---秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究
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选抗原基因的表达。通过对秀丽隐 杆 线 虫 形 态、 培 养 条 件 以 及 保 存 方 面 的 研 究, 发 现 秀 丽 隐 杆 线 虫 在 !&* 将其放入 #( . 甘油溶液中, 在 / 0( * 冰箱中可以保存较长的时间。 +,- 培养基中生长良好, 关键词: 秀丽隐杆线虫; 形态特征; 培养; 保存 中图分类号: 1!0 文献标识码: 2 文章编号: (’(()) !(($ / !$’3 (! / ((#$ / (#
浙江农业学报 !"#$ !%&’"()#(&$* +,*-’$.%*./’/ !" (!) : #$ % #& , ’(()
秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究
庞林海, 杜爱芳 ! , 李孝军, 侯玉慧, 高
(浙江大学 动物预防医学研究所, 浙江 杭州 #!((’")
翔
摘
要: 秀丽隐杆线虫作为一种模式线虫, 已广泛应用于寄生性线虫基因功能的研 究 以 及 寄 生 性 线 虫 疫 苗 候
[D] 弃上清 。 一 组 将 -’’ ! (BC, ) 沉淀物分别接种 到涂有大肠杆菌 65.’ 的 $%& 培养 基、 2> 培 养 基 [/]
- "!
结果与分析
不同培养基对虫体生长性能的影响 将同量秀丽 隐 杆 线 虫 分 别 接 种 于 涂 有 大 肠
。
(-)2> 培 养 基。 2> 培 养 基 按 常 规 方 法 配
秀丽 隐 杆 线 虫 A$*.1&,$B8’#’/ *)*%$./ ,属 于 线形动物门、 线虫纲动物。秀丽隐杆线虫本 身 在 自然状态下与人类的关系不大, 它生活在世 界 各 地的泥土中, 以 细 菌 为 食, 容 易 人 工 养 殖, 对 人、 动物和植物没有危害。秀丽隐杆线虫非 常 小, 成 能感知气味和 虫只有 ! MM 左 右。它 身 体 透 明, 味道, 对光线、 温 度 有 反 应。 研 究 者 很 容 易 在 显
及 2> 加胆固醇培养基 中, 置 !; A 生 化 培 养 箱 培 养, 观察虫 体 的 生 长 发 育 情 况; 另 一 组 将 -’’ ! ) 沉淀 物 接 种 于 涂 有 大 肠 杆 菌 65.’ $%& 培 养 基 中, 分别 置 7 A , !; A , #/ A 生化培养 箱 内 培 养 /观察虫体的生长发育情况。 E, ! "- "虫体形态观察 取 !’ ! ) ! @ 盐酸四咪唑溶液滴于 $%& 平板 虫体上, 约 . (BC 虫 体 麻 醉 后, 用比较尖的牙签 挑选单个虫体, 然后置玻片上用显微镜结合 数 字 摄影和成像系统观察虫体的生长繁殖情况。 ! "- "# 虫体保存 将冰 &< 缓冲液洗下的 虫体分装 入 . 个 F98 其 中 一 管 置 7 A 冰 箱 中, 每日显微 9GCH0IJ 管中, 镜下观察虫体的活力; 其余 7 管分别加入 !’ @ 的 二甲基亚万方数据 砜、 (= 缓 冲 液 溶 解) 、 !’ @ 的 甘 油 #’ @
