57.柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d含量测定----祝婧

柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a与柴胡皂苷d含量测定

祝婧1龚千锋钟凌云张金莲

（江西中医药大学江西南昌330004）

摘要：目的以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量为指标，考察不同炮

制方法对柴胡中皂苷类成分含量的影响。方法采用RP-HPLC法测定

柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量，色谱柱为Dikma

Diamonsil C

(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-水(35：18

65)，流速1.0mL/min，柱温30℃，检测波长210nm。结果柴胡经

不同的方法炮制后，柴胡皂苷a、d的含量有不同程度的变化，柴胡皂

苷a的含量变化依次为:生品＞酒麸制品＞清炒品＞酒炙品≈鳖血制

品＞醋炙品，柴胡皂苷d的含量变化依次为:生品＞酒麸制品＞鳖血

制品＞酒炙品＞清炒品＞醋炙品。结论本方法简便、可靠、重现

性好，可用于柴胡及其炮制品中柴胡皂苷a、d的含量测定，并为全

面控制其质量提供参考，为深入探讨柴胡炮制的意义，提供一定的实

验依据。

关键词：柴胡；炮制品；柴胡皂苷a；柴胡皂苷d；HPLC 柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd的干燥根。具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气的功能，主要含有挥发油、柴胡皂苷、多糖等成分。柴胡生品升散作用较强，临床多用于解表退热。常用炮制品清炒柴胡

1基金项目：江西中医药大学重点学科资助项目（550024）

作者：祝婧，女，1985年生，讲师，从事中药制药工艺研究，TEL:(0791)87118995,E-mail:277836041@.

具有缓和升散作用，增强升举阳气的功效；醋炙柴胡具有缓和升散之性，增强疏肝止痛的作用；酒炙柴胡能改变药性、引药上行，增强活血通络作用并能矫臭去腥；酒麸柴胡缓和升散之性并增强活血通经之功；蜜炙柴胡药性缓和，能增强润肺止咳、补脾益气的作用且能矫味和消除副作用。我们对柴胡不同炮制品的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量进行了比较研究，通过探讨不同炮制工艺对柴胡皂苷类物质含量的影响，为临床安全、有效、合理应用柴胡及其炮制品提供实验依据。

1.仪器与试药

高效液相色谱仪（戴安U-3000）及双波长紫外检测器；红外测温仪（DIGITAL）；KQ-250E型医用超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)；十万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。甲醇、乙腈均为色谱纯，水为高纯水，其他试剂为分析纯。

柴胡皂苷a(批号:11077-200304)和柴胡皂苷d(批号: 11077-200303)对照品由中国药品生物制品检定所提供。柴胡饮片购自樟树天齐堂中药饮片有限公司，经江西中医药大学葛菲教授鉴定为伞形科植物北柴胡的干燥根。

2方法与结果

2.1不同柴胡炮制品的制备

2.1.1生品:除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。

2.1.2清炒品：取净柴胡片，文火炒至药物表面颜色加深。

2.1.3醋炙品：取净柴胡片，加米醋（100g药物用米醋20g)闷润，再文火炒干即得。

2.1.4酒炙品:取净柴胡片，加黄酒(100g药物用黄酒10g)闷

润，再文火炒干即得。

2.1.5酒麸制品:先将麦麸均匀撒入热锅中（100g药物用麦麸15g），至起烟时投入经黄酒(100g药物用黄酒15g)闷润过的净柴胡片，文火炒至药物表面颜色加深，筛去麦麸，放凉。

2.1.6鳖血制品：取净柴胡片，加鳖血及适量冷开水（100g药物用鳖血13g)闷润，再文火炒干即得。

6种炮制品各取50g，分别粉碎，过三号筛，备用。

(250mm×4.6mm，

2.2色谱条件色谱柱:Dikma Diamonsil C

18

5μm)；流动相:乙腈-水(35：65)；流速:1.0mL/min；柱温:30℃;检测波长:210nm；进样量:20μl。柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分离度良好，无其他杂质干扰，见图1。

A

B

C

图1样品及对照品HPLC色谱图

（A-柴胡生品；B-柴胡皂苷a对照品；C-柴胡皂苷d对照品）

Fig.1HPLC Chromatograms of standard reference materials and samples （A–raw Radix Bupleuri;B and C–standard reference materials）

2.3对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a对照品

3.21mg，柴胡皂苷d对照品7.32mg，分别置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.4供试品溶液的制备分别取柴胡生品及炮制品各0.5g，精密称定,置具塞锥形瓶中,加入含5%浓氨试液的甲醇溶液25ml,密塞,

于30℃超声处理30min，滤过。用甲醇20ml分两次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，置于60℃水浴锅上挥发至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中,定容至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤即得。

2.5线性关系考察取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d对照品溶液l、5、10、15、20μl分别注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，以峰面积对进样量进行回归，得柴胡皂苷a回归方程Y=12.099X-2.3524，R=0.9997，表明在0.624～12.84μg范围内柴胡皂苷a线性良好；柴胡皂苷d回归方程Y=4.9356X+4.364，R=0.9996，表明在1.464～29.28μg范围内柴胡皂苷d线性良好。

2.6精密度试验分别取柴胡皂苷a对照品溶液20μl与柴胡皂

苷d对照品溶液20μl注入液相色谱仪，各连续进样5次,测定峰面积，计算得RSD分别为0.33%和0.60%，表明精密度良好。

2.7稳定性试验取同一柴胡生品溶液，分别于0、2、4、8、12 h测定，结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的稳定性较好(RSD分别为

1.18%和0.64%)。

2.8重现性试验取柴胡醋炙品5份，每份0.5g，精密称定，照2.4项方法制备，分别精密吸取此供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定柴胡皂苷a和柴胡皂苷d峰面积，计算得RSD分别为1.78％和

1.92%，表明重现性良好。

2.9加样回收试验取已知含量的酒麸柴胡粉末（柴胡皂苷a含量为0.642mg/ml，柴胡皂苷d含量为1.464mg/ml）0.25g,精密称定，共6份，加入适量柴胡皂苷a和柴胡皂苷d对照品，照“2.4”项下方法制备，分别精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的平均回收率分别为99.30%和99.97%，RSD分别为1.84%和2.30%。

2.10样品含量测定分别取柴胡生品及不同炮制品0.5g，精密称定，按“2.4”项下供试品溶液制备方法及“2.2”项下色谱条件，精密吸取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，并根据回归方程计算各样品中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量。结果见表1。