叶绿体色素的提取分离及其理化性质
实验名称：叶绿体色素的提取分离及其理化性质
【中文摘要】
本实验在提取叶绿体色素（叶绿素和类胡萝卜素）后，分别进行色素的分离和植物叶绿素理化性质的观察与检验。
【英文摘要】
In this study, the extraction of chloroplast pigments (chlorophyll and carotenoids), the pigments were separated and the physical and chemical properties of chlorophyll observation and testing.
【实验原理】
提取: 叶绿体中含有叶绿素(叶绿素a与b)和类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素)，这两类色素均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
分离: 当溶剂沿支持物不断向前推进时，由于叶绿体中不同色素分子结构不同，在两相(流动相与固定相)间具有不同的分配系数，因此它们移动速率不同。对叶绿体色素进行层析可将不同色素分离。
理化性质的观察: 叶绿素是一种二羧酸酯，在碱作用下，发生皂化反应；在弱酸作用下，叶绿素中镁可被氢原子取代而成为褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，叶绿素具有荧光，故从与入射光相垂直的方向观察叶绿素溶液呈血红色。叶绿素的化学性质不稳定，易受强光氧化，特别是当叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。
【实验目的】
以植物叶片组织为材料,提取叶绿体色素;以纸层析法分离其成分;鉴定叶绿体色素的理化性质.
【实验器材和试剂】
1、材料：菠菜
2、用具：天平、研钵、三角漏斗、滤纸、层析缸、毛细管、分光镜、量筒、烧杯、试管等
3、试剂：丙酮、碳酸钙、层析液（石油醚：丙酮=25：3)，20%KOH-甲醇、乙醚、1%HCl、醋酸铜
【实验步骤】
1.叶绿体色素的提取
1).取新鲜菠菜叶片2克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;
2).加入少许石英砂和CaCO
,再加入无水丙酮10ml,研磨成匀浆,再加丙酮15ml;
3
3).用漏斗滤去残渣,得叶绿体色素提取液(置于暗处).
2.纸层析分离叶绿体色素
1）.层析样纸制备,将优质滤纸剪成3cm×9cm的长条,将一端剪成中央留约1cm×0.5cm 的窄条;
2）.点样,用细玻璃棒蘸取叶绿体色素提取液点于层析纸的窄条上端中央部,用吹风机吹干后在原处重复点样7-8次;
3）.展层,在层析缸中加入3-5ml层析推动液,然后将已点样的层析纸插入缸的側壁槽内,调节纸条使窄条1/2部分浸入推动液中,盖好盖子,于阴暗处展层约10min,即可在层析纸上分辨出4种不同的清楚色层;
3.叶绿体理化性质的观察
1）.荧光现象的观察
取浓的叶绿体色素提取液化3ml,在透射光和反射光下观察叶绿体色素提取液的颜色.
2).皂化作用
在观察过荧光现象的叶绿体色素提取液中加入2ml的20%KOH-甲醇溶液,充分混匀.吹打5分钟;沿试管壁缓慢加入3ml乙醚+4ml的蒸馏水,边滴加边摇动,直至看到溶液逐渐分为两层为止. 对照不加KOH-甲醇溶液.
3).叶绿素分子中Mg2+的取代作用
取2只试管,分别加入2ml叶绿体色素提取液,第1只作为对照,第2只加入数滴5%HCl,摇匀,观察溶液颜色变化.当溶液变褐后,再加入少量醋酸铜粉末,并微加热.与对照比较,观察溶液颜色变化.
【实验结果】
1、纸层析分离叶绿体色素
2、叶绿体理化性质的观察
1）荧光现象的观察
溶液的透射光为绿色，反射光为暗红色。因为叶绿素吸收光量子而转变为激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。
2）皂化作用
溶液分为两层，下层溶有皂化的绿色的叶绿素a和叶绿素 b(以及少量叶黄素)，上层溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素。
3）叶绿素分子中Mg2+的取代作用
a．经水浴加热后的溶液颜色变为深绿色，比对照试管中的溶液颜色更深。
b．经水浴加热后的溶液颜色先略微变黄，然后变为深绿色。
因为叶绿素中的镁可以被氢离子所取代而呈褐色的去镁叶绿素。去镁叶绿素遇铜则成为很稳定的铜代叶绿素，其在光下不易被破坏。
【讨论】
有什么作用?
1.研磨提取色素时加入CaCO
3
加入CaCO
能使叶绿素中的一些成分在研磨时不受破坏。
3
2.哪些条件会影响实验结果?
1）叶绿体色素提取液的保存条件
2）试剂的浓度以及用量
【参考文献】
1. 杨善元. 关于测定叶绿素含量及a:b值等若干问题，植物生理学通讯，1983（4）：61-6
2.
2. Arnon DI. Copper enzymes in isolated chloroplasts polyphenoloxidase in beta vulgaris. Plant Physiol., 1949, 24：1-15.
3. Bruinsma J. The quantitative analysis of chlorophylls a and b in plant extracts. Photochem Photobiol., 1963, 2：241-249.
叶绿体色素的提取分离实验报告
叶绿体色素的提取分离、理化性质实验报告 第一部分提取与分离 一实验目的 学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法 二实验原理 叶绿体是进行光合作用的细胞器。叶绿体中的叶绿体a(C55H72O5N4Mg)、叶绿素b(C55H72O6N4Mg)、胡萝卜素(C40H56)和叶黄素(C40H56O2)与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。提取液可用薄层色谱法加以分离与鉴别。 薄层色谱分析法是将吸附剂均匀的涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层做固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂做流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂中。流动相通过毛细管作用由下而上的逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱附、再吸附、再脱附……的过程。由于吸附剂的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。 三实验材料与试剂 1 新鲜的菠菜叶片 2 体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂(石油醚:丙酮:苯=7:5:1，体积比) 3 天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸 四实验步骤 (一)色素提取液的制备 1 取新鲜叶片4至5片(2g左右)，洗净，擦干叶表面，去中脉剪碎，放入研钵中。 2 研钵中加入少量碳酸钙粉末，加2至3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，再加10至15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤，残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色素提取液。提取液应避光保存。 (二)叶绿体色素的分离 1 取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘约1cm处用毛细管划线，风干后再划第二次，重复操作3至4次。 2 在干洁的层析缸中加入适量的展开剂，高度约0.5cm，将硅胶预制板带有色素的一端放下，使其浸入展开剂中(但不要使待测样品浸入展开剂中)。迅速盖好层析缸盖。此时，展开剂借毛细管作用沿硅胶预制板向上扩散，并把叶绿体色素向上推动，不久即可以看到各种色素的色带。 3 当各种色素的得到较好分离，展开剂前沿接近硅胶预制板上端近边缘处时，取出硅胶预制板，并迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带的位置。
高中生物必修一实验八 叶绿体中色素的提取和分离
实验八叶绿体中色素的提取和分离 教学目的 1．初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。 2．探索叶绿体中有几种色素。 实验原理 1．叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。 2．色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。 实验程序 （1）称取5g绿色叶片并剪碎 提取色素 （2）加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口 （1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时 到达滤液细线）制滤纸条 （2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线 （1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线 滤液划线 （2）干燥后重复划2-3次 （1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准） 纸上层析（2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中 （3）用培养皿盖盖上烧杯 观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图） 最宽：叶绿素a； 最窄：叶绿素b； 相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b； 相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。 实验关键 1．选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。2．画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行，重复2-3次。 3．层析时不要让滤液细线触及层析液。 注意事项 1．因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。 2．在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。 3．分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
试验九叶绿体色素的提取分离与理化性质鉴定试验目的1学会
实验九叶绿体色素的提取分离与理化性质鉴定 一、实验目的 1、学会叶绿体色素提取和分离的方法。 2、了解叶绿体色素的荧光现象、皂化反应等理化性质。 二、实验原理 叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。 提取液可用色层分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。 叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。 三、实验器材 新鲜的植物叶片。 研钵；漏斗；100ml三角瓶；玻璃棒；剪刀；滴管；培养皿；定性滤纸条（5cm×1.5cm）。 毛细管；试管；试管架；石棉网；烧杯（100ml）；酒精灯；铁三角架；刻度吸量管2ml、5ml各1支。 四、实验试剂 1、95%乙醇；石英砂；碳酸钙粉 2、推动剂：按石油醚：丙酮：苯（10：2：1）比例配制（体积比） 3、醋酸铜粉末；5%的稀盐酸 4、甲醇、KOH 五、实验步骤 1、叶绿体色素的提取 （1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4~5片（2g左右），洗净，擦干，去掉中脉，剪碎，放入研钵中。 （2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2~3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10ml 95%
叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定
实验报告 植物生理学及实验（甲）实验类型：课程 名称：实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶 绿素含量的测定姓名：专业：学 号：指导老师：同组学生姓名： 实验日期：实验地点： 二、实验内容和原理一、实验目的和要求装 四、操作方法与实验步骤三、主要仪器设备订 六、实验结果与分析五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得一、实验目的和要求、掌握植物中叶绿体色素的分离和 性质鉴定、定量分析的原理和方法。1 和b的方法及其计算。a2、熟悉在 未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素二、实验内容和原理以青菜为 材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。 原理如下：80%的乙醇或95%叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，1、常用的丙酮提取。、皂化反应。叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应， 形成绿色的可溶性叶绿素2． 盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。- COOCHCOO3 Mg + 2KOH C32H30ON4Mg + 2KOH +CH3OH
HONC43230+C20H39OH 、3H+可依次被在酸性或加温条件下，叶-COOCOOCH39 20 绿素卟啉环中的Mg++取代反应。Mg2+, Cu2+ 取代Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。(H+和H+ ) 取代(Zn2+) 绿色褐色 、叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。4645其中叶绿素吸收红光和兰紫光，红光区可用于定量分析，5、定量分析。 652可直接用于总量分析。663用于定量叶绿素a,b及总量，而和C最大吸收光谱不同的两个组分的混合液，它们的浓度根据朗伯-比尔定律， *k+C*kOD=Ca*k与吸光值之间有如下的关系： OD=Ca*k+C b2 1g/L和b的80查阅文献得，2b1 b1a1a2b时，比吸收系％丙酮溶液，当浓度为 叶绿素a 值如下。数k k 比吸收系数波长/nm b 叶绿素a 叶绿素 9.27 82.04 663 45.60 645 16.75
(完整版)《绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计
《绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计 一．教材分析 本实验是高中生物必修一第五章第四节《能量之源-----光与光合作用》中的基本实验，加之此节是生物三大必修模块《分子与细胞》的核心内容。所以在展开光合作用的相关学习内容之前通过教师适当的引导，学生的动手操作完成对绿叶中色素的提取与分离的学习，增强了学生探究学习的欲望和学习光合作用的兴趣，也为后续光合作用内容的学习打下了坚实的基础。并以此提高了学生的生物科学素养和科学探究的能力。 二．学情分析 我所带的是职业中学的体育班，全班29位学生，其中只有3名女同学，以男生居多的这个班级学生学习的重视度，自觉性都比较差。而且学生学习目标不明确，态度不端正，文化课的底子薄，对课堂教学兴趣不浓厚。但学生比较好动，具有很大的好奇心和探究欲望，往往他们对实验课具有很高的兴趣，这样对开展生物实验课很优势。以此来激发学生学习生物课的兴趣和培养学生的实际动手操作能力。 三、教学目标 知识目标：理解色素的提取和分离实验目的、实验原理，探索叶绿体有色素的种类。 能力目标： （1）初步学会提取、分离叶绿体中色素的方法和技能。 （2）使学生掌握科学探究的程序和方法，培养学生创造性思维能力和动手实践的能力。（3）提高学生口头表达、相互交流的能力及思维的严密性。 情感态度目标：提高学生的学习兴趣，初步培养了学生科学探索的欲望和能力。 培养学生实事求是的科学态度，增强学生关心爱护绿色植物，关心发展农业的意识，进行生命科学价值观的教育。 四、重点难点： 重点：叶绿体中色素的种类和作用 难点：对实验原理的理解；对照实验的设计和色素的提取。 五、实验原理： 提取原理：叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，所以可以用丙酮提取叶绿体中的色素。当没有丙酮时，也可以用其他有机溶剂替代，如酒精。 分离原理：分离色素的方法叫纸层析法。分离色素与色素的溶解度有关，而与色素的浓度、
光合色素的提取与分离改进实验
光合色素的提取与分离改进实验 一、本实验在教材中所处的地位与作用 本实验是浙科版高中生物必修一《分子与细胞》中的一节内容，是高中生物教学中的一个重要实验。光和色素在光合作用中起着吸收、传递与转化光能的作用，通过光合色素的提取和分离实验，有助于学生理解光合色素的种类和作用、加强学生对光合作用的理解和掌握，培养学生提取、分离光合色素的技能。 二、对教材实验的教学思考 结合笔者多年的教学实践和学生操作反馈的实验结果 可以发现，即使完全按照课本所提供的材料和实验方案进行规范操作，光合色素提取和分离的效果也不是很理想。主要体现在以下三个方面：（1）教材中提取光合色素使用研磨法，步骤较为繁琐，药品种类较多。虽然浙科版已经改用烘干的菠菜叶干粉作材料，降低了研磨操作的难度，但是所用到的药品种类还是比较多（包括二氧化硅和碳酸钙等），且用量不好控制，用量过多影响色素的浓度，用量过少则得不到很好的研磨效果。另外，研磨时要求迅速、充分研磨成匀浆，学生难以把握好匀浆的程度，而且提取液中色素含量不高，导致色素分离不明显。（2）教材中画滤液细线时使用毛细吸
管吸取滤液直接画线，毛细吸管很细、易断，而且画滤液细线时，线画得较粗且不直，操作上很难符合要求。（3）分离光合色素，用到的工具是滤纸条，且放置于装有层析液的试管中层析，由于试管口径较小，所制备的滤纸条也相应较小，滤纸条上即使在画滤液细线时重复多次，滤纸上色素含量也不多，导致分离出来的色素带不是很明显；另外，操作上也很容易使滤液细线触及层析液，导致实验失败。 三、实验改进之处 1.光合色素提取的改进――酒精隔水加热提取色素 将原实验中的研磨法改为酒精隔水加热法。直接将菠菜叶片的绿叶剪碎加入无水乙醇，进行隔水加热，所得的溶液就是色素溶液，省去了添加二氧化硅和碳酸钙、过滤的步骤，操作简单，也能使学生明确色素不溶于水，极易溶于有机溶剂的知识点。 2.画滤液细线方法的改进 将教材实验中画滤液细线工具毛细吸管改为自制画线器，如，笔帽、大号移液枪头等空心圆柱材料，直接在装有色素溶液的培养皿中蘸取，印上滤纸圆心处即可，这样操作更为便利。 3.光合色素分离的改进――灯芯法分离色素 将教材中的滤纸条分离改为用圆形滤纸分离，以酒精灯灯芯作为介质，将层析液引导至圆形滤纸片上，得到的层析
冲刺2020高考生物实验突破专题：绿叶中色素的提取和分离(附答案及解析)
绿叶中色素的提取和分离 1.提取绿叶中的色素 ①原理：绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中。 ②步骤 取材：称取5 g 新鲜绿叶 ↓ 研磨：剪碎叶片，放入研钵中，加少许二氧化硅和碳酸钙，再加入10 mL 无水乙醇， 迅速、充分研磨 ↓ 过滤：漏斗基部放一块单层尼龙布，将研磨液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤 ↓ 收集：用小试管收集色素滤液，及时将试管口用棉塞塞严 2.分离绿叶中的色素 ①原理：不同色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢。 ②步骤 制备滤纸条????? 剪滤纸条：将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与直径的 滤纸条，并在一端剪去两角 ↓ 铅笔画线：在距滤纸条去角的一端1 cm 处用铅笔画一条细的横线 ↓ 画滤液细线????? 取滤液：用毛细吸管吸取少量滤液 ↓画线：沿铅笔线均匀地画出一条细线 ↓重复画线：待滤液干后，重复画细线1～2次 ↓ 分离绿叶中的色素：将适量的层析液倒入试管中，将滤纸条(有滤液细线的一端朝下) 轻轻插入层析液中，随后用棉塞塞紧试管口 ↓ 观察并记录结果：滤纸条上出现4条色素带
3.实验中的材料试剂及操作目的 考点一：实验的基本原理和过程分析 例一、甲、乙、丙、丁四位同学，在利用新鲜绿色菠菜叶为实验材料，用层析法进行叶绿体中色素的提取和分离实验时，由于操作不同，得到了四种不同的层析结果(如图所示)。下列分析错误的是()
A．甲可能误用蒸馏水作提取液和层析液 B．乙可能是因为研磨时加入无水乙醇过多 C．丙可能是正确操作得到的理想结果 D．丁可能是研磨时未加入CaCO3 考点二：实验异常现象分析 例一．在做提取和分离叶绿体中的光合色素实验时，甲、乙、丙、丁四位同学对相关试剂的使用情况如下表所示(“＋”表示使用，“－”表示未使用)，其余操作均正常，他们所得的实验结果依次应为() A．①②③④B．②④①③ C．④②③①D．③②①④ 易错点一收集到的滤液绿色过浅的原因分析 ①未加石英砂(二氧化硅)，研磨不充分。 ②使用放置数天的绿叶，滤液色素(叶绿素)太少。 ③一次加入大量的无水乙醇，色素溶液浓度太低(正确做法：分次加入少量无水乙醇提取色素)。 ④未加碳酸钙或加入过少，色素分子被破坏。 易错点二滤纸条色素带重叠：没经干燥处理，滤液细线不能达到细、齐、直的要求，使色素扩散不一致。
《叶绿体色素的提取和分离》 实验报告
《叶绿体色素的提取和分离》实验报告 实验目的 1. 学习叶绿体色素的提取、分离方法。 2. 通过叶绿体色素提取、分离方法的学习了解叶绿体色素的相关理化性质。 3. 为进一步研究各叶绿体色素性质、功能等奠定基础。 实验原理 叶绿体色素包括绿色的叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和黄色的类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)两大类,它们均以色素蛋白复合体形式存在于类囊体膜上。两类色素均不溶于水而溶于有机溶剂,故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。由于提取液中不同色素在固定相和流动相中的分配系数不同,所以可借助分配层析方法将其分离。 实验仪器与药品 1. 绿色植物如菠菜等的叶片。 2. 研钵、漏斗、三角瓶、剪刀、滴管、康维皿、圆形滤纸(直径11cm)。 3. 95%乙醇、石英砂、碳酸钙、展层剂。展层剂按石油醚:丙酮:苯10:2:1的比例配制(V/V)。 实验步骤 1. 叶绿体色素的提取
(1)取菠菜或其它新鲜植物叶片4~5片(4g左右),将其洗净、擦干并去掉中脉,剪碎后置入研钵中。 (2)研钵中加入95%乙醇2~3 ml及少许石英砂、碳酸钙研磨至匀浆,再加95% 乙醇5ml,然后以漏斗过滤之,即为色素提取液。 2. 叶绿体色素的分离 (1)取圆形定性滤纸一张(直径应小于康维皿直径)于其中心扎一圆形小孔(直 径约3mm),另取长方形滤纸条一张(5cm×1.5cm),用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取 液沿滤纸条的长度方向涂抹,注意涂抹色素扩散宽度应限制在0.5cm以内,风干后再重复操作数次。然后沿长度方向将滤纸条卷成纸捻,使涂抹过叶绿体色素溶液的一侧恰在纸捻的一端。 (2)将纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中,使与滤纸刚刚平齐(勿突出)。 (3)在康维皿中央小室中加入适量的展层剂,把带有纸捻的圆形滤纸平放在康 维皿中央小室上,使纸捻下端浸入展层剂中,迅速盖好培养皿。展层剂将借助毛细管作用顺纸捻扩散至圆形滤纸上,使叶绿体色素在固定相(滤纸中吸附有水分的纤维素)和流动相(展层剂)间反复分配,从而使不同色素得到分离,分离结果为滤纸上可见到各种色素的同心圆环。无康维皿时亦可用底、盖直径相同的培养皿进行实验,实验时可在培养皿底中放入一平底短玻管或塑料药瓶盖以替代康维皿中央小室盛装展层剂,其余相同。 (4)当展层剂前沿接近滤纸边缘时便可结束实验,此时可看到不同色素的同心 圆环,各色素由内往外的顺序为:叶绿素b(黄绿色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶黄素(鲜黄色)、胡萝卜素(橙黄色),再用铅 笔标出各种色素的位置和名称。
叶绿体色素的提取
叶绿体色素的提取、分离、理化性质和含量测定 Ⅰ提取与分离 实验日期：2011.10.22 实验者：XXX 同组姓名：XXX 一、实验目的： 1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。 2.了解叶绿素的组成、性质和测定叶绿素有助于理解光合作用的本质。 二、实验原理: 叶绿体是进行光合作用的细胞器。叶绿体中的叶绿素a，叶绿素b，胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。这些色素都不溶于水而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。提取液可用薄层色谱法加以分离和鉴别。 植物活性成分的分离常用薄层层析法和柱层析法，其中柱层析适用于大量制备。 本实验采用薄层层析色谱法，其中固定相用硅胶预制板。 三、实验材料与试剂: 1.新鲜的菠菜叶片。 2.体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂。 3.研钵，漏斗，滤纸，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板。 四、实验步骤: （一）色素提取液的制备 1.取新鲜叶片4~5片，洗净，擦干叶表面，去除中脉剪碎（越碎越好），放 入研钵中。 2.向研钵中加入少量CaCO3，加2~3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状， 再加10~15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤出，残渣再用10ml 体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色 素提取液。提取液应尽量避光保存。因提取量较大，可用于其他相关实验 （即用于后面的理化性质的验证）。 （二）叶绿体色素的分离 1.取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边， 距下边缘1cm处用毛细管划线，自然风干后划第二次，重复操作3~4次， 确保划的滤液细线颜色足够深，使分离结果更加明显。 2.取已经加入适量展开剂的层析缸，把硅胶预制板带有色素的一端放入，使 其下端浸入展开剂中，但注意液面不可超出滤液细线。迅速改好层析缸盖 减少展开剂的挥发对人体产生的不良影响。注意观察展开剂的扩散过程， 当各种色素得到较好分离，且展开剂前沿接近硅胶预制板上端边缘处时， 取出硅胶预制板迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带的位置。注意要迅 速，否则展开剂前沿很快会挥发消失，且前沿和各个色素带的位置均会有 微小变动。 3.测量出前沿和各个色素带距离原点的距离并记录。 五、实验结果与分析（以图辅助以文字展示）:
绿叶中色素的提取和分离
绿叶中色素的提取和分离》实验教学设计 学院附中陈建志 一、教材分析 生物学是以实验为基础的科学，实验教学对提高学生的生物科学素养起着无可替代的重要作用，他是素质教育和创新教育的重要场所和前沿阵地，也是基础教育改革的基础、前提和保证。 《绿叶中色素的提取和分离》是一个探究性实验，通过本实验，可以让学生知道绿叶中色素的种类和颜色对植物叶片颜色的影响，是学习光合作用的基础。本实验要求层次较高、操作难度较大、考查频率高的一个实验，但是按照教材的实验步骤和方法，多数学生把握不够，操作不当。分离后的色带或不全或色浅，辨认困难，实验效果皆不理想。笔者在实验教学中将有关操作作了调整。 1、教材中值得推敲的地方 实验选材和研磨教材推荐用菠菜为实验材料。菠菜生长受季节的限制，有的季节很难采集。另外菠菜叶片含水量较高，较多的水分子与丙酮分子接触，降低了丙酮对色素分子的萃取率，导致提取液中含色素分子少，进而影响实验结果。 教材中选用5克叶片．相对于仅需的几滴滤液来说，显然太多，也增加了研磨的时间和难度。相对于5克叶片，5毫升丙酮又显太少。丙酮极易挥发，实验中常出现叶片未研碎。丙酮已挥发干的情况。因为研磨不彻底，提取液中色素含量少。 研磨剂的配制学生只是按课本要求按顺序添加无水、乙醇、CaCO、3 SiO2,并不能很深刻的理解添加这些物质的原理和作用。 过滤装置课本要求用放置单层尼龙布的漏斗过滤滤液，但实际操作中这个方法耗时且费力。 画线方法由于学生平时的实验操作中很少用到毛细吸管，所以采用课本要求的方法划线，很难做到滤液细线细、直、均匀的要求。色素分离装置分离色素是将滤纸条插入到
加入层析液的烧杯中，为了防止层析液挥发，还可以给烧杯加盖。而实际操作很难做到滤纸条在烧杯中保持竖直，也不能有效减少层析液的挥发。 分离色素的方法课本是让色素在长形滤纸条上扩散分离，方法单一，不能很好地激发学生的创新思维。 2 实验改进 只要是新鲜、浓绿的叶片皆可选，但要对叶片作些处理。将叶片用沸水处理，即将2克叶片置于沸水中煮20—40 秒（时间不宜过长。否则会破坏色素分子的结构）后。立即捞出置于冷水中降温，再用吸水纸吸千水分．剪碎后放人研钵。 研磨剂的配制 试验设计： 1）分别在A 、B、C 三个研钵中加入 5 克剪碎的叶片 2） A 中加少量的二氧化硅和无水乙醇， B 中加少量的二氧化硅、碳酸钙和水 C 中加少量的二氧化硅、碳酸钙和无水乙醇； 3）经研磨、过滤得到三种不同颜色的溶液（A黄绿色、B几乎无色、 C 深绿色）； 4）分析实验结果得出结论：碳酸钙可以防止色素被破坏，色素可以溶于酒精但不溶于水。 通过分组对照，让学生通过具体的实验探究，更直观更容易理解提取色素过程中所添加的各种物质的作用。 过滤装置的改进将过滤用的尼龙布改为用棉花塞住漏斗口过滤，一个人就能独立完成，而且过滤速度快，操作更为简单。 画线方法的研究这一步是本实验的一个操作难点，学生很难用毛细吸管画出细、直、均匀的滤液细线。如果用钢笔沾色素、硬币边缘压线、盖玻片或者棉线画线等，则操作起来更容易。色素分离装置的制作，用厚纸板作个烧杯盖，上面剪开 1.5 —2 厘米的缝隙，滤纸条只需要从层析缸上盖子的缝隙插入到层析液中，根据实验需要可以选择缝隙数量不同的盖子做出调整。分离色素的方法的创新1）用圆形滤纸片分离。用圆形滤纸片分离，取平面培养皿 1 只，将一干燥的圆形定性滤纸盖在培养皿中，在圆形滤纸（直径为l0 cm ）中央滴上2 ~ 3滴色素提取液，静置约1 min,在滤纸的中央点成圆形的色素
色素的提取和分离
第4节能量之源——光与光合作用 一捕获光能的色素和结构 一 课前预习学案 1阅读p98填写绿叶中的色素和种类 2如何提取和分离色素？阅读p97—98实验 1.色素的提取 (1)实验原理： (2)实验流程 取材：称取5 g绿叶，，放入研钵中 ↓ 研磨： 加二氧化硅,为了 无水乙醇为了 ↓ 过滤：漏斗基部放一块单层尼龙布，将滤液迅速倒入玻璃漏斗中进行过滤↓ 收集：用小试管收集色素滤液，及时将试管口用棉塞塞严 2．色素的分离 (1)实验原理：绿叶中色素在层析液中的不同，它们随层析液在滤纸条上的也不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得；反之则慢。这样，色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。 (2)实验流程
1．形态：扁平的 或 。 2．结构 3．功能：绿色植物进行 的场所。 4．色素的分布： 。
课堂探究一实验部分 1．实验成功的关键 (1)色素的提取 ①选取新鲜叶片： ②加入少许SiO2 CaCO3：。 ③加入无水乙醇：。 ④收集完滤液后，试管口加棉塞，。 (2)色素的分离 ①滤纸条剪去两角，。 ②画滤液细线时，画得要，使分离的色素带平整、不重叠； 而且要重复一两次，。 ③层析液不能没及滤液细线，。 2．注意事项 (1)裁取定性滤纸时，注意双手尽量不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。 (2)根据试管的高度制备滤纸条，让滤纸条长度高出试管1 cm，高出的部分做直角弯折。 (3)画滤液细线时，用力要均匀，速度要适中。 (4)研磨要迅速、充分。①因为无水乙醇容易挥发；②为了使叶绿体完全破裂，从而能提取较多的色素。叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而破坏。 (5)过滤时，不能用滤纸，要用单层尼龙布(或脱脂棉)，因为滤纸可以吸附色素，降低滤液中色素的含量，使实验效果不明显。 2画出实验得到的色素带以及位置 3该实验中收集到的滤液绿色过浅，可能的原因有哪些？
实验三 叶绿体色素的提取
实验三叶绿体色素的提取、分离及理化性质的测定 【实验原理】 叶绿体色素又称光合色素，在高等植物中可分为叶绿素和类胡萝卜素两大类，前者包括叶绿素a（蓝绿色）和叶绿素b（黄绿色），后者包括胡萝卜素（橙色）和叶黄素（黄色），它们与类囊体膜上的蛋白质结合形成色素蛋白复合体，不溶于水，易溶于酯，因此可用丙酮、乙醇、石油醚等有机溶剂进行提取。叶绿体色素的分离有多种方法，本实验仅介绍纸层析法。层析的基本原理：在分离过程中，由一种流动相（即一种液体或气体）带动着试样经过固定相（一种支持物，如纸）向外扩散，由于试样在两相中的溶解度不同和固定相对试样中不同成分的吸附程度有别，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，可使试样中的各种组分得到分离，在做纸层析时，由于纸对光合色素中各种色素分子的吸附程度不同，以及这些色素分子在溶剂四氯化碳（推进剂）中溶解度也有差异，以致溶剂带动色素分子向四周移动时，各种色素分子沿纸扩散的速度也就不同，使混合色素分离，出现不同颜色的环。将提取的叶绿素溶液置于光下，在透射光呈绿色，在反射光下呈樱桃红色，这种现象称为荧光现象。在反射光下叶绿素溶液之所以呈樱桃红色，是因为叶绿色分子吸收光能后处于激发状态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它回到基态时，将所获得的能量以辐射能的形式发射出红光量子。叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光、高温等的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。叶绿素中的镁可以被H＋所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜后，其中的氢（H＋）又被铜（Cu2＋）取代，形成了铜代叶绿素，便由褐色转变成蓝绿色，铜代叶绿素很稳定，且比原来的绿色还要稳定些，在光下也不易被破坏。 【材料、设备与试剂】1. 材料新鲜的菠菜或小白菜等其他绿色植物叶片。2.设备电子天平、研钵、烧杯、量筒、培养皿、刻度试管、试管夹、试管架、酒精灯、剪刀、圆形滤纸、小漏斗等。3.试剂丙酮、四氯化碳、无水硫酸钠、6?mol/L盐酸、醋酸铜粉末、碳酸钙等。 【方法与步骤】1. 叶绿体色素的提取1.1 取菠菜或其他植物新鲜叶片5?g，洗净，擦干，去掉主脉后剪碎，放入研钵中。1.2 在研钵中加入少量碳酸钙和约3-5?mL 丙酮后，研磨成匀浆，研磨过程中根据情况加入一定量的丙酮以利于研磨，匀浆用多层纱布过滤到试管中。1.3 在残渣中再加入3~5?mL 丙酮，研磨过滤，共得深绿色溶液近10?mL，其中含有叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素等色素及其它脂溶性物质。2. 叶绿体色素的分离2.1纸层析分离法纸层析装置如图8.1 所示。
绿叶中色素的提取和分离
实验：绿叶中色素的提取和分离 杨琪 一．实验原理 实验中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇(丙酮，汽油，苯等)中，所以，可以用无水乙醇提取绿叶中的色素。 绿叶中的色素不止一种，他们都能溶解在层析液中。然而，它们在层析液中的溶解度不同；溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快；反之则慢。这样，几分钟之后绿叶中的色素就会随着层析液在滤纸上的扩散而分离开。且溶解度最高的是胡萝卜素，它随层析液在滤纸上扩散的最快；叶黄素和叶绿素a的溶解度次之，叶绿素b的溶解度最低，扩散的最慢。 二．实验目的 1. 掌握提取和分离叶绿体色素的方法 2. 探究绿叶中含有几种色素 三．实验材料用具 材料：新鲜的绿色叶片（如菠菜的绿叶）。无水乙醇，层析液，SiO2、CaCO3 用具:干燥的定性滤纸，烧杯（100ml）,小试管，试管架，培养皿盖，棉塞，研钵，玻璃漏斗，尼绒布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10ml）,天 平，铅笔 四．实验步骤 1.提取绿叶中的色素 取材：用天平称取5g的新鲜绿叶，剪碎，放入研钵中。向研钵中加入少许SiO2、CaCO3 ，再加入10ml无水乙醇，进行快速，充分的研磨。 过滤：将研磨液迅速倒入玻璃漏斗（漏斗基部放一块单层尼绒布）中进行过滤。将滤液收集到小试管中，及时用棉塞将试管口塞严。 2.制备滤纸条 将干燥的定性滤纸剪成略小于试管长与直径的滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，并在距这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。 3.画滤液细线 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀的画出一条细线。待滤液干后，再画一两次 4.分离绿叶中的色素 将适量的层析液倒入烧杯中，将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）略微倾斜靠着烧杯的内壁，轻轻插入层析液中，随后用培养皿盖盖住烧杯口。注意，不能让滤液细线触及层析液 5.观察与记录 几分钟以后，打开培养皿盖，取出滤纸条，干燥后观察滤纸条上的色素带，以及每条色素带的颜色和宽度，将观测结果记录下来。 6．观察结果分析结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图）
叶绿体色素的提取分离及其理化性质
