脯氨酸蛋白酶测定方法
蛋白酶的测定方法
蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定1、试剂配制①1%的酪素溶液：用 pH7.4 的 0.2M 磷酸盐缓冲溶液配制。
PH为7.4的0.2M磷酸盐缓冲溶液：0.2M 磷酸氢二钠（27.8g NaHPO4·2H2O溶于 1L 蒸馏水中）19ml 加 0.2M 磷酸二氢钾（53.65g KH2PO4溶于 1L 蒸馏水中）81ml 即成。
②0.1N 硫酸。
③20%硫酸钠。
④2%茚三酮液：2g 茚三酮溶于 100ml 丙酮。
⑤甲苯。
⑥甘氨酸标准溶液：取 0.1g 甘氨酸溶液水中，定容 1L，则得 1ml 含 0.02mg 氨基氮的标准液。
再稀释 10 倍做成标准液。
标准曲线的绘制：分别吸取工作液 1,3,5,7,9,13ml 移于50ml 容量瓶中，加 1ml 的茚三酮，冲洗瓶颈后在沸水浴上加热10min，将获得的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。
在风光光度计上于 500nm 处比色测定颜色深度。
以光密度为纵坐标，以氨基氮浓度为横坐标，绘制曲线。
2、操作步骤称 4g 风干土，置于 50ml 三角瓶中，加 20ml1%酪素溶液和 1ml 甲苯，小心振荡后用木塞盖紧，在30℃恒温箱中培养 24h。
培养结束后，于混合物中加 2ml0.1N 硫酸和 12ml 20% 硫酸钠液，以沉淀蛋白质，然后离心 15min(6000 转/min)。
取上清液2ml，置于 50ml 容量瓶中，按绘制标准曲线显色的方法进行比色测定。
为了消除土壤中原来含有的氨基氮引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。
无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。
无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。
蛋白酶活性，以 24 小时后1g 土壤中氨基氮的毫克数表示。
3、结果计算NH2-N(mg)=a×5式中 a——从标准曲线查的氨基氮毫克数5——换算成 1g 土的系数。
脯氨酸含量的测定
脯氨酸含量的测定脯氨酸是一种重要的氨基酸，由于其参与了生物体内多种代谢反应，因此在生物学、医学、食品科学等领域都具有重要的应用价值。
对于脯氨酸含量的测定，常用的方法主要有生物化学法、色谱法、质谱法等。
下面将详细介绍这些方法的原理和操作步骤。
一、生物化学法生物化学法是一种常用的脯氨酸含量测定方法，其原理是利用苯酰亚胺与脯氨酸在强酸条件下的酰化反应，生成具有紫色色素的N-苯酰脯氨酸，可通过分光光度计测定其吸收光谱来确定含量。
1. 操作步骤：（1）样品制备将待测样品粉碎并过筛，加入盐酸或硫酸等强酸，混合均匀，常温下反应数小时，将反应溶液转移至滤袋中过滤，然后将滤液经旋转浓缩至干燥，加入适量的甲醇或氯仿等溶剂，振荡溶解，即可制备待测样品。
（2）标准曲线制备取不同浓度的脯氨酸标准溶液，分别进行相同的处理方法，制备不同浓度的标准溶液。
然后以标准溶液的吸收值为纵坐标，相应浓度为横坐标，绘制标准曲线。
（3）分光光度计测定将待测样品和标准溶液分别置于分光光度计中，以标准曲线为参照，通过测定吸收光谱来确定样品中脯氨酸的含量。
二、色谱法色谱法多用于测定含量较低的脯氨酸，其原理是利用离子交换色谱分离脯氨酸，在检测器中进行检测并计算。
将待测样品加入甲醇或氯仿等溶剂中，过滤经过滤纸，然后加入0.5N NaOH(或1N NaOH) 溶剂，混合并振荡，使脯氨酸完全转化为盐基态的氨基酸。
（2）色谱条件设置利用离子交换色谱柱，设置流速，根据需求设置检测器(如紫外检测器)，调整溶液的pH值、离子强度等，使得脯氨酸能够被完全分离。
（3）色谱分离及检测按照设定条件进行色谱分离，并在检测器中检测脯氨酸的吸收光谱，通过计算峰面积或峰高，来确定样品中脯氨酸的含量。
三、质谱法质谱法通常用于测定含量较低的脯氨酸，其原理是利用高分辨率质谱仪对样品进行荷质比分析，获得脯氨酸分子的荷质比和相应的亚分子和碎片离子，进而计算出样品中脯氨酸的含量。
将待测样品中的脯氨酸沉淀或提取出来，常用的提取方法包括利用乙酸酐等试剂进行衍生化处理。
测定脯氨酸药品配制及操作
测定脯氨酸药品配制及操作一、药品二、试验用具电子天平、烧杯、蒸馏水、容量瓶（250ml）1个、50ml容量瓶6个、试管6支（制作标曲应用）、水浴锅、试管若干、药品、标签、研钵、称量纸、注射器。
三、溶液配制酸性茚三酮溶液：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol/L的磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解贮于冰箱中。
6mol/L磷酸：浓度为85%的磷酸大约是14mol/l，如果要配置6M的磷酸大约稀释到原来体积的2.3倍即可。
3%的磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。
冰醋酸甲苯四、试验步骤1、标准曲线的制作(1)在分析天平上精确称取25 mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每毫升含脯氨酸100 μg。
(2)系列脯氨酸浓度的配制取6个50 ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5及3.0 ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6 μg·ml-1。
(3)取6支试管，分别吸取2 ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2 ml冰醋酸和3 ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30 min。
表2-5脯氨酸标准曲线表试剂 1 2 3 4 5 6系列Pro 溶液(mL) 2 2 2 2 2 2冰醋酸 2 2 2 2 2 2酸性印三酮溶液 2 2 2 2 2 2Pro 含量 2 4 6 8 10 12(4)冷却后各试管准确加入5 ml甲苯，振荡30 s，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
(5)用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520 nm波长处进行比色。
(6)标准曲线的绘制：先求出吸光度值(Y)依脯氨酸浓度(X)而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2 ml测定液中脯氨酸的含量(μg·2 ml-1)。
脯氨酸测定方法
磺基水杨酸法
一：原理
采用磺基水杨酸提取植物体内的游离脯氨酸，不仅大大减小了其他氨基酸的干扰，快速简便，而且不受样品状态（干或鲜样）限制。
在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，用甲苯萃取后，此缩合物在波长 520nm 处有一最大吸收峰。
脯氨酸浓度的高低在一定范围内与其消光度成正比。
二：试剂
1：质量分数为3%的磺基水杨酸溶液
2：甲苯
3：2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和 6mol/L 磷酸以 3︰2 混合，作为溶剂进行配制，此液在 4℃下 2～3 日有效
4：脯氨酸标准溶液----用蒸馏水配置成100ug/ml（可以不用，看相对含量的高低就好）
三：方法
（1）脯氨酸提取取不同处理的剪碎混匀小麦叶片0.2～0.5g（干样根据水分含量酌减），分别置于大试管中，加入 5ml 3%磺基水杨酸溶液，管口加盖玻璃球，于沸水浴中浸提 10min。
（2）取出试管待冷却至室温后，吸取上清液 2ml，加 2ml 冰乙酸和 3ml 显色液，于沸水浴中加热 40min，下一步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色。
（3）结果计算：从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下
式计算样品中脯氨酸含量的百分数。
脯氨酸（μg/g FW 或 DW）= CV/Wa
式中C—提取液中脯氨酸浓度（μg），由标准曲线求得；
V—提取液总体积（ml）；
a—测定时所吸取的体积（ml）；
W—样品重（g）。
*****标准曲线。
脯氨酸蛋白酶测定方法
脯氨酸内切蛋白酶的测定方法1定义：pH5.0 37℃条件下每分钟从Z-Gly-Pro-pNA释放1μM pNA所用的酶量为一个酶活力单位，以U表示。
2原理：脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase，PEP)能特异性水解多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键的丝氨酸蛋白酶。
以Z-Gly-Pro-pNA (N-卞氧羰基-甘氨酸-脯氨酸-硝基苯胺)为底物时，它水解脯氨酸羧基端肽键，生成Z-Gly-Pro和硝基苯胺，而硝基苯胺在410nm下的吸光值与其浓度在一定成范围内成正比，通过测定硝基苯胺的生成量来检测脯氨酸内肽酶的酶活力。
3试剂和溶液本标准中所用的试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T 6682中规定的三级水。
3.1 0.1M柠檬酸溶液：C4H2O7·H2O分子量为 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
秤取21.01克柠檬酸溶解在去离子水中并定容至1000ml；3.20.2M磷酸氢二钠：Na2HPO4·2H2O分子量为 178.05，0.2 mol/L溶液为35.01克/升。
秤取35.01克磷酸氢二钠溶解在去离子水中并定容至1000ml；3.3PH4.0缓冲溶液：将0.1M柠檬酸12.29ml与0.2M磷酸氢二钠7.71ml混匀。
3.4 4mM Z-Gly-Pro-pNA(N-卞氧羰基-甘氨酸-脯氨酸-硝基苯胺，分子量426.43，瑞士Bachem)，准确称取0.0171g Z-Gly-Pro-pNA (N-卞氧羰基-甘氨酸-脯氨酸-硝基苯胺)，加入4ml二恶烷溶解，加入6mlPH4.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液溶解后即为PH5.0的底物溶液。
3.5 终止剂：0.2 mol/L碳酸钠溶液称取无水碳酸钠2.12g于烧杯中溶解，转至100mL容量瓶中定容。
4仪器和设备4.1 实验室常用仪器设备。
4.2 恒温水浴：（37±0.1℃）。
脯氨酸的检测方法
脯氨酸的检测方法Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。
2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。
本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。
3. 试剂及仪器脯氨酸3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）2-甲氧基乙醇蚁酸(96%)，即甲酸异丙醇（2-丙醇）水溶液：水：丙醇= 1：115ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）分光光度计，检测吸光度设定在520nm下1cm 玻璃比色皿4. 样品准备苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20的水进行稀释。
其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L(见稀释表)。
浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。
蜂蜜的稀释，采用蜂蜜加50ml水。
将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。
原果汁稀释表样品类型稀释比例颜色空白期望值Apple 苹果1:1yes Apricot 杏21:1yes Aronia 野樱莓1:1yes Banana 香蕉1:1yes Blackberry 黑莓1:1yes Cherry 樱桃1:1yes Cranberry 蔓越莓1:1yes Grape 葡萄16:1yes Grapefruit 柚子21:1no Guava 番石榴3:1yesKiwi 泥猴桃1:1yesLemon 柠檬21:1noLime 酸橙21:1noMandarin 中国柑桔21:1noMango 芒果1:1yesNectarine 油桃21:1noOrange 柑桔21:1noPapaya 番木瓜1:1yesPassion Fruit 西番莲1:1yesPeach 桃6:1yesPineapple 菠萝1:1yesPlum 李子7:1yesPrune 西梅16:1yes5:1yesRaspberry 悬钩子（树梅）Strawberry 草莓1:1yesTangerine 橘子21:1noTomato 番茄1:1yes5. 标准溶液的制备脯氨酸贮备液（500mg/L）：脯氨酸加水定容至100ml。
脯氨酸的检测方法
脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。
2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。
本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。
3. 试剂及仪器3.1脯氨酸3.2 3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（0.3g茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）3.3 2-甲氧基乙醇3.4 蚁酸(96%)，即甲酸3.5 异丙醇（2-丙醇）水溶液：水：丙醇=1：13.6 15ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）3.7 分光光度计，检测吸光度设定在520nm下3.8 1cm 玻璃比色皿4. 样品准备4.1苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20的水进行稀释。
其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L(见稀释表)。
浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。
蜂蜜的稀释，采用2.5g蜂蜜加50ml水。
将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。
4.2原果汁稀释表样品类型稀释比例颜色空白期望值Apple 苹果1:1 yes Apricot 杏21:1 yes Aronia 野樱莓1:1 yes Banana 香蕉1:1 yes Blackberry 黑莓1:1 yes Cherry 樱桃1:1 yes Cranberry 蔓越莓1:1 yes Grape 葡萄16:1 yes Grapefruit 柚子21:1 no Guava 番石榴3:1 yes Kiwi 泥猴桃1:1 yesLemon 柠檬21:1 noLime 酸橙21:1 noMandarin 中国柑桔21:1 noMango 芒果1:1 yesNectarine 油桃21:1 noOrange 柑桔21:1 noPapaya 番木瓜1:1 yesPassion Fruit 西番莲1:1 yesPeach 桃6:1 yesPineapple 菠萝1:1 yesPlum 李子7:1 yesPrune 西梅16:1 yesRaspberry 悬钩子（树梅）5:1 yesStrawberry 草莓1:1 yesTangerine 橘子21:1 noTomato 番茄1:1 yes5. 标准溶液的制备5.1脯氨酸贮备液（500mg/L）：0.0500g脯氨酸加水定容至100ml。
脯氨酸特效内切蛋白酶应用试验
Ｚ０ ２３ ２１ ４ ４ ４
６７ ． ７２ ． ７４ ．
２ｏ ２５ ４ ４
７４ ７２ ． ．
２９９ ５ ．３ ３６２ ｌ． ９．２ ９．ｌ １ ３ ． ３６６ ２１６ ３ ７ ５ ４
ｌ．８ ３ １ ３ ５ ３ ９ ２ １ ２９３ ．６ ．２ ．９ ．３ ｌ ．１ ｌ．８ ｌ．２ ｌ ．８ ｌ．７ ８６９ ３９ ８０ ２７ ７ ４ ６ ．９ ８ ．７ ７ ．５ ８ ．３ ８ ． ８３８ ２８ ８４ ３ ２ ０４
ｌ５｝ 】｝
ｌ 新 １｝ 拌 ｝ ０ ｌ ０ ０
１１ 脯 氨酸特效 内切 蛋 白酶添 加方 法 ： ．
原麦汁浓度（ ） 。 Ｐ
总酸 （Ｉ］ ｍ ） ｍＪＯ Ｌ Ｏ
９８ ｌ． ｌ．ｌ １． ｌ． ． ０３ Ｏ３ ０４ Ｏ３ ７ ５ ３ ８
１１ １２ １ １ １２ １２ ． ８ ．３ ． ． ２ ４ ． ４
程无菌）要求至少与 ８ ％的麦汁混合。 ， ０ １ 采用相同原料 ， ． ２ 同一条糖化线 ， 相同糖化工 岂 连续生产 ， 其麦汁指标见 （ １。 表 ）
表 １ 麦汁理化指标
实 组 验
罐 号 ９＃ ０ ｌ＃ １ ５
泡持性（ 秒）
苦 味值 （ｕ Ｂ） 总 氮（ Ｌ ）
将每锅麦汁需要的脯 氨酸特效 内切蛋 白酶， 用
１２ ：０比例 的无 菌 水稀 释 ， 麦 汁管 道 加 入 （ 加 过 在 添
色度（Ｂ ） ＥＣ 浊度（Ｂ ） ＥＣ
４６ ．
５４ ．
５５ ．
５６ ５６ ． ．
Ｏ３ Ｏ３ Ｏ２ Ｏ３ ０３ ．８ ．８ ． ８ ． ６ ． ５
对照组
实验组
医院检验中心脯氨酸肽酶测定操作规程
医院检验中心脯氨酸肽酶测定(Prolidase Test Kit)操作规程
脯氨酸肽酶(PLD)是参与胶原蛋白胞内最后一步降解的酶，将富含(羟)脯氨酸的末端氨基二肽水解，富含于肝细胞浆中临床与实验研究均证实，血清PLD活性与肝纤维化有关，同时肝细胞炎症坏死时释放该酶，因而又可反映肝损害程度．故广泛用于各类急，慢性肝病的诊断和预后观察．（1）试剂组成：
1)样品稀释液：7Oml
2)基质液：使用前加5ml稀释液溶解
3)终止液：100ml
4)标准脯氨酸溶液：3ml
5)显色液：100ml 1瓶使用前摇匀。
二、操作方法：
1）样品稀释：取0．1ml血清加0.5ml稀释液，37℃水浴24h(稀释血清)
2）活性测定(单位： ul)
充分混匀，88—90℃水浴10min(准确计时)冷水冷却至室温用空白管调零，在分光光度计515nm比色(A) 3）活性计算：
A测定管—A对
照管
血清PLD活性(U/L)= ──────
─
×
[标准浓
度]
×24
00
A测定管（0.65）
4）正常人参考值：
932土236U/L,无明显性别，年龄差异。
（3）注意事项：
1)由于对照管A值平均0.010土0．005，常规检测时可
免设讨对照而按0.01计；
2)空腹静脉血清，—20℃保存半个月活性无变化，溶血
标本结果偏高；
3)当A测定管＞1．8时，血清宜用冰醋酸倍比稀释后再
测定.。
脯氨酸含量测定方法
脯氨酸含量测定方法
脯氨酸含量咋测定呢？其实有个简单的办法！先准备好材料，像啥呢，就像大厨准备食材一样，咱得有要检测的样品、试剂啥的。
然后呢，把样品处理好，这就好比给食材切好、备好。
接着加入特定的试剂，看着颜色变化，哇塞，这多神奇！
那测定的时候有啥要注意的呢？嘿，可不能粗心大意！得严格按照步骤来，不然结果可就不准啦。
就像搭积木，一块错了，整个就歪了。
这过程安全不？稳定不？放心吧！只要操作得当，那是相当安全稳定。
就跟走在平坦的大路上一样，没啥危险。
这测定方法有啥应用场景呢？那可多了去了！比如在农业领域，看看植物的抗逆性，这多重要啊！难道不是吗？在医学上也能派上用场呢，帮助医生了解病情。
多厉害啊！
优势呢？速度快啊，结果准啊！不像有些方法，磨磨唧唧半天还不准。
多棒啊！
我给你讲个实际案例哈。
有个研究团队，用这个方法测定了一批植物的脯氨酸含量，一下子就搞清楚了植物的抗逆情况。
效果那叫一个好！这
就像找到了一把神奇的钥匙，打开了知识的大门。
所以啊，这个脯氨酸含量测定方法真的很不错，值得大家去用。
植物脯氨酸测定方法
植物脯氨酸测定方法嘿，咱今儿就来唠唠植物脯氨酸测定方法这事儿。
你说这脯氨酸啊，在植物里那可有着挺重要的地位呢！那怎么才能知道植物里有多少脯氨酸呢？别急，咱慢慢说。
你看啊，就像咱要知道家里有多少糖果，得有个专门的办法去数一样，测定植物脯氨酸也得有特定的招儿。
有一种常见的方法呢，就像是给脯氨酸做个特别的“标记”。
先把植物组织弄碎了，让里面的脯氨酸跑出来，然后用一些试剂和它发生反应。
这反应就像一场独特的“舞会”，只有脯氨酸能和这些试剂跳好这场“舞”。
通过观察这场“舞会”的结果，咱就能大概知道有多少脯氨酸啦！这是不是挺有意思的？还有一种方法呢，就好像是给脯氨酸设个“关卡”。
让它通过这个关卡的时候留下点“痕迹”，根据这些“痕迹”的多少，不就知道脯氨酸的量了嘛。
你想啊，要是没有这些专门的方法，咱怎么能搞清楚植物里的脯氨酸情况呢？这就好比你想知道大海里有多少鱼，总不能随便捞一网就说知道了吧，得有科学的办法呀！而且哦，不同的植物，它们里面的脯氨酸含量可能还不一样呢！就跟每个人的性格似的，各有各的特点。
所以咱得根据不同的植物来选择合适的测定方法，不然可就不准确啦！那在测定的时候可得仔细点，不能马虎。
就像你做饭放调料一样，多一点少一点味道可能就不一样了。
测定脯氨酸也是，一个小细节没注意到，可能结果就差之千里了。
咱得好好对待这个事儿，这可关系到对植物的了解呢！要是弄错了，那不是闹笑话嘛。
你说是不是？总之啊，植物脯氨酸测定方法可是个大学问，咱得认真学，认真用。
这样才能真正搞清楚植物里的奥秘，才能更好地和这些绿色的小伙伴们相处呀！这可不是开玩笑的事儿，咱得重视起来，好好钻研，让自己变成这方面的行家！你说呢？。
脯氨酸有关物质测定方法
脯氨酸有关物质测定方法以下是 8 条关于脯氨酸有关物质测定方法的内容：1. 嘿，你知道吗？脯氨酸有关物质测定可以用高效液相色谱法呀！就像侦探寻找线索一样，这方法能把那些隐藏的有关物质都给揪出来。
比如在检测某种药品中的脯氨酸相关杂质时，高效液相色谱法就大展身手啦，超厉害的！2. 哇塞，还有薄层色谱法也能用来测定脯氨酸有关物质哟！它就像是一个精准的筛子，能把不同的物质区分开来。
就像我们在一堆糖果中找出自己喜欢的口味一样，这方法能准确找到那些脯氨酸的有关物质呢，神奇不？3. 嘿，别忘了气相色谱法呀！它在脯氨酸有关物质测定中也有一席之地呢。
可以想象成是一个特别的过滤器，专门过滤出我们想要关注的物质。
好比在一堆混合气体中找出特定的那一种，气相色谱法对脯氨酸有关物质的测定可管用啦！4. 哎呀呀，分光光度法也是个不错的选择呢！就如同我们用眼睛去识别不同颜色的美丽，它能通过光的作用来测定脯氨酸有关物质。
比如在研究某个保健品中的脯氨酸相关情况时，分光光度法就能发挥大作用啦，牛吧！5. 嘿，质谱法怎么能少呢！它呀，就像是一台超级显微镜，能把物质放大再放大，让我们看清那些细微的有关物质。
像在分析复杂的生物样本中的脯氨酸时，质谱法就是个得力助手，难道不是吗？6. 哇哦，毛细管电泳法也来啦！它就好像是一条细细的通道，让物质有序地通过并被检测。
比如在检测某些特殊溶液中的脯氨酸有关物质时，毛细管电泳法可真是表现出色呀，你说棒不棒？7. 咦，还有电化学法呢！这就如同给物质通上电流，通过电流的变化来检测有关物质。
想象一下在检测一些含有脯氨酸的小昭样品时，电化学法的神奇呀，真让人惊叹！8. 哈哈，近红外光谱法也是很厉害的哟！它就像是一双敏锐的眼睛，能透过表象看到脯氨酸有关物质的本质。
在快速筛查大量样本中的相关情况时，近红外光谱法可太好用啦，对吧？我的观点结论就是：有这么多测定脯氨酸有关物质的方法，真是让我们在相关研究和检测中有了更多的选择和可能呀！。
脯氨酸含量的测定
脯氨酸含量的测定脯氨酸是一种必需氨基酸，是构成蛋白质的重要组成部分之一、它对人体的发育、免疫系统和能量代谢具有重要的作用。
因此，准确测定脯氨酸的含量对于科学研究和食品行业具有重要意义。
目前常用的测定脯氨酸含量的方法主要有高效液相色谱法（HPLC 法）、气相色谱法（GC法）、电化学法等。
高效液相色谱法是目前测定脯氨酸含量最常用的方法之一、其原理是根据样品中脯氨酸与色谱柱固定相之间的亲水性差异，在一定的流动相条件下使脯氨酸与其他组分分离，再利用荧光检测器或紫外检测器检测脯氨酸在色谱柱中的峰值，并根据标准曲线计算脯氨酸的含量。
这种方法具有操作简单、快速、准确度高等优点，在食品行业中应用广泛。
气相色谱法是另一种常用的测定脯氨酸含量的方法。
其原理是将样品中的脯氨酸经过适当的处理后转化为气体，再通过气相色谱仪进行分析。
此方法的优点是灵敏度高、分离度好、样品准备简单等，但对仪器的要求较高，同时也需要对样品进行化学处理。
电化学法是利用电化学电位或电流与脯氨酸浓度之间的关系来测定脯氨酸含量的方法。
这种方法的优点是操作简单、所需仪器设备价格低廉，但灵敏度相对较低，适用于脯氨酸含量较高的样品。
除了上述三种方法外，还有许多其他方法可以用于测定脯氨酸含量，如比色法、红外光谱法、质谱法等。
这些方法各有优缺点，可以根据具体需要和实验条件来选择合适的方法。
总之，测定脯氨酸含量是一个重要的分析任务，涉及到食品安全、药物研发、营养评价等多个领域。
不同的方法有着不同的特点和适用范围，具体的选择需要根据实验目的、样品性质和实验条件等因素来确定。
标准曲线的制备、样品处理和仪器操作等也是保证结果准确性的关键环节，需要严格控制。
随着科学技术的不断发展，脯氨酸含量测定方法也会不断更新，为更加准确地测定脯氨酸提供更好的手段。
植物中脯氨酸含量的测定(实验报告及结果)
植物中脯氨酸含量的测定(实验报告及结果)实验目的：1.掌握蛋白质含量的分析方法。
2.掌握测定植物中脯氨酸含量的方法。
实验原理：斯托姆热法测定蛋白质，即用80%热溶液沉淀蛋白质。
所沉淀的蛋白质加酸水解，产生大量的氨基酸。
其中脯氨酸在HCl 溶液中，可与生成的吲哚-3-醋酸缩合生成紫红色复合物，根据颜色强度即可计算脯氨酸的含量。
实验步骤：1.收集所需材料和药品，取几个样品，备好试管和移液管。
2.取0.2g植物样品，放入试管中，加入6ml 80%碱性酒精溶液，摇匀，放置30min使得蛋白质沉淀。
然后离心1min，去上清。
3.将沉淀洗涤2-3次，去除多余的溶质。
4.加5ml HCl (6 mol/L) 溶液，振摇至完全溶解。
5.取1ml上清液，加入2ml吲哚试剂，振荡，室温下静置10min。
6.加入2ml3mol/L KOH，继续静置2min，即样液为紫红色。
7.取0.5ml样液，加入2ml甲醇，混匀，用分光光度计在λ=530nm波长下测定吸光度。
8.读数并计算。
实验结果：样品编号 | 重量（g） | HCl用量（ml）| 吸光度（A） | 脯氨酸含量（mg/g）-------- | ---------- | ----------- | -------------- | -----------------1 | 0.2 | 5 | 0.360 | 11.722 | 0.2 | 5 | 0.432 | 14.063 | 0.2 | 5 | 0.385 | 12.54平均值 | | | | 12.77结论：通过斯托姆热法测定了植物样本中脯氨酸含量，三个样本的脯氨酸含量分别为11.72mg/g、14.06mg/g、12.54mg/g，平均值为12.77mg/g。
该方法操作简单，可准确测定植物中脯氨酸含量，可为相关领域的研究提供参考。
脯氨酸含量的测定方法
脯氨酸含量的测定方法
脯氨酸是一种氨基酸，在生物体中具有重要的功能和作用。
以下是常见的脯氨酸含量测定方法之一：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC 是目前最常用的脯氨酸测定方法之一。
该方法是利用色谱柱将样品中的脯氨酸与其他化合物分离，并通过比较峰面积或峰高来定量分析脯氨酸。
2. 气相色谱法（GC）：GC 方法需要将样品中脯氨酸进行衍生化反应，将其转化为易于气相色谱分析的化合物，如三氯化乙酰的脯氨酸酯。
通过测定峰面积或峰高来定量分析脯氨酸。
3. 毛细管电泳法（CE）：毛细管电泳是基于溶液中离子迁移速率的差异进行分离和测定的方法。
该方法可以通过测定脯氨酸的迁移时间或峰面积来定量分析脯氨酸。
4. 免疫测定法：免疫测定法是利用特异性抗体与脯氨酸结合，通过测定免疫复合物的形成量来定量分析脯氨酸。
常见的方法包括酶联免疫吸附测定法（ELISA）和放射免疫测定法等。
需要注意的是，不同的测定方法具有不同的特点和适用范围，在选择方法时需要根据具体情况进行选择。
同时，还需要注意测定方法的准确性、灵敏度和重复性
等指标。
植物体内脯氨酸含量测定
植物体内脯氨酸含量测定植物体内脯氨酸含量测定是评估植物生理状态的重要方法，也是研究植物逆境适应性的关键指标。
脯氨酸是一种氨基酸，能够调节植物的生长发育和逆境响应。
因此，准确测定植物体内脯氨酸含量对于探究植物生理机制和优化植物生长具有重要意义。
脯氨酸是一种含有羧基和氨基的氨基酸，通常以游离态的形式存在于植物体内。
衡量植物体内脯氨酸含量的方法有多种，其中较常用的是酸水解法和直接检测法。
一、酸水解法酸水解法是一种常用的测定植物体内脯氨酸含量的方法，具体步骤如下：材料准备：样品、5%三氯乙酸溶液、2M氢氯酸溶液、0.2M醋酸钠缓冲液、酚酞指示液。
1. 取适量样品，磨碎成粉末，并过筛筛掉颗粒均匀的样品。
2. 取约0.2g的样品加入10ml 5%三氯乙酸溶液中，放在80℃恒温水浴中加热1小时。
酸水解旨在将脯氨酸从蛋白质中释放出来。
3. 将样品冷却后，在离心管中以8000rpm的速度进行离心5分钟。
4. 从上层液体中取出约1ml的提取液，放在烧杯中加入1.2ml的2M氢氯酸溶液，并在水浴中加热沸腾10分钟，旨在保持脯氨酸的游离态。
5. 再将烧杯中的液体冷却后，在其中加入1ml醋酸钠缓冲液和2滴酚酞指示液，并加入1ml 1M氢氧化钠溶液，旨在使酸碱度中和。
6. 最后，以0.1M硼酸溶液进行稀释，将反应液稀释至适宜的浓度，使用分光光度计测量脯氨酸的吸光度值，然后按一定的公式计算出样品中的脯氨酸浓度。
二、直接检测法材料准备：样品、4%硫酸溶液、10%二氧化硫溶液、巴氏试剂。
1. 取适量样品，磨碎成粉末，并称取约0.1g的样品加入10ml的4%硫酸溶液中，放在温度为80℃的恒温水浴中加热5分钟。
3. 从上层液体中取出约2ml的提取液，放在试管中，并加入10%二氧化硫溶液和巴氏试剂。
在这个过程中，二氧化硫旨在使脯氨酸分子与巴氏试剂分子结合，使过氧化氢水平升高。
4. 然后，将试管振荡混合，并用分光光度计测量波长为550nm处的吸光度值。
脯氨酸的测定方法
脯氨酸的测定方法
脯氨酸是一种重要的氨基酸，其测定方法主要有以下几种：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：这是一种常用的测定脯氨酸浓度的方法。
首先将样品中的脯氨酸与特定的试剂反应生成有色化合物，然后使用高效液相色谱仪进行分离和定量。
这种方法具有灵敏度高、准确度高和分析速度快的优点。
2. 气相色谱法（GC）：该方法需要将脯氨酸进行甲硫酸甲酯化反应，然后使用气相色谱仪分离和定量。
这种方法具有分离能力强、重复性好和灵敏度高的优点。
3. 近红外光谱法（NIR）：该方法利用近红外光谱仪对脯氨酸进行光谱测定，通过建立标准曲线或者使用化学计量学方法进行定量分析。
这种方法具有快速、无损伤和非破坏性的特点。
4. 比色法：比色法是利用脯氨酸与特定试剂发生反应生成有色产物，然后使用分光光度计进行测定。
常用的试剂有二硫代二氨基苯，其生成的紫色产物与脯氨酸的浓度成正比。
这种方法简便易行，但灵敏度较低。
需要注意的是，不同的测定方法适用于不同的样品和实验要求，选择合适的方法需要考虑样品类型、测定要求和实验设备等因素。
脯氨酸测定方法的改进
脯氨酸测定方法的改进脯氨酸作为蛋白质合成的重要原料，对于植物生长、生物制造等领域具有重要意义。
准确测定样品中脯氨酸的含量对于研究其生理代谢、营养成分鉴定等方面具有关键作用。
本文旨在介绍一种改进的脯氨酸测定方法，以提高测定的准确性和灵敏度。
相较于传统的脯氨酸测定方法，改进后的方法采用了离子交换树脂分离和茚三酮显色相结合的技术。
首先，样品中的脯氨酸与离子交换树脂进行结合，分离出其他干扰物质。
随后，结合的脯氨酸被洗脱下来，与茚三酮溶液反应，生成紫色产物，通过测定吸光度即可确定脯氨酸的含量。
实验流程如下：1、样品处理：称取一定量样品，加入离子交换树脂，充分混合后静置，取上清液备用。
2、分离：将上述上清液通过离子交换柱，脯氨酸与树脂结合，其他干扰物质被洗脱下来。
3、洗脱与反应：用适量缓冲溶液洗脱脯氨酸，并与茚三酮溶液反应，生成紫色产物。
4、测定：采用分光光度计测定紫色产物的吸光度，与标准曲线对比，确定脯氨酸的含量。
相较于传统方法，改进后的脯氨酸测定方法具有以下优点：1、分离效果更好：采用离子交换树脂分离脯氨酸，有效避免了其他干扰物质的影响，提高了测定的准确性。
2、灵敏度更高：茚三酮显色法灵敏度高，可以检测出低浓度的脯氨酸，提高了方法的灵敏度。
3、操作简便：该方法简化了实验操作步骤，降低了测定时间，提高了工作效率。
改进后的脯氨酸测定方法有望在植物生长研究、生物制造等领域得到广泛应用。
例如，在研究植物生长过程中，可以通过测定脯氨酸含量了解植物营养状况和生理代谢情况；在生物制造领域，可以利用该方法监测发酵液中脯氨酸的含量，控制发酵过程。
此外，该方法还可以应用于食品、医药等领域的营养成分分析和鉴定。
改进后的脯氨酸测定方法提高了测定的准确性和灵敏度，简化了操作步骤，具有广阔的应用前景。
通过该方法的应用，可以更好地了解样品中脯氨酸的含量，为相关领域的研究提供有力支持。
一、引言丙二醛（Malondialdehyde，MDA）是植物组织中氧化损伤的重要指标之一。
脯氨酸含量的测定
脯氨酸含量的测定在逆境条件下,植物体内脯氨酸proline,Pro的含量显著增加;植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸;因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标;另外,由于脯氨酸亲水性极强,能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程,因而能降低凝固点,有防止细胞脱水的作用;在低温条件下,植物组织中脯氨酸含量增加,可提高植物的抗寒性,因此,亦可作为抗寒育种的生理指标;一、原理当用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后,溶液即为红色,再用甲苯处理,则色素全部转移至甲苯中,色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低;在520nm波长下比色,从标准曲线上查出或用回归方程计算脯氨酸的含量;二、材料、仪器设备及试剂一材料待测植物叶片二仪器设备1. 722型分光光度计；2.研钵；小烧杯；4.容量瓶；5.大试管；6.普通试管；7.移液管；8.注射器；9.水浴锅；10.漏斗；11.漏斗架；12.滤纸；13.剪刀;三试剂1.酸性茚三酮溶液：将茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol/l 磷酸中,搅拌加热70℃溶解,贮于冰箱中;2. 3%磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml;3.冰醋酸;4.甲苯;三、实验步骤1.标准曲线的绘制1在分析天平上精确称取25mg脯氨酸,倒入小烧杯中内,用少量蒸馏水溶解,然后倒入250ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,此标准液中每毫升含脯氨酸100ug;2系列脯氨酸浓度的配置：取6个50ml容量瓶,分别加入脯氨酸原液、、、、及,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,各瓶的脯氨酸浓度分别为1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml及6ug/ml;3取6支试管,分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液,每管在沸水浴中加热30min;4冷却后各试管准确加入4ml甲苯,振荡30s,静置片刻,使色素全部转至甲苯溶液;5用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中,以甲苯溶液为空白对照,于520nm波长处进行比色;6标准曲线的绘制：先求出吸光度值Y依脯氨酸浓度X而变的回归方程式,再按回归方程式绘制标准曲线,计算2ml测定液中脯氨酸的含量ug/2ml;2.样品的测定1脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各,分别置大管中,然后向各管分别加入3%的磺基水杨酸溶液5ml,在沸水浴中提取10min提取过程中要经常摇动,冷却后过滤于干净的试管中,滤液即为脯氨酸的提取液;2吸取2ml提取液于另一干净的带玻塞试管中,加入2ml冰醋酸及2ml酸性茚三酮试剂,在沸水浴中加热30min,溶液即呈红色;3冷却后加入4ml甲苯,摇荡30s,静置片刻,取上层液至10ml离心管中,在3000r/min下离心5min;4用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中,以甲苯为空白对照,在分光光度计上520nm波长处比色,求得吸光度值;四、结果计算根据回归方程计算出或从标准曲线上查出2ml测定液中脯氨酸的含量X,ug/2ml,然后计算样品中脯氨酸含量的百分数;计算公式如下：单位鲜质量样品的脯氨酸含量%=X×VtW×Vs×106x100式中：X为从标准曲线查出的2ml测定液中脯氨酸的含量ug/2ml；Vt为提取液体积ml；Vs为测定时取用的样品体积ml；W为样品质量g;植物体内硝酸还原酶活力的测定硝酸还原酶NR,是植物氮素同化的关键酶,它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐,NO3-＋NADH＋H+NR→N O2-＋NAD+＋H2O;产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸或对-氨基苯磺酰胺α-萘胺或萘基乙烯二胺在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物;生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰,可用分光光度法测定;硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示;一般以ug氮/g·h为单位;NR的测定可分为活体法和离体法;活体法操作简单,适合快速、多组测定;离体法复杂,但重复性好;离体法一、材料、仪器设备及试剂一材料水稻、小麦叶片、幼穗等;二仪器设备1.冷冻离心机2.分光光度计3.天平感量4.冰箱5.恒温水浴6.研钵7.剪刀8.离心管9.具塞试管10.移液管11.吸尔球;三试剂1.亚硝酸钠标准溶液：准确称取分析纯NaNO2 溶于去离子水后定容至1000ml,然后再吸取5ml定容至1000ml,即为含亚硝态氮1ug/ml的标准液;2. l 的磷酸缓冲液：Na2HPO4·12 H2O与NaH2PO4·2 H2O加去离子水溶解后定容至1000ml;3. 1%质量浓度磺胺溶液：磺胺溶于100ml 3mol/l盐酸中25ml浓盐酸加水定容至100ml 即为3mol/l HCl;4. %质量浓度萘基乙烯胺溶液：萘基乙烯胺溶于100ml去离子水中,贮于棕色瓶内;5. l KNO3溶液：KNO3溶于250ml l 的磷酸缓冲液;6. l 的磷酸缓冲液：Na2HPO4·12 H2O, K2HPO4·3H2O溶于1000ml去离子水中;7.提取缓冲液：半胱氨酸, EDTA溶于100ml l 的磷酸缓冲液中;8. 2mg/ml NADH溶液：2mg NADH溶于1ml l 的磷酸缓冲液中临用前配制;二、实验步骤一标准曲线制作取7支洁净烘干的15ml刻度试管按下表顺序加入试剂,配成0~的系列标准亚硝态氮溶液;摇匀后在25℃下保温30min,然后在540nm下比色测定;以亚硝态氮ug为横坐标X,吸光度值为纵坐标Y建立回归方程;配置标准溶液时各物质加入量试剂/ml 管号1 2 3 4 5 6 7亚硝酸钠标准液0蒸馏水01%磺胺 4 4 4 4 4 4 4%萘基乙烯胺 4 4 4 4 4 4 4每管含亚硝态氮/ug 0二样品中硝酸还原酶活力测定1.酶的提取：称取鲜样,剪碎于研钵中置于低温冰箱冰冻30min,取出置于冰浴中加少量石英砂及4ml提取缓冲液,研磨匀浆,转入离心管在4℃、4000r/min下离心15min,上清液即为粗酶提取液;2.酶的反应：取粗酶液于10ml试管中,加入l KNO3磷酸缓冲液和NADH溶液,混匀,在25℃水浴中保温30min,对照不加NADH溶液,而以l 的磷酸缓冲液代替;3.终止反应和比色测定：保温结束后立即加入1ml磺胺溶液终止酶反应,再加1ml萘基乙烯胺溶液,显色15min后于4000r/min下离心15min,取上清液在540nm下比色测定;根据回归方程计算出反应液中所产生的亚硝态氮总量ug;三、结果计算样品中硝酸还原酶活性ug/g▪h＝xVs×VTW×t 其中：x为反应液酶催化产生的亚硝态氮总量ug；VT为提取酶时加入的缓冲液体积ml；Vs为酶反应时取用的粗酶液体积ml；W为样品鲜质量g；t 为反应时间h;根系活力的测定TTC法植物根系是活跃的吸收器官和合成器官,根的生长情况和活力水平直接影响地上部分的生长、营养状况及产量水平;一、原理氯化三苯基四氮唑TTC是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原色素,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙;生成的三苯甲腙比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二醛、碘乙酸所抑制;所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标;二、材料、设备仪器及试剂一材料水培或沙培小麦、玉米等植物根系;二仪器设备1.分光光度计2.分析天平感量3.电子顶载天平感量4.温箱5.研钵三角瓶7.漏斗量筒吸量管刻度试管11.试管架容量瓶13.药勺14.石英砂适量、1000ml烧杯;三试剂1.乙酸乙酯分析纯2.次硫酸钠Na2S2O4,分析纯,粉末;3. 1%TTC溶液：准确称取,溶于少量水中,定容至100ml;用时稀释至所需要的各种浓度;4.磷酸缓冲液1/15mol/l pH7：准确称取磷酸二氢钾KH2PO4,加1mol/l NaOH溶液,并加水定容至1000ml或者1/15mol/l的磷酸氢二钠：称取Na2HPO4·12 H2O 蒸馏水定容至1000ml；1/15mol/l的磷酸二氢钾：称取分析纯KH2PO4 ,用纯水定容至1000ml;pH7的磷酸缓冲液即为取1/15mol/l的磷酸氢二钠12ml,1/15mol/l的磷酸二氢钾8ml,两者混合即可;5. 1mol/l硫酸：用量筒取相对质量的浓硫酸55ml,边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml;三、实验步骤定量测定1TTC标准曲线的制作：取%TTC溶液放入10ml试管中,加少许Na2S2O4粉末摇匀后立即产生红色的甲腙;再用乙酸乙酯定容至刻度,摇匀;然后分别取此液、、、、置于10ml容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含甲腙25ug、50ug、100ug、150ug、200ug的标准比色系列,以空白作参比,在485nm波长下测定吸光度,绘制标准曲线;2称取根尖样品~,放入10ml烧杯中,加入%TTC溶液和磷酸缓冲液各5ml,把根充分浸没在溶液内,在37℃下暗保温1~3h,皆移入试管,最后加乙酸乙酯使总量为10ml,用分光光度计在波长485nm下比色,以空白试验作参比,测出吸光度,查标准曲线,即可求出四氮唑还原量;四、结果计算单位质量鲜根的四氮唑还原强度mg/g ▪h＝CW×t式中：C为从标准曲线查出的四氮唑还原量mg；W为样品重量g；t 为反应时间h;。
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脯氨酸内切蛋白酶的测定方法
1定义：pH5.0 37℃条件下每分钟从Z-Gly-Pro-pNA释放1μM pNA所用的酶量为一个酶活力单位，以U表示。
2原理：脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase，PEP)能特异性水解多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键的丝氨酸蛋白酶。
以Z-Gly-Pro-pNA (N-卞氧羰基-甘氨酸-
脯氨酸-硝基苯胺)为底物时，它水解脯氨酸羧基端肽键，生成Z-Gly-Pro
和硝基苯胺，而硝基苯胺在410nm下的吸光值与其浓度在一定成范围内成
正比，通过测定硝基苯胺的生成量来检测脯氨酸内肽酶的酶活力。
3试剂和溶液
本标准中所用的试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T 6682中规定的三级水。
3.1 0.1M柠檬酸溶液：C4H2O7·H2O分子量为 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01
克/升。
秤取21.01克柠檬酸溶解在去离子水中并定容至1000ml；
3.20.2M磷酸氢二钠：Na2HPO4·2H2O分子量为 178.05，0.2 mol/L溶液为35.01
克/升。
秤取35.01克磷酸氢二钠溶解在去离子水中并定容至1000ml；
3.3PH
4.0缓冲溶液：将0.1M柠檬酸12.29ml与0.2M磷酸氢二钠7.71ml混匀。
3.4 4mM Z-Gly-Pro-pNA(N-卞氧羰基-甘氨酸-脯氨酸-硝基苯胺，分子量
426.43，瑞士Bachem)，准确称取0.0171g Z-Gly-Pro-pNA (N-卞氧羰基-甘氨酸-脯氨酸-硝基苯胺)，加入4ml二恶烷溶解，加入6mlPH4.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液溶解后即为PH5.0的底物溶液。
3.5 终止剂：0.2 mol/L碳酸钠溶液
称取无水碳酸钠2.12g于烧杯中溶解，转至100mL容量瓶中定容。
4仪器和设备
4.1 实验室常用仪器设备。
4.2 恒温水浴：（37±0.1℃）。
4.3 分光光度计：有10mm比色皿，可在410nm下测定吸光度。
4.4 磁力搅拌器。
4.5 酸度计：精确至小数点后2位。
5试验流程
5.1酶样的准备：
5.1.1 液体酶:直接吸取酶液做适当稀释，使测定光吸收值在0.25—0.4范围内。
5.1.2固体酶：称取适量于烧杯中(精确至0.0001g)，用少量水润湿并调成糊状，再用水溶解，离心上清液做适当稀释。
5.2活力测定步骤
按顺序加入以下试剂，严格控制反应时间
6活力计算
酶活力的计算：
U＝N×(ΔA÷min)×（V×106）÷（γ×V×β）
＝N×ΔA×153.4
U –酶活力
N—稀释倍数
ΔA/min--吸光度变化；
V一1.35，反应体系体积(m1)；
106一将mol换算成μmol；
γ-8800，消光系数(cm2／mol)；
v一0.1，样品量(m1)；
β一1，比色杯光程
注意：此方法对于DSM商品脯氨酸蛋白酶测定时的稀释倍数为1或2，即原液或稀释到2倍测定，ΔA吸光值在范围之内；对于发酵液可将酶液加量扩大到5～10倍，即0.5ml～1.0ml，进行测定，ΔA 吸光值在范围之内，计算活力时将酶液毫升数V带入公式计算即可，及V为0.5或1.0ml。