细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检测方法
细菌内毒素检测方法细菌内毒素是一种细菌产生的有毒物质，它对人体和动物的健康造成了严重威胁。
因此，及时准确地检测细菌内毒素是非常重要的。
在本文中，我们将介绍几种常用的细菌内毒素检测方法，希望能够为相关领域的研究人员提供一些帮助。
首先，常用的细菌内毒素检测方法之一是生物学法。
这种方法利用动物（如小鼠、大鼠）或细胞培养物进行毒性试验，通过观察动物或细胞的生理、生化反应来判断细菌内毒素的毒性。
生物学法的优点是灵敏度高，能够检测到极微量的毒素，但缺点是操作复杂、耗时长、成本高，且容易受到其他因素的干扰。
其次，化学法也是一种常用的细菌内毒素检测方法。
这种方法利用化学试剂与细菌内毒素发生特异性反应，通过观察颜色、光度等变化来判断毒素的存在和含量。
化学法的优点是操作简便、结果可视化，但缺点是灵敏度相对较低，不能检测到极微量的毒素。
另外，免疫学法也是一种常用的细菌内毒素检测方法。
这种方法利用抗体与细菌内毒素发生特异性结合反应，通过免疫学方法（如免疫层析、免疫电泳）来检测毒素的存在和含量。
免疫学法的优点是灵敏度高、特异性强，但缺点是操作复杂、耗时长，且需要专门的实验设备和试剂。
最后，分子生物学法也是一种常用的细菌内毒素检测方法。
这种方法利用PCR、酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术，通过检测细菌内毒素基因或蛋白来判断毒素的存在和含量。
分子生物学法的优点是灵敏度高、特异性强、操作简便，但缺点是需要专门的实验设备和试剂，且对操作人员的技术要求较高。
综上所述，针对细菌内毒素的检测，生物学法、化学法、免疫学法和分子生物学法都各有优缺点。
在实际应用中，可以根据实验的具体要求和条件选择合适的检测方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究人员有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的细菌内毒素检测方法出现，为人类的健康保驾护航。
细菌内毒素检查验证方案
-起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日1 概述 (1)2 验证目的及范围 (1)3 验证小组人员组成及职责 (1)4 验证依据 (2)5 验证前准备 (2)6 验证的实施 (2)7 偏差处理 (5)8 验证数据及评估 (5)9 验证报告及评审 (5)10 再验证及周期 (5)11 验证文件及归档 (5)12 附件 (5)细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或者量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判 断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放， 即凝胶法和光度测定法， 后者包括浊度法和显色基 质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法发展实验。
公司自行制备的注射用 水需发展细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法发展试验。
本验证方案合用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性发展评 价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.1 验证小组由以下部门人员组成：质量部、 QC 、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表"中华人民共和国药典"2022 版 1143 细菌内毒素检查法职 责1. 负责起草验证方案的起草2. 负责本方案的培训3. 仪器仪表校验确认4. 负责验证的实施5. 负责数据的采集和整理6. 负责数据分析7. 负责完成验证报告1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准2. 负责验证现场的监视审查 1. 负责保障设备、器具的完好 2. 负责动力系统的保障组成Q C质量部生产部5.1 验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后〔且在验证实施前〕对本次验证相关人员发展培训。
培训人员记录见附件 1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
5.3 相关文件，确认以下文件皆为现行有效版本。
序号相关文件文件编号1 DHG 型电热恒温鼓风枯燥箱操作规程 WI-1002 BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和维护保养规程 WI-1013 W*QI-S-18SI 自动手提式灭菌器使用和维护保养规程 WI-1034 DK 型电热恒温水浴锅操作规程 WI-1045 HWS 型恒温恒湿箱操作规程 WI-1056 JA2003N 电子天平操作及维护保养规程 WI-1067 PHS-3C 型 PH 计操作及维护保养规程 WI-1088 SHP-3C 型低温生化培养箱操作及维护保养规程 WI-1099 YJ-875SDB 型净化操作台的操作及维护保养规程 WI-11310 "培养基管理规程" WI-766.1实验材料及用具电子天平6.1.2. 电热枯燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂〔具有国家主管部门的批准文号〕 6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品) 6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检验方法验证方案
细菌内毒素检验方法验证方案一、背景介绍细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒分子，它可以引起中毒反应并对人类健康造成危害。
因此，准确检测和验证细菌内毒素的方法非常重要。
本方案旨在验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
二、实验目的本实验旨在验证细菌内毒素检验方法，确保其能够准确地检测细菌内毒素的含量。
三、实验材料和设备1. 细菌内毒素检验试剂盒2. 细菌培养基3. 细菌菌种4. 培养皿5. 恒温培养箱6. 试管7. 离心机8. 显微镜9. 无菌培养室四、实验步骤1. 准备工作a. 清洁实验桌面和实验器材，防止污染。
b. 准备所需要的材料和设备，并确保其干净和无菌。
2. 细菌培养a. 随机取一支细菌菌种采样放入培养基中并均匀涂抹于培养皿上。
b. 将培养皿置于恒温培养箱中，以适当的温度和时间培养细菌。
3. 细菌内毒素检验a. 取一份细菌内毒素检验试剂盒，根据说明书的指导进行试剂的调配和处理。
b. 等待试剂反应完成后，根据试剂盒的说明书进行结果的解读。
4. 结果分析a. 观察试剂盒结果，根据颜色变化和强度判断细菌内毒素的含量。
b. 结果符合预期的样本被认为是阳性，否则为阴性。
五、质量控制1. 测量前需进行必要的质量控制，包括试剂的稳定性和标准品的准确性。
六、风险控制1. 实验过程中需佩戴个人防护装备，如实验手套和口罩，以减少潜在的健康风险。
