最新11级生物技术1班发酵工程实验计划方案汇总

11级生物技术1班发酵工程实验计划方案

生物技术一班发酵工程实验计划方案一、实验日程表

二、实验分组

第一组：薛盛、张川、周宁、殷清玉宇、周辰栋、杨朝伟、吴迪、刘洋、刘丽婷（负责人：吴迪）

第二组：张怡、沈飞、徐依依、陆佳桦、吴冰燕、王芸清鉴、叶晨、汪素红、刘杏、刘文跃（负责人：沈飞）

第三组：田玉寒、闻宁、林飞敏、李林棋、丁铭、周欣欣、罗斯、蒋秋艳、刘宇霞（负责人：田玉寒）

三、时间分配

前三周的周二晚发酵理论课照上，因此各组的固定实验时间如下：第一组固定实验时间：周一下午、周三晚上

第二组固定实验时间：周二中午、周四上午

第三组固定实验时间：周五下午、周五晚上

后三周的周二晚无理论课，各组集中在周二晚实验

前三周每周安排两次实验，以获取更多的实验数据，后三周每周一次集体实验

几个重要时间节点为：第10周正式进入实验程序；

第13周获得目标菌株1株；

第14周完成种子的摇瓶培养；

第15周分别完成上罐发酵；

第16周实验收尾工作。

四、实验内容

实验一产蛋白酶微生物菌株的分离

【实验材料】

1、采样样品

食堂泔脚等残存蛋白质丰富的环境周围的土壤或其它蛋白质腐败材料。

2、培养基

（1）增殖培养基：蛋白胨10 g/L，牛肉膏3 g/L，氯化钠5 g/L，pH 7.0～7.2，0.1MPa，灭菌20min。

（2）分离纯化培养基：酪蛋白10 g/L，Na2HPO4 6 g/L，KH2PO4 3 g/L，NaCl 0.5 g/L，NH4Cl 1 g/L，FeSO4 0.025 g/L，酵母膏0.2 g/L，MgSO4 0.24 g/L，CaCl2 0.011 g/L，溴百里香酚兰0.05 g/L，琼脂20 g/L，pH 7.0～7.2，0.1MPa，灭菌20min。

（3）菌种保存培养基：蛋白胨10g/L，牛肉膏 3 g/L， NaCl 5g/L，琼脂 20g/L，pH 7.0～7.2，0.1MPa, 灭菌20min。

（4）无菌水：90 mL无菌水/250 mL三角瓶; 9 mL无菌水/试管6支。

3、实验器材

刮铲、一次性手套、无菌小塑料袋、试管、三角瓶、培养皿、吸管、接种环和涂布棒等。

4、实验设备

涡旋振荡器、超净工作台、高压灭菌锅、振荡培养箱、恒温培养箱、（数码）显微镜。

【实验步骤】

1、采样

分别取食堂泔脚池周边土壤，腐烂基质或其它可能含有蛋白酶生产菌的生物制剂10g装入无菌小塑料袋，在超净工作台上将样品混合均匀从中称取1g作为待增殖的采样样品。

2、增殖培养

1g待增殖的采样样品加入50 mL增殖培养基/250 mL三角瓶中，涡旋振荡器上振荡5min，可设置3组平行。混匀的液体置于30℃，180 r/min振荡培养箱中摇瓶培养36 h。增殖后的培养液置于80℃水浴中加热10 min去除营养体细胞，迅速取出冷却至常温，待用。平行样可以在加热处理后再合并成一个样作为增殖培养液。

3、增殖液梯度稀释

在超净工作台中取增殖培养液10 mL加入装有90 mL无菌水的250 mL三角瓶中，静置5 min后用涡旋振荡器上振荡5 min，制成10-1稀释菌液。用无菌吸管吸取1 mL 10-1稀释菌液加入9 mL无菌水试管中，涡旋振荡器1 min制成10-2稀释菌液，再依次用无菌吸管吸

取1 mL 稀释菌液加入9 mL 无菌水试管中梯度稀释成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7倍稀释菌液。 4、平板涂布

分别取0.1mL 10-6、10-7稀释菌液于分离培养基平板上，用无菌涂布棒分别涂布均匀，每一稀释度重复5个平行。 5、培养

将涂布好的平板放入30℃微生物恒温培养箱中倒置培养36 h 后，观察培养结果，统计总菌数、菌落种类及各自比例。 6、菌株鉴别及纯化

挑取菌落周围培养基变蓝色的典型菌落，在保存培养基平板上划线纯化至单一菌落。显微观察菌体形态。纯化后的纯菌落作斜面菌种保藏作为后续实验的备用菌种。

【实验结果】 1、菌落总数M

M =

)/(101.0ml cfu N

n

N n =⨯⨯ （1.1）

2、目标菌株比例P

P=(%)100⨯M

m （1.2）

式中：n 为平板上菌落数（个），以出现30-300个菌落的平板计数为宜，0.1为涂布稀释液加量（mL ），10为量取的增殖培养液量（mL ）, m 为变色菌落数，N 为所计数平板的稀释倍数。

3、显微观察典型目标菌落及细胞形态。

实验二蛋白酶生产菌种的筛选

【实验材料】

1.待选菌种

取“实验1”分离出的待选菌株3~5株，或以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和地衣芽孢杆菌(Bacillus lichenifornis)等不同产蛋白酶性状的菌株5~7株。

2.培养基

（1）鉴别培养基：酪蛋白10 g/L，Na2HPO4 6 g/L，KH2PO4 3 g/L，NaCl 0.5 g/L，NH4Cl 1 g/L，FeSO4 0.025 g/L，酵母膏0.2 g/L，MgSO4 0.24 g/L，CaCl2 0.011 g/L，溴百里酚蓝0.05 g/L，琼脂20 g/L，pH 7.0～7.2，0.1MPa，灭菌20min。

（2）验证培养基：可溶性淀粉10 g/L，蛋白胨 5 g/L，酵母膏0.25 g/L， KH2PO4 3 g/L，NaCl 0.5 g/L，MgSO4 0.24 g/L，pH 7.0～7.2，分装成50mL培养基/250mL三角瓶，0.1MPa，灭菌20min。