SDS-PAGE电泳分析表达蛋白
SDS-PAGE凝胶电泳测蛋白质分子量
SDS-PAGE凝胶电泳测蛋白质分子量一、药剂准备a、SDS-PAGE凝胶配制试剂：1、30%Acr-Bis(29:1) 100ml2、1M Tris-HCL,PH8.8 100 ml3、10%SDS 5ml4、Ammonium persulfate (过硫酸铵) 0.5克先配制成10%的溶液以备用，如0.0625g/625ul无菌水。
可可5、TEMED 0.5 ml6、1M Tris-HCL,PH6.8 15mlb、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（5X）2ml，1ml/管，共2管c、蛋白质分子量标准（200ul）d、SDS-PAGE电泳液（1L）由SDS-PAGE电泳液（粉剂）1瓶，已配置好1L在玻璃大试剂瓶中保存，可重复利用。
（不宜超过两周）e、考马斯亮染色液（250ml）f、考马斯亮染色脱色液（500ml）注：脱色液可按如下比例配制（按说明书）：甲醇或者乙醇乙酸250ml 80ml去离子水补至 1000ml,混匀，备用。
二、器材准备移液枪（绿色：100-1000ul, 蓝色：10-100ul, 白色：2-20ul）,不同规格的微量进样针，电泳仪，电泳槽，烧杯，加热器，培养皿，浮子，镊子三、SDS-PAGE 分析操作过程：1、配制蛋白质溶液用试管配制好0.05g/10ml的蛋白质清液。
确保质量分数为3～5g/L。
试管依次标号1、2、3、4、5。
用保鲜膜和皮筋封口保存备用。
最好当天现配。
2、制分离胶（即下胶层）鉴于本蛋白质的最佳分离范围是10-40kD,所以SDS-PAGE分离胶浓度取15%。
按说明书“SDS-PAGE凝胶配制试剂盒”后表格。
依照15%胶，5ml（打勾）一栏。
如图：注意单位，表格中以ml计，操作时用移液枪以ul计，同时注意移液枪量程。
a. 按上图配方制分离胶，迅速摇匀。
b. 安装好电泳仪，组装模具，沿着固定好的大小玻璃板形成的槽边侧分次用移液枪迅速向槽中注入分离胶，注意勿打入气泡，高度至槽高2/3-3/4。
蛋白质的SDS-PAGE检测
百泰派克生物科技
蛋白质的SDS-PAGE检测
SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）十
二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离纯化技术，它利用十二烷基硫酸钠消除蛋白质结构和电泳的影响，使蛋白质仅根据分子质量差异进行分离，广泛用于蛋白质的分离、纯度鉴定、分子量鉴定以及表达分析等。
蛋白质SDS-PAGE检测包括蛋白质SDS-PAGE电泳和电泳后凝胶图像分析两个部分。
在蛋白质SDS-PAGE电泳过程中，不同分子质量的蛋白质迁移速率不同，相对分子
质量较大的蛋白质在电场的作用下迁移较慢，电泳结束后仍然靠近点样孔；而低分子质量的蛋白质迁移速率较快，电泳结束后处于离点样孔较远的位置。
经银染或考马斯亮蓝等方法染色后，便可以观察到凝胶上蛋白质条带的大小、数量和分布情况。
百泰派克生物科技采用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝胶系统，提供快速高效的蛋白质SDS-PAGE检测服务技术包裹，用于多种蛋白质组学分析，包括蛋白质分子
量测定、蛋白质鉴定、样品纯度分析、二硫键鉴定以及蛋白质定量等，欢迎免费咨询。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定蛋白质分子量
(4)聚丙烯胺凝胶的生成：
四、实验步骤：
1、贮液的配制：
2、凝胶的制备： 2.1 胶板的制备： 2.2 分离胶的制备： 2.3 浓缩胶的制备：
3、蛋白样品的制备：
4、装槽、点样： 5、电泳： 6、剥胶、染色、脱色：
2.1 胶板的制备：
3、植物组织蛋白质提取：
称取大豆叶片1g放在研钵中用液氮研磨，加
第二、不连续系统中的三种物理效应：
①电荷效应：
②分子筛效应: ③浓缩效应:
三、实验材料、仪器和试剂：
1、实验材料：黄瓜叶片(芽黄叶和正常叶)
2、仪器、器皿：
(1)垂直板电泳装置
（电泳槽，玻璃板，胶条，电泳梳子，制胶架等）； (2)稳流稳压电泳仪； （4）电子天平； （6）瓷盘、微量进样器； （3）高速冷冻离心机； （5）电冰箱；
