大肠、沙门、志贺菌的培养与鉴定1
沙门菌和志贺菌鉴定流程
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在进行沙门菌和志贺菌鉴定之前，首先要进行准确的样本采集。
沙门氏菌和志贺氏菌的检测ppt文档
肠杆菌科共同特性
相似的形态染色 G-小杆菌，有鞭毛(痢疾杆菌外) 菌毛，某些有荚膜，无芽胞
简单的培养条件 需氧或兼性厌氧，营养要求不高
活泼的生化反应 致病菌 非致病菌
乳糖 发酵 实验
阴性 阳性
SS琼脂培养基
（含胆盐、乳糖、中性红等）
4、抗原构造复杂
鞭毛抗原（H） IgG
K或Vi抗原
菌体抗原（O） IgM
沙门菌检测
• 美国细菌学家Salmon与Smith于1885年分离 出猪霍乱沙门菌。1990年为纪念Salmon，定 名这类细菌为沙门菌属。
• 沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌。包括伤寒、 副伤寒甲、乙、丙型，肠炎，鼠伤寒等沙门菌， 现今已发现2324个血清型。
• 在世界各地的食物中毒中，沙门菌食物中毒常 占首位或第二位。规定在药品和食品中不得检 出沙门菌。美国每年报道病例45 000个左右， 实 际 数 量 可 能 多 达 200-300 万 。 伤 寒 每 年 400-500例。
➢ H抗原：为不稳定的蛋白质抗原，加热或用乙 醇处理均被破坏。沙门菌H抗原有两个相,第一 相特异性较高称特异相,用小写英文字母a、b、 c表示，直至z，z以衙用z加阿拉伯数字表示， 如z1、z2、z3等，第二相抗原为沙门菌共有， 称非特异相，直接用1、2、3表示。同时有第 一相和第二相H抗原的细菌称为双相菌，仅有 一相者称单相菌。H抗原是定型的依据，其刺 激机体产生的抗体以IgG为主，与相应的抗血 清呈絮状反应。
抗原构造
• 菌体抗原（o）：不被乙醇、0.1%石炭酸所破 坏。与特异性抗血清呈颗粒状凝集，形成慢， 不易摇散。现已知有50多种，多数沙门菌含有 两种以上的O抗原，有的O抗原是一种菌独有 的，有的是几种菌共有的，凡含有共同特异性 抗原成分的血清型归为一个群，可将沙门菌化 分为42群，按A-Z排列，Z以后的顺序以O51O67表示。引起人类沙门菌病的95%以上都在 A-F 6个群内。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
肠道致病菌的检验与鉴定方式
5、沙门氏菌哪几个菌型具有Vi抗原，Vi抗原对O抗原 血清涟试验有何影响，对含Vi抗原菌，如何做O抗 原血清学试验。
6、沙门氏菌在SS平板，T分离纯化后怎样选用最少的生化试验方法初步鉴 定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。
8、如何进行沙门氏菌的血清学试验。
肠道致病菌的检验与鉴定方式
（1）三糖铁培养的培养
典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征： 表面（-）粉红色、底层（+）黄色、 H2S （+）底层有黑色、有动
力。 在TSI培养基中：表面（+）黄色、 H2S （-）的培养物可排除，其
它培养物均有可能是沙门氏菌。
肠道致病菌的检验与鉴定方式
（2）其余四项生化实验
甘露醇+
靛基质- 靛基质+
乳糖-
乳糖+
靛基质-
靛基质+
靛基质-
痢疾志贺 痢疾志 氏菌1、3、 贺氏菌 4、5、6、 2、7、 9、10型 8型
福氏6型， 鲍氏1、2、 3、4、5、 6、8、10、 12、14型
福氏痢疾菌
（1、2、3、4、
5型）鲍氏5、 宋氏志 7、9、11、13、 贺氏菌 15型
肠道致病菌的检验与鉴定方式
肠道致病菌的检验与鉴定方式
4、表面抗原：