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杆菌 ( 65.’ ) $%& 培养基、 2> 培养基及 2> 加胆 固 醇培养基中, 在 $%& 培养基中 !; A 培养 /- E 后, 肉眼可见有大量虫体表面蠕动, 镜检有大量 大小 不同的幼虫; 在 2> 培养基中可见虫体仍然存活, 但活动能力下降, 未见幼虫 繁殖; 在 胆固 醇 加 2> 培养基中虽可见虫体繁殖、 生长, 但发育 不良, 数 量明显少于 $%& 培养基中的虫体数量。 - "不同培养基温度对虫体生长性能的影响 将同量秀丽 隐 杆 线 虫 接 种 于 涂 有 大 肠 杆 菌 ( 65.’ ) 分别置 7A, $%& 培 养 基 中, !; A , #/ A 生 化培 养 箱 内 培 养 /- E , 观察虫体的生长发育情 但繁 况。结果表明, 7 A 培养条件下虫体能 存活, 殖能力明显 受 到 影 响, 不 表 现 有 繁 殖 能 力; !; A 培养条件下虫体生长发育良好, 可见大量成 虫和 幼虫; 未 #/ A 条 件 下 培 养 的 虫 体 活 动 能 力 下 降, 见幼虫繁殖。 - "# - "# "! 形态学观察 虫体的形态特征 将培养的虫体置显微镜下观察, 雌雄同 体成 虫 长 ! (( 左右, 它通身透明 (如图 !8L, , > 所示) 头部较 粗 尾 端 较 细, 在固体培养基表面蠕动缓 慢, 但在 液 体 中 运 动 较 快。 它 能 感 知 气 味 和 味 道, 对光线、 温度有反应, 能通过肌肉协调运 动作 出种种反应, 以完成趋利避害、 进食、 排粪 和交配 等活动。 - "# "雌雄判断 雌雄虫可通过尾部的形态差异来鉴别, 雌雄 同体虫体尾端 较 细 长, 雄 虫 尾 端 则 较 粗, 显得比 较钝圆 (图 -) 。 - "7 不同保存条件对虫体生长性能的影响 结果 表 明, 置 于 7 A 冰 箱 中 虫 体, 在显微镜 下连续观察 #’ H , 虫体死亡数量随着时间 的推移 不断增加, 并且死亡的主要为一些幼虫和衰老的
收稿日期: ’((3 / !! / #( 基金项目: 国家自然基金项目 ( #(3)!#"3) 作者简介: 庞林海 ( !"0( / ) , 男, 汉 族, 山 东 省 济 南 市 人, 硕士研 究生, 主要从事动物检疫与流行病防治。 万方数据 杜爱芳, Y8M:6K: :=HC Z [BC U JHC U R7; \JK : (3)! / 0&")!30# ! 通讯作者,
[G] 。 相似 [A] 发现将虫体置 于 A$ @ 甘 油 溶 液 &/9..9/ 等 [E] 于液氮 中 可 以 长 期 保 存, 发现置于 C*+:,1. 等
($ @ 甘油溶液 中 的 秀 丽 隐 杆 线 虫 虫 体 可 以 在 液
( #$$ % ) ; ( ’$$ % ) ! " 成虫 & " 幼虫与成虫比较
Fra Baidu bibliotek
(!)$%& 培养 基。 ! ’’’ () 的 $%& 培 养 基 内 加有: # * $+,) , - " . * 蛋白胨, !/ * 琼脂,! (0) 1 ( 94 : ; " ’ )-. () , 2 3- 4567 834- 567 缓 冲 液 </. 灭菌 后 加 入 分 别 抽 滤 除 菌 的 ! () 胆 () 蒸馏水, 固醇溶液 (. (* 1 () 乙醇) , ! (0) 1 2 &*=67 ! () ,! (0) 1 2 的 ,+,)- ! () 制。 (#)2> ? 胆 固 醇 培 养 基。 ! ’’’ () 的 2> 培 养基灭菌后加入抽滤除 菌 的 ! () 胆 固 醇 溶 液 (. 。 (* 1 () 乙醇) ! "! "7 缓冲液 (!)&< 缓 冲 液。 每 升 缓 冲 液 中 含 !. " !- * (或 ; * $+- 4567 ) , !-4- 6 # * 34- 567 ,. $+- 4567・ 宜现用现配。 * $+,) ,’ " -. * &*=67・ /4- 6, (-)= 缓冲液。 ’ " ! (0) 1 2 $+,) , ’ " ’. ((0) 1 2 ( 94 : ; " ’) 。 3- 4567 834- 567 缓冲液 (#)麻醉剂。取 ! * 盐 酸 四 咪 唑 溶 解 于 !’’ 配制成质量分数为 ! @ 的溶液。 () 蒸馏水中, ! "! "- "! 方法 虫体培养 用冰 &< 缓冲液将虫体洗下, 置 7 A -’ (BC , 弃上 清, 沉 淀 物 用 &< 缓 冲 液 重 悬 后 置 7 A -’