实验名称：叶绿体色素的提取分离及其理化性质 【中文摘要】 本实验在提取叶绿体色素（叶绿素和类胡萝卜素）后，分别进行色素的分离和植物叶绿素理化性质的观察与检验。 【英文摘要】 In this study, the extraction of chloroplast pigments (chlorophyll and carotenoids), the pigments were separated and the physical and chemical properties of chlorophyll observation and testing. 【实验原理】 提取: 叶绿体中含有叶绿素(叶绿素a与b)和类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素)，这两类色素均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 分离: 当溶剂沿支持物不断向前推进时，由于叶绿体中不同色素分子结构不同，在两相(流动相与固定相)间具有不同的分配系数，因此它们移动速率不同。对叶绿体色素进行层析可将不同色素分离。 理化性质的观察: 叶绿素是一种二羧酸酯，在碱作用下，发生皂化反应；在弱酸作用下，叶绿素中镁可被氢原子取代而成为褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，叶绿素具有荧光，故从与入射光相垂直的方向观察叶绿素溶液呈血红色。叶绿素的化学性质不稳定，易受强光氧化，特别是当叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。 【实验目的】 以植物叶片组织为材料,提取叶绿体色素;以纸层析法分离其成分;鉴定叶绿体色素的理化性质. 【实验器材和试剂】 1、材料：菠菜 2、用具：天平、研钵、三角漏斗、滤纸、层析缸、毛细管、分光镜、量筒、烧杯、试管等 3、试剂：丙酮、碳酸钙、层析液（石油醚：丙酮=25：3)，20%KOH-甲醇、乙醚、1%HCl、醋酸铜 【实验步骤】 1.叶绿体色素的提取 1).取新鲜菠菜叶片2克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;
绿叶中色素的提取和分离实验改进
绿叶中色素的提取和分离实验改进、探索 武威二中何秀芳 一、实验在教材中所处的地位与作用 本实验是高中生物必修一《分子与细胞》中光合作用一节的内容，是高中生物教学中的一个重要实验，做好绿叶中色素的提取和分离实验，有助于学生理解光合色素的种类和作用、加强学生对光合作用的理解和掌握，培养学生提取、分离、观察叶绿体中色素的技能。 二、实验目的： 1、提取和分离绿叶中的色素。 2、探究绿叶中色素的种类。 三、实验原理： 1、提取色素：绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中，则可用无水乙醇提取色素。 2、分离色素：绿叶中的色素不只一种，它们都能溶解在层析液中，而且在层析液中的溶解度不同：溶解度高→随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低→随层析液在滤纸上扩散得慢。则根据不同的扩散速度，把色素分离开。 四、原实验步骤
五、实验创新与改进之处 1、提取绿叶中的色素 不足之处：提取色素使用研磨法，加10ml无水乙醇，得到提取液色素含量不高，并且点样时容易印染（如图1），导致色素分离不明显；且实验中研磨之后还要过滤，步骤繁琐，所需器材较多。 改进：提取色素时加5ml无水乙醇即可，得到的提取液可不用过滤直接点样，这样步骤简单，节省时间并且不影响实验效果，只不过这一操作放到第二步较好。 2、制备滤纸条 改进之处：滤纸条剪去两角之后，剩下的长度在0.5CM左右为宜，底边左右两侧剪去两角时最好夹角一致这样色素在滤纸上扩散的才会更均匀。（如图2） 图1 图2 3、画滤液细线 不足之处：滤液细线要求“细、直、齐”，用毛细吸管加大了难度，毛细吸管很细易断，而且画滤液细线时，线画得较粗且不直，很难符合要求。 改进：直接用盖玻片蘸取提取液在铅笔线处拓印，这样干了再在原处拓印2~3次，降低难度，且色素含量较高。 4、层析液 成分：（1）石油醚、丙酮、苯（2）石油醚、二甲苯、苯、（如图3）（挥发性强，有刺激性气味，而且有毒） （3）汽油（如图4）
高中生物叶绿体色素的提取和分离学案
叶绿体色素的提取和分离 一．实验目的： 思考题1．尝试用方法提取叶绿体中的色素和用法分离提取到的色素。 2．分析实验结果，探究叶绿体中有几种色素，以及各自所呈现的颜色。 二．实验原理： 1．叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮、乙醇等能提取色素。思考题2．叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，溶解度随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度随层析液在滤纸上扩散得慢。 三、实验材料：幼嫩、鲜绿的菠菜叶 思考题3．为什么选用幼嫩、鲜绿的菠菜叶作为实验材料？ 四、实验步骤： 1．提取色素：5克绿叶剪碎，放入研钵，加少量SiO2、CaCO3和5mL丙酮，迅速、充分研磨。 思考题4．加SiO2、加CaCO3的目的是什么？ 思考题5．为什么要迅速研磨？ 2．收集滤液：漏斗基部放一单层尼龙布，研磨倒入漏斗内挤压，将滤液收集到小试管中，用棉花塞塞住试管口 3．制备滤纸条：将干燥的滤纸，顺着纸纹剪成长10cm，宽1cm的纸条，一端剪去二个角，并在距这一端1cm 处划一铅笔线。 思考题6．将干燥的滤纸的一端剪去二个角的目的是什么？ 4．画滤液细线：用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线，干后重复三次。 思考题7．为什么滤液细线越细、越齐越好？ 思考题8．为什么画滤液细线需要重复三次？ 5．分离绿叶中的色素 将3mL层析液倒入烧杯中，将滤纸条（划线一端朝下）插入层析液中，用培养皿盖盖上烧杯。注意：
层析液不能没及滤纸条的滤液细线，烧杯要盖培养皿盖。 思考题9．为什么层析液不能没及滤纸条的滤液细线？ 思考题10．为什么烧杯要盖培养皿盖？ 6．观察实验结果 思考题11．请在右图中标示出相应的色素及其颜色： 思考题12．提取和分离叶绿体色素的关键是什么？ 五、课堂练习： 1、叶绿体色素的纸层析结果显示．叶绿素b位于层析滤纸的最下端，原因是： A．分子量最小B．分子量最大 C．在层祈液中的溶解度最小D．在层析液中的溶解度最大 2、通过纸层析法分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现4条色素带，从上而下依次为： A．胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b B．胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素 C．叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素、叶黄素 D．叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 3、下列项目中，前项为实验试剂，中项为试剂的作用，后项为实验结果或实验目的，其中错误的一项是 A．丙酮溶解叶绿体中色素提取色素 B．二氧化硅防止色素分解研磨时避免色素被破坏 C．醋酸洋红溶液染色体着色观察染色体 D．斐林试剂鉴定还原性糖产生砖红色沉淀 4、以下是与高中生物实验有关的内容 (1)请将下列实验名称与材料、试剂、用具的对应关系用连线表示，每项只准选择一次 实验名称材料、试剂、用具 探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用黑藻
叶绿体色素的提取分离及理化性质检测实验报告