沙门氏菌有三种：Vi、M、5抗原、K抗原 Vi抗原位于菌体的最表层，包围了O抗原，可阻碍O抗原的血清
学凝集试验。破坏Vi抗原：60℃ 30′，100 ℃ 5′ 含有Vi 抗原的沙门氏菌：
伤寒沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、都柏林沙门氏菌
肠道致病菌的检验与鉴定方式
肠道致病菌的检验与鉴定方式
肠道致病菌的检验(沙与鉴门定方氏式 菌（红色）侵入人体细胞
肠杆菌科细菌的培养与鉴定
－
＋＋
－
－
普通变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F ＋ ＋ － －/+ ＋
＋
＋－
－
－
奇异变形杆菌 K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ +/－ +/－ ＋
＋
＋－
＋
－
志贺菌
K/A － － － F －/＋ ＋ － － ＋
－
－－
－
－
沙门菌
K/A ＋ ＋ ＋ F － ＋ － ＋ ＋
－
－＋
＋ +/－
注：A：产酸；K：产碱；+：90%以上菌株阳性；-：90%以上菌株阴性；+/-： （50-90）%菌株阳性；-/+：（50-90）%菌株阴性；沙门菌与志贺菌除鉴定到种以 外，还应进行和特异性血清凝集实验鉴定血清型。
大肠埃希菌生化鉴定反应结果
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
革兰染色为阴性杆菌，大小为(0.3-1.5) μm×(0.66)μm。单个、成双或短链状排列。可见透明环状荚膜。
革兰阴性杆菌荚膜
肺炎克雷伯菌(K. Peumoniae)
在血琼脂平板上培养18-24h，形成较大、粘、圆形、凸 起、灰白不溶血的大菌落。
沙雷菌属(Serratia)
血平板上形成光滑、湿润、圆形、中心呈颗粒状的菌落。 大多不透明，可呈现白色、粉色、红色菌落。
血平板上黏质沙雷 菌落形态
巧克力平板上黏质 沙雷菌落形态
总
结
肠杆菌科细菌生化鉴定反应选择：氧化酶、触酶、克氏双 糖铁、半固体、甲基红、V-P、枸橼酸盐、苯丙氨酸脱氨 酶、硝酸盐、尿素、赖氨酸脱羧酶(LYS)、鸟氨酸脱氨酶 (ORN)、精氨酸脱氨酶(ARG)。
沙门氏菌和志贺氏菌的检测
生化反应
初步鉴别：三糖铁琼脂
乳糖:蔗糖:葡萄糖=10 : 10 : 1
以酚红作指示剂 当待检菌发酵乳糖或蔗糖时，产酸量多，使整个培养基均呈黄
色；如仅发酵葡萄糖，则产酸少，斜面由于细菌生长分解蛋白 胨而释放氨，酚红显碱性红色、而底层黄色 细菌对培养基中硫代硫酸钠或硫酸钠、亚硫酸钠的还原作用，生 成硫化氢。硫化氢遇硫酸亚铁或柠檬酸铁铵产生不溶性黑色硫化 亚铁。
3）败血症 ：常由猪霍乱沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、鼠伤寒沙 门菌、肠炎沙门菌等引起。有高热、寒战、贫血等严重症状。多见 于儿童及免疫力低下者。
免疫性：主要依靠细胞免疫，牢固。
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二、微生物学检查
• 标本采集
根据疾病的类型、病情和病程的不同分别采集不 同的标本。分离培养原则上于发病第1周采血，第2 周取粪便或尿液，全程均可作骨髓培养。血清学诊
概述 肠道感染细菌
❖肠道感染细菌是通过粪-口传播途径进行传播的一类 细菌。
❖主要包括肠杆菌科细菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、 幽门螺杆菌等。 ❖肠杆菌科中与医学有关的包括：埃希菌属、志贺菌属、 沙门菌属、变形杆菌属等。