七、数据处理与结果1. 将实验所得数据进行整理和统计，并进行数据分析和结果的解读。
八、讨论与结论1. 讨论实验结果与预期结果之间的差异，分析可能的原因，并提出改进和优化的建议。
2. 结论验证细菌内毒素检验方法的准确性和可靠性。
九、参考文献参考实验所使用的细菌内毒素检验方法的相关文献。
以上是细菌内毒素检验方法验证方案的内容，该方案通过详细的步骤和操作说明，确保了实验的准确性和可靠性。
通过验证该方法，将可为细菌内毒素检验提供可靠的数据支持，为相关领域的研究和应用提供技术支持。
细菌内毒素检查验证方案之欧阳学创编
细菌内毒素检查验证方案时间：2021.03.03 创作：欧阳学文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述1 2 验证目的及范围13 验证小组人员组成及职责1 4 验证依据2 5验证前准备26验证的实施27 偏差处理5 8 验证数据及评估59验证报告及评审510 再验证及周期511 验证文件及归档512 附件51 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4验证依据《中华人民共和国药典》2015版 1143 细菌内毒素检查法 5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2.电热干燥箱6.1.3.恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5.旋涡混合器6.1.6.鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案文件编号：VP-QC-2015-06起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述 12 验证目的及范围 13 验证小组人员组成及职责 14 验证依据 25 验证前准备 26 验证的实施 27 偏差处理 58 验证数据及评估 5 9验证报告及评审 510 再验证及周期 511 验证文件及归档 512 附件 51 概述细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2 验证目的和方法本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表4 验证依据《中华人民共和国药典》2015版1143 细菌内毒素检查法5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
6 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2. 电热干燥箱6.1.3. 恒温恒湿箱6.1.4.水银温度计6.1.5. 旋涡混合器6.1.6. 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号）6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品)6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
细菌内毒素检查验证方案
细菌内毒素检查验证方案一、引言细菌内毒素是一类具有强毒性的生物毒素，可以由细菌产生并释放到环境中。
其存在对于人类和动物的健康具有潜在的危害。
因此，建立一种可靠有效的细菌内毒素检查验证方案至关重要。
本文将介绍一种基于实验室技术的细菌内毒素检查验证方案。
二、实验目的本实验的目的是开发一种验证细菌内毒素检测的方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
具体目标包括：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法；2. 确定验证方案的实施步骤；3. 评估验证方案的可行性和有效性。
三、实验设计1. 材料准备- 细菌内毒素检测试剂盒（根据实验需求选择合适的试剂盒）- 多个细菌培养菌株- 培养基和培养用具- 杂质过滤器- 试管和离心管等实验室常用器具2. 实验步骤1) 培养细菌菌株：选择多个细菌菌株进行培养，确保含有多种不同类型的内毒素。
2) 提取内毒素：将培养的细菌离心，取上清液，通过杂质过滤器去除细菌细胞残留和固体杂质。
得到的上清液即为细菌内毒素提取物。
3) 验证检测方法：使用细菌内毒素检测试剂盒对提取物进行检测，按照试剂盒说明书进行操作。
根据试剂盒结果，评估其准确性和可靠性。
4) 重复实验：根据上述步骤，重复多次实验以确保实验结果的稳定性和可重复性。
5) 数据分析：收集实验结果并进行统计分析，评估所选择的细菌内毒素检测方法的可行性和有效性。
四、实验注意事项1. 实验过程中要严格遵守实验室操作规范，注意安全。
2. 选择合适的细菌内毒素检测试剂盒，确保其适用于所需检测的内毒素类型。
3. 在提取内毒素时，要注意避免细菌细胞的污染。
4. 实验过程中要确保操作的准确性和重复性，避免人为误差的干扰。
5. 对于实验结果的分析，要进行统计学处理，确保数据的准确性和可信度。
五、预期结果通过本实验，预计将得到以下结果：1. 确定合适的细菌内毒素检测方法，验证其具有较高的准确性和可靠性。
2. 提供一个详细的细菌内毒素检查验证方案，使其可应用于实际生产中。
细菌内毒素检查法凝胶法
• λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml） ，或是在光度测定法中所使用的标准曲 线上最低的内毒素浓度。
凝胶法
• 凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反 应的原理进行限度检测或半定量检测内毒 素的方法。
鲎试剂灵敏度复核试验
• 在本检查法规定的条件下， 使鲎试剂产生 凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标 示灵敏度，用 EU/ml 表示。当使用新批号 的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响 检验结果的改变时， 应进行鲎试剂灵敏度 复核试验。
进行干扰试验。
• 当鲎试剂、供试品的处方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结 果的变化时，须重新进行干扰试验。
• 检查法
• （1 ）凝胶限度试验
• 按表 2 制备溶液 A、B、C 和 D。使用稀释 倍数不超过 MVD 并且已经排除干扰的供试 品溶液来制备溶液 A 和 B。按鲎试剂灵敏 度复核试验项下操作。
• 表 2凝胶限度试验溶液的制备
• 注：A 为供试品溶液；B 为供试品阳性对照； C 为阳性对照；D 为阴性对照。
结果判断
• 保温 60 分钟±2 分钟后观察结果。若阴性对照溶液 D 的 平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液 B 的平行管均为阳 性，阳性对照溶液 C 的平行管均为阳性，试验有效。
• 若溶液 A 的两个平行管均为阴性，判定供试品符合规定。 若溶液 A 的两个平行管均为阳性，判定供试品不符合规定。 若溶液 A 的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性， 需进行复试。复试时溶液 A 需做 4 支平行管，若所有平行 管均为阴性，判定供试品符合规定，否则判定供试品不符 合规定。若供试品的稀