②光聚合：
催化剂是核黄素（VB2 ），在痕量氧存在下，核黄素光
解形成无色基，无色基再被氧氧化成自由基，激活单体发 生聚合。光聚合形成的凝胶孔径较大，且不稳定，适于制 备大孔径的浓缩胶。
5)聚丙烯酰胺凝胶结构上的特点：
① 聚丙烯酰胺的基本结构为丙烯酰胺单体构成的长 链，链与链之间通过甲叉桥联结在一起；
⑧支持物筛孔大小：
孔径小，电泳速度慢，反之则快。
2、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE测定蛋白质分子量
02 实验材料
所需的试剂和溶液
丙烯酰胺（AA）：用于制备凝胶，是聚合反应 的单体。
甲叉双丙烯酰胺（MBA）：交联剂，增加凝胶 的交联度。
N,N,N',N'-四甲基乙二胺（TEMED）：催化剂， 加速交联聚合反应。
所需的试剂和溶液
过硫酸铵（APS）
引发剂，产生自由基，引发聚合反应。
SDS
十二烷基硫酸钠，用于变性蛋白质并促使其 带负电荷。
发展新型分离技术
随着生物技术的不断发展，可以发展新型的蛋白质分离技术， 如二维电泳、毛细管电泳等，以提高蛋白质分离的分辨率和准
确性。
应用多维度分析
在后续实验中，可以将SDS-PAGE与其他蛋白质分析技术相结 合，如质谱技术、免疫学检测等，进行多维度分析，更全面地
了解蛋白质的性质和功能。
THANKS FOR WATCHING
白质带负电荷，从而在电场中向正极移动。
聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，能够根据蛋白质分子量的不同
03
对其进行分离。
蛋白质的分子量测定
通过比较标准蛋白的迁移率和已知分 子量的标准蛋白，可以大致测定出待 测蛋白质的分子量。
蛋白质的迁移率与其分子量的对数成 反比，因此可以通过计算待测蛋白与 标准蛋白的相对迁移率来推算其分子 量。
甘氨酸
作为分子量标准品。
Tris-HCl缓冲液
维持电泳过程中的pH值稳定。
所需的仪器和设备
电源
为电泳提供电力。
凝胶板
放置凝胶的框架。
垂直电泳槽
提供电泳所需的基 本结构。
移液器
精确添加试剂和溶 液。
紫外透射仪
检测蛋白质条带。
实验前的准备事项
清洗电泳槽和相关器具，确保无残留物。 准备好所需的试剂和溶液，并确保其在有效期内。
SDS-PAGE全细胞蛋白电泳
2.2.5 SDS全细胞蛋白电泳提取蛋白质：用Ependorf管离心收集菌体（对数生长期），称其重量，并用样品缓冲液（sample buffer）裂解细胞，使其浓度达到150 mg⋅ml-1，放入-20℃冰箱中，临用前在95℃下加热10 min，并以4000 rpm/min离心2 min，待用。
电泳：用DYCZ-24D双垂直电泳槽，10%的分离胶，5%的浓缩胶。
先灌分离胶，等其凝固后再灌入浓缩胶，同时插好梳子。
电泳前将2.1.2.5中样品取出溶化后在95℃下加热10 min放在冰上冷却后即可点样，第一个孔点buffer，第二个孔点marker，其余每孔点样7 μl，电泳时恒流30 mA，视其指示剂溴酚兰到达胶的底端为止。
胶的染脱色及判读：电泳完把胶取下放在大小适合的盒子里，放入染色液在37℃摇床振荡30 min，然后用脱色液脱色，遵循少量多次原则（约5次），直到背景蓝色褪去。
把胶放在紫外成像仪上照相观察，把条带相同的归为一类。
所需试剂：样品缓冲液：4 ml 水；1 ml 0.625 M Tris-HCl，pH 6.8；0.8 ml 甘油；1.6 ml 10% SDS；0.4 ml β-巯基乙醇；0.2 ml 1%百里溴酚兰。
电泳缓冲液：3.03 g Tris base，14.41 g 甘氨酸，1 g SDS；加水到1000 ml；pH 8.4+0.1。
下胶缓冲液：18.17 g Tris Base，2 ml 20%SDS溶液，pH 8.8，加水到100 ml。
上胶缓冲液：6.06 g Tris Base(1.5 M), 2 ml 20%SDS溶液，pH 6.8，加水到100 ml。
10ml 10% 分离胶：2.5 ml 下胶缓冲液；3.4 ml H2O；4.1 ml Acry/biscrylamide (24.2%, 30:1) ; 30 μl 10%的过硫酸铵; 20 μl TEMED。
