210 nm Column temperature: room temperature Injection volume:20 µL
MWD1 A, Sig=210,8 Ref=off (CAY\POLAR-PHENYL-23055-MAHUANG-MIX-2.D) mAU Sample: 麻黄碱、伪麻黄碱对照品40 µ g/mL in CH OH 140 3 120 100 80 60 40 20 0 0 2 4 6 8 10 12 14 MWD1 A, Sig=210,8 Ref=off (CAY\POLAR-PHENYL-23055-MAHUANG-MIX-1.D) mAU Sample: 麻黄碱、伪麻黄碱对照品40 µ g/mL in mobile phase 80 60 40 20 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 min
裂峰——溶剂化效应
16
min
溶剂效应引起的峰前伸——用流动相溶解或减小进样量
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