生物制药试卷

一，名词解释（5*4=20.）

1.高密度发酵:是在单个菌体对目标基因的表达水平基本不变的前提下，通过单位体积的菌体数量的增加来实现部分表达量的提高的发酵方式。

2.干扰素：人体细胞分泌的一种活性蛋白，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性，是人体防御系统的重要组成部分。

3.人鼠嵌合体抗体：将抗A抗原的抗体的重链和轻链可变区分离出来，分别于人工的重链和轻链的稳定区基因连接成人鼠嵌合体的重链和轻链基因，再转染骨髓瘤细胞，就能表达出完整的人鼠嵌合体抗体。

4.亲和层析:利用固定化配体与目的蛋白之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。

5.原代细胞:直接取自动物组织，器官，经过粉碎，消化而获得的细胞悬液。

二，填空题（1*20=20）

1.质粒不稳定分（分裂不稳定）和（结构不稳定）。

2.影响高密度发酵的因素包括（溶氧浓度）、（培养基）、（PH）、（温度）、（代谢副产物）

3.目的基因的获取方法:（反转录法），（反转录-聚合酶链式反应法），（人工合成）

4.动物细胞在培养过程，会产生一些有害的代谢副产物，这些物质的积累会抑制细胞的生长和蛋白的表达，这些代谢副产物主要是（乳酸）和（氨）

5.基因工程药物制造的主要程序有

（目的基因的克隆），（构建DNA重组体），（构建工程菌），（目的基因的表达），（外源基因表达产物的分离纯化），（产品的检验）等。

6.离体培养的动物细胞分为两类:（贴壁依赖型）和（贴壁非依赖型）

三，选择题。（2*10=20）

1.细胞破碎不属于化学法的是（D）

A渗透冲击法B增溶法C脂溶法D裂解法

2. 青霉素的主要作用（A）

A、抑制细胞壁合成

B、抑制细胞膜功能

C、干扰蛋白质合成

D、抑制核酸合成

3. 下列可以用于蛋白质分子量的测定的技术是（A）

A、凝胶过滤层析

B、亲和层析

C、离子交换层析

D、免疫吸附层析

4.细胞融合后，其常用的选择培养基中，没有下列哪种成分（B）

A 氨基喋呤B，鸟嘌呤C次黄嘌呤 D 胸腺嘧啶

5.高密度发酵的理论最高值可达到（C） gDCM/L

A50 B100 C 200 D 500

6.发酵培养基的成分不包括（B）

A 碳源

B 维生素

C 氮源 D无机盐

7.真核生物在大肠杆菌中的表达方式不包括（D）

A 融合蛋白

B 非融合蛋白

C 分泌型表达蛋白 D非分泌型表达蛋白

8.二倍体细胞的寿命一般不会超过（C）代

A 20

B 40

C 50 D100

9.动物细胞在进行离心纯化时一般采用（A）

A 低温高速

B 低温超高速

C 低温低速

D 高温低速

10.下列哪种物质属于初级代谢产物（D）

A生物碱B有机酸C黄酮体D糖类

四，判断题（2*10=20）

1.若用反渗透处理海水，在膜的低压侧得到卤水（x）

2.天然酶经过修饰后，其抗原性大大增加（✔）

3.酶的固定化过程中需要使用载体。（√）

4.因为毒素毒性较大，所以免疫毒素不能用于治疗疾病。（ x）

5.离子交换层析是以离子交换剂为流动相，依据固定相中的组分离子与交换剂上的平衡离子可逆交换时的结合力大小差别而进行分离的技术。（X）(离子交换剂为固定相，待分离组分在流动相中。)

6.细胞破碎按是否加外力可以分为机械法和非机械法。（✔）

7.酶经过固定后其最适PH保持不变（x）

8.在制作杂交瘤细胞时，为了提高细胞的融合率，可以在PEG中加入DMSO（✔）

9.次级代谢产物的积累主要是在对数生长期完成的。（x）

10. 细胞冻融一般选用慢冻快融的方法。（✔）

五，简答题（4*5=20）

1.基因工程菌的培养方式分为哪几类？并叙述其各自的特点。

答案:

1）分批培养：一次接种、一次加料、一次收获的培养方式。

2）补料分批培养：将种子接入发酵罐中，经过一定时间后，间歇或连续的补入新鲜培养基，使菌体进一步生长的培养方法。

3）连续培养：将种子接入发酵罐后，搅拌培养至菌体浓度达到一定程度，开动进料和出料蠕动泵，以一定稀释率进行不间断培养。

4）透析培养：利用膜的半透性原理将培养物与培养基分离，其主要目的是通过去除培养液中的代谢产物来解除其对生产菌的不利影响。

5）固定化培养：将基因工程菌固定化后再进行培养的方式

2.什么叫固定化酶？固定化酶的优点和缺点？

答案：

⑴固定化酶是指经物理或化学的方法处理，使酶限制或固定于特定空间，使之不能随水流失，即运动受限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。

⑵固定化酶的优点：

①稳定性高

②酶可以反复使用

③产物纯度高，副产物少，有利于提纯。

④生产可连续化、自动化。

⑤设备小，节约能源。

固定化酶的缺点：

①酶活力有一定损失

②成本高

③适用于小分子，不适用于大分子

④与菌体比，不适应于多酶反应

⑤胞内酶必须经过酶分离技术

3.动物细胞大规模培养的方法及其特点

答案:

（1）悬浮培养即让细胞自由的悬浮于培养基中生长。它适用于一切种类的非贴壁依赖型细胞，也适用于兼性贴壁细胞。其优点是操作简便，培养条件比较均一，传质和传氧较好容易扩大培养规模，在培养条件的设计和实际操作中可以借鉴许多有关细菌发酵的经验。不足之处在于由于细胞体积较小，较难采用灌流培养，因此细胞密度比较低。

（2）贴壁培养必须让细胞贴附于某种基质上生长繁殖的培养方式，适用于一切贴附依赖性细胞和兼性贴壁细胞，其优点是适用的细胞范围广，较容易采用灌流培养的方式使细胞达到高密度，不足之处是操作比较麻烦，需要合适的贴附材料和足够的面积，培养条件不易均一，传质和传氧条件差。

（3）贴壁-悬浮培养微载体培养既可以创造较大的培养面积供细胞贴附生长繁殖，满足了绝大多数细胞的生长要求，又由于载体的体积较小，比重较轻，在轻度搅拌下可以携带细胞自由的悬浮在培养基中，充分发挥了悬浮培养的优点。

4.影响基因工程菌发酵因素

答案:

1培养基的影响2 接种量的影响3温度的影响4溶解氧的影响5诱导时机的影响6诱导表达程序的影响7 Ph的影响