5 ml5% 浓缩胶：1.25 ml 上胶缓冲液; 2.25 ml 水; 1 ml Acry/biscrylamide(24.2%); 30 μl 10% 的过硫酸铵; 20 μl TEMED。
SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量
SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量SDS-PAGE电泳是现代生物学和生物化学研究中最常用的方法之一，可用于测定蛋白质的相对分子质量、纯度和数量等指标。
下面将就SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量进行介绍。
SDS-PAGE电泳的原理：SDS-PAGE电泳是一种基于PAG（聚丙烯酰胺凝胶板）的矩阵上运行的直流凝胶电泳。
相对分子质量（MW）是以电泳迁移距离为单位来表示的。
蛋白质在PAG上被限制在孔道中运动，因此，蛋白质分子迁移距离与分子大小成正比。
通过使用外部标准，可以精确地将样品的迁移距离转换为分子量。
这种分离方法受到电荷和大小作用的影响，电势梯度使带电的蛋白质分子在凝胶中迁移。
SDS-PAGE电泳的过程：SDS-PAGE电泳的过程主要包括：样品加载、电泳和染色步骤。
（1）样品加载：样品的制备：蛋白质样品通常经过还原和变性，以便将所有蛋白质中的二硫键断裂并且在孔道中呈现线性的多聚蛋白质结构。
这需要在治疗过程中对样品添加SDS缓冲液，然后在热水浴或高压下暴露于还原剂，例如2-硫代乙酸（DTT）或β-巯基乙酸（MEA）。
（2）电泳：将处理过的样品通过凝胶基质中的丝状孔道。
随着电场的施加，蛋白质会在SDS凝胶板上自由迁移，从而分离出蛋白系列。
（3）染色：电泳结束后，将凝胶板进行染色。
目前较常用的方法是银染、共染和Coomassie Brilliant Blue染色法。
SDS-PAGE电泳的应用：SDS-PAGE电泳广泛应用于研究蛋白质相对分子质量、活性定量、纯度评估、亚基分离等方面。
其中，蛋白质相对分子质量的测定是SDS-PAGE电泳的最主要应用之一。
通过将未知蛋白与已知分子质量蛋白一起电泳，可以通过线性回归计算未知标本的分子大小。
蛋白SDS-PAGE蛋白范围
百泰派克生物科技
蛋白SDS-PAGE蛋白范围
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE），也称之为变性聚丙烯酰胺凝胶
电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种含有十二烷基硫酸钠（SDS，变性剂）的常用电泳技术，常用于检测蛋白质分子量大小和样品中的蛋白纯度。
SDS-PAGE有效分离蛋白的范围取决于聚丙烯酰胺的浓度和交联度，其分子筛孔径
随着双丙烯酰胺与丙烯酰胺比率的增加而减小。
因此，SDS-PAGE蛋白范围主要取
决于丙烯酰胺的浓度（%）。
通常情况下，丙烯酰胺的浓度为15%、12.5%、10%、
7.5%、5.0%时，SDS-PAGE蛋白范围分别为15-43.5kDa、15-60kDa、18-75kDa、30-120kDa、60-212kDa。
因此，在进行蛋白SDS-PAGE检测之前，需要预估目标蛋白的分子量大小，然后通过SDS-PAGE实验进行验证。
若无法预知目标蛋白分子量大小，则可优先选择蛋白分子量检测范围大的丙烯酰胺浓度开展SDS-PAGE实验，然后将
电泳后的凝胶蛋白条带采用凝胶呈像系统软件计算蛋白分子量和纯度。
百泰派克生物科技提供基于SDS-PAGE的蛋白分离服务，经过SDS-PAGE电泳将获取蛋白质样品的电泳图谱，结合其它基于质谱的蛋白质鉴定服务对样品进行分析或纯化，用于复杂生物样品的蛋白质谱分析。
您只需将实验目的告知并将样品寄出，我们将负责项目后续所有事宜，包括样品净化（去除DNA和RNA，减少s-s键，蛋白质）、消除样品中高丰度蛋白质以及蛋白质提取、纯化、浓缩和水解消化等处理。
实验二聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE鉴定免疫球蛋白
将制备好的凝胶放入电泳槽，加入电泳缓冲液， 拨除梳子。用微量移液器点样。 5、电泳
样品在浓缩胶时，低电压（60~80V，起始电流不超过10~15mA）， 进入分离胶后，提高电压（100~200V，电流不超过30mA），当 指示剂溴酚蓝前沿距离胶1~2mm，终止电泳。最好在低温下进行。