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肠杆菌科共同特性
相似的形态染色 G-小杆菌，有鞭毛(痢疾杆菌外)
一般情况下，伤寒沙门菌O抗体的凝集价应在1∶80以上，H抗体凝集 价在1∶160以上，引起副伤寒沙门菌H抗体凝集价在1∶80以上才有 诊断意义
当前7页，共57页，星期日。
抗原构造
• 菌体抗原（o）：不被乙醇、0.1%石炭酸所破坏。与
特异性抗血清呈颗粒状凝集，形成慢，不易摇散。现 已知有50多种，多数沙门菌含有两种以上的O抗原， 有的O抗原是一种菌独有的，有的是几种菌共有的， 凡含有共同特异性抗原成分的血清型归为一个群，可
13、大肠杆菌 志贺菌 沙门氏菌属
一大群居住在人和动物肠道中 生物学性状近似的革兰阴性杆菌
多数是肠道的正常菌群
少数为致病菌， 是胃肠传染病的最重要病原菌
肠杆菌科中与医学有关的常见菌属
菌属 埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 变形杆菌属 代表种 大肠杆菌 痢疾志贺菌 伤寒沙门菌 普通变形杆菌
肠 道 杆 菌共同特性
防治原则
口服减毒活菌苗 治疗可用氯霉素等
三、 志贺菌属
是细菌性痢疾的病原菌，通称痢疾杆菌。 形态 无鞭毛（动力试验阴性）有菌毛 生化反应
多数不分解乳糖
对理化因素的低抗力 低于其他肠道杆菌，对酸敏感
抗原与分类 菌种 痢疾志贺菌
福氏志贺菌
根据O抗原分类 群 A
B
分为4群39个血清型（包括亚型）
型 1~10
菌体抗原（O）
5、抵抗力： 不强，对热和化学消 毒剂敏感
一、大肠 埃希菌
是人类和动物肠道中的正常菌群
出生后数小时进入肠道，在肠道中能合 成维生素B和维生素K等供机体吸收利用， 并终生伴随。
为正常菌群，一般不致病
两大原因可以致病 1、条件致病
细菌居住部位改变引起的肠外感染：
尿路感染最常见
2、部分致病菌株
防治原则
控制传染源
切断传播途径 隔离病人，治疗无症状携带者 加强水源管理 疫苗预防接种
提高易感者免疫力 治疗霍乱的关键
及时补充液体和电解质，加抗生素治疗 预防大量失水导致的低血容量性休克和酸中毒
二、副溶血弧菌
1、生物学特性
嗜盐 在培养基中以含3.5%NaCl生长最为适宜 革兰染色阴性、单鞭毛
2、致病性
身中毒症状。
慢性细菌性痢疾：病程迁延二个月以上
微生物学检查
大肠杆菌与沙门氏菌鉴定
大肠杆菌与沙门氏菌的鉴定08动检1班：魏静翟阿官李盼盼尚延丽田方方崔亚婷一、实验目的与要求1、通过本实验了解大肠杆菌及沙门氏菌的主要生化特性与培养特性2、掌握大肠杆菌与沙门氏菌的鉴别方法二、实验器材及试剂温箱、显微镜、载玻片、营养琼脂、接种环、灭菌平皿、麦康凯培养基、无菌试管、伊红美兰培养基、三糖铁培养基、革兰氏染色剂、棉签、火柴等三、实验内容1、直接镜检法：1）操作步骤：a）用棉签沾取适量样液直接涂在载玻片上b）用革兰氏染色剂染色c）显微镜下观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：大肠杆菌为革兰氏阴性菌，中等大小，两端略圆的短粗杆菌，成单个存在，也有成双排列；周身鞭毛，能运动，有时两端着色较浓，要注意与巴氏杆菌区分开来。
b）沙门氏菌：沙门氏菌也为革兰氏阴性菌，无芽孢，大小通常为0.7~1.5um*2.0~5.0um，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。
2、分离培养法：将样液分别划线接种在麦康凯培养基、伊红美兰培养基上，温箱培养24h后观察生长情况，根据菌落的形态、颜色、大小等方面的差异来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。
1）麦康凯培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润；b）沙门氏菌：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。
2）伊红美兰培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：紫黑色菌落，有的有金属光泽b）沙门氏菌：形态特征与在麦康凯培养基上的相似2、三糖铁培养基穿刺试验1）操作方法：将待检样液穿刺接种于三糖铁培养基中，培养18~24h后，取出观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：穿刺后不变黑，表面呈黄色b）沙门氏菌：穿刺底部有气体，穿刺后变黑，中间为黄色表面为红色3、乳糖发酵试验1）操作方法：将待检样液接种于乳糖发酵管内放于温箱内培养18h后，观察结果2) 预期实验结果：a）大肠杆菌：产酸产气b）沙门氏菌：不产酸产气。
肠道杆菌的实验报告
一、实验目的1. 熟悉肠道杆菌的基本生物学特性。
2. 掌握肠道杆菌的分离与鉴定方法。
3. 学会使用生化反应和显微镜观察等方法对肠道杆菌进行鉴定。
二、实验原理肠道杆菌是一类革兰氏阴性细菌，广泛存在于人体肠道中。
它们分为条件致病菌和致病菌两大类。
本实验通过观察肠道杆菌的形态特征、生化反应和血清学试验等方法，对分离到的肠道杆菌进行鉴定。
三、实验材料1. 实验菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等。
2. 培养基：普通琼脂培养基、双糖铁培养基、血清学反应用培养基等。
3. 试剂：革兰氏染色液、生化试剂、血清等。
4. 仪器：显微镜、接种环、酒精灯、培养箱等。
四、实验方法1. 菌株分离（1）将实验菌株接种于普通琼脂培养基上，在37℃培养箱中培养18-24小时。
（2）用接种环挑取单菌落，接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况。
2. 形态观察（1）将分离得到的菌株涂片，进行革兰氏染色。
（2）在显微镜下观察菌体的形态、大小、染色特性等。
3. 生化反应（1）将分离得到的菌株接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况和颜色变化。
（2）根据菌落生长情况和颜色变化，判断菌株的生化反应类型。
4. 血清学试验（1）将分离得到的菌株与相应的血清进行玻片凝集试验。
（2）观察凝集反应，判断菌株的血清学类型。
五、实验结果1. 菌株分离实验菌株在普通琼脂培养基上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为白色。
2. 形态观察革兰氏染色结果显示，实验菌株为革兰氏阴性菌，菌体呈短杆状，大小约为0.5×1.5μm。
3. 生化反应双糖铁培养基结果显示，实验菌株能够发酵葡萄糖，产生酸和气体，不发酵乳糖，不还原硝酸盐。
4. 血清学试验玻片凝集试验结果显示，实验菌株与相应的血清发生凝集反应，判断为该血清学类型。
六、实验讨论本实验通过对肠道杆菌的分离与鉴定，掌握了肠道杆菌的基本生物学特性和鉴定方法。
实验结果表明，分离得到的菌株为革兰氏阴性菌，能够发酵葡萄糖，不发酵乳糖，不还原硝酸盐，且与相应的血清发生凝集反应，符合肠道杆菌的生物学特性。
沙门氏菌和志贺氏菌的检测
H抗原：为不稳定的蛋白质抗原，加热或用乙 醇处理均被破坏。沙门菌H抗原有两个相,第一 相特异性较高称特异相,用小写英文字母a、b、 c表示，直至z，z以衙用z加阿拉伯数字表示， 如z1、z2、z3等，第二相抗原为沙门菌共有， 称非特异相，直接用1、2、3表示。同时有第 一相和第二相H抗原的细菌称为双相菌，仅有 一相者称单相菌。H抗原是定型的依据，其刺 激机体产生的抗体以IgG为主，与相应的抗血 清呈絮状反应。
沙门氏菌和志贺菌检测
熊长辉
概述 肠道感染细菌
肠道感染细菌是通过粪-口传播途径进行传播的一 类细菌。 主要包括 肠杆菌科细菌、霍乱弧菌、副溶血性弧
菌、幽门螺杆菌等。
肠杆菌科 中与医学有关的包括： 埃希菌属、志贺
菌属、沙门菌属、变形杆菌属等。
肠杆菌科共同特性
相似的形态染色 G 小杆菌，有鞭毛(痢疾杆菌外) 菌毛，某些有荚膜，无芽胞
斜面红色、底层黄色，出现部分黑色或全部黑 色 斜面红色、底层黄色，无黑色 斜面、底层均黄色，出现部分黑色或全部黑色
除沙门菌外，变形杆菌、柠檬酸盐菌、志贺菌 等也可出现上述反应。 • 吲哚试验：阴性
志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖， 不产生H2S。 大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不 产生H2S 。 沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖，大多数产生 H2S ，多数产气。 下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏 菌？
1）正常凝集价 正常人由于隐性感染或预防接种，血清中通常可含 有一定水平的凝集抗体，正常的凝集价可因不同地区而有差异 一般情况下，伤寒沙门菌O抗体的凝集价应在1∶80以上，H抗体 凝集价在1∶160以上，引起副伤寒沙门菌H抗体凝集价在1∶80以 上才有诊断意义 2）动态观察 有时单次效价不能定论，可在病程中逐周检查。若效 价逐次增加或恢复期效价比初次≥4倍者有意义
沙门氏菌和志贺氏菌的检测ppt课件
二、致病性与免疫性
致病物质： 1.侵袭力：菌毛帮助细菌黏附肠粘膜上皮细胞 Vi抗原 可阻断相应抗体和补体的作用，抵 抗吞噬细胞的吞噬作用。 内毒素：可激活补体系统、吸引白细胞，引起 肠道炎症，吸收入血可引起全身中毒，发热、白细 胞减少、中毒性休克。 肠毒素：类似于大肠杆菌肠毒素。
精品课件
2. 所致疾病
精品课件
鉴定与分型——生化鉴定
疑为沙门菌的可疑菌落可用手工或商品生化反应
进行生化鉴定，常用三糖铁(TSI)琼脂和赖氨酸琼脂来初步
鉴定。本菌在TSI上典型的生化模式为：碱/酸，葡萄糖产
气，硫化氢阳性（K/A++）。少数菌株为乳糖发酵型，呈
（A/A），这些菌株的硫化氢往往阴性。在赖氨酸铁琼脂上
的典型生化模式为K/K和硫化氢阳性，但亦存在赖氨酸和硫
沙门氏菌和志贺菌检测
熊长辉
精品课件
概述 肠道感染细菌
❖肠道感染细菌是通过粪-口传播途径进行传播的一 类细菌。
❖主要包括肠杆菌科细菌、霍乱弧菌、副溶血性弧 菌、幽门螺杆菌等。 ❖肠杆菌科中与医学有关的包括：埃希菌属、志贺 菌属、沙门菌属、变形杆菌属等。
精品课件
肠 杆 菌 科共 同
特性
相似的形态染色 G-小杆菌，有鞭毛(痢疾杆菌外) 菌毛，某些有荚膜，无芽胞
• 沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌。包括伤寒、 副伤寒甲、乙、丙型，肠炎，鼠伤寒等沙门菌， 现今已发现2324个血清型。
• 在世界各地的食物中毒中，沙门菌食物中毒常 占首位或第二位。规定在药品和食品中不得检 出沙门菌。美国每年报道病例45 000个左右， 实际数量可能多达200-300万。伤寒每年400500例。
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鉴定与分型——Vi噬菌体分型
沙门菌属和志贺菌属检验
步骤和方法1．形态观察(1)革兰染色：沙门菌属细菌为革兰阴性细长杆菌。
志贺菌属细菌为革兰阴性杆菌，散在分布。
(2)观察鞭毛染色标本片：镜下可见沙门菌属细菌具有周鞭毛。
志贺菌属细菌无鞭毛。
2．菌落观察(1)沙门菌属：将本菌接种在SS、MAC平板上经35℃孵育18～24h。
由于本菌不分解乳糖并产碱，故在SS和MAC平板上形成无色、半透明、光滑湿润、凸起的小菌落，产生H2S的菌落可在SS平板上形成中心带黑褐色的小菌落。
(2)志贺菌属：将本菌接种在SS和MAC平板上经35℃孵育18～24h。
由于志贺菌不分解乳糖，宋内志贺菌某些菌株可迟缓发酵乳糖，故其在SS平板和MAC平板上形成无色透明的、中等大小的菌落。
除宋内志贺菌菌落外均为光滑型菌落。
3．生化反应氧化酶试验：方法同大肠埃希菌。
沙门菌属和志贺菌属细菌氧化酶试验均为阴性。
初步试验鉴定：挑取志贺菌和沙门菌的单个菌落分别接种在KIA、MIU和硝酸盐培养基上，经35℃孵育18～24h，同时做触酶试验。
其结果见表2—4。
表2-4志贺菌属和沙门菌属的基本生化反应KIA斜底产动H2S面层气力志贺菌K A -/+--伤寒沙门菌K A -+/-+乙型副伤寒K A +++菌最终鉴定：须做全面生化反应和血清学试验。
4．血清学试验MIU吲哚+/---氧化触硝酸盐还脲酶酶原酶--++--++--++(1)志贺菌属的分型鉴定：凡生化反应符合志贺菌属者均需做血清学鉴定。
取1环志贺菌四种多价血清于载玻片一端，再取少许待测菌与之混合，同时在玻片另一端取待测菌与生理盐水混合对照。
结果：对照呈均匀混浊，待检菌与志贺菌四种多价血清混合后，数分钟内出现肉眼可见的颗粒状凝集物即为阳性。
继之用C、D群最常见的单价血清凝集定种。
结果判断、解释和报告：①分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符合志贺菌属鉴定依据者可报告“未分离到志贺菌属细菌”。
②经分离鉴定后符合鉴定依据者，可报告“分离出××志贺菌”，若进一步做多种生化反应及因子血清分型后，可报告：“分离出××志贺菌×型”。
第七章肠道致病菌的检验与鉴定
5、沙门氏菌哪几个菌型具有Vi抗原，Vi抗原对O抗 原血清涟试验有何影响，对含Vi抗原菌，如何做O 抗原血清学试验。
6、沙门氏菌在SS平板，TSI培养基上生长的现象如 何，说明其原理。
7、分离纯化后怎样选用最少的生化试验方法初步鉴 定检验菌是否是沙门氏菌属的细菌。
8、如何进行沙门氏菌的血清学试验。
赖氨酸脱羧E（+），补做ONPE试验，可判定沙门 氏 菌 属 和 埃 希 氏 菌 属 （ ONPE （ - ） 为 沙 门 氏 菌 ， ONPE（+）大肠艾希氏菌
5、血清学试验（最后鉴定）
（1）、沙门氏菌诊断血清的种类： 10种组合血清：主要用于伤寒和副伤寒沙门氏菌鉴
定 26种组合血清：常见致病菌的定群与分型 57种组合血清：常见定型，初步鉴定A—F群以外
（3）属外抗原关系：
志贺氏菌与艾希氏菌属的O抗原关系 非常密切，除A群9型和D群宋氏菌与埃氏 希菌的O抗原关系未见报道外，每一个型 都与一定的艾希氏菌的O抗原有关。
4、K抗原对O抗原血清学试验的影响
可阻碍O抗原的血清学凝集试验，煮沸 处理即可。
（五）志贺氏菌的抵抗力
• 志贺氏菌属在外界环境中的生存力，以宋内氏最强，福氏菌次之，志 贺氏菌最弱。
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-
B
1～6 1a、1b、2a、 +
-
x、y变种 2b、3a、3b
3c、4a、4b
鲍氏菌 宋内氏菌
C 1 ～ 15
D
1
+
-
+
＋
甘露醇-
葡萄糖+
甘露醇+
靛基质- 靛基质+
乳糖-
乳糖+
靛基质-
靛基质+
10大肠、沙门、志贺菌
要防御机制。伤寒或副伤寒病后有牢固免疫，很
