羧酸酯酶(Carboxylesterase,CarE)活性测定试剂盒使用说明
稻飞虱生物学、生态学及其防控技术研究进展
浙江大学学报（农业与生命科学版）48（6）：692~700，2022Journal of Zhejiang University (Agric.&Life Sci.)http ：///agrE -mail ：zdxbnsb @稻飞虱生物学、生态学及其防控技术研究进展蒯鹏，娄永根*（浙江大学农业与生物技术学院昆虫科学研究所，水稻生物学国家重点实验室/农业农村部作物病虫分子生物学重点实验室，杭州310058）摘要稻飞虱是制约我国水稻生产的一类最主要害虫，主要包括褐飞虱、白背飞虱和灰飞虱。
本文重点就稻飞虱重要遗传特性（翅型分化、繁殖力、抗药性）分子基础、水稻-稻飞虱-天敌-其他生物种间互作关系、稻飞虱灾变机制及其防控技术等方面的最新研究成果进行综述，并提出今后应进一步深入剖析稻飞虱灾变的生物学与生态学分子基础，明确集约农业与稻田生态系统抗性在微观层面的协调机制，以在集约农业背景下维持或提高稻田生态系统抗性，实现稻飞虱的可持续治理。
关键词稻飞虱；生物学特性；种间互作关系；灾变机制；可持续治理中图分类号S 435.11文献标志码A引用格式蒯鹏,娄永根.稻飞虱生物学、生态学及其防控技术研究进展[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2022,48(6):692-700.DOI:10.3785/j.issn.1008-9209.2022.08.221KUAI Peng,LOU Yonggen.Research advances in biology,ecology and management of rice planthoppers[J].Journal of Zhejiang University (Agriculture &Life Sciences),2022,48(6):692-700.Research advances in biology,ecology and management of rice planthoppersKUAI Peng,LOU Yonggen *(State Key Laboratory of Rice Biology/Ministry of Agriculture and Rural Affairs Key Laboratory of Molecular Biology of Crop Pathogens and Insects,Institute of Insect Sciences,College of Agriculture and Biotechnology,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China )Abstract Rice planthoppers,mainly including Nilaparvata lugens ,Sogatella furcifera ,and Laodelphaxstriatellus ,are one of the most important insect pests of rice in China.In this review,we summarized the latest research progress on the molecular basis of important genetic characteristics (wing-morph differentiation,fecundity,insecticide resistance)of rice planthoppers,interactions among rice,rice planthoppers,natural enemies of rice planthoppers and other organisms,mechanisms underlying rice planthopper outbreak,and management of rice planthoppers.Finally,we suggest that future studies should further dissect the molecular basis of biology and ecology related to rice planthopper outbreak,and find the coordination mechanisms between intensified agriculture and rice ecosystem resistance at the micro level,so as to maintain or improve the rice ecosystem resistance,and achieve sustainable management of rice planthoppers in the context of intensified agriculture.Key words rice planthoppers;biological characteristics;interspecific interactions;outbreak mechanisms;sustainable management稻飞虱是危害我国和东南亚国家水稻生产的一类主要迁飞性害虫，主要包括褐飞虱（Nilaparvatalugens ）、白背飞虱（Sogatella furcifera ）和灰飞虱（Laodelphax striatellus ），属于半翅目（Hemiptera ）DOI ：10.3785/j.issn.1008-9209.2022.08.221基金项目：国家重点研发计划项目（2021YFD1401100）；农业农村部现代农业产业技术体系项目（CARS -01-43）。
羧酸酯酶(CarE)检测
迪信泰检测平台
羧酸酯酶（CarE）检测
羧酸酯酶（Carboxylesterase, CarE）是一种多聚蛋白，属于酯酶家族，主要分布于肝、其他组织及细胞胞液、线粒体和内质网，可催化酯、硫酸酯和酰胺的水解。
羧酸酯酶活性测定对于脂质运输和代谢分析，药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢研究具有重要意义。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测羧酸酯酶的活性变化。