6、染色与脱色
2、在一塑料盒里加入少量转膜液，将滤纸与胶浸泡 于其中5-10min；PVDF膜浸入甲醇中2min
3、制备“夹心饼”：（膜可比滤纸稍大，防止短路） 提起滤纸平放在盒盖上，用洁净15ml离心管压走多 余的buffer，以不滴水为宜，平铺在半干转印槽上， 再将湿润的膜（实验室统一剪角标记）放在该层滤纸 上；接下来将已切角的胶平铺在膜上，在最上层再铺 上滤纸并压走多余液体。
四肽链结构
所有Ig的基本单位都是四条肽链的对称结构。两条重 链（H）和两条轻链（L）。
三、试剂与器材
1、30%的丙烯酰胺
2、10%SDS 3、TEMED 4、10%过硫酸铵
5、5xSDS-PAGE电泳缓冲液
6、浓缩胶缓冲液（PH6.8）
6.0 g Tris , 48mL 1mol/L HCl,加水至100ml.
4、转膜：（半干转）（PVDF膜0.22UM） 半干转移中，一般恒流（1-1.5mA/cm2，60-90min），
恒压的话15v 60分钟就可以了。 5、关闭电源，用镊子夹取PVDF膜，转移到塑料盒中，加入
5%脱脂奶粉4℃封闭过夜。 6、弃去封闭液，用TBST洗膜3次，每次5min 7、加入一抗，室温平缓摇动2h； 8、废弃液体用TBST洗膜3次，每次5min； 9、加入二抗，室温下孵育1h； 10、废弃液体用TBST洗膜3次，每次5min； 11、显色 在DAB中显色约10-30min，待蛋白质带的颜色
蛋白质sdspage电泳实验报告
蛋白质sdspage电泳实验报告蛋白质SDS-PAGE电泳实验报告引言：蛋白质是生命体中最基本的分子之一，它们在细胞的结构和功能中起着重要的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们开发了许多技术和方法。
其中，SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分析方法，它通过电泳的方式将蛋白质按照其分子量大小进行分离和定量。
实验目的：本实验旨在通过SDS-PAGE电泳技术对不同来源的蛋白质进行分析，了解其分子量和纯度，并探讨其应用于蛋白质研究中的意义。
实验步骤：1. 样品制备：收集不同来源的蛋白质样品，如乳清蛋白、鸡蛋清蛋白等。
将样品加入SDS-PAGE样品缓冲液中，加热至100摄氏度，使蛋白质完全变性。
2. 准备电泳胶：根据实验需要，配制相应浓度的聚丙烯酰胺凝胶，加入TEMED和过硫酸铵使其聚合。
3. 装载样品：将变性后的蛋白质样品注入电泳胶槽中，注意不要产生气泡。
4. 电泳：将电泳胶槽连接至电源，设置合适的电压和时间，进行电泳分离。
5. 凝胶染色：将电泳胶取出，用凝胶染色剂染色，使蛋白质带可见。
6. 图像分析：使用分子量标准品作为参照，通过图像分析软件测量蛋白质带的迁移距离，计算其分子量。
实验结果：通过SDS-PAGE电泳实验，我们成功地将不同来源的蛋白质样品分离出来，并得到了清晰的蛋白质带。
根据分子量标准品的迁移距离，我们计算出了各个蛋白质样品的分子量。
讨论：1. 分子量测定：通过SDS-PAGE电泳实验，我们可以准确地测定蛋白质的分子量。
这对于研究蛋白质的结构和功能非常重要，因为不同分子量的蛋白质可能具有不同的生物活性和相互作用方式。
2. 纯度分析：通过观察电泳胶上的蛋白质带的清晰度和数量，我们可以初步评估样品的纯度。
纯度高的样品通常只有一个清晰的蛋白质带，而纯度低的样品则可能有多个模糊的带。
因此，SDS-PAGE电泳可以帮助我们选择纯度较高的蛋白质样品进行后续实验。
3. 应用前景：SDS-PAGE电泳技术在生物医学研究中有着广泛的应用前景。
11蛋白质的SDS-PAGE电泳
诱导表达蛋白的SDS-PAGE 电泳检测
【实验目的】
1. 学习和掌握SDS-PAGE电泳原理 2. 掌握SDS-PAGE电泳检测诱导表达蛋白
的方法
【实验原理】
1. 带电颗粒在电场中泳动的速度与电场强 度和带电颗粒的净电荷量成正比,而与颗 粒半径(分子量和结构)和介质粘度成反比
2. 若样品为混合的蛋白质溶液时,由于不同 蛋白质的等电点和分子量是不同的,因此 经电泳后,就形成了泳动度不同的区带
4. 中分子量蛋白质Marker
【实验步骤】
1. 凝胶板的制备 2. 点样及电泳 3. 蛋白质的染色和脱色
1. 凝胶板的制备
电泳槽 斜 楔 板
密封条
梳子 平,凹玻板