• 2.确定最大有效稀释倍数（MVD ）
最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液
细菌内毒素检查标准操作规程
细菌内毒素检查标准操作规程细菌内毒素检查标准操作规程1 简述1.1 本规范适用于中国药典2005年版附录中细菌内毒素检查法一凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.2 供试品细菌毒素限值的确定。
（一）药典中有规定的，按供试品各论中规定限值；（二）尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg、EU/U表示。
K为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg/h表示。
其中注射剂，K=5EU/kg/h；放射性药品注射剂，K=2.5EU/kg/h；鞘内用注射剂，K=0.2EU/kg/h。
M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量，以ml/kg/h、ml/kg/h、U/kg/h表示。
药品人用最大剂量可参阅国家批准的药品说明书和《临床用药须知》等权威著作，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1小时的按1小时计。
按人用剂量计算限值时，如遇特殊情况，可根据生产和临床用实际情况做必要调整，但需说明理由。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MV D）按下式计算：MV D=C?L/λL为供试品的细菌内毒素限值；C为供试品溶液的浓度。
当L以EU/ml表示时，C等于1.0ml/ml；当L的单位以EU/mg或EU/U表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg/ml或U/ml。
如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MV D取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度C: λ/L。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
1.4 在使用新一批号的鲎试剂前，必须进行鲎试剂灵敏度复核实验。
1.5 药典中已有规定的品种或有其他内毒素检验标准的品种，可直接进行内毒素检查，如在检验中出现干扰的情况需再进行干扰实验的验证；其他未建立内毒素检查的品种需先进行干扰实验，确定不干扰浓度后再进行内毒素检查。
4.细菌内毒素检测的相关验证
凝胶法干扰试验（1批次）
平行 管
1 2 平行 管
1 2 3 4
溶液C（内毒素标准品）
溶液D（阴性对照）
需要28支 反应管
E2λ
Eλ
E0.5λ
溶液A（供试品溶液） S ○ ○
溶液A（供试品溶液） S ○ ○
需要64支 反应管
溶液编号 溶液内容 平行管数
溶液编号 溶液内容 平行管数
24 湛江安度斯生物有限公司
凝胶法干扰试验
结果分析示例
B
S4E2λ
S4Eλ
S4E0.5λ
+
+
－
+
+
－
+
+
－
+
+
－
C
E2λ
Eλ
E0.5λ
+
+
－
+
+
－
最理想的无干扰 状况
5. 选择三批产品，进行干扰试验。
如有可能，请保留一个安全系数（选择≤1/2MVD的稀释倍数进行检测）。
*凝胶法干扰初筛试验中，可以选择任意灵敏度的鲎试剂。一般为了试验的方便，选择灵敏度低的鲎试剂。
17 湛江安度斯生物有限公司
凝胶法干扰初筛试验
平行
管
S1
1
○
溶液A（供试品溶液）
S2
S4
…
○
○
…
溶液D（阴性对照）
SMVD
检查用水
○
细菌内毒素方法学验证方案
细菌内毒素方法学验证方案生效日期：再验证时间：审批表1．概述细菌内毒素检查法在药品的热原限量控制中应用广泛，本方案通过对无菌氯化钠溶液、配套药盒和本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的细菌内毒素检测，对生产过程进行质量控制。
因此对细菌内毒素检验方法的验证就显得尤为重要。
2．目的为了保证所购买的无菌氯化钠溶液、配套药盒和本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的细菌内毒素检验方法的专属性和灵敏性，且保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
3．范围本方案适用于无菌氯化钠溶液、配套药盒以及本公司所生产的锝[99m Tc]放射性药品的无菌检查方法的验证。
4．确认小组成员与职责成立确认小组，明确各成员及相应职责。
5．参考文件5.1确认与验证管理规程5.2《中国药典》2010年版二部附录XI E6．验证所需仪器和材料6．1验证中所用到的仪器：电子天平、电热干燥箱、恒温水浴箱、水银温度计和旋涡混合器，验证所涉及到的仪器均经过检定或确认合格，且在有效期内。
6．2验证所需试剂：具有国家主管部门的批准文号的鲎试剂和由中国药品生物制品检定所统一发放的细菌内毒素工作标准品。
7.验证标准在实验结果中，必须要阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性且阴性对照都为阴性时，实验有效。
8.验证步骤8.1实验前准备验证前首先要进行细菌内毒素标准品的制备，内毒素限值的确定。
然后确认鲎试剂是否进行灵敏度复核和干扰试验。
确定干扰试验中的最大稀释倍数（MVD）。
8.1.1根据2010年版中国药典二部附录ⅪE细菌内毒素检查法中规定，细菌内毒素限值计算公式：L=K/M式中L为供试品的细菌内毒素限值，本品以EU/mg表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂K=5EU/（kg．h）；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，人均体重按60kg计算，人体表面积按1.62m2计算。
注射时间若不足1小时，按1小时计算。
本品以腺苷蛋氨酸计最大剂量为1000mg。
sop细菌内毒素检查操作规程
1 目的规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。
2 范围适用于本厂质监科化验室对注射用水的细菌内毒素检验。
3 责任化验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。
4 内容本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1仪器、用具4.1.1旋涡混合器、注射器（2.0ml、1.0ml）、注射针（6号、9号）、保鲜纸、试管（10×75 mm）、镊子（金属）、金属盒。
4.1.2用具除去外源性内毒素：将用具放入金属盒，在250℃干烤30分钟或180℃干烤120分钟。
4.2试剂4.2.1细菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.2.2细菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价应不小于2EU，不大于50EU。
4.2.3细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为0.03EU/ml或更高灵敏度的鲎试剂在37℃±1℃条件下24小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。
4.2.4鲎试剂：0.1ml/支（λ=0.5EU/ml）。
4.3鲎试剂灵敏度复核试验鲎试剂灵敏度的标示值（λ，此处λ=0.5EU/ml）,将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合15分钟，然后制备成合适的稀释浓度，1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml，每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
按检查法项下试验，每一浓度平行做4支，同时用细菌内毒素检查用水做2支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值λc。
λc=lg-1(∑X/4)式中X为反应终点浓度的对数值(lg)。
反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。
当λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批鲎试剂的灵敏度。
细菌内毒素检查操作规程
细菌内毒素检查操作规程1.目的：建立一个测定细菌内毒素的检查方法。
2.范围：适用于需测定细菌内毒素的药品等。
3.责任：质检科检验员对实施本规程负责。
4.程序4.1原理4.1.1本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
4.1.2细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
4.1.3细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
4.1.4细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
4.1.5细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
4.1.6凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml 的灭菌注射用水。
光度测定法的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml 。
4.1.7试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。
常用的方法是在250℃干烤至少60分钟，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。
试验操作过程应防止微生物的污染。
4.2供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH值在6.0 ～8.0 的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的pH值，可使用酸、碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜的缓冲液调节pH值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
4.3内毒素限值的确定4.3.1药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按以下公式确定：L = K/M式中：L——供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性单位）表示；K ——人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg· h）表示，注射剂K＝5EU（/ kg·h），放射性药品注射剂K＝2.5EU/（kg·h），鞘内用注射剂K ＝0.2EU/ （kg·h）。
医疗器械细菌内毒素合并检验方案研究
医疗器械细菌内毒素合并检验方案研究摘要：系列产品细菌内毒素合并检验，每一份样品有两个作用，一是作为样品，二是作为其他样品的稀释剂，在所有产品稀释倍数不超过最大有效稀释倍数的前提下，整体样品的检测结果为阴性，则系列产品内样品均合格。
关键词：医疗器械；细菌内毒素；系列产品；合并检验细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
包括凝胶法和光度测定法。
其中凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。
大部分医疗器械需要在水溶液中浸提制成供试品溶液，供试品溶液不应该超过最大有效稀释倍数。
最大有效稀释倍数的确定按照公式L=MVD*λ来计算，其中L-供试品技术要求、MVD-为供试品最大有效稀释倍数、λ-鲎试剂灵敏度。
因此，只要产品的稀释倍数不超过最大有效稀释倍数，当细菌内毒素检查阴性结果，即表示产品内毒素含量不超过限值，则判产品合格。
将医疗器械分别浸提制成供试品溶液后，供试品溶液混合检验，形成合并样本，这样，参与合并检验的样品有两个作用，一是作为样品参与检验，二是成为其他样品稀释剂，因此，参与合并的供试品是被相互稀释了的样品供试液。
最坏的可能是所检合并样本内毒素只来自其中同一批样品，只要保证参与合并的样品溶液被稀释的倍数不超过最大有效稀释倍数，当合并样本结果阴性，则参与合并的每批样品一定均不能超过各自的限值规定，可判参与合并的所有批次均合格。
细菌内毒素凝胶试验是不超过规定限度的定性试验，适合合并检验的方法。
本研究材料进行系列产品的验证，验证结果如下：1 划分产品系列组，每一系列组选取代表样品根据产品原材料划分产品系列组，再根据产品组件、加工工艺、产品的评价来进行系列组内分类，从分类中选取配件种类最多，浸提浓度最高的产品作为代表样品。
本次验证做了两个产品系列组，如表一。
表一产品系列组2 将代表性样品随机组合进行验证根据表一的产品系列组选取系列组1的代表样品5个，进行2个、3个、4个、5个组合，形成26个试验组，分别对26个组合进行细菌内毒素干扰试验。
细菌内毒素验证
• 只有当溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液 C的结果符合鲎试剂灵敏度复核试验要求时，试验方为有效。
• 干扰试验中我们需要对三批供试品，两个不同厂家的鲎试剂进行试验
干扰试验结果举例
例1、批号1——厂家1鲎试剂试验结果
鲎试剂灵敏度复核试验
• 根据鲎试剂灵敏度的标示值（ λ ），将细菌内毒素工作标准品加入1ml内毒素检查 用水溶解，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。然后按所用的鲎 试剂灵敏度2λ、λ、0.5λ、0.25λ进行稀释。0.1ml鲎试剂+ 0.1ml标准品，平行4管； NC： 0.1ml鲎试剂+ 0.1mlBET用水，平行2管37℃±1℃孵育60min±2min。
细菌内毒素方法验证
细菌内毒素验证基本程序
试验准备 计算MVD 初筛试验
确定样品内毒素限值
选择试剂
鲎试剂灵敏度复核试验
供试品干扰
干扰试验
结果判断
计算公式：MVD=cL/λ
MVD为供试品的最大有效稀释倍数，c为供试品溶液的浓度，L供试品的细菌内毒素限值。如果 计算在MVD时的供试品浓度，即最小有效稀释浓度，可使用公式MVc=λ /L.
Es= antilg (∑Xs/4) Et = antilg (∑Xt/4) （Xsl，g）Xt。分别为系列溶液反应终点浓度的对数值
---
阴性对照 -
正式干扰试验接受标准 当阴性对照4管为阴性，两组最大浓度2λ均为阳性， 最低浓度0.25λ均为阴性时，试验结果有效。Et/Es值 在0.5～2（包括0.5、2）之间为无干扰，反之为有干 扰
注射用水内毒素检验方法验证方案
注射用水细菌内毒素检验方法验证方案1.0目的该方案确认制定的注射用水细菌内毒素检验方法适用于本公司微生物实验室对注射用水细菌内毒素的检验，方法能够提供一致、可信和准确的细菌内毒素检验结果。
2.0范围该方案适用于公司注射用水细菌内毒素检验方法的验证。
3.0名词定义BET：细菌内毒素测试(Bacterial Endotoxins Test)EU：内毒素单位，1EU=1IUλ：鲎试剂标示灵敏度MVD：最大有效稀释倍数4.0描述4.1验证方法：中国药典<1143>细菌内毒素检查法；4.2验证用注射用水：取注射用水检测点的新鲜注射用水；5.0接受标准注射用水细菌内毒素限度标准：＜0.25EU/ml6.0验证内容6.1验证前的准备：6.1.1验证器具准备➢将内毒素反应试管及取样三角瓶放入铬酸洗液中充分浸泡，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用纯化水反复冲洗，晾干后放入不锈钢方盘或用锡箔纸包好后再放入不锈钢方盘内，置于干热灭菌烘箱。
➢将干热灭菌烘箱温度设定为250℃，灭菌时间设定为1h，开启灭菌程序，灭菌程序结束待灭菌烘箱温度降至室温。
6.1.2主要仪器设备/试剂、对照品：设备：细菌内毒素检测仪、干热灭菌烘箱、医药冷藏箱试剂、对照品：细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂细菌内毒素工作标准品：以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于干扰试验及检查法中阳性及供试品阳性溶液的制备、鲎试剂灵敏度复核试验。
细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法），且对内毒素试验无干扰作用。
6.2验证过程：6.2.1鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核的目的不仅是考察鲎试剂的灵敏度是否准确，也是考察检验人员操作方法是否正确及试验条件是否符合规定。
实验室在使用一批新的鲎试剂进行细菌内毒素检查前必须进行鲎试剂灵敏度复核试验。
6.2.1.1 内毒素标准溶液的制备：取内毒素工作标准品一支，加入1ml 内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15min 。
细菌内毒素检验SOP
干扰试验
表1凝胶法干扰实验溶液的制备
编号
配制内毒素的溶液浓度
稀释用液
当Ea在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）及Et在0.5 Ea～2Ea（包括0.5 Ea和2Ea）时，认为供试品在该浓度下无干扰作用。若供试品溶液在小于MVD的稀释倍数下对实验有干扰，应将供试品溶液进行不超过MVD的进一步稀释，再重复干扰试验。
当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺或环境中发生了任何有可能影响实验结果的变化时，须重新进行干扰试验。
一般要求供试液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需要调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸，碱溶液或鲎试剂生产厂家推荐的适宜缓冲液调节PH值。酸或碱溶液必须用细菌内毒素检查用水在已除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经验证不含内毒素和干扰因子。
检测
辅助材料
鲎试剂标准品检查用水9g/L的氯化钠溶液
细菌内毒素检验
审核
日期
批准
日期
序号
作业内容及作业要项
参考图
检验方法：凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
鲎试剂灵敏度复核试验：在本检查规定的条件下，使鲎试剂生产凝集内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或实验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核实验。
记录原始数据，填写检验报告。
辅助材料
鲎试剂标准品检查用水9g/L的氯化钠溶液
细菌内毒素检测方法
细菌内毒素检测方法细菌内毒素是一种细菌产生的毒素，它们可以引起严重的疾病，甚至危及生命。
因此，及时准确地检测细菌内毒素对于预防和治疗疾病至关重要。
本文将介绍几种常见的细菌内毒素检测方法，希望能为相关领域的研究者和医护人员提供一些参考。
首先，常见的细菌内毒素检测方法之一是内毒素生物学检测法。
这种方法利用动物模型，将待检测的样品注射到动物体内，观察动物是否出现典型的内毒素中毒症状，如发热、休克等。
通过观察动物的生理指标和行为变化，可以初步判断样品中是否含有细菌内毒素。
这种方法的优点是直观、快速，但缺点是需要动物实验，不够环保，而且结果受动物个体差异影响较大。
其次，还有一种常用的细菌内毒素检测方法是内毒素化学检测法。
这种方法是利用化学试剂与细菌内毒素发生特定反应，产生可见的颜色变化或者荧光信号，从而检测样品中内毒素的含量。
内毒素化学检测法具有灵敏度高、操作简便的特点，可以快速、准确地检测出内毒素的存在，是目前常用的内毒素检测方法之一。
此外，分子生物学检测方法也被广泛应用于细菌内毒素的检测。
这种方法利用PCR、酶联免疫吸附测定法（ELISA）等技术，通过检测细菌内毒素的基因或蛋白质水平来确定样品中内毒素的含量。
分子生物学检测方法具有高度的特异性和准确性，可以对样品进行快速、精准的检测，是目前内毒素检测的主流方法之一。
综上所述，针对细菌内毒素的检测，我们可以选择合适的方法进行检测。
内毒素生物学检测法直观快速，但需要动物实验；内毒素化学检测法操作简便，准确性高；分子生物学检测方法具有高度的特异性和准确性。
在实际应用中，我们可以根据具体的需求和条件选择合适的检测方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的方法能够为相关领域的研究和临床工作提供一些帮助，促进细菌内毒素检测技术的进步和应用。