少再感染。
防治原则
1. 控制传染源：带菌者检查（Vi抗体≥ 1：10）；
2. 切断传播途径：公共卫生和环境卫生；
3. 疫苗接种：伤寒荚膜多糖疫苗
4. 治疗：抗生素
志贺菌属(Shigella)
引起细菌性痢疾，通称痢疾杆菌；
28
生物学性状
• 无芽胞、无鞭毛，有菌毛 • 营养要求不高，不发酵乳 糖 • 分为四群： A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 • 抵抗力弱
夏秋季多见，粪-口途径传播
急性：临床表现为发热、腹痛、里急后重、粘液
脓血便等。预后良好。 急性中毒型：全身中毒症状明显，但肠道症状不 明显。病情凶险，死亡率高。 慢性：症状不典型，迁延2个月以上。
3、免疫性：感染局限（SIgA），故免疫不牢固，
不能防止再次感染。
SS培养基和动力试验
防治原则
抗原结构：较复杂，包括菌体Ｏ抗原、鞭毛Ｈ抗原等。
俗称大肠杆菌
大肠杆菌都致病吗？豆芽如何被污染？对于食源性 疾病如何预防？
是人类和动物肠道中的正常菌群 出生后数小时就进入肠道，并终生伴随 随粪便排出体外
卫生学指标
在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标 大肠菌群指数 细菌总数 我国饮用水卫生标准： ≤ 3个大肠菌群/1L饮水 ≤ 100个细菌总数/1ml饮水 每1000ml水中大肠菌群数 每1ml或1g样品中细菌总数
粘附和破坏上皮细胞 侵袭和破坏 结肠粘膜上皮细胞 出血性结肠炎 Vero 毒素
• 致病物质
–粘附结构：普通菌毛
• 粘附在肠道及尿道粘膜上皮细胞
–外毒素
• 肠毒素及溶血毒素；
大肠、沙门、志贺菌的培养与鉴定1
临床微生物学教研室
目的与要求
1、掌握大肠埃希菌、沙门菌属和志贺菌属的 菌落形态、染色特性、培养特性及常见鉴 定实验。 ２、掌握沙门菌属和志贺菌属细菌的血清学 鉴定方法。
器材与试剂
１、菌种：普通大肠埃希菌、福氏志贺菌和 肠炎沙门菌。 2、培养基：血平板、MAC、SS、中国兰平 板、 KIA等等。 3、试剂：氧化酶试剂、诊断血清、细菌微量 生化管等。 4、其他：载玻片、生理盐水、革兰染液等。
生化反应
①大肠埃希菌：ａ、氧化酶试验（－） b、KIA：ＡＡ＋－ c、MIU：++②沙门菌： ａ、氧化酶试验（－） b、 KIA：ＫＡ－ ＋／－ c、 MIU：＋－－ ③志贺菌：ａ、氧化酶试验（－） b、KIA:ＫＡ－－ c、MIU:－＋－
血清学试验
志贺菌属的分型鉴定：凡生化反应符合志 贺菌者均需做血清学鉴定。 结果报告： ａ、分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符 合志贺菌鉴定依据者可报告“未分离 到志贺菌属细菌”。 b、经分离鉴定后符合鉴定依据者，可报 告“分离出× ×志贺菌”。 c、经进一步做多种生化反应及和血清学 鉴定报告：“分离出××志贺菌的×型”
血清学试验
沙门菌属的分型鉴定：如果生化反应及形态学检 查疑为沙门菌，可选用沙门菌的多价诊断血清进 行玻片凝集。 结果报告： a、分离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌 属细菌鉴定依据者，可报告“未分离出沙门菌”。 b、生化反应符合沙门菌、玻片凝集试验结果阳性， 可初步报告为：“分离到××沙门菌”，或“××群 沙门菌”。
步骤与方法
１、形态观察：均为G-杆菌，镜下无多大区 别。
步骤与方法
2、菌落观察 ①大肠埃希菌：a.血平板：灰白色、圆形、 湿润，有的可出现溶血环。b.麦康凯或SS 平板平板：红色菌落。
志贺菌属微生物检验
志贺菌属微生物检验1、标本采集尽可能在发病早期及在治疗前采集新鲜粪便，选择粘液脓血便，必要时可用肛拭子采集。
2、检验方法及鉴定(1)分离培养：取粪便(粘液或脓血部分)或肛拭标本接种GN肉汤增菌及再进行分离培养。
一般同时接种强弱选择性不同的两个平板。
强选择性鉴别培养基可用沙门、志贺菌选择培养基(SS);弱选择培养基可用麦康凯或中国蓝培养基。
培养18-24小时后选取可疑菌落进行下列鉴定。
(2)鉴定：1)初步鉴定：挑选可疑菌落3-4个先用志贺菌属多价诊断血清作试探性玻片凝集试验。
将试探性凝集试验阳性的菌落至少接种2-3支KIA (克氏双糖)和MIU(动力、吲哚、脲酶)，经35℃18-24小时，凡符合KIA：K/A、产气-/+、H2S，MIU：动力-、吲哚、脲酶-，氧化酶-，并结合试探性玻片凝集试验阳性结果可鉴定为志贺菌属。
2)最后鉴定：增加甘露醇(+/-)、蔗糖(-/+)(宋内志贺菌属迟缓阳性)、柠檬酸盐(-)、苯丙氨酸脱氨酶(-)、ONPG(β-半乳糖苷酶)及鸟氨酸脱羧酶(-)(宋内志贺菌属为阳性);用志贺菌属的诊断血清作群型鉴定。
A群痢疾志贺菌，甘露醇阴性，10个血清型。
B群福氏志贺菌，有6个血清型和X、Y2个变种。
C群鲍氏志贺菌，15个血清群。
D群宋内志贺菌，仅有一个血清型，有光滑型和粗糙型两种菌落。
3、与大肠埃希菌的鉴别(1)无动力，不发酵乳糖，靛基质阴性，赖氨酸阴性。
(2)发酵糖产酸不产气(福氏志贺菌6型、鲍氏志贺菌13和14型、痢疾志贺菌3型除外)。
(3)分解黏液酸，在醋酸盐和枸橼酸盐琼脂上产碱。
4、与类志贺邻单胞菌和伤寒沙门菌的鉴别可用动力和氧化酶试验加以鉴别，志贺菌为阴性，而类志贺邻单胞菌为阳性。
伤寒沙门菌硫化氢和动力阳性，能与沙门菌属因子血清凝集而不与志贺菌属因子血清凝集。
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生化反应
①大肠埃希菌：ａ、氧化酶试验（－） b、KIA：ＡＡ＋－ c、MIU：++②沙门菌： ａ、氧化酶试验（－） b、 KIA：ＫＡ－ ＋／－ c、 MIU：＋－－ ③志贺菌：ａ、氧化酶试验（－） b、KIA:ＫＡ－－ c、MIU:－＋－
血清学试验
志贺菌属的分型鉴定：凡生化反应符合志 贺菌者均需做血清学鉴定。 结果报告： ａ、分离培养未见可疑菌落或经鉴定不符 合志贺菌鉴定依据者可报告“未分离 到志贺菌属细菌”。 b、经分离鉴定后符合鉴定依据者，可报 告“分离出× ×志贺菌”。 c、经进一步做多种生化反应及和血清学 鉴定报告：“分离出××志贺菌的×型”
血清学试验
沙门菌属的分型鉴定：如果生化反应及形态学检 查疑为沙门菌，可选用沙门菌的多价诊断血清进 行玻片凝集。 结果报告： a、分离培养未发现可疑菌落或经鉴定不符合沙门菌 属细菌鉴定依据者，可报告“未分离出沙门菌”。 b、生化反应符合沙门菌、玻片凝集试验结果阳性， 可初步报告为：“分离到××沙门菌”，或“××群 沙门菌”。
步骤与方法
１、形态观察：均为G-杆菌，镜下无多大区 别。
步骤与方法
2、菌落观察 ①大肠埃希菌：a.血平板：灰白色、圆形、 湿润，有的可出现溶血环。b.麦康凯或SS 平板平板：红色菌落。
步骤与方法
2、菌落观察 ②沙门菌属：a.血平板: 灰白色、圆形、湿润。 b. 麦康凯或SS平板:无色、透 明，有的菌属在SS平板上 可形成黑色菌落. ③志贺菌属：麦康凯或 SS上无色透明、中等大小 的菌落。
大肠、沙门和志贺 菌的鉴定
临床微生物学教研室
目的与要求
1、掌握大肠埃希菌、沙门菌属和志贺菌属的 菌落形态、染色特性、培养特性及常见鉴 定实验。 ２、掌握沙门菌属和志贺菌属细种：普通大肠埃希菌、福氏志贺菌和 肠炎沙门菌。 2、培养基：血平板、MAC、SS、中国兰平 板、 KIA等等。 3、试剂：氧化酶试剂、诊断血清、细菌微量 生化管等。 4、其他：载玻片、生理盐水、革兰染液等。