此外，我们还提供其他酯酶类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定羧酸酯酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 羧酸酯酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
一种羧酸酯酶活力的检测方法与流程
一种羧酸酯酶活力的检测方法与流程
一种羧酸酯酶活力的检测方法和流程主要包括以下几个步骤：
第一步：制备样品
从微生物或动植物中提取羧酸酯酶，并将其纯化至一定程度。
可
以采用各种方法提取和纯化酶，如超声波破碎、离心、柱层析等。
第二步：准备反应体系
将提取得到的酶加入含有特定底物的反应体系中，底物通常为p-
硝基苯酯、碱式酯等。
反应体系需要保证酶和底物的浓度和pH值等参
数合适，以确保反应的可靠性和准确性。
第三步：进行反应
将反应体系加热至一定温度，保持一定反应时间。
在反应过程中，底物被酶催化剂水解，产生相应的产物。
反应后，可以通过各种方法
检测产物的生成量，如分光光度法、荧光法、比色法、质谱法等。
第四步：计算酶活力
根据反应产物的生成量计算酶的活力，通常以酶单位（enzymatic unit，U）表示。
酶活力的计算与反应体系的参数、反应时间等有关。
通过以上几个步骤，就可以检测并计算出羧酸酯酶的活力。
这种
方法可以广泛应用于各种生物样品中的酶活力检测，有助于深入了解
各种生物中的基本代谢过程。
一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法
一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法一、概述羧甲基纤维素酶（carboxymethylcellulase，CMCase）是一种重要的木质素酶，它可以将木质素分解为更小体积的产物，从而可促进木质素利用。
因此，测定CMCase活性对于研究木质素加工过程和利用资源至关重要。
二、试剂①P-nitrophenyl 葡糖苷（PNPG）：20 mg/ml;②NaHCO3：0.1 mol/L;③Tris-HCl buffer：50 mmol/L, pH 7.2;④凝胶分离 Buffer：30 mmol/L Tris-HCl，1.5 mmol/L EDTA，10 mmol/L Na2SO4，pH=7.2三、实验步骤1.溶质处理：将木质素细胞壁材料（包括原料和残渣）用凝胶分离buffer缓慢搅拌，直至得到悬浮液。
2.仪器设置：将悬浮液100 μL加入定量瓶中，并加入足量的Tris-HCl缓冲液（50 mL）。
然后安装溶解度仪，并调节机器的参数，使水温调节在28-30℃，波速调节在400 Hz左右，进行10min的研磨处理。
3.测定：将研磨后的悬浮液取出，加入0.1mol/L NaHCO3 10 ml和P-nitrophenyl 葡糖苷（100 μL），搅拌均匀，测定其吸光度，以425nm波长，示定测定CMCase活性。
4.计算：根据吸光度值计算CMCase活性：CMCase活性（U/ml）=A/B，其中A为PNPG测定液的吸光度，B为研磨后悬浮液的吸光度。
四、安全措施1.实验时应戴好实验手套，操作时要注意卫生。
2.羧甲基纤维素酶属于酶分类，易挥发，操作时应尽量避免空气污染。
3.在实验室进行实验时，应注意实验室温度和湿度，使实验条件尽量达到推荐的实验要求。
4.搅拌完毕后，实验材料用大量水冲洗，然后再投入污水处理系统处理。
五、结论本实验介绍了一种简便、高效的羧甲基纤维素酶活性测定方法，建立的方法可以准确、灵敏地测定羧甲基纤维素酶活性，可广泛应用于木质素加工过程和资源利用的研究中。
活性氧（ROS）测定试剂盒说明书
②、波长设置：最佳激发波长 500(50015nm)，最佳发射波长 525 (53020 nm)。也可按照 FITC 荧光检
测条件检测。 ③、结果以荧光度值表示。
四、细胞样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度 计测定）
二、试剂组成及保存： 1、0.1ml 10mM DCFH-DA in DMSO，20℃保存。 2、1ml 活性氧供氢体，4-8℃保存。
三、组织样本操作步骤：（可用激光共聚焦显微镜观察，也可用于流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光分光度 计测定）
1、单细胞悬液制备： 方法 1、采用单细胞悬液制备仪制备单细胞悬液。 方法 2、酶消化法： 方法 3、机械法（网搓法）：
本试剂盒仅用于科研实验
1、直接将探针加入培养液中： ①、直接将 DCFH-DA 探针加入无血清培养基中：一般按照 1 ：1000 用无血清培养液稀释 CFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜， 通常对于 6 孔板的一个孔加入稀释好的 DCFH-DA 不少于 1ml。 ②、取一份不加探针，只加入培养基的细胞设为阴性对照管。阳性对照管：取一份已加入探针的细胞，同 时加入活性氧供氢体诱导细胞，推荐该试剂的工作浓度为 20～100µM。 ③、37℃孵育细胞 30min～几小时，通常为 30～60min 即可，孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DCFH-DA 浓度有关。一般阳性对照在刺激细胞 30 分钟左右，即可观察到明显的绿色荧光。 ④、吸去培养液，利用无血清培养液或者 0.01MPBS 反复吹打，肉眼观察瓶底由半透明(细胞单层连接成 片)转为透明，细胞层几乎全部吹打到 PBS 中。 ⑤、将细胞悬液全部收集到 1.5ml 离心管中。用无血清培养液或者 PBS 洗涤 2 次，以充分去除未进入细 胞内的 DCFH-DA。1000rpm/min，5min，吸净上清后加入 PBS 重新悬浮细胞进行测定。
羧基酯脂肪酶
羧基酯脂肪酶羧基酯脂肪酶是一种重要的酶类催化剂，具有广泛的应用价值。
本文将从定义、分类、催化机制、应用领域等方面介绍羧基酯脂肪酶的相关知识。
一、定义羧基酯脂肪酶（Carboxyl ester lipase，简称CEL）是一类能够催化羧酸酯的加水分解反应的酶。
羧基酯脂肪酶主要存在于胰腺、肠道等组织和器官中，是消化系统中重要的消化酶之一。
