---秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究

选抗原基因的表达。通过对秀丽隐 杆 线 虫 形 态、 培 养 条 件 以 及 保 存 方 面 的 研 究， 发 现 秀 丽 隐 杆 线 虫 在 !&* 将其放入 #( . 甘油溶液中， 在 / 0( * 冰箱中可以保存较长的时间。 +,- 培养基中生长良好， 关键词： 秀丽隐杆线虫； 形态特征； 培养； 保存 中图分类号： 1!0 文献标识码： 2 文章编号： （’(()） !(($ / !$’3 (! / ((#$ / (#
浙江农业学报 !"#$ !%&’"()#(&$* +,*-’$.%*./’/ !" （!） ： #$ % #& ， ’(()
秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究
庞林海， 杜爱芳 ! ， 李孝军， 侯玉慧， 高
（浙江大学 动物预防医学研究所， 浙江 杭州 #!((’"）
翔
摘
要： 秀丽隐杆线虫作为一种模式线虫， 已广泛应用于寄生性线虫基因功能的研 究 以 及 寄 生 性 线 虫 疫 苗 候
［D］ 弃上清 。 一 组 将 -’’ ! (BC， ) 沉淀物分别接种 到涂有大肠杆菌 65.’ 的 $%& 培养 基、 2> 培 养 基 ［/］
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结果与分析
不同培养基对虫体生长性能的影响 将同量秀丽 隐 杆 线 虫 分 别 接 种 于 涂 有 大 肠
。
（-）2> 培 养 基。 2> 培 养 基 按 常 规 方 法 配
秀丽 隐 杆 线 虫 A$*.1&,$B8’#’/ *)*%$./ ，属 于 线形动物门、 线虫纲动物。秀丽隐杆线虫本 身 在 自然状态下与人类的关系不大， 它生活在世 界 各 地的泥土中， 以 细 菌 为 食， 容 易 人 工 养 殖， 对 人、 动物和植物没有危害。秀丽隐杆线虫非 常 小， 成 能感知气味和 虫只有 ! MM 左 右。它 身 体 透 明， 味道， 对光线、 温 度 有 反 应。 研 究 者 很 容 易 在 显
及 2> 加胆固醇培养基 中， 置 !; A 生 化 培 养 箱 培 养， 观察虫 体 的 生 长 发 育 情 况； 另 一 组 将 -’’ ! ) 沉淀 物 接 种 于 涂 有 大 肠 杆 菌 65.’ $%& 培 养 基 中， 分别 置 7 A ， !; A ， #/ A 生化培养 箱 内 培 养 /观察虫体的生长发育情况。 E， ! "- "虫体形态观察 取 !’ ! ) ! @ 盐酸四咪唑溶液滴于 $%& 平板 虫体上， 约 . (BC 虫 体 麻 醉 后， 用比较尖的牙签 挑选单个虫体， 然后置玻片上用显微镜结合 数 字 摄影和成像系统观察虫体的生长繁殖情况。 ! "- "# 虫体保存 将冰 &< 缓冲液洗下的 虫体分装 入 . 个 F98 其 中 一 管 置 7 A 冰 箱 中， 每日显微 9GCH0IJ 管中， 镜下观察虫体的活力； 其余 7 管分别加入 !’ @ 的 二甲基亚万方数据 砜、 （= 缓 冲 液 溶 解） 、 !’ @ 的 甘 油 #’ @
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杆菌 （ 65.’ ） $%& 培养基、 2> 培养基及 2> 加胆 固 醇培养基中， 在 $%& 培养基中 !; A 培养 /- E 后， 肉眼可见有大量虫体表面蠕动， 镜检有大量 大小 不同的幼虫； 在 2> 培养基中可见虫体仍然存活， 但活动能力下降， 未见幼虫 繁殖； 在 胆固 醇 加 2> 培养基中虽可见虫体繁殖、 生长， 但发育 不良， 数 量明显少于 $%& 培养基中的虫体数量。 - "不同培养基温度对虫体生长性能的影响 将同量秀丽 隐 杆 线 虫 接 种 于 涂 有 大 肠 杆 菌 （ 65.’ ） 分别置 7A， $%& 培 养 基 中， !; A ， #/ A 生 化培 养 箱 内 培 养 /- E ， 观察虫体的生长发育情 但繁 况。结果表明， 7 A 培养条件下虫体能 存活， 殖能力明显 受 到 影 响， 不 表 现 有 繁 殖 能 力； !; A 培养条件下虫体生长发育良好， 可见大量成 虫和 幼虫； 未 #/ A 条 件 下 培 养 的 虫 体 活 动 能 力 下 降， 见幼虫繁殖。 - "# - "# "! 形态学观察 虫体的形态特征 将培养的虫体置显微镜下观察， 雌雄同 体成 虫 长 ! (( 左右， 它通身透明 （如图 !8L， ， > 所示） 头部较 粗 尾 端 较 细， 在固体培养基表面蠕动缓 慢， 但在 液 体 中 运 动 较 快。 它 能 感 知 气 味 和 味 道， 对光线、 温度有反应， 能通过肌肉协调运 动作 出种种反应， 以完成趋利避害、 进食、 排粪 和交配 等活动。 - "# "雌雄判断 雌雄虫可通过尾部的形态差异来鉴别， 雌雄 同体虫体尾端 较 细 长， 雄 虫 尾 端 则 较 粗， 显得比 较钝圆 （图 -） 。 - "7 不同保存条件对虫体生长性能的影响 结果 表 明， 置 于 7 A 冰 箱 中 虫 体， 在显微镜 下连续观察 #’ H ， 虫体死亡数量随着时间 的推移 不断增加， 并且死亡的主要为一些幼虫和衰老的
收稿日期： ’((3 / !! / #( 基金项目： 国家自然基金项目 （ #(3)!#"3） 作者简介： 庞林海 （ !"0( / ） ， 男， 汉 族， 山 东 省 济 南 市 人， 硕士研 究生， 主要从事动物检疫与流行病防治。 万方数据 杜爱芳， Y8M:6K： :=HC Z [BC U JHC U R7； \JK ： (3)! / 0&")!30# ! 通讯作者，
［G］ 。 相似 ［A］ 发现将虫体置 于 A$ @ 甘 油 溶 液 &/9..9/ 等 ［E］ 于液氮 中 可 以 长 期 保 存， 发现置于 C*+:,1. 等
($ @ 甘油溶液 中 的 秀 丽 隐 杆 线 虫 虫 体 可 以 在 液
（ #$$ % ） ； （ ’$$ % ） ! " 成虫 & " 幼虫与成虫比较
Fra Baidu bibliotek
（!）$%& 培养 基。 ! ’’’ () 的 $%& 培 养 基 内 加有： # * $+,) ， - " . * 蛋白胨， !/ * 琼脂，! (0) 1 （ 94 : ; " ’ ）-. () ， 2 3- 4567 834- 567 缓 冲 液 </. 灭菌 后 加 入 分 别 抽 滤 除 菌 的 ! () 胆 () 蒸馏水， 固醇溶液 （. (* 1 () 乙醇） ， ! (0) 1 2 &*=67 ! () ，! (0) 1 2 的 ,+,)- ! () 制。 （#）2> ? 胆 固 醇 培 养 基。 ! ’’’ () 的 2> 培 养基灭菌后加入抽滤除 菌 的 ! () 胆 固 醇 溶 液 （. 。 (* 1 () 乙醇） ! "! "7 缓冲液 （!）&< 缓 冲 液。 每 升 缓 冲 液 中 含 !. " !- * （或 ; * $+- 4567 ） ， !-4- 6 # * 34- 567 ，. $+- 4567・ 宜现用现配。 * $+,) ，’ " -. * &*=67・ /4- 6， （-）= 缓冲液。 ’ " ! (0) 1 2 $+,) ， ’ " ’. ((0) 1 2 （ 94 : ; " ’） 。 3- 4567 834- 567 缓冲液 （#）麻醉剂。取 ! * 盐 酸 四 咪 唑 溶 解 于 !’’ 配制成质量分数为 ! @ 的溶液。 () 蒸馏水中， ! "! "- "! 方法 虫体培养 用冰 &< 缓冲液将虫体洗下， 置 7 A -’ (BC ， 弃上 清， 沉 淀 物 用 &< 缓 冲 液 重 悬 后 置 7 A -’
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， 由复旦大学生物发育基地惠 XI6ONAK ONI:67 +’ ） 赠。 ! U! U’ 大肠杆菌 E43( 大肠杆菌 E43( 是尿嘧啶渗漏突变型， 作为秀 丽隐杆线虫的食物。
庞林海等： 秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究
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培养基
的甘油 （ = 缓冲液溶解） 、 不 加任何 物质 直 接 放 入 保 存 两 个 月 后 取 出， 解冻后一部分 K D’ A 冻存， 镜下检查， 另一部分接种到涂有大肠杆菌 65.’ 的 观察和测定虫体的活力。 $%& 培养基中，
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浙江农业学报
第 (R 卷 （ ’$$G）
固醇是 秀 丽 隐 杆 线 虫 生 长 所 需 要 的 必 需 因 子。
［# ， E］ ， 我 C*+:,1. 等曾经使用 D 培 养 基 来 培 养 虫 体
们把 >?3 培养基 与 D 培 养 基 成 分 比 较 后 发 现， 且制作 >?3 培养基 提 供 的 营 养 成 分 更 加 全 面， 起来更加 简 便。 因 此 我 们 认 为， >?3 培 养 基 较 适合秀丽隐杆线虫生长。 研究表明， 虫 体 可 在 不 同 温 度 条 件 下 生 长， 但在 (F = 的情况下 细 菌 生 长 速 度 和 虫 体 繁 殖 速 度同步， 更适 合 虫 体 培 养， 且可在一块培养基上 培养 ’$ ) 左右。此研 究 结 果 与 其 他 学 者 的 报 道
［! ， ’］ 微镜下对其细胞和组织进行跟踪观察 。
能生长， 虫体 在 +,- 培养 基比较 适合虫 体生 长，
［#］ 液氮中可以 长 期 保 存 。后来又有很多学者对 ［$ % 0］ 秀丽隐杆线虫培养和保存方法 的作 了探索 ，
但还没有较一致的结论。为此， 本文对秀丽 隐杆 线虫形态、 培养条件以及保存方法作了进 一步的 研究和探讨。
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材料与方法
材料 品系 +’ 野 生 型 秀 丽 隐 杆 线 虫（ A C *)*%$./ ，N9J
英国 的 XIJ77JI 于 !"&# 年 发 现 的 秀 丽 隐 杆 线虫细胞数量不多、 功能也不复杂、 身体透 明， 是 研究生 物 学 理 想 的 模 型 动 物。 随 后， XIJ77JI 对 秀丽隐杆线虫培养方法和保存方法进行了 研 究， 发现秀丽隐杆线虫虫体在 3 * % #( * 的 温 度 均
氮中保存 ’E 年 以 上。 本 研 究 发 现， 设置的几个 保存方法中以 A$ @ 的甘油 ; <$ = 保存效果最好， 该方法不需要专门的设备， 适合于实验室虫种的 保存。 参考文献：
［ (］ H7))+9 I " ! " #$#%&’( !［ 3］ " >9J K1/L ： M1+) C4/7.6 N-/O1/ B-O1/-,1/P Q/9::，(RRG " ’’$ ; ’’F " ［’］ 刘恩岐， 仓林 让 " 模 型 动 物—秀 丽 隐 杆 线 虫 研 究 进 展 ［ S］ " 动物科学与动物医学， ： ’$$A ，’$（ ($） (($ ; ((’ " ［A ］ &/9..9/ C " T59 ?9.9,78: 12 !&#’)*+&,-./.( #$#%&’( ［ S ］ " （ (） ： (RG# ， GG G( ; R# " 0#’#/.1( ，