选修1.1第一章微生物的利用
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⑤菌种保存:在无菌条件下将单菌落用接种环取出,再用划线法接种 在斜面上,37 ℃培养24 h后,放于冰箱内保存,温度控制在4 ℃。 ⑥实验结束后,为防止细菌污染,需要对培养物进行灭菌处理。 (3)实验结果及相应结论 若观察到在划线的末端出现不连续的单个菌落,表明菌已被分离了。
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(2)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子五类 营养物质。 (3)制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤:计算→称量→溶化、调 pH→灭菌→倒平板。 3.无菌技术 (1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。应根据情况进行 消毒和灭菌。
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②自三角瓶向培养皿中转移并分装固体培养基:待冷却至60 ℃左右 时,将三角瓶中的培养基在超净台上分装至几个培养皿中,制成固体 培养基。 ③将大肠杆菌自斜面转移到三角瓶中的液体培养基中培养:将大肠杆 菌用接种环在无菌操作下接种至三角瓶中的液体培养基中,在37 ℃ 摇床振荡培养12 h,完成大肠杆菌培养。 ④将菌液在固体平面培养基上划线分离。从前一步培养得到的菌液 中获取菌种,用接种环以划线法接种至第二步制得的固体平面培养基 中,在37 ℃恒温箱中培养12~24 h后观察菌落。
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(2)细菌分离 ①平板划线法:用接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作,将聚 集的菌种逐步分散到培养基表面。培养10~20小时后,可以分离到由 一个细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群,即菌落。 ②稀释涂布分离法:将菌液先进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀 释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,然后进行培养。 ③两种方法比较:划线分离,方法简单;涂布分离,单菌落更易分开,但 操作复杂些。两种方法都能将混杂在一起的微生物分离成单个细胞, 并能在培养基表面形成单个菌落,以便分离和纯化菌种。
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以上灭菌原理是使细菌体内蛋白质变性而达到杀灭细菌的目的。 (5)消毒方法 ①煮沸消毒法:100 ℃煮沸5~6 min可以杀死微生物的营养细胞和一 部分芽孢,可用于培养器皿的消毒。 ②巴氏消毒法:80 ℃中15 min或70~75 ℃中30 min,实际生产中常用于 鲜奶的消毒。 ③70%乙醇消毒法:70%乙醇杀毒能力最强,常用于实验时操作者手臂 的消毒。 (6)含抗生素的牛奶不能发酵为酸奶的原因:牛奶发酵成酸奶是利用
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(2)消毒与灭菌的区别 ①消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一 部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸 消毒法,还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、红外线消毒 等。
②灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括 芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等。
(2)一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值
为23.4,那么每毫升样品中的菌落数量为(涂布平板时所用稀释液的
体积为0.2 mL)
。
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(3)用这种方法测定密度,实际活菌数量要比测得的数量
,因
为
。
选修1 生物技术实践专题
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第一章 微生物的利用
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核心理解突破 ◎迁移升华思维的加油站◎
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考点一 大肠杆菌的培养和分离 1.大肠杆菌:是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌,在肠道中一般对人 无害,是原核生物,是基因工程中广泛采用的工具。 2.培养基 (1)培养基按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。在液体培 养基中加入凝固剂琼脂后,制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养 基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。
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乳酸菌来完成的。乳酸菌属于细菌,抗生素有抑制甚至杀死细菌的作 用。 4.细菌的培养与分离 (1)细菌的培养 ①用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,细菌以分裂方式繁殖,分裂速 度很快,条件适宜时,20分钟可分裂一次。 ②如要将已有细菌培养物转移到新的培养基时,一般用接种环转移带 菌的培养物。
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5.大肠杆菌的培养和分离实验 (1)实验目的 ①进行大肠杆菌的扩增,利用LB液体培养基进行细菌培养的操作。 ②进行大肠杆菌的分离,用LB固体培养基进行细菌的划线培养。 ③说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。 (2)实验步骤 ①灭菌:用高压锅在1 kg压力下对LB液体培养基、LB固体培养基和 培养皿灭菌15 min。
(3)无菌操作要求 ①首要条件是各种器皿必须是无菌的。
②各种培养基必须是无菌的。
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③菌转移操作的过程必须是无菌的。 (4)灭菌方法 ①常用高压蒸汽灭菌法。即用高压蒸汽灭菌锅在 121 ℃(1 kg·cm-2压 力)下灭菌15 min。 ②干热灭菌,用干热灭菌箱对耐热器具在160 ℃维持 2 h 或170 ℃维 持1 h灭菌。 ③酒精灯灼烧法:如接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌。酒精灯火焰上 方无菌区,可使菌转移过程在无菌条件下完成。 ④利用紫外灯照射灭菌。用紫外灯照射灭菌30 min。
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(1)测定的大肠杆菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几
种统计结果,正确可信的是
。
A.一个平板,统计的菌落数是23
B.两个平板,统计的菌落数是22和26,取平均值24
C.三个平板,统计的菌落数分别是21、5和52,取平均值26
D.四个平板,统计的菌落数分别是21、30、24和25,取平均值25
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【例1】 自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物 时一般要将它们分离提纯,然后进行数量的测定。下面是对大肠杆 菌进行数量测定的实验,请回答有关问题。 步骤: ①制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 ②用稀释涂布平板法接种样品。 ③适宜温度下培养。 结果分析:
⑤菌种保存:在无菌条件下将单菌落用接种环取出,再用划线法接种 在斜面上,37 ℃培养24 h后,放于冰箱内保存,温度控制在4 ℃。 ⑥实验结束后,为防止细菌污染,需要对培养物进行灭菌处理。 (3)实验结果及相应结论 若观察到在划线的末端出现不连续的单个菌落,表明菌已被分离了。
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(2)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子五类 营养物质。 (3)制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤:计算→称量→溶化、调 pH→灭菌→倒平板。 3.无菌技术 (1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。应根据情况进行 消毒和灭菌。
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②自三角瓶向培养皿中转移并分装固体培养基:待冷却至60 ℃左右 时,将三角瓶中的培养基在超净台上分装至几个培养皿中,制成固体 培养基。 ③将大肠杆菌自斜面转移到三角瓶中的液体培养基中培养:将大肠杆 菌用接种环在无菌操作下接种至三角瓶中的液体培养基中,在37 ℃ 摇床振荡培养12 h,完成大肠杆菌培养。 ④将菌液在固体平面培养基上划线分离。从前一步培养得到的菌液 中获取菌种,用接种环以划线法接种至第二步制得的固体平面培养基 中,在37 ℃恒温箱中培养12~24 h后观察菌落。
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(2)细菌分离 ①平板划线法:用接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作,将聚 集的菌种逐步分散到培养基表面。培养10~20小时后,可以分离到由 一个细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群,即菌落。 ②稀释涂布分离法:将菌液先进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀 释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,然后进行培养。 ③两种方法比较:划线分离,方法简单;涂布分离,单菌落更易分开,但 操作复杂些。两种方法都能将混杂在一起的微生物分离成单个细胞, 并能在培养基表面形成单个菌落,以便分离和纯化菌种。
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以上灭菌原理是使细菌体内蛋白质变性而达到杀灭细菌的目的。 (5)消毒方法 ①煮沸消毒法:100 ℃煮沸5~6 min可以杀死微生物的营养细胞和一 部分芽孢,可用于培养器皿的消毒。 ②巴氏消毒法:80 ℃中15 min或70~75 ℃中30 min,实际生产中常用于 鲜奶的消毒。 ③70%乙醇消毒法:70%乙醇杀毒能力最强,常用于实验时操作者手臂 的消毒。 (6)含抗生素的牛奶不能发酵为酸奶的原因:牛奶发酵成酸奶是利用
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(2)消毒与灭菌的区别 ①消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一 部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)。消毒方法常用煮沸 消毒法,还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、红外线消毒 等。
②灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括 芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等。
(2)一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值
为23.4,那么每毫升样品中的菌落数量为(涂布平板时所用稀释液的
体积为0.2 mL)
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(3)用这种方法测定密度,实际活菌数量要比测得的数量
,因
为
。
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第一章 微生物的利用
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核心理解突破 ◎迁移升华思维的加油站◎
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考点一 大肠杆菌的培养和分离 1.大肠杆菌:是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌,在肠道中一般对人 无害,是原核生物,是基因工程中广泛采用的工具。 2.培养基 (1)培养基按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。在液体培 养基中加入凝固剂琼脂后,制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养 基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。
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乳酸菌来完成的。乳酸菌属于细菌,抗生素有抑制甚至杀死细菌的作 用。 4.细菌的培养与分离 (1)细菌的培养 ①用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌,细菌以分裂方式繁殖,分裂速 度很快,条件适宜时,20分钟可分裂一次。 ②如要将已有细菌培养物转移到新的培养基时,一般用接种环转移带 菌的培养物。
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5.大肠杆菌的培养和分离实验 (1)实验目的 ①进行大肠杆菌的扩增,利用LB液体培养基进行细菌培养的操作。 ②进行大肠杆菌的分离,用LB固体培养基进行细菌的划线培养。 ③说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。 (2)实验步骤 ①灭菌:用高压锅在1 kg压力下对LB液体培养基、LB固体培养基和 培养皿灭菌15 min。
(3)无菌操作要求 ①首要条件是各种器皿必须是无菌的。
②各种培养基必须是无菌的。
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③菌转移操作的过程必须是无菌的。 (4)灭菌方法 ①常用高压蒸汽灭菌法。即用高压蒸汽灭菌锅在 121 ℃(1 kg·cm-2压 力)下灭菌15 min。 ②干热灭菌,用干热灭菌箱对耐热器具在160 ℃维持 2 h 或170 ℃维 持1 h灭菌。 ③酒精灯灼烧法:如接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌。酒精灯火焰上 方无菌区,可使菌转移过程在无菌条件下完成。 ④利用紫外灯照射灭菌。用紫外灯照射灭菌30 min。
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(1)测定的大肠杆菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几
种统计结果,正确可信的是
。
A.一个平板,统计的菌落数是23
B.两个平板,统计的菌落数是22和26,取平均值24
C.三个平板,统计的菌落数分别是21、5和52,取平均值26
D.四个平板,统计的菌落数分别是21、30、24和25,取平均值25
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【例1】 自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物 时一般要将它们分离提纯,然后进行数量的测定。下面是对大肠杆 菌进行数量测定的实验,请回答有关问题。 步骤: ①制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 ②用稀释涂布平板法接种样品。 ③适宜温度下培养。 结果分析: