2019-2020学年高中生物第一部分微生物的利用1.1大肠杆菌的培养和分离2素材浙科版选修1.doc
【2019-2020】高中生物第一部分微生物的利用第1课时大肠杆菌的培养和分离同步备课教学案浙科版选修1
教学资料参考范本【2019-2020】高中生物第一部分微生物的利用第1课时大肠杆菌的培养和分离同步备课教学案浙科版选修1撰写人：__________________部门：__________________时间：__________________考试要求一、微生物培养的基本条件1.微生物基础知识(1)微生物的特点：结构简单，形体微小。
通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。
体内一般不含叶绿素，不能进行光合作用。
(2)细菌的外形与大小 ①外形分类②大小：单细胞不分枝的原核微生物，细胞微小而透明。
通常用适当染料染色后，再显微镜观察。
(3)细菌的繁殖：细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20分钟分裂一次。
(4)菌落①概念：单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
(如图)②作用：细菌的菌落特征因种而异，菌落是鉴定菌种的重要依据。
2.培养基的种类(1)按物理性质分类(2)按培养基的用途分类3.无菌技术(1)含义：无菌技术不仅能防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，保持微生物的纯培养，而且在分离、转接时亦能防止其他微生物污染。
(2)无菌操作①对实验空间、操作台可用紫外线或酒精消毒，操作者的手用酒精消毒。
②实验用的培养器皿和培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，接种环用灼烧方法灭菌。
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
1.结合所学知识，完成下图横线上大肠杆菌的结构名称，然后思考：(1)大肠杆菌与酵母菌相比，在结构上最主要的区别是什么？答案大肠杆菌是原核生物，与酵母菌相比，最主要的区别是没有由核被膜包被的细胞核。
(2)大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但也有一些菌株对人体是有害的，可以侵袭肠黏膜并产生毒素。
但是，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。
2019-2020学年高中生物 第1部分 微生物的利用 第1课时 大肠杆菌的培养和分离学案 浙科版选修1
第1课时大肠杆菌的培养和分离[学习目标] 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
一、微生物培养的基本条件1.微生物(1)概念：结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。
(2)用途：许多种抗生素来源于放线菌和霉菌；酒由酵母发酵产生；腐乳由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物能用于治理环境污染，在新能源领域也将发挥巨大作用。
2.培养基(1)概念：培养基是微生物生存的环境和营养物质。
(2)分类：培养基按物理性质常可分为固体培养基和液体培养基，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四类营养物质，另外还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。
通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
(3)酸碱性：细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，霉菌要求在中性偏酸的环境中生长；因此，在制备培养基时需调节培养基的酸碱度。
特别提醒有关培养微生物所需营养的三点提醒(1)不同微生物对营养的需求不同，所以培养不同的微生物所需要的营养可能不同。
(2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳源又是氮源、能源。
(3)培养微生物时营养物质要协调。
营养物质过少不能满足微生物的营养需要，过多对微生物的生长有抑制作用。
3.灭菌操作(1)常见灭菌方法①对于培养皿、试管、三角瓶、镊子等常采用高压蒸汽灭菌法灭菌。
②对于不能加热灭菌的化合物，如尿素等，只能用G6玻璃砂漏斗过滤，但玻璃砂漏斗使用前也要在121℃下用纸包好灭菌。
③实验操作过程中，一般采用灼烧的方法对接种环进行灭菌。
(2)高压蒸汽灭菌操作的要求①灭菌前各种用品均需用牛皮纸或报纸包好，在121℃下灭菌15min，实验过程中所需的棉花不能用脱脂棉，因为其易吸水，吸水后容易引起污染。
大肠杆菌培养和分离
大肠杆菌培养和分离超净台实验准备工作2灭菌和消毒无菌操作目的：为了避免被杂菌污染。
1对实验操作空间：超净台：紫外线灭菌，过滤风桌面：酒精擦拭，酒精灯外焰附近操作2.操作者衣服和手进行：清洁和消毒，70%酒精3.避免已灭菌处理的材料用具和周围物品的接触消毒的方法1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用70%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气、高锰酸钾消毒……（1）消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。
消毒与灭菌的区别（2）灭菌：灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。
实验1大肠杆菌的培养和分离超净台上紫外灯和过滤风实验过程：准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒操作阶段：1倒平板：分装固体培养基倒平板：将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过程。
分装培养基：1倒平板：将灭菌后的固体培养基倒入培养皿培养基冷却到60度时倒入2培养基的分装（试管，三角瓶，培养皿）倒入三角瓶和试管（漏斗法）1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
朊病毒就是蛋白质病毒，是只有蛋白质而没有核酸的病毒。
1997年诺贝尔医学/生理学奖的获得者美国生物学家斯垣利·普鲁辛纳(S.B.Prusiner)就是由于研究朊病毒作出卓越贡献而获此殊荣的。
细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖，它使得这层壁坚韧并富有弹性。
一旦失去细胞壁，所有的细菌都将变成球形。
细菌细胞壁的主要功能是保护细胞、维持细胞形状、协助鞭毛运动等，而且还与细菌的抗原性、致病性和对噬菌体的敏感性有关。
【新步步高】高二生物浙科版选修1课件：1.1 大肠杆菌的培养和分离
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后 再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为 什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起 始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能 使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少， 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
大肠杆菌
细菌的外形与大小
大肠杆菌属于杆状菌
细菌的营养类型
• 根据细菌所利用的能源和碳源的不同 将细菌分为两大营养类型。 • 自养菌:
光能自养型:光合细菌
化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌
• 异养菌: 腐生菌 寄生菌
大部分病原菌
大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌
细菌的革兰氏染色
革兰氏染色法是一种用于细菌的染 色法。此法将细菌分为两类，即革兰 氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰 氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后， 再用脱色液处理，细菌仍保留染色液 的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两 种菌的差别在于细胞壁的成分不同。
3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳 源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养 物质，另外还需要满足微生物生长对 pH 、氧气、渗透压的要求．
4.培养基的用途
液体培养基：扩增细菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离），鉴定、保 藏菌种
☆ 菌落
• 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 • 菌落是鉴定菌种的重要依据。
病毒 微小生物的总称． 病毒界 细菌
微生物包括哪五类： 放线菌 真菌 原生动物
真菌界
原生生物界 原核生物界
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用 光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细 胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.
2019-2020年高中生物第1部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离学案浙科版选修
2019-2020年高中生物第1部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离学案浙科版选修．大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。
2．在肠道中，大肠杆菌一般对人无害，但也有一些菌株可以侵袭肠黏膜并产生毒素，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。
3．大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具。
二、实验内容1．本实验的内容是将大肠杆菌扩大培养和划线分离。
分离后，一个菌体便会形成一个菌落，这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
2．本实验用LB液体培养基(通用的细菌培养基)扩大培养大肠杆菌。
培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上便会形成一个个单独的菌落。
三、细菌的培养和分离1．细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20分钟分裂一次。
人们在培养细菌时，一般用接种环转移带菌的培养物。
接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，再操作。
2．细菌的分离(1)划线分离法：在液体培养基中，只要接种后培养8 h，每毫升培养基中就有几亿个细菌。
可用接种环蘸菌液在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此，划线到最后，可使细菌间的距离加大。
在固体培养基培养10～20 h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。
如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。
这种方法也可用于分离细菌，将污染的杂菌除去。
接种环在取菌种前和划线前都要灼烧、而后都要冷却、操作完毕后又要灼烧的原因是什么？【提示】取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
(2)涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释10－5～10－7倍，然后取0.1 mL不同稀释度的稀释菌液加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。
选修1.1第一章微生物的利用
⑤菌种保存:在无菌条件下将单菌落用接种环取出,再用划线法接种 在斜面上,37 ℃培养24 h后,放于冰箱内保存,温度控制在4 ℃。 ⑥实验结束后,为防止细菌污染,需要对培养物进行灭菌处理。 (3)实验结果及相应结论 若观察到在划线的末端出现不连续的单个菌落,表明菌已被分离了。
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(2)各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子五类 营养物质。 (3)制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤:计算→称量→溶化、调 pH→灭菌→倒平板。 3.无菌技术 (1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。应根据情况进行 消毒和灭菌。
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②自三角瓶向培养皿中转移并分装固体培养基:待冷却至60 ℃左右 时,将三角瓶中的培养基在超净台上分装至几个培养皿中,制成固体 培养基。 ③将大肠杆菌自斜面转移到三角瓶中的液体培养基中培养:将大肠杆 菌用接种环在无菌操作下接种至三角瓶中的液体培养基中,在37 ℃ 摇床振荡培养12 h,完成大肠杆菌培养。 ④将菌液在固体平面培养基上划线分离。从前一步培养得到的菌液 中获取菌种,用接种环以划线法接种至第二步制得的固体平面培养基 中,在37 ℃恒温箱中培养12~24 h后观察菌落。
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(2)细菌分离 ①平板划线法:用接种环在琼脂固体培养基表面连续划线操作,将聚 集的菌种逐步分散到培养基表面。培养10~20小时后,可以分离到由 一个细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群,即菌落。 ②稀释涂布分离法:将菌液先进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀 释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,然后进行培养。 ③两种方法比较:划线分离,方法简单;涂布分离,单菌落更易分开,但 操作复杂些。两种方法都能将混杂在一起的微生物分离成单个细胞, 并能在培养基表面形成单个菌落,以便分离和纯化菌种。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1
高中生物第一部分《实验一大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙科版选修1微生物的利用大肠杆菌的培养和分离学案一、课标内容：进行微生物的分离和培养二、教学要求：基本要求1，进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2，进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
说明实验2和实验3不作要求。
三、知识要点：1、微生物是指结构、形体的细胞、细胞或细胞结构的生物，如。
绝大多数微生物与传染病无关，对人类，有多种用途。
2、细菌是单细胞的生物，从形态上分为菌、菌、菌（弧菌）。
细菌结构上，有，无，只有一环状。
有些细菌外有荚膜和鞭毛。
有些细菌在不良的环境条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做。
当环境适宜时，休眠体又可以萌发，形成一个细菌。
细菌繁殖方式: 繁殖，速度很快。
单个细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做。
他是的重要依据。
细菌在基因工程中应用广泛，可为其提供载体，也可作为细胞。
细菌用革兰氏染色法分为革兰氏菌和菌两大类，区别在的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏、厌氧的肠道菌。
3、培养基按物理状态分：培养基、培养基、培养基。
其中液体培养基常用于，半固体培养基可观察微生物的，固体培养基用于。
细菌扩大培养要用培养基，细菌分离要用培养基。
细菌的分离方法有两种：和。
是消除的通用方法，也是用于高表达量菌株的最简便方法之一。
划线分离法，方法；涂布分离法，单菌落，但操作。
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方，细菌，霉菌。
通常细菌培养基要用和提取物来配制，还要加入一定的，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用配制或豆芽汁即可。
尽管培养基的配方各不相同，但一般都含有、、和等营养物质。
另外还需要满足微生物生长对、、等的要求。
如细菌需要环境，霉菌需要环境；厌氧生物需要控制含量。
有的还需要在培养基中加入特殊营养物质。
4、在培养微生物时，必须进行。
实验1,大肠杆菌的培养和分离
实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。
2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。
实验步骤1. 培养基灭菌。
在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。
既可以通气，又不使细菌进入。
)。
将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。
同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。
2. 倒平板，倒斜面。
灭菌后。
待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。
超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。
将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。
待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。
倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。
倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。
2020学年高中生物 第一部分 微生物的利用 实验1 大肠杆菌的培养和分离知能演练轻巧夺冠 浙科版选修1
实验1 大肠杆菌的培养和分离一、选择题1.有关大肠杆菌营养物质的叙述中，正确的是( )A．是碳源的物质也可能同时是氮源B．凡碳源都提供能量C．除水以外的无机物只提供无机盐D．无机氮源也能提供能量解析：选A。
是碳源的物质也可能同时是氮源，如碳酸氢铵、氨基酸等，既能为微生物提供碳源，同时也能提供氮源；凡碳源未必能为大肠杆菌提供能量，如无机的碳源；除水以外的无机物可能同时具有提供无机盐、碳源和氮源等多重作用；无机氮源对硝化细菌可以提供能量，但是对大肠杆菌不能提供能量。
2.在光照下，将等细胞数量的衣藻和大肠杆菌分别接种到只含无机盐的培养液中培养，结果是(虚线和实线分别表示大肠杆菌和衣藻的生长曲线)( )解析：选C。
衣藻是低等植物，能利用无机盐进行光合作用自己合成有机物。
大肠杆菌是异养生物，不能自己制造有机物只能摄取现成有机物，在只含无机盐的培养基上几乎不能生长。
3.培养基配制需要运用灭菌和消毒技术，但两者消灭的微生物种类和数量是不同的，下列哪一项能正确表示消毒结果和灭菌结果之间的关系( )解析：选B。
消毒的目的是杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括孢子和芽孢。
所以，一般来说，灭菌的结果应包含消毒的结果，故选B。
4.下列所述环境条件下的微生物，能正常生长繁殖的是( )A．在缺乏生长素的无氮培养基中的圆褐固氮菌B．在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌C．在新配制的植物矿质营养液中的酵母菌D．在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病毒解析：选A。
圆褐固氮菌是自生固氮菌，能合成生长素满足自身生长。
破伤风杆菌是严格厌氧生活的细菌，在表皮不能生长。
在新配制的植物矿质营养液中由于缺乏有机物，因此不能培养酵母菌。
禽流感病毒营严格的胞内寄生生活，在灭菌后的动物细胞培养液中不能培养禽流感病毒，通常在活的鸡胚细胞中进行培养。
5.有关涂布分离法的叙述，错误的是( )A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．其核心是防止杂菌污染，保证培养液的纯度D．结果都是在培养基表面形成单个的菌落解析：选D。
生物选修一大肠杆菌的培养和分离 共70页PPT资料
1．液体基础培养基 牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g ，蒸馏水100ml， 加热溶解以上成分，冷至40-50℃，调pH值至7.4~7.6， 煮沸3-5分钟，补足水分，过滤、分装、高压灭菌。 2．半固体基础培养基 在液体基础培养基100ml中加琼脂0.2-0.5g，加热至 100℃使琼脂熔化，分装试管，高压灭菌。取出后直立 放置至琼脂凝固。 3．固体基础培养基 在液体基础培养基100ml中加琼脂2-3g，加热至100℃使 琼脂化，分装于试管和三角烧瓶中，高压灭菌。取出后 趁热将试管倾斜一定角度放置，琼脂凝固后即成普通琼 脂斜面；将三角烧瓶中培养基倾注于灭菌平皿内，凝固 后即成琼脂平板基础培养基。
图 细菌的结构
*细胞壁
伤
寒
• 成分：肽聚糖
杆 菌
• 细胞壁有哪些功能？
细
• ①固定细胞外形；
胞
②保护细胞免受外力的损伤；
壁
中
③阻拦大分子物质进人细胞；
含
④使细胞具有致病性及对
毒
噬菌体的敏感性。
素
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
1-1什么是生物技术
• 生物技术=生物工程
应用自然科学及工程学原理，以微生 物体、动物体、植物体或其组成部分作为 生物反应器将物料进行加工，以提供产品 来为社会服务的技术。
1-2 传统生物技术
• 传统生物技术指主要通过微生物 的发酵来生产商品.如:酱、醋、 酒、面包、奶酪、酸奶等
2019-2020年高中生物第1部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离学业达标测评浙科版选修
2019-2020年高中生物第1部分微生物的利用实验1大肠杆菌的培养和分离学业达标测评浙科版选修1．要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用( )A．固体培养基B．液体培养基C．加青霉素的培养基D．加入高浓度食盐的培养基【解析】分离微生物应使用固体培养基。
【答案】 A2．涂布平板操作需要用到( )A．接种环、滴管、酒精灯B．接种环、移液管、酒精灯C．涂布器、移液管、酒精灯D．涂布器、接种环、酒精灯【解析】涂布平板操作过程中不需要接种环。