1
2
3
4
配胶
SDS-PAGE 分离胶(下)
成分
水
3.3 ml
30%(聚)丙烯酰胺溶液 4.0 ml
0.5mol/L Tris(pH6.8)
SDS-PAGE电泳
分子筛作用 分子量大的蛋白质泳动的速度慢, 分子量小的蛋白质泳动的速度快
SDS-PAGE的有效分离范围
丙烯酰胺浓度/%
15 12 10 7.5 5.0
线性分离范围/kDa
10-43 12-60 20-80 36-94 57-212
分离胶 浓缩胶
【实验材料】
1. 诱导表达产物(自己上次实验制备) 2.SDS-PAGE系统(北京六一) 3.电泳仪
产生气泡.室温放置约30分钟.凝固好后, 拔出梳子。
④ 待积层胶聚合完全后,小心的拔出梳
子(垂直向上)
⑤ 取出制胶板,拿掉硅胶密封圈后,短板
向内放回电泳槽(压紧)
⑥ 将电泳槽与电泳仪连接好(注意正负极),
SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量
四、实验操作流程
1.安装夹心式垂直板电泳槽 (1)装上贮槽和固定螺丝销钉，仰放在桌面上。 (2) 将长、短玻璃板分别插到凵形硅橡框的凹形槽中，注意勿 用手接触灌胶面的玻璃。 (3) 将已插好玻璃板的凝胶模平放在上贮槽上，短玻璃板应面 对上贮槽。 (4) 将下贮槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上贮槽，双手以对 角线的方式旋紧螺丝帽。 (5) 竖直电泳槽，在长玻璃板下端与硅胶模框交界的缝隙内加 入已融化的 1% 琼脂 ( 糖 ) 。其目的是封住空隙，凝固后的琼 脂(糖)中应避免有气泡。
三、实验用品
仪器：垂直电泳槽；直流稳压电源；50或100μl微量注射器、玻璃板、水 浴锅，染色槽；烧杯；吸量管；常头滴管等。 材料：人血清；原料：低分子量标准蛋白质按照每种蛋白0.5~1mg· ml-1样 品溶解液配制。可配制成单一蛋白质标准液，也可配成混合蛋白质标准液。 试剂： （1）分离胶缓冲液（Tris-HCl缓冲液 PH8.9）：取1mol/L盐酸48mL，Tris 36.3g，用无离子水溶解后定容至100mL。 （2）浓缩胶缓冲液（Tris-HCl缓冲液 PH6.7）：取1mol/L盐酸48mL， Tris 5.98g，用无离子水溶解后定容至100mL。 （3）30%分离胶贮液：丙烯酰胺（Acr） 30g及N，N’-甲叉双丙烯酰胺 （Bis）0.8g，溶于重蒸水中，最后定容至100ml，过滤后置棕色试剂瓶中， 4℃保存。
4．样品处理及加样 各标准蛋白及待测蛋白都用样品溶解液溶解，使浓 度为0.5~1mg/mL，将其转移到带塞的小离心管中，轻轻 盖上盖子(不要塞紧，以免加热时迸出)，在100℃沸水浴 中加热3min，取出冷却后加样。 一般加样体积为10－15μL（即2－10μg蛋白质）。 如样品较稀，可增加加样体积至25 L。用微量注射器小 心将样品通过缓冲液加到凝胶凹形样品槽底部，待所有 凹形样品槽内都加了样品，即可开始电泳。
蛋白质的SDSPAGE电泳
无法分析疏水性蛋白质
02
SDS-PAGE电泳主要适用于分析带有强负电荷的蛋白质，对于疏
水性蛋白质，其分离效果可能不佳。
对样品要求高
03
为了获得准确的电泳结果，需要确保样品的纯度和浓度，这可
能需要耗费较多的时间和精力。
感谢您的观看
THANKS
01
02
03
丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺： 用于制备凝胶的交联剂。
过硫酸铵和TEMED （N,N,N',N'-四甲基乙二 胺）：促进凝胶聚合。
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05
考马斯亮蓝染料：用于染色 蛋白质条带。
03 电泳技术
聚丙烯酰胺凝胶的制备
制备凝胶前的准备
配制凝胶溶液
清洗玻璃板、准备试剂和工具，确保实验 环境干净整洁。
脱色
染色完成后，将凝胶从染色液中取出 ，进行脱色处理，以去除背景颜色， 使蛋白质条带更清晰可见。常用的脱 色液有乙醇和醋酸。
结果观察与解读
观察
通过观察凝胶上的蛋白质条带，可以判断蛋白质的大小、数量和浓度等信息。
解读
根据蛋白质条带的颜色深浅、迁移率和电泳行为等特征，可以对蛋白质的性质 进行初步判断。