细菌内毒素检测方法验证方案 定稿
细菌内毒素检测方法验证方案起草人：审核人：批准人：生效日期：文件分发范围：QA、QC1.验证目的：为确保细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此验证方案。
2.验证范围：适用于注射液细菌内毒素检测方法验证。
3.验证小组成员及职责：组长：，QC经理，负责协调小组的行动，跟进验证方案的审批流程，协调与其他部门及小组成员内的交流，组织验证数据并文件化。
组员：，QC人员，负责起草方案并按照确认方案进行验证，起草验证报告。
组员：QC微生物主管，负责验证方案与报告的审核，验证过程的复核。
4.验证依据：4.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）4.2《药品生产验证指南》(2003年版)4.4《细菌内毒素检验操作规程》（SN-O08-F0061-02）4.5《中国药典2010版二部》附录5.验证前准备：5.1人员培训确认：检查人：日期：复核人：日期：5.2仪器设备5.3检验材料、试剂及标准品6. 鲎试剂灵敏度复核：以上该批鲎试剂按《细菌内毒素检查法操作规程》（SN-O08-F0061-02）检查法的要求复核标示灵敏度，应符合规定。
《鲎试剂灵敏度复核记录》（SN-O08-F0061-R02-01）编号：。
灵敏度复核结果： EU/ml7.验证方法：通过比较内毒素在水溶液和供试品溶液中反应的差异程度，来确定供试品在该浓度下是否对细菌内毒素（BET）检查有干扰，至少对3批样品进行干扰试验。
7.1供试品细菌内毒素限值和最大稀释倍数的确定（L）：7.1.1限值：每1mg中含细菌内毒素的量应小于30EU7.1.2供试品的最大有效稀释倍数（MVD）公式：MVD＝C*L/λ式中：C为供试品溶液的浓度（为2.5mg/ml），其中当L以EU/ml表示时，C为1.0ml/ml；当L以EU/mg或EU/U表示时，C的单位为mg/ml或U/ml，λ为鲎试剂的灵敏度。
7.1.3最大有效稀释倍数（MVD）计算结果：MVD＝CL/λ＝（2.5mg/ml*30EU/mg）/0.25 EU/ ml＝ 300倍7.2干扰试验7.2.1细菌内毒素标准溶液制备：取细菌内毒素工作标准品（160EU/ml）一支，开启，加入1ml 细菌内毒素检查用用水溶解，置旋涡混合器上混合15分钟，得到160EU/ml的内毒素标准溶液（以E160表示），用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2λ、λ、0.5λ、0.25λ。
细菌内毒素检测方法验证 (1)
目的---------------------------------------------------------------------------------------------------------范围---------------------------------------------------------------------------------------------------------责任人-----------------------------------------------------------------------------------------------------内容--------------------------------------------------------------------------------------------------------1.实验材料及用具-------------------------------------------------------------------------------------2.具体验证步骤-----------------------------------------------------------------------------------------2.1. 鲎试剂灵敏度复核------------------------------------------------------------------------------2.2..干扰实验---------------------------------------------------------------------------------------------2.3.供试品细菌内毒素检查--------------------------------------------------------------------------3. 验证结论----------------------------------------------------------------------------------------------附：表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验预实验表3.干扰试验记录表4.细菌内毒素检查记录目的：为确保注射用重组抗Her2单克隆抗体细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
2024版中国药细菌内毒素检查法验证方案
2024版中国药细菌内毒素检查法验证方案嘿，各位同行，今天咱们来聊聊细菌内毒素检查法验证方案，这可是咱们药界的大事儿。
作为一名有着10年方案写作经验的大师，我就来给大家详细梳理一下2024版的验证方案。
一、概述细菌内毒素检查法是一种用于检测药品、医疗器械等物品中细菌内毒素含量的方法。
它主要是通过检测细菌内毒素与鲎试剂发生凝集反应来实现的。
此方法具有简便、快速、灵敏度高、特异性好等特点，广泛应用于药品质量控制。
二、验证目的1.验证细菌内毒素检查法的可靠性、准确性、重复性。
2.确定细菌内毒素检查法的适用范围。
3.为药品、医疗器械等物品的细菌内毒素限量提供科学依据。
三、验证方法1.鲎试剂法：采用鲎试剂与细菌内毒素发生凝集反应，通过比色法或浊度法测定凝集程度，从而计算出细菌内毒素含量。
2.酶联免疫法：利用细菌内毒素与特异性抗体结合，通过酶联免疫反应测定细菌内毒素含量。
四、验证步骤1.验证实验材料：准备鲎试剂、细菌内毒素标准品、待测样品等。
2.验证实验方法：按照细菌内毒素检查法操作规程进行实验。
3.验证实验数据：记录实验数据，包括细菌内毒素标准品、待测样品的凝集程度、吸光度等。
4.数据处理：计算细菌内毒素含量，进行统计分析。
5.结果判定：根据细菌内毒素限量标准，判断待测样品是否符合要求。