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, 由复旦大学生物发育基地惠 XI6ONAK ONI:67 +’ ) 赠。 ! U! U’ 大肠杆菌 E43( 大肠杆菌 E43( 是尿嘧啶渗漏突变型, 作为秀 丽隐杆线虫的食物。
庞林海等: 秀丽隐杆线虫培养特性与保存方法研究
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培养基
的甘油 ( = 缓冲液溶解) 、 不 加任何 物质 直 接 放 入 保 存 两 个 月 后 取 出, 解冻后一部分 K D’ A 冻存, 镜下检查, 另一部分接种到涂有大肠杆菌 65.’ 的 观察和测定虫体的活力。 $%& 培养基中,
・ AF ・
浙江农业学报
第 (R 卷 ( ’$$G)
固醇是 秀 丽 隐 杆 线 虫 生 长 所 需 要 的 必 需 因 子。
[# , E] , 我 C*+:,1. 等曾经使用 D 培 养 基 来 培 养 虫 体
们把 >?3 培养基 与 D 培 养 基 成 分 比 较 后 发 现, 且制作 >?3 培养基 提 供 的 营 养 成 分 更 加 全 面, 起来更加 简 便。 因 此 我 们 认 为, >?3 培 养 基 较 适合秀丽隐杆线虫生长。 研究表明, 虫 体 可 在 不 同 温 度 条 件 下 生 长, 但在 (F = 的情况下 细 菌 生 长 速 度 和 虫 体 繁 殖 速 度同步, 更适 合 虫 体 培 养, 且可在一块培养基上 培养 ’$ ) 左右。此研 究 结 果 与 其 他 学 者 的 报 道
[! , ’] 微镜下对其细胞和组织进行跟踪观察 。
能生长, 虫体 在 +,- 培养 基比较 适合虫 体生 长,
[#] 液氮中可以 长 期 保 存 。后来又有很多学者对 [$ % 0] 秀丽隐杆线虫培养和保存方法 的作 了探索 ,
但还没有较一致的结论。为此, 本文对秀丽 隐杆 线虫形态、 培养条件以及保存方法作了进 一步的 研究和探讨。
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材料与方法
材料 品系 +’ 野 生 型 秀 丽 隐 杆 线 虫( A C *)*%$./ ,N9J
英国 的 XIJ77JI 于 !"&# 年 发 现 的 秀 丽 隐 杆 线虫细胞数量不多、 功能也不复杂、 身体透 明, 是 研究生 物 学 理 想 的 模 型 动 物。 随 后, XIJ77JI 对 秀丽隐杆线虫培养方法和保存方法进行了 研 究, 发现秀丽隐杆线虫虫体在 3 * % #( * 的 温 度 均
氮中保存 ’E 年 以 上。 本 研 究 发 现, 设置的几个 保存方法中以 A$ @ 的甘油 ; <$ = 保存效果最好, 该方法不需要专门的设备, 适合于实验室虫种的 保存。 参考文献:
[ (] H7))+9 I " ! " #$#%&’( ![ 3] " >9J K1/L : M1+) C4/7.6 N-/O1/ B-O1/-,1/P Q/9::,(RRG " ’’$ ; ’’F " [’] 刘恩岐, 仓林 让 " 模 型 动 物—秀 丽 隐 杆 线 虫 研 究 进 展 [ S] " 动物科学与动物医学, : ’$$A ,’$( ($) (($ ; ((’ " [A ] &/9..9/ C " T59 ?9.9,78: 12 !&#’)*+&,-./.( #$#%&’( [ S ] " ( () : (RG# , GG G( ; R# " 0#’#/.1( ,