二、分类根据催化反应的底物和产物的不同，羧基酯脂肪酶可以分为三类：甘油酯脂肪酶（Triacylglycerol lipase，简称TGL）、磷脂酯脂肪酶（Phospholipase A2，简称PLA2）和胆固醇酯脂肪酶（Cholesterol ester lipase，简称CEL）。
三、催化机制羧基酯脂肪酶的催化机制主要包括两个步骤：亲核攻击和脱酸。
在亲核攻击步骤中，底物中的羧基氧原子受到羧基酯脂肪酶中的亲核基（如组氨酸）的攻击，形成酯酶中间体。
在脱酸步骤中，酯酶中间体中的羧基氧原子与底物中的羟基氧原子发生酸碱催化的反应，生成羧酸和醇。
四、应用领域1. 食品工业：羧基酯脂肪酶可以用于乳化、酯化和脱脂等工艺，提高食品的品质和口感。
2. 制药工业：羧基酯脂肪酶可以用于药物的合成和纯化过程中，提高合成反应的效率和产物的纯度。
3. 生物技术：羧基酯脂肪酶可以用于生物催化反应中，如酶促反应和酶生物传感器等。
4. 生物燃料领域：羧基酯脂肪酶可以用于生物柴油的生产过程中，提高生物柴油的产率和质量。
五、发展趋势随着生物技术和酶工程的发展，羧基酯脂肪酶的催化性能和稳定性得到了很大的提高。
同时，利用基因工程技术，可以通过改变羧基酯脂肪酶的氨基酸序列，使其具有更广泛的催化底物和更高的催化活性。
因此，羧基酯脂肪酶在未来的应用前景非常广阔。
总结：羧基酯脂肪酶是一种重要的酶类催化剂，具有广泛的应用价值。
本文从定义、分类、催化机制、应用领域等方面对羧基酯脂肪酶进行了详细的介绍。
随着生物技术的不断发展，羧基酯脂肪酶的应用前景将更加广阔。
羧酸酯酶及其在含酯类化合物代谢中的作用
羧酸酯酶（ａ ｏｌ ｔ ａ ，ａｓＥ ． ） 于 ／ Ｃ ｒ ｘ ｓ ｒ ｅＣ Ｅ ，Ｃ３ ． １ ｂ ｅｅｓ １ ．属 折 解老 鼠胰 腺 和 肾中类 固醇 中 的脂 肪 酸酯 『。此外 ， ａ ｓ ４ 】 Ｃ Ｅ 又
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第 ４ 卷第 ６期 ６
２０ 年 ６月 Ｏ７
农 药
ＡＧＲｏＣＨＥＭＩ ＣＡＬ Ｓ
Ⅵ）． ６ Ｎｏ ６ １４ ． ．
羧 酸 酯 酶 及 其 在 含 酯 类 化 合 物 代 谢 中 的 作 用
郭 晶 ， 高菊 芳 唐振华 ，
（． 海师范大学 生命与环 境科学学 院 ， １ 上 上海 ２ ０ ２ ； ． ０ １ ３ ２ 中国科学 院 上海生 理生态研究所 ， 上海 ２ ０ ２ ） ００５
ｃ ｔ ｉ ｎ ｄｏ ｎｏ ｎｄ ｅ ｏｎ ａｎｉ ｇ ｅｎ ｇｅ ｕｓａ ｘｏｇ ｎｏ ｍ ｐｏ ｄｓ ｅ ｕｓｃｏ ｕｎ ．Ｔｈｅ ｒ ｎｖ ｖ ｄ ｉ ｅ ｏｘ ｆｃ ｔｏｎ ｏｆｎ ｙ ａ ｅ ｉ ｏｌ ｅ ｎ ｄ ｔ ｉｉ ａ ｉ ｕｍ ｅ ｏ ｎｓ ｃ ｉ ｉ ｓ ｒ ｕｓｉ ｅ ｔｃｄｅ ， ｉ ｃ ｕｄｉ ｙｒ ｔ ｏｉ ，ｏｒ ａｎ ｎ ｌ ｎｇ ｐ ｅｈｒ ｄｓ ｇ ｏｐｈ ｐｈａ ｅｓ ｎｄ ｃａ ｂａ ａ ｅ ．Ｔｈｉ ｅ ｉ ｗ ｏｖｅ ｓ ｅ ｙｍ ｅ ｎｏ ｅｎ ｌ ｔ ｅ ａ ａ ｙｔｃ ｏｓ ｔ ，ａ ｒ ｍ ｔ ｓ ｓｒ ｖ ｅ ｃ ｒ ｎｚ ｍ ｃ ａ ｕｒ ，ｃ ｔ ｌ ｉ
羧酸酯酶杀虫剂代谢
羧酸酯酶杀虫剂代谢-概述说明以及解释1.引言1.1 概述羧酸酯酶杀虫剂是一类广泛应用于农业和卫生领域的农药，其作用是通过干扰昆虫体内的代谢过程而达到杀虫的效果。
羧酸酯酶作为一种重要的酶类，参与了羧酸酯酶杀虫剂的代谢过程。
因此，对羧酸酯酶杀虫剂的代谢进行深入研究，不仅有助于揭示其作用机制，还能够为农药的合理应用和环境保护提供科学依据。
然而，羧酸酯酶杀虫剂的代谢过程复杂而多样，受到众多因素的影响。
羧酸酯酶杀虫剂既可在昆虫体内经过一系列的反应代谢为无毒的物质以实现解毒，也可被转化为具有更强毒性的代谢产物。
此外，环境因素如温度、湿度、光照等也可能对羧酸酯酶杀虫剂的代谢产生影响，导致其效果不稳定或失去活性。
对羧酸酯酶杀虫剂代谢的认识不仅有助于评估农药的安全性和效果，还能够指导农药的改良和研发工作。
同时，深入研究羧酸酯酶杀虫剂代谢对于环境保护来说也具有重要意义。
通过了解农药在环境中的代谢转化规律，可以更好地预测和评估其在环境中的残留情况，从而采取相应的措施来减少农药对生态系统的影响。
然而，目前对羧酸酯酶杀虫剂代谢的研究还存在一些不足之处。
首先，羧酸酯酶杀虫剂代谢的机制尚不完全清楚，需要进一步深入的研究来揭示其详细的代谢途径和代谢产物。
此外，对羧酸酯酶杀虫剂代谢的影响因素还需要更加全面和系统的研究，以便更好地了解其在不同环境条件下的代谢特点和规律。
综上所述，羧酸酯酶杀虫剂的代谢是一个复杂而重要的研究领域。
通过深入研究羧酸酯酶杀虫剂的代谢机制和影响因素，可以为农药的安全应用和环境保护提供科学依据，也有助于促进农药领域的发展和进步。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分主要介绍了整篇文章的组织结构和各个章节的内容概要。
通过清晰地列举和简述各个章节的主题和目标，读者可以更好地理解整篇文章的逻辑结构和主要内容。
在本篇文章中，结构部分的内容可以按照以下方式编写：文章结构部分的内容：本文主要包含以下章节：引言、正文和结论。
烟草甲两个羧酸酯酶基因的克隆及表达模式
第 ４期
朱晓晔等：烟草甲两个羧酸酯酶基因的克隆及表达模式
１３７
ｏｐｍｅｎｔａｌｓｔａｇｅｓａｎｄｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔＣＯ２ ｓｔｒｅｓｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｂｙｕｓｉｎｇｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ （ｑＰＣＲ）． Ｔｈｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｓｏｆｔｗｏｇｅｎｅｓｗｅｒｅ１６９８ｂｐａｎｄ１６９５ｂｐ，ｅｎｃｏｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓｃｏｍｐｒｉｓｅｄｏｆ５６５ ａｎｄ５６４ａｍｉｎｏａｃｉｄｒｅｓｉｄｕｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｈｏｍｏｌｏｇｙａｎｄｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅａ ｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｂｏｔｈｏｆｔｈｅｍｈａｖｅｔｙｐｉｃａｌｃｏｎｓｅｒｖｅｄｍｏｔｉｆｓｏｆＣａｒＥｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｂｅｌｏｎｇｔｏβｓｕｂｆａｍｉ ｌｙ，ａｎｄｔｅｒｍｅｄａｓＬｓＣａｒＥＢ１ａｎｄＬｓＣａｒＥＢ２（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｏ：ＭＧ１８９６０１ａｎｄＭＧ１８９６０２），ｒｅ ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｑＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｗｏｇｅｎｅｓｗｅｒｅｂｏｔｈｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｌｌｔｅｓｔｅｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｓｔａ ｇｅｓ，ａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎｌａｔｅｌｙｌａｒｖａｅｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｅａｒｌｙ ｌａｒｖａｅ，ｐｕｐａｅａｎｄａｄｕｌｔｓ．ＩｎＬ．ｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅｌａｒｖａｅｅｘｐｏｓｅｄｔｏＣＯ２ｆｏｒ６ｈ，ｔｈｅｍＲＮＡｌｅｖｅｌｓｏｆＬｓＣａｒＥＢ１ ａｎｄＬｓＣａｒＥＢ２ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈａｔｏｆｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ． ＷｅｓｐｅｃｕｌａｔｅｄｔｈａｔＬｓＣａｒＥＢ１ａｎｄＬｓＣａｒＥＢ２ｍａｙｂｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｌａｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｓｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏＣＯ２ｓｔｒｅｓｓｉｎＬ．ｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌａｓｉｏｄｅｒｍａｓｅｒｒｉｃｏｒｎｅ；ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ；ｃｌｏｎｉｎｇ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎ；ＣＯ２ｓｔｒｅｓｓ
纤维素酶酶活性测定试剂盒说明书
纤维素酶（cellulase ，CL ）/羧甲基纤维素酶活性测定试剂盒说明书微量法100管/48样注 意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义：CL （EC 3.2.1.4）存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化羧甲基纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。
测定原理：采用蒽酮比色法测定CL 催化羧甲基纤维素钠降解产生的还原糖的含量。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、浓硫酸和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存； 临用前加入5mL 蒸馏水和45mL 浓硫酸充分溶解待用。
样品测定的准备：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W ，超声3s ，间隔10s ，重复30次）；8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
加样表和测定步骤：37℃振荡反应1h 后，90℃水浴15min （盖紧，防止水分散失），冷却后试剂名称 对照管 测定管 样本 50 50 试剂一（μL ） 90 试剂二（μL ） 370 370 蒸馏水（μL ）180908000g 25℃离心10min，取上清，得糖化液糖化液(μL)140 140试剂三(μL)260 260 混匀，90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，测620nm下吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。
假臭草精油对小菜蛾的毒力及酶活力的影响
假臭草精油对小菜蛾的毒力及酶活力的影响郭达伟【摘要】为了探讨外来入侵杂草假臭草的科学利用方法，用点滴法和熏蒸法测定了假臭草精油对小菜蛾的毒杀、拒食作用及其对小菜蛾体内羧酸酯酶和谷胱甘肽-s-转移酶活性的影响。
结果表明，假臭草精油对小菜蛾幼虫有一定的毒杀作用，点滴处理48 h致死中浓度为2.102×105 mg· L -1、熏蒸处理48 h致死中浓度为1.404×105 mg· L -1；假臭草精油对小菜蛾幼虫有明显的拒食作用，12 h拒食中浓度为2.69×104 mg· L-1，处理浓度为1.00×105 mg· L-1，拒食率可达100％，不同处理时间的拒食中浓度无明显差异。
假臭草精油处理小菜蛾幼虫会导致小菜蛾幼虫体内的羧酸酯酶和谷胱甘肽-s-转移酶活性的变化，但未呈现出规律性。
%To investigate the new methods and tools of alien weeds usage , effects of essential oil extracted from Prax-elis clematidea on enzyme activities (carboxylesterase and glutathione-s-transferase) of diamondback moth (DBM), Plutella xylostella, and its toxicity by using topical methods of application and fumigation were studied in this paper . Results showedthat LC 5 0 after 48 h of P.clematidea essential oil against DBM larvae was 2.102 ×10 5 mg· L-1 by topical application methed and was 1.404 ×10 5 mg· L-1 by fumigation treatment .The median antifeedant concentra-tion ( AFC50 ) of P.clematidea essential oil against DBM larvae was 2.69 ×10 4 mg· L-1 .The antifeedant rate could reach 100%when treating concentration was 1.00 ×10 5 mg· L-1 .Treating time had no significant effects on AFC 50 . The activities of carboxylesterase and glutathione-s-transferase of DBM larvae treated with P.clematidea essential oil were changed significantly but not in a regular pattern .【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】6页(P1278-1283)【关键词】假臭草精油;小菜蛾;毒力;羧酸酯酶;谷胱甘肽-s-转移酶活性【作者】郭达伟【作者单位】龙岩市农业科学研究所，福建龙岩364000【正文语种】中文【中图分类】S482.3小菜蛾是危害十字花科蔬菜的重要害虫。
羧酸酯酶(carboxylesterase ,CarE )活性测定试剂盒说明书
货号: QS2003 规格：50管/48样羧酸酯酶（carboxylesterase ，CarE ）活性测定试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。
CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。
CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。
测定原理：CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在450 nm光吸收增加速率，计算CarE活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶（棕色），4℃避光保存。
样本的前处理：1、细菌、细胞样品制备收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000g 4℃离心30min，取上清液待测。
2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心30min，取上清液待测。
3、液体：直接测定。
测定步骤：1. 分光光度计预热30min，调节波长到450 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入5μL蒸馏水和1000μL试剂二，迅速混匀，于450nm 处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s吸光值记为A2。
△A空白管=A2-A14. 测定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入5μL上清液和1000μL试剂二，迅速混匀，于450nm 处测定3min内吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s吸光值记为A4。
家蚕幼虫不同龄期体内主要解毒酶及其基因表达的性别差异
昆虫学报Acta Entomologica Sinica，May2010，53（5）：479－486ISSN0454-6296家蚕幼虫不同龄期体内主要解毒酶及其基因表达的性别差异刘海涛1，李兵1，2，赵国栋1，张婷1，高瑞娜1，卫正国1，2，沈卫德1，2，*（1.苏州大学医学部，江苏苏州2151232.苏州大学蚕桑研究所，江苏苏州215123）摘要：为了研究家蚕Bombyx mori性别与抗性的关系，本研究采用Thermo酶活性测定法和实时荧光定量PCR法，比较不同龄期雌雄家蚕起蚕体内解毒酶活性及其基因的表达差异。
结果表明：解毒酶及其基因在雌雄个体之间均存在明显差异，谷胱甘肽S-转移酶活性及其基因BmGSTe5的表达量在1 3龄表现为雌蚕高于雄蚕，4龄和5龄则表现相反，其中4龄雄蚕酶活性和基因表达量分别是雌蚕的3.65倍和5.11倍，推测与雄蚕精巢在4龄初迅速发育有关。
雄蚕乙酰胆碱酯酶活性在2 4龄分别是雌蚕的1.48，1.34和1.40倍；乙酰胆碱酯酶基因Bm-ace1在2龄和3龄性别差异不明显，Bm-ace2在2 4龄为雄性高于雌性，雄性分别是雌性的1.75，2.17和2.40倍，提示Bm-ace2对性别间该酶活性的差异影响较大。
羧酸酯酶活性在2龄和3龄雄蚕较高，分别是雌蚕的1.23和1.87倍，4 5龄雌蚕较高，分别是雄蚕的1.23和1.22倍；羧酸酯酶基因BmCarE-5和BmCarE-10在性别间的差异规律均与酶活性相反，即羧酸酯酶表现为较高的基因表达量对应较低的酶活性，推测在家蚕体内可能存在“羧酸酯酶突变”现象。
结果为研究基因表达产物的修饰方式及其功能开辟了新的研究路径，为家蚕性别与抗药性的研究提供了重要参考。
关键词：家蚕；性别；抗性；解毒酶；基因表达；酶活性中图分类号：Q965.9文献标识码：A文章编号：0454-6296（2010）05-0479-08Sexual differences in main detoxification enzymes and their gene expression in different instars of Bombyx mori larvaeLIU Hai-Tao1，LI Bing1，2，ZHAO Guo-Dong1，ZHANG Ting1，GAO Rui-Na1，WEI Zheng-Guo1，2，SHEN Wei-De1，2，*（1.Medical College，Soochow University，Suzhou，Jiangsu215123，China； 2.Institute of Sericulture，Soochow University，Suzhou，Jiangsu215123，China）Abstract：In order to study the relationship between resistance and sex in male and female Bombyx mori，Thermo enzyme activity measurement and Real Time fluorescent quantitative RT-PCR were performed to compare differences of the activities of detoxification enzymes in male and female B.mori larvae and their genetic expression of newly exuviated larvae at different instars.The research demonstrated significant differences in detoxification enzymes and their related genes existed between male and female B.mori larvae.The activities of glutathione S-transferases（GSTs）and BmGSTe5showed higher expression in males than those in1st－3rd instar females，while the opposite phenomena were found in4th and5th instar larvae.The ratios of enzyme activity and gene expression in the male and the female were3.65and5.11，respectively，which were attributed to the fast development of testis in4th instar larvae.The enzyme activities of acetylcholine esterase（AchE）in the male were1.48，1.34and1.40times compared to those of the female from2nd to4th instars，while its gene Bm-ace1showed insignificant differences between male and female B.mori at2nd and3rd instars.The expression amount of gene Bm-ace2in the male were1.75，2.17and2.40times as high as that in the female from2nd to4th instars，suggesting that Bm-ace2plays amore important role in sex differences.The enzyme activities of carboxylesterase（CarE）in male were1.23 and1.87times compared to that in female at2nd and3rd instars，and the activity ratios in the female and the male were1.22and1.23at4th and5th instars，respectively.The expression of BmCarE-5and BmCarE-10showed the opposite trend to enzyme activities between different sexes，i.e.，low-level gene基金项目：国家重点基础研究发展规划（“863”计划）项目（2006AA10A118）；江苏省高校自然科学基金项目（07KJB230102）作者简介：刘海涛，男，1984年生，山东泰安人，硕士研究生，主要从事家蚕抗药性相关研究，Tel.：0512-********；E-mail：moyun-jinchi @*通讯作者Corresponding author，Tel.：0512-********，E-mail：shenwd@收稿日期Received：2009-12-09；接受日期Accepted：2010-04-26480昆虫学报Acta Entomologica Sinica53卷expression and high carboxylesterase activity.We so speculate that carboxylesterase mutation phenomenon exists in B.mori.These results break a new road for research on modification of genetic expression products and their function，and make further contribution to the study of relations between the gender and the abilityof drug resistence in B.mori.Key words：Bombyx mori；sex；resistance；detoxification enzyme；gene expression；enzyme activity昆虫的代谢抗性是昆虫的主要解毒机制，已有的研究表明，与杀虫剂代谢相关的解毒酶的解毒能力增强是昆虫对杀虫剂产生抗性的主要原因之一（Hemingway and Karunaratne，1998；Devonshire et al.，1998；Kostaropoulos et al.，2001）。