实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质 系别：机械工程系班级：机械11实验者：潘霖学号：2011010389 同组姓名：肖鹤翀实验日期：2011.10.22 Ⅰ提取与分离 一、实验目的： 1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。 2.了解叶绿素的组成、性质和测定叶绿素有助于理解光合作用的本质。 二、实验原理: 叶绿体是进行光合作用的细胞器。叶绿体中的叶绿素a，叶绿素b，胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。提取液可用薄层色谱法加以分离和鉴别。 薄层层析色谱法是将吸附剂均匀地涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层作为固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂作流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂当中。由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的物质则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。 植物活性成分的分离常用薄层层析法和柱层析法，其中柱层析适用于大量制备。 本实验采用薄层层析色谱法，其中固定相用硅胶预制板。 三、实验材料与试剂: 1.新鲜的菠菜叶片。 2.体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂（石油醚：丙酮：苯=7:5:1，体积比）。 3.研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸。 四、实验步骤: （一）色素提取液的制备 1.取新鲜叶片4~5片，洗净，擦干叶表面，去除中脉剪碎，放入研钵中。 2.向研钵中加入少量CaCO3粉末，再加2~3ml体积分数为95%的乙醇，充分研 磨至糊状，再加10~15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤出， 残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中， 即制成叶绿体色素提取液。提取液应避光保存，因提取量较大，可用于其 他相关实验（如后面的叶绿素理化性质的验证）。 （二）叶绿体色素的分离 1.取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边， 距下边缘1cm处用毛细管划线，保证划线细直。自然风干后划第二次，重 复操作3~4次，确保划的滤液细线颜色足够深，从而保证分离结果更加明 显。 2.取已经加入适量展开剂的层析缸，把硅胶预制板划过滤液细线的一端放 入，使其下端浸入展开剂中，但注意展开剂液面不可没过滤液细线。迅速 改好层析缸盖（减少展开剂中的苯的挥发）。注意观察硅胶预制板上的颜
5.5光合色素的提取和分离(生物精品练习)
5.5生物分项小练习 光合作用的探索历程和色素的提取和分离 1. 下列关于生长在同一植株上绿色叶片和黄绿色叶片的叙述，错误．． 的是 A.两种叶片都能吸收蓝紫光 B.两种叶片中均含有类胡萝卜素 C.两种叶片的叶绿体中都含有叶绿素a D.黄绿色叶片在光反应中不会产生ATP 2. 阳光通过密林，林下不仅光弱，而且经上层叶片对光的吸收，使透到林下光的光波组成 也不同。以下四图（虚线表示林中空地的光谱，实线表示林下的光谱）中，能反映林下光的光波组成的是 3. 取生长状态相同两组番茄幼苗，分别置于表中（+表示有，－表示无）所列甲、乙两种 培养液中，在相同的适宜条件下培养，有关叙述不正确的是 A ．若干天后发现，两组番茄苗叶片颜色不同，甲组呈绿色，乙组呈黄色 B ．提取光合色素时未加碳酸钙，所得滤液颜色可能是黄色 C ．实验中，要不断向培养液中通入空气 D ．分离光合色素，乙组色素颜色都比甲组的浅 4. 下列有关生物学实验的叙述，不正确的是 A ．探索淀粉酶对淀粉和蔗糖作用的专一性时，不可用碘液替代斐林试剂进行鉴定；探索温度对酶活的影响实验中，一般不用过氧化氢与过氧化氢酶 B ．在色素的提取和分离实验中，用无水乙醇进行提取，叶绿素b 在层析液中的溶解度最低，扩散速度最慢 C ．用某一浓度的硝酸钾溶液处理洋葱鳞片叶表皮细胞，不一定观察到质壁分离及复原现象；探究酵母菌的呼吸方式可以用是否产生二氧化碳来予以确定 D ．在“观察洋葱根尖有丝分裂”和“观察细胞中RNA 和DNA 分布”的实验中加入盐酸的质量分数和目的都不相同 5. 为研究高光强对移栽幼苗光合色素的影响，某同学用乙醇提取叶绿体色素，用石油醚进 行纸层析，右图为滤纸层析的结果（I 、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、为色素条带）。下列叙述错误的是 A ．强光照导致了该植物叶绿素含量降低 B ．类胡萝卜素含量增加有利于该植物抵御强光照 C ．色素Ⅲ、Ⅳ吸收光谱的吸收峰波长不同 D ．画滤液线时，滤液在点样线上只能画一次
实验报告设计 叶绿体中色素的提取和分离
叶绿体中色素的提取和分离 一、实验目标 1、知识方面 （1）探究叶绿体中含有几种种色素：理解它们的特点及与光合作用的关系 （2）了解纸层析法的原理。 2、能力方面 掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。 3、情感态度与价值观方面 认识生物科学的价值，乐于学习生物科学，养成质疑、求实、创新及勇于实践的科学精神和科学态度 二、实验原理 1、色素提取的原理：叶绿体中的色素能溶于有机溶剂中，故可用丙酮和无水乙醇提取色素。 2、色素分离的原理：叶绿体中的各种色素在层析液中的溶解度不同。溶解度大的色素，在滤纸上随层析液的扩散速度快；溶解度小的色素，在滤纸上随层析液的扩散速度慢。三、实验准备 实验材料：新鲜的绿叶（如新鲜菠菜叶片）。 实验仪器及用具：定性滤纸，研钵，玻璃滤斗，脱脂棉，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10mL），天平，试管，试管架，滴管，培养皿，三角瓶，烧杯 试验试剂：无水乙醇（或丙酮），层析液（CCl4），石英砂（SiO2）和碳酸钙（CaCO3） 四、实验步骤 1、叶绿体色素的提取 （1）取菠菜新鲜叶片5g，洗净，擦干，去掉中脉，剪碎，放入研钵中。 （2）向研钵中加入少许碳酸钙和二氧化硅，再加10mL无水乙醇，进行迅速、充分研磨（二氧化硅有助于研磨得充分，碳酸钙可防止研磨中色素被破坏）。 （3）将研磨液迅速倒入漏斗（漏斗基部放一块单层尼龙布）中进行过滤。将滤液收集到试管中，及时用棉塞将试管口塞严。 2、制备滤纸条 用预先干燥处理过的定性滤纸，将滤纸剪成长10 cm、宽1cm的滤纸条，在滤纸条的一端剪去两角（防止层析液在滤纸条的边缘扩散过快），并在距离这一端1cm处用铅笔画一条细的横线。 3、画滤液细线 用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀地画出一条细而直的滤液细线。待滤液干后，再画二三次。 4、分离叶绿体中的色素