五、结果判定及处理1.结果判定：细菌内毒素含量小于等于限量标准时，判定为合格；大于限量标准时，判定为不合格。
2.处理：对不合格样品，进行原因分析，采取相应的质量控制措施，确保产品质量。
下面，我来给大家举个例子，以便更好地理解这个验证方案。
假设我们要验证某药品的细菌内毒素含量，我们需要准备鲎试剂、细菌内毒素标准品、待测样品等实验材料。
然后，按照细菌内毒素检查法操作规程进行实验，记录实验数据。
计算细菌内毒素含量，与限量标准进行比较。
如果细菌内毒素含量小于等于限量标准，那么该药品判定为合格；如果大于限量标准，那么该药品判定为不合格，需要进一步采取措施进行质量控制。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
纪律作风整顿细菌内毒素检查验证方案文件编号：VP-QC-2015-06起 草 人： 审 核 人： 批 准 人： 批准日期：年月日.11 概述纪律作风整顿目录1 2 验证目的及范围1 3 验证小组人员组成及职责1 4 验证依据2 5 验证前准备.2纪律作风整顿2 6 验证的实施2 7 偏差处理5 8 验证数据及评估9 验证报告及评审10 再验证及周期5 5.3纪律作风整顿5 11 验证文件及归档5 12 附件5.4纪律作风整顿1 概述 细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由格兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查报告两种发放，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法，供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行实验。
公司自行 制备的注射用水需进行细菌内毒素的检查，本方案将采用凝胶法进行试验。
2 验证目的和方法 本验证方案适用于注射用水的细菌内毒素的检查，通过对鲎试剂灵敏度复核试验、 干扰试验及凝胶限度试验，建立该产品的细菌内毒素检查方法，并对其有效性进行评 价，确保检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求。
3.验证小组人员组成及职责：3.1 验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组组成及职责列表组成 QC质量部 生产部职责1. 负责起草验证方案的起草 2. 负责本方案的培训 3. 仪器仪表校验确认 4. 负责验证的实施 5. 负责数据的收集和整理 6. 负责数据分析 7. 负责完成验证报告1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准 2. 负责验证现场的监督审查1. 负责保障设备、器具的完好 2. 负责动力系统的保障4 验证依据《中华人民共和国药典》2015 版 1143 细菌内毒素检查法5.验证前准备.5纪律作风整顿5.1 验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件 1。
5.2 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
5.3 相关文件，确认以下文件皆为现行有效版本。
序 号相关文件文件编号1DHG 型电热恒温鼓风干燥箱操作规程WI-1002BSC-100-II-B2 生物安全柜操作和维护保养规程3WXQI-S-18SI 自动手提式灭菌器使用和维护保养规程WI-101 WI-1034DK 型电热恒温水浴锅操作规程WI-1045HWS 型恒温恒湿箱操作规程WI-1056JA2003N 电子天平操作及维护保养规程WI-1067PHS-3C 型 PH 计操作及维护保养规程WI-1088SHP-3C 型低温生化培养箱操作及维护保养规程9YJ-875SDB 型净化操作台的操作及维护保养规程WI-109 WI-1131《培养基管理规程》0WI-766 验证的实施6.1实验材料及用具6.1.1电子天平6.1.2. 电热干燥箱.6纪律作风整顿6.1.3. 恒温恒湿箱 6.1.4.水银温度计 6.1.5. 旋涡混合器 6.1.6. 鲎试剂（具有国家主管部门的批准文号） 6.1.7.细菌内毒素工作标准品(由中国药品生物制品检定所统一发放的标准品) 6.1.8.细菌内毒素检查用水：应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于 0.015EU/ml，且对内毒素试验无干扰作用。
6.1.9. 实验用具:移液管、凝集管、三角瓶、试管、试管架、洗耳球、时钟、75% 酒精棉、剪刀、砂轮。
6.2实验准备 6.2.1 玻璃器皿的洗涤将玻璃器皿放入铬酸洗液或其他热原灭活剂或清洗液中充 分浸泡，然后取出将洗液空干，用自来水将残留洗液彻底洗净，再用蒸馏水反复冲洗 三遍以上，空干后放入适宜的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内， 放置入烤箱。
6.2.2 除去玻璃器皿表面可能存在的外源性内毒素玻璃器皿置烤箱后，将烤箱调至 250℃，待烤箱温度升至设定的温度后开始计时，干烤至少 1 小时。
达到规定时间后， 关断电源，待烤箱温度自然降至室温。
在不打开金属容器的情况下，可在两天内使用； 如果玻璃器皿用锡箔纸包装，在不打开包装的情况下可在两周内使用，否则须再次干 烤除去可能存在的外源性内毒素。
6.3鲎试剂灵敏度复核试验本试验采用凝胶法，凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理进行 限度检测的方法。
6.3.1 细菌内毒素标准溶液的制备 取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈 上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
按照.7纪律作风整顿标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜将瓶口封 严，置旋涡混合器上混合15分钟。
然后进行稀释，制备成4个浓度的细菌内毒素标准溶 液，即2λ、λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试对的标示灵敏度），每稀释一步 均应在旋涡混合器上混合30 秒钟。
6.3.2 待复核鲎试剂的准备 取规格为0.1ml/ 支的鲎试剂18支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈 轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml 检 查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
6.3.3.加样 将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列4支 （管），1列2支（管）。
4 支（管）4 列每列每支分别加入0.1ml 的2λ、λ、0.5 λ、和0.25λ 的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水，作为阴性对照。
6.3.4 加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，垂 直放入试管架上，连同试管架放入37℃± 1℃恒温恒湿箱中，试管架保持水平状态，保 温60± 2 分钟。
6.3.5 观察并记录结果。
将试管架从恒温恒湿箱中轻轻取出，避免振动，将每管 拿出缓缓倒转180°观察，管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性， 记录为（+）；未形成凝胶或凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。
保温和拿取试管过程应避免受到振动，造成假阴性结果。
6.3.6实验结果计算 如最大浓度2λ4管均为阳性，最低浓度0.25λ4管均为阴性，阴性对照为阴性时 实验为有效，按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（λ.8纪律作风整顿c）。
λc = lg-1 (∑X/4)式中x为反应终点浓度的对数值（lg）。
反应终点浓度是系列递减的内毒素标准溶 液中最后一个呈阳性结果的浓度。
6.3.7结果判断 6.3.7.1.判断标准 当λc在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ）时判定该批鲎试剂灵敏度复核合格，可用 于干扰实验和供试品细菌内毒素检查，并以λ（标示灵敏度）为该批鲎试剂的灵敏度。
6.3.7.2 判断结果：（记录附后）6.4干扰实验 6.4.1目的 是检验本公司自制的注射用水对于鲎试剂与内毒素的反应有无干扰作用。
使用的 供试品溶液应为未检验出内毒素且不超过所使用的鲎试剂的最大有效稀释倍数的溶 液。
6.4.2 确定最大有效稀释倍数（MVD） 注射用水的内毒素限值L为0.25EU/ml，鲎试剂的标示灵敏度为0.25 EU/ml， 则最大有效稀释倍数MVD为注射用水本身浓度。
公司如下：MVD=cL/λ 式中：L为供试品的细菌内毒素限值c为供试品溶液浓度 λ为鲎试剂灵敏度的标示值。
6.4.3制备内毒素标准对照溶液.9纪律作风整顿取1支细菌内毒素标准品，用细菌内毒素检查用水稀释成4个浓度的标准溶液即2λ、λ、0.5λ、0.25λ（方法同6.3.1）。
6.4.4 制备含内毒素的供试品溶液再注射用水将6.4.3.中的同支细菌内毒素标准品稀释成4个浓度即2λ、λ、0.5λ、0.25λ的含内毒素的供试品溶液。
6.4.5鲎试剂的准备取规格为0.1ml/支的鲎试剂28支，轻弹壁使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。
每支加入0.1ml检查用水溶 解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。
6.4.5加样：按下列表1方法进行加样1) 将准备好的鲎试剂取其中18支（管）放在试管架上，排成5列，4列4支（管），1列2支（管）。
其中的4支4列每列每支分别加入0.1ml的2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的含内毒素的供试品溶液，另一列2支（管）加入0.1ml 供试品溶液作为阴性对照。
2) 将另外10支（管）鲎试剂放在试管架上，排成5列，每列2支（管）。
其中的4列每列每支分别加入0.1ml的含2.0λ、1.0λ、0.5λ、0.25λ的内毒素的标准内毒素溶液，另一列2支（管）加入0.1ml检查用水作为样品阴性对照。
加样结束后，用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同试管架放入37±1℃恒温恒湿箱中，保温60±2分钟后，观察并记录结果。
表1 凝胶法干扰试验溶液的准备编 号内毒素浓度/ 被加入内毒素的溶液稀释 用液稀释 倍数所含内毒素的 浓度平行 管数A无/供试品溶——————2.102/供试品溶液2 1 0.5 0.252/检查用水2 1 0.5 0.25注：A为供试品溶液；B为干扰试验系列；C为鲎试剂标示灵敏度的对照系列；D为阴性对照。
6.4.7实验结果计算只有当溶液A和阴性对照溶液D的所有平行管都为阴性，并且系列溶液C的结果符合鲎试剂里面的复核试液要求时，试验方为有效。
当系列溶液B的结果符合鲎试剂里面的复核试验要求室，认为该供试品溶液物干扰作用。
其他情况则认为供试品溶液存在干扰作用。
按下式计算用检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(Es )和用供试品溶液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值(Et).Es= lg-1 (∑Xs/4)Et= lg-1 (∑Xt/4)Xs 、Xt分别为用检查用水和供试品溶液或稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（lg）。
6.4.8结果判断6.4.8.1判断标准当Es 在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）时，且Et在0.5 Es～2.0Es（包括0.5 Es和2.0Es）时，则认为该供试品溶液不干扰实验，可对此供试品进行细菌内毒素检查。
当Et 不在0.5 Es～2.0Es（包括0.5 Es和2.0Es）时，则认为该供试品溶液干扰实验。
6.4.8.2判断结果：（记录附后）。
6.5供试品的凝胶限度试验检查6.5.1 在细菌内毒素检查中，每批供试品必须做2支供试品管和2支供试品阳性对照，同时每次实验必须做2支阳性对照和2支阴性对照。
6.5.2 凝胶限度溶液的制备：按表2进行各试验溶液的制备表1 凝胶限度试验溶液的制备2/供试品溶液2/检查用水注：A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为阴性对照。