鸡胚繁殖病毒技术

2、病毒含量测定：
• 可以根据情况多瓶混合后进行检验，根据 不同的病毒采用不同的方法测定病毒含量， 为配苗提供依据。
3、其他检验：
• 支原体检验、外源病毒检验、安全检验等， 一般半成品不做，只检验成品。
七、病毒液的保存
• 经过检验的病毒液应马上加入抗生素，防 止细菌污染，塞上胶塞，放-15℃冷库保存， 保存期限视不同病毒而定，一般不应超过6 个月。
2、孵化
• 种蛋的孵化一般温度设定为38℃，相对湿 度设定为65%，每天翻蛋1～4次。 • 孵化过程中要求有专人管理，记录种蛋的 入孵时间、数量、出蛋时间、数量，还要 每4小时记录孵化器内的温度、湿度等参数， 如果遇到故障应马上报告以便及时进行维 修，避免造成损失。
三、鸡胚接种
• 鸡胚接种前要先进行检蛋，选择发育良好、 血线清晰的鸡胚。发育不良或没有发育 （没有受精）的、变黑的、死亡的鸡胚应 弃去不用。
二、鸡胚的孵化
• 1、消毒 • 新入孵的种蛋都要进行表面消毒，一般采用消毒 液浸泡或福尔马林熏蒸。 • 0.1%～0.2%的新洁尔灭溶液浸泡。 • 福尔马林熏蒸：种蛋放入孵化器后，孵化器温度 达到37℃，相对湿度达到90%，每立方米用13ml 甲醛和6.5g高锰酸钾，放入烧杯中混合，迅速放 入孵化器中关闭箱门，20分钟后打开箱门，通风 排除甲醛蒸汽，继续孵化。
鸡胚繁殖病毒技术
2012年10月
• 许多病毒尤其是禽源病毒都能 在鸡胚中生长繁殖，利用鸡胚 可以进行病毒的分离、鉴定、 抗原制备和疫苗生产。除了鸡 胚外，鹅胚和鸭胚也可以用于 某些病毒的增殖。
一、鸡胚的选择
• 1、冻干苗应选择受精率比较高的（90%以 上）SPF种鸡蛋，鸡蛋必须新鲜、洁净。原 因是SPF种鸡蛋不携带致病微生物，生产出 来的疫苗更安全。SPF种鸡蛋没有干扰病毒 增殖的母源抗体，与普通种蛋相比能明显 提高病毒含量。 • 2、灭活苗可以选择受精率比较高的（90% 以上）普通低免疫蛋，好处就是成本比较 低。
四、接种后鸡胚的检验
• 接种后24小时照蛋，挑出死亡的鸡胚弃去 不用。 • 以后每4～6小时照蛋一次，随时取出死亡 的鸡胚，放入2℃～8℃冷库中冷胚。
五、收获病毒液
1、 消毒：
• 把冷却好的鸡胚放入无菌室内，先 用5%的碘酊在鸡蛋的气室处涂抹 消毒，15分钟后用75%的酒精脱碘。
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2、收获：根据不同的病毒收获不同的成 分，最常用的是鸡胚尿囊液。用大镊 子剪去气室部分的蛋壳，注意蛋壳的 碎屑不要掉到里面，用灭菌的医用眼 科镊子斜插入绒毛尿囊膜内，压向胚 胎一侧，用玻璃吸管把尿囊液吸入无 菌的500ml瓶中，尽量把胚液吸净。 3、编号：把收获的病毒液每瓶贴上标签， 注明名称、批号、编号、生产日期等 信息，避免混淆。
1、接种方法：
• 根据不同的病毒（或其他微生物）选择不 同的接种方法。包括尿囊腔接种、绒毛尿 囊膜接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、静 脉接种、脑内接种等。
• 其中最常用的方法是尿囊腔接种，方法是 取9～10日龄鸡胚，画出气室范围，离气室 边缘0.3～0.5mm无大血管处做一个记号， 作为接种孔的位置。先用5%的碘酊消毒， 15分钟后用75%的酒精脱碘，然后用消毒 的锥子在记号处打一个小孔，用1ml注射器 的针头刺入0.5～1cm，注入种毒，用白蜡 封口。接种后继续孵化，一般温度设定为 37℃左右，相对湿度设定为70%～90%， 继续孵化2～7天，不必翻蛋。
六、病毒液的检验
• 1、无菌检验： • 收获的病毒液如果用于冻干苗的生产要逐瓶进行 无菌检验。 • 检验方法：先准备好检验培养基每套2支酪胨琼脂 和2支硫乙醇酸盐，将培养基与收获的病毒液对应 编号，每瓶病毒液用灭菌的注射器抽取2ml左右， 每支加入0.5ml左右，盖好塞后分别放入37℃和 25℃培养箱中培养，5天后观察结果，固体培养 基斜面上有菌生长、液体培养基变浑浊的判为污 染，应弃去不用。