根据所需的浓度和孔径大小，准确称量丙 烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺，加入适量的水 和缓冲液，混合均匀。
灌制凝胶
聚合凝胶
将凝胶溶液倒入玻璃板间的凹槽中，确保 没有气泡和缝隙，然后插入梳子以固定凝 胶。
将灌制好的凝胶放入恒温箱中，保持一定 的温度和时间，使凝胶聚合。
样品处理与加样
01
02
03
样品准备
根据实验需求，将蛋白质 样品进行适当的稀释和变 性处理。
实验步骤
样品制备
将待测蛋白质样品与SDS和β-巯基乙 醇混合，使蛋白质完全变性并带上等 量的负电荷。
sdspage分离蛋白质实验报告
sdspage分离蛋白质实验报告
SDS-PAGE分离蛋白质实验报告
引言
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离技术，通过电泳原理将蛋白质按照其分子量大小进行分离。
本实验旨在利用SDS-PAGE技术对不同来源的蛋白质进行分离，并观察其分离效果。
材料与方法
1. 样品制备：收集不同来源的蛋白质样品，如动植物组织、细胞培养液等。
2. 样品处理：将样品加入SDS-PAGE样品缓冲液，并在100℃下煮沸5分钟，使蛋白质变性。
3. 准备SDS-PAGE凝胶：按照实验要求制备SDS-PAGE凝胶。
4. 样品加载：将处理好的样品加载到SDS-PAGE凝胶孔中。
5. 电泳分离：在设定好的电泳条件下进行电泳分离。
6. 凝胶染色：将分离后的蛋白质凝胶进行染色，观察分离效果。
结果与讨论
经过SDS-PAGE电泳分离后，观察到不同来源的蛋白质在凝胶上呈现出不同的条带。
通过比较不同样品的分离效果，可以发现不同来源的蛋白质在分子量和丰度上存在差异。
此外，通过与已知分子量标准蛋白质进行对照，可以进一步确定待测蛋白质的分子量。
结论
本实验通过SDS-PAGE技术成功分离了不同来源的蛋白质样品，并观察到了它们的分子量差异。
这为进一步的蛋白质研究和分析提供了重要的数据支持。
同
时，本实验也展示了SDS-PAGE技术在蛋白质分离领域的重要应用价值。
结语
通过本次实验，我们对SDS-PAGE技术有了更深入的了解，并获得了宝贵的实验数据。
期待未来能够进一步应用这一技术，探索更多蛋白质的分离与分析。
sds-page(聚丙烯酰胺)蛋白电泳原理
sds-page(聚丙烯酰胺)蛋白电泳原理下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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SDS-PAGE测定蛋白质分子量
SDS-PAGE测定蛋白质分子量一、实验目的1、学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理。
2、掌握垂直板电泳的操作方法。
3、运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定。
l二、实验原理1、带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动，这种现象称为电泳。
电泳分类：移动界面电泳、区带电泳、稳态电泳。
其中区带电泳是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支持介质中迁移。
支持介质的作用主要是为了防止机械干扰和由于温度变化以及大分子溶液的高密度而产生的对流。
区带电泳早期使用不同的支持介质有滤纸、玻璃珠、淀粉粒、纤维素粉、海砂、海绵、聚氯乙烯树脂；以后有淀粉凝胶、琼脂凝胶、醋酸纤维素膜，现在则多用聚丙烯酰胺（PAGE）和琼脂糖凝胶。
2、PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。
不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。
3、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠），SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
sds-page鉴定目的蛋白质
百泰派克生物科技
sds-page鉴定目的蛋白质