丙酮酸羧化酶(PC)试剂盒使用说明
丙酮酸羧化酶（PC)试剂盒使用说明货号：BC0730规格：50管/48样产品内容：提取液：100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体47mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体×1支，4℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；产品说明：丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中，催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，是糖异生过程的第一个限速酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。
PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm下测定NADH氧化速率，即可反映PC活性。
需自备的仪器和用品：分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本的前处理组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1、称取约0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、将匀浆600g，4℃离心5min。
3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的PC（此步可选做）。
5、在步骤④的沉淀中加入1mL提取液，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体PC活性测定。
二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟；用不完的试剂4℃保存一周；试剂四的配制：在试剂四瓶中加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂四和900μL工作液，立即混匀，记录340nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算A=A1-A2。
植酸酶活性检测试剂盒说明书 微量法
植酸酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC3145规格：100T/48S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
缓冲液：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×2支，4℃保存，临用前加缓冲液4mL配制，现用现配。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
显色剂：粉剂×6瓶，4℃保存，临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解，再加1.6mL试剂三混匀。
样本处理产品说明：植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理植酸酶在一定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸收峰，根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅，超声溶解器，回旋式振荡器。
操作步骤：1.酶制剂：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：500~1000的比例（建议称取约0.001g，加入1mL提取液）第1页，共4页加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，待测。
2.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
3.饲料样品：饲料烘干粉碎，过40目筛，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
紫茉莉种子中对草地贪夜蛾的杀虫活性成分及杀虫机制
出ꎬ据报道草地贪夜蛾已对虱螨脲、氟胺氰菊酯和毒
理甜菜夜蛾( Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｅｘｉｇｕａ) 可破坏甜菜夜蛾的
目前针对紫茉莉种子中对草地贪夜蛾的杀虫活性成
分及杀虫机制的研究未见报道ꎮ
本试验基于前期紫茉莉种子各萃取物对草地贪
死蜱等 ４１ 种传统及新型杀虫剂产生了不同程度的
草地贪夜蛾( Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ Ｊ.Ｅ.Ｓｍｉｔｈ) 属
取物浓度 为 ０ ８ ｇ / ｍｌ 时 与 白 僵 菌 ( Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉ￣
( Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ) 昆虫ꎬ主要寄主为玉米
ｐａｖｏｎａｎａ) 化蛹时间延长、蛹质量减轻、化蛹率降低
鳞翅目( Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ) 夜蛾科( Ｎｏｃｔｕｉｄａｅ) 灰翅夜蛾属
江苏农业学报( Ｊｉａｎｇｓｕ Ｊ.ｏｆ Ａｇｒ.Ｓｃｉ.) ꎬ２０２４ꎬ４０(１) :４７￣５４
ｈ ｔｔｐ: / / ｊｓ ｎ ｙ ｘ ｂ.ｊａ ａ ｓ.ａ ｃ.ｃ ｎ
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詹 丽ꎬ李敬丹ꎬ付 璇ꎬ等. 紫茉莉种子中对草地贪夜蛾的杀虫活性成分及杀虫机制[ Ｊ] . 江苏农业学报ꎬ２０２４ꎬ４０(１) :４７￣５４.