【答案】 C3．采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌( )A．接种环、吸管、培养基、接种室B．吸管、接种环、培养基、接种箱C．培养基、接种环、吸管、接种箱D．培养皿、吸管、培养基、双手【解析】干热灭菌主要对玻璃器皿进行灭菌，紫外线主要对接种室和接种箱进行空气和表面灭菌。
【答案】 B4．下列操作错误的是( )A．用酒精擦拭双手B．用氯气消毒水源C．实验室用紫外线进行消毒D．玻璃器皿(吸管、培养皿)用酒精直接擦拭即可达到彻底灭菌的目的【解析】玻璃器皿应用干热无菌箱在160～170 ℃加热1～2 h才能达到无菌目的。
【答案】 D5．在涂布平板操作时错误的是( )A．将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红B．取少量菌液滴加在培养基表面C．将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃尽后，冷却8～10 s再用D．涂布时可转动培养皿，使涂布均匀【解析】涂布平板所用涂布器是玻璃器皿，不能在酒精灯火焰上灼烧，否则会变形，正确方法是沾取少量酒精，引燃。
【答案】 A6．利用涂布分离法纯化的大肠杆菌，经培养后发现培养基上出现了多种菌落，不可能的原因是( )A．培养基制备过程中被杂菌污染B．接种过程中，无菌操作不符合要求C．系列稀释时，无菌操作不符合要求D．由大肠杆菌的种类不同造成的【解析】大肠杆菌培养基中出现了多种菌落，说明污染了杂菌，杂菌可能来自培养基，也可能是因为操作过程中无菌操作不符合要求。
高中生物 第一部分《实验一 大肠杆菌的培养和分离》课件13 浙科版选修1
①常用的固体培养基:
琼脂固体培养基. ②微生物在固体培养基
表面生长,可以形成
肉眼可见的菌落.
第七页，共38页。
2.培养基内所含的基本物质
• (1)水 • (2)碳源
• (3)氮源
• (4)无机盐
第八页，共38页。
3.培养基内所需的其他条件 • (1)pH值 • 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱
α-固定化酶的使用 α-固定化酶 条件和效果
枯草杆菌
果酒和果醋的制作 果酒:酵母菌+天然 干酵母 果醋:醋化醋杆菌 菌种或醋曲
泡菜的腌制和亚硝 假丝酵母、乳酸菌 天然微生物 酸的测定
植物组织培养
菊花
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实验1 大肠杆菌的培养和分离
• 实验目的： • 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进
的铅笔上，冷却后使培养基形成斜面。
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步骤:
１、配制培养基; 培养基灭菌、器具灭菌
2、冷却，倒平板 (编号,无菌环境操无菌环境操作)
４、划线分离、恒温培养箱培养12~24h
(无菌环境操作)
５、接种斜面,4℃冰箱保存(目的:为了保存菌种)
6、实验完成后，接触过细菌的器皿均应灭菌处理后丢失。
4℃冰箱保存。
视频
6.实验完成后，接触过细菌的器皿均应灭菌处 理后丢弃。 目的：为了防止实验菌残留于接种环而污染环境 和感染实验人员。
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1为了获得纯净的培养物，其关键是防止外来杂菌的入侵 污染： 1）培养皿； 2）培养基； 3）接种过程是无菌的 2请思考：培养基、培养皿、手、接种环分别如何消毒或 灭菌？
2019-2020版高三一轮复习系列选考总复习生物课件：第29讲微生物的利用、浅尝现代生物技术
2.(2017·金丽衢十二校 节选)普通酵母菌直接利用淀粉的能力 很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α－淀粉酶基因转入酵母菌中， 经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图1 所示)
(1)图1中，为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以______ 作为唯一碳源。②③过程需重复几次，目的是____________ ____________________________________________________。 (2)某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分 布如图2所示。该同学的接种方法是________；推测该同学接 种时可能的操作失误是________。 (3)上述工程酵母菌培养过程中，有关操作正确的是________。 A.玻璃刮刀用火焰灼烧进行灭菌 B.培养基分装到培养皿后进行灭菌 C.倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行 D.获得的菌种如果需要保存，可置于37 ℃恒温保存
解析 (1)本实验中的LB培养基是要与尿素培养基作对比的， 所以要用琼脂糖替换琼脂。(2)尿素培养基的灭菌要分开进行， 除尿素外的其他成分仍用高压蒸汽灭菌，尿素溶液用G6玻璃砂 漏斗过滤除菌，再将除菌的尿素加到已灭菌的其他成分中。G6 玻璃砂漏斗由于孔径小，细菌不能滤过，可用于过滤除菌，但 需要在使用前进行高压蒸汽灭菌。(3)由于在土壤中产脲酶的细 菌远小于普通细菌，所以在尿素培养基上的菌落数相对少得多， 另外稀释倍数高的土壤稀释液中细菌数量少，在培养基上菌落 数也相对少。在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现红 色环带，这是因为脲酶催化尿素分解产生氨，使培养基呈碱性， 酚红指示剂在碱性下呈红色。
解析 (1)配制培养细菌的培养基通常用LB培养基，其成分有 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水等，固体培养基还有琼脂。其 中蛋白胨、酵母提取物提供营养，NaCl提供无机盐并调节渗透 压，琼脂是凝固剂。(2)细菌培养通常用LB液体培养基进行扩 大培养和生产，用固体培养基进行分离、鉴定、保存菌种。菌 种分离有划线法和涂布法，进行涂布分离时，选稀释菌液，再 进行涂布，完成后将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养，可获 得分布均匀的单菌落。为了检测接种、培养过程是否受杂菌污 染以及培养基灭菌是否彻底，应同时将未接种的培养基放入恒 温培养箱培养。(3)菌落的形状、大小等特征可以作为鉴定的依
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2019-2020学年高中生物第一部分微生物的利用1.1大肠杆菌的培养
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一、培养基的配置：
我们用牛肉膏蛋白胨培养基来培养大肠杆菌。
配置1000ml的培养基（可由教师在实验前配置好，也可由学生分小组后在实验课上操作）。
1、配方：
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
Nacl 5g
琼脂 20g
2、称量：准确称取各成分。
3、溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到1000mL。
整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。
4、调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至7.0——7.2。
5、灭菌：将配置好的培养基转移到锥形瓶中，加上棉塞，包上牛皮纸，用皮筋勒紧，集中放入高压灭菌锅内，121摄氏度、100千帕压力下灭菌15min。
5——8套培养皿用旧报纸包作一包，于干热灭菌锅内160——170℃条件下灭菌2小时。
6、倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。
其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；
②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。
倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。
否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。
二、大肠杆菌的接种、培养：
1、接种常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
（1）平板划线法：
①操作步骤：将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。
在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿内，在平板培养基的一边，作第1次平行划线 3～5条，转动培养皿约70°角，用烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。
划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。
不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。
划线完毕后，盖上皿盖，倒置于恒温箱培养。
②该方法原理及其注意事项：
用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。
划线到最后，可使细菌间的距离加大。
在培养10～20h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。
如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。
取菌种前灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种；取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。
（2）稀释涂布平板法：
先将培养的菌液稀释，通常稀释到10－5～10－7之间，然后取0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。
通常每个培养皿有20个以内的单菌落最为适合。
将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。
2、培养：
将接种后和未接种的培养基都放入37℃恒温箱中，培养12小时和24小时后，分别观察记录结果。
三、实验评价相关问题：
1、未接种的培养基是否有菌落？如果有，为什么？
2、接种了大肠杆菌的培养基上是否有菌落？其颜色、形状、大小是否相同？
3、如果培养基上出现了不同的菌落，请分析可能的原因。
四、实验注意事项：
①实验中用的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易造成污染。
灭菌后，通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的水分；
②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是有利于锅内温度升高，随后关闭排气阀继续加热，加热结束切断热源后，要使温度自然降低，气压务必降至零时打开锅盖，其目的是防止容器中的液体暴沸；
③在用任何器皿转接时，瓶塞和封口膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；
④培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上，否则容易污染；
⑤接种时要胆大心细，动作快捷，这是减少污染的关键；
⑥接种后，培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中，如正放则水蒸气在盖上凝成水滴，滴到接种后的培养基表面，水流扩散会使菌落扩散，就很难形成单菌落。