SDS-PAGE十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种最常用的高分辨率分析分离
电泳技术。
电泳通过施加电场使带电分子在基质中移动，在这种技术中，影响带电分子迁移率的因素包括其本身的相对分子量、电荷以及结构等。
SDS-PAGE用阴离
子去污剂对待检测样品进行初始变性，赋予所有待测分子与其分子量成比例的负电荷，再结合聚丙烯酰胺凝胶可以消除结构以及电荷的影响，使待测物质仅根据其分子量的差异进行分离，常用于复杂DNA、RNA和蛋白质在内的大分子高分辨率分离
实验。
利用SDS-PAGE鉴定蛋白质时，既可以对单一蛋白质进行电泳分析也可以对蛋白混
合物进行鉴定。
样品中的蛋白质根据其相对分子质量大小进行迁移，在电泳结束后，不同分子质量的蛋白质分子被分离成不同的蛋白条带。
对于单一的蛋白质样品，可以用于其分子质量鉴定，同时还可验证其是否含有其他蛋白杂质；对于蛋白样品混合物来说，通过SDS-PAGE电泳可以分离混合样品中的不同组分，并对其相对分子
质量进行鉴定。
另外，根据电泳结束后蛋白条带的宽度可以粗略估计其含量的多少。
百泰派克生物科技使用Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra凝胶系统以及Thermo公司
最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪，结合nanoLC-MS/MS纳升色谱，提供基于SDS-PAGE和质谱的蛋白质鉴定服务技术包裹，可快速准确的鉴定各种蛋白样品
的相对分子量、纯度、结构、氨基酸组成及排列顺序等。
此外，百泰派克生物科技还可提供定制化的分析服务，满足不同的实验需求，欢迎免费咨询。
sds-page聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质含量实验注意事项
SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质含量的实验注意事项如下：
1. 实验器材的清洁：ACr和BIs是神经性毒剂且对皮肤有刺激作用，配制贮液、配胶、灌胶操作时，要戴上医用乳胶手套或指套，避免与皮肤接触。
只要细心操作，一般不会引起损伤。
2. 严谨操作：SDS-PAGE 测定分子量有误差，不可完全信任。
有必要时，应同时作标准曲线。
并且SDS—PAGE 测定分子量有10%误差，不可完全信任。
3. 注意个人安全：在实验过程中请注意个人安全，避免直接接触化学试剂。
以上就是用SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质含量的注意事项，如果您对实验步骤有疑问或者想了解更多信息，请咨询专业人士。
实验12 蛋白表达的SDS-PAGE检测
实验12 蛋白表达的SDS-PAGE 检测实验目的：使学生掌握蛋白质电泳检测常用技术：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE），以及聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue，R-250）染色技术。
同时此实验还要学生掌握如何检测分析蛋白原核表达的状态，即判断蛋白原核表达部位：培养液（medium）、可溶性胞质部分（soluble fraction）、周质部分（periplasmic fraction）、包涵体部分（insoluble fraction）。
实验原理：聚丙烯酰胺（polyacrylamide，PAA）凝胶是丙烯酰胺（acrylamide，Acr），在交联剂甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide，Bis）的作用下经聚合而形成的一种大分子化合物（图12-1）。
图12-1丙烯酰胺的聚合作用只有在自由基存在时才能发生，需要一个催化诱发剂系统产生自由基，过硫酸铵（ammonium persulfate，APS）和N，N，N′，N′-四甲基乙二胺（tetramethylethylenediamine，TEMED）就是这样的催化诱发系统。
聚丙烯酰胺的聚合反应是通过加入过硫酸铵启动的，添加TEMED加速聚合反应。
过硫酸铵提供引发丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合的自由基。
诱发剂TEMED 能加速过硫酸铵形成自由基，使丙烯酰胺单体转变为自由基态。
被激活的单体和未被激活的单体开始了多聚链的延伸，正在延伸的多聚链也可以随机地接上双丙烯酰胺，使多聚链交叉互连成为网状立体结构，最终多聚链聚合成凝胶状。
溶液的pH 对聚合作用是重要的，因为过低pH 没有足够的碱基加速催化反应，同样过多的氧分子存在，会使聚合作用很快停止。
所以制备凝胶时，在加过硫酸胺之前，混合物必须抽去空气。
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试验三SDS-PAGE电泳分析表达蛋白
一、实验目的与要求
1. 掌握SDS-PAGE电泳的操作步骤。
2. 学会用电泳图分析原核表达效果
二、实验原理
聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。
SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。
该技术最初由shapiro于1967年建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂（SDS即十二烷基磺酸钠）后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小。
三、实验材料与试剂
诱导表达后的蛋白，SDS-PAGE凝胶电泳试剂，蛋白上样缓冲液等。
四、实验仪器设备
伯乐蛋白电泳仪，细菌振荡培养箱、高压灭菌锅、电子天平，电炉，量筒等。
五、实验步骤
1、SDS-PAGE凝胶电泳试剂
1）1.0 M Tris/HCl溶液（pH 6.8）：121 g Tris溶于900 mL蒸馏水，浓HCl调pH至6.8，定容至1 L；
2）1.5 M Tris/HCl溶液（pH 8.8）：182 g Tris溶于900 mL蒸馏水，浓HCl调pH至8.8，定容至1 L；
3）30 %丙烯酰胺溶液：292 g丙烯酰胺和8 g甲叉双丙烯酰胺溶于900 mL蒸馏水中，定容至1 L，4 ℃避光贮存待用；
4）5×电泳缓冲液（pH 8.3）：94 g 甘氨酸和15.1 g Tris溶于800 mL蒸馏水中后，加入50 mL 10 % SDS溶液，定容至1 L，常温贮存，用时用蒸馏水稀释至1倍缓冲液；
5）上样缓冲液：4 mL 10 % SDS溶液，0.2 mL巯基乙醇，1 mL 1.0 M Tris缓冲液，然后加入2 g甘油，20 mg溴酚蓝，充分溶解后定容到20 mL，4 ℃贮存待用；
6）染色液：1.0 g 考马斯亮蓝（R250），100 mL冰醋酸，450 mL 甲醇混合，定容至1 L，充分混匀备用；
7）脱色液：乙酸100 mL，甲醇300 mL，加水定容到1 L；
8）10 %过硫酸铵：0.1 g 过硫酸铵加入1 mL 蒸馏水充分溶解，需现配现用。
2、SDS-PAGE凝胶电泳试剂
1）利用12 %的分离胶进行SDS-PAGE进行电泳
2）配制12 %的分离胶（10 mL）
混匀，用注射器缓慢在两玻璃板之间加入分离胶溶液，留出浓缩胶的空间（与顶部距离约2.5 cm），以无水乙醇封胶，室温放置使其完全聚合（约30 min）。
4）倒掉无水乙醇，超净工作台放置10-15 min，使其完全挥发；
5）5 %浓缩胶配制（10 mL）
混匀，用注射器缓慢在两玻璃板之间加入浓缩胶溶液至顶端，小心插入梳子，室温放置使其完全聚合（约30 min）。
6）聚合完全后，轻轻拔出梳子，放入电泳设备，准备点样；
7）点样：用点样10 μL枪头进行点样，每次点20 μL；
8）电泳：额定电压80 V 30-60 min，待溴酚蓝条带离开浓缩胶时调整额定电压为120 V 至电泳结束；
9）染色及脱色：SDS-PAGE电泳结束后，小心取出凝胶，用去离子水清洗3-4遍，加入染色液染色2-3 h（30 r/min），倒掉染色液，用去离子水漂洗3-4遍，加入脱水液脱色6-8 h；
10）成像：脱色结束后用Bio-rad成像系统成像拍照并保存图片。
六、实验作业
1、简述SDS-PAGE操作原理。
2、简述SDS-PAGE操作步骤。
3、何谓聚丙烯酰胺凝胶电泳？
4、何谓电泳及其分离原理？
5、SDS-PAGE的应用有哪些？
6、电泳蛋白样品如何制备？。