购自云南省昆明市螺蛳湾中药材市场ꎬ种子阴干粉
碎备用ꎮ
ꎮ 利用植物杀虫活
１.１.２ 供试昆虫 草地贪夜蛾虫卵由河南省济源
ꎬ是未来
２６ ℃ ꎬ相对湿度７０％ ~ ８０％ꎬ光 / 暗周期 １６ ｈ / ８ ｈꎬ初
性成分制成的杀虫剂ꎬ具有无污染、作用方式多样、
易降解、低毒且不易产生耐药性等特点
[９]
害虫防治中很有潜力的化学农药替代品ꎮ
亡率最高ꎬ第 ７ ｄ 时为 ８２ ００％ꎮ 经 ＧＣ￣ＭＳ 分析ꎬ馏分 ２ 的主要化学成分为十三烷(９ ５９％) 、亚油酸乙酯( ５１ １４％)
马缨丹提取物对黄胸散白蚁体内酶活性的影响
马缨丹提取物对黄胸散白蚁体内酶活性的影响孙骊珠;罗兰;袁忠林【摘要】[Objective] In order to explore the action mechanisms,the effects of 3 different solvent extracts from Lantana camara (Verbenaceae) leaves on cellulose and detoxification enzyme in the termite Reticulitermes flaviceps (Isoptera: Rhinotermitidae) were studied.[Method] Termites were fed with filter paper saturated with 3 different solvent extracts of L.camara leaves for different times,and then we measured the enzymes activities of endo-β-1,4-glycanase (EG),exo-β-1,4-gluc anase (CBH),β-1,4-glucosidase (BG),carboxylesterase (CarE),glutathione-S-transferase (GSTs) and mixed-functional oxidase (MFO).[Result] The all extracts had to some degree inhibiting effects on the six enzymes activities,however there were differences in the inhibition with extracts of chloroform,ethyl acetate and petroleum ether at 6-72 h.As for the three cellulose enzymes,the chloroform extract had no significant effect on EG,but had significantly inhibiting effect on CBH and BG,especially on CBH with the highest inhibition rate of 17.61% at 72 h.The ethyl acetate extract also had inhibiting effect on the 3 enzymes activities,with relatively stronger inhibition on EG and BG,and the inhibition rate on EG was 27.18% at 48 h,and 29.28% at 24 h,respectively.The petroleum ether extract had no significant effect on CBH,but had strongly inhibited on EG and BG,with the highest inhibition rate of 39.89% on EG at 72 h.As for the three detoxification enzymes,the 3 extracts had no significant effect on CarE,buthad inhibiting effect on GSTs,which mainly occurred at 12-48 h.The ethyl acetate extract had the strongest inhibition,with the highest inhibition rate of 39.54% at 36 h.The MFO activities fluctuated after being treated with 3 extracts,and the relatively stronger inhibition on the 3 detoxification enzymes occurred at 12 h and 36 h.[Conclusion] The extracts of chloroform,ethyl acetate and petroleum ether could decrease the cellulose and detoxification enzymes activities,disrupting the normal physiological metabolism.%[目的] 探究马缨丹氯仿提取物、乙酸乙酯和石油醚萃取物对黄胸散白蚁体内纤维素酶系及解毒酶系活性的影响,初步探讨其作用机制.[方法] 采用滤纸片带毒饲喂,测定处理不同时间点其对黄胸散白蚁体内3种纤维素酶[内切-β-1,4-葡萄糖酶(EG)、外切-β-1,4-葡萄糖酶(CBH)、β-葡萄糖苷酶(BG)]和3种解毒酶[羧酸酯酶(CarE)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)、多功能氧化酶(MFO)]酶活性的影响.[结果] 马缨丹氯仿提取物、乙酸乙酯和石油醚萃取物在6~72 h对黄胸散白蚁体内6种酶活性的影响存在差异,主要表现为有一定的抑制作用.对3种纤维素酶活性的影响而言,氯仿提取物对EG酶活性无显著影响,但对CBH和BG酶有显著的抑制作用,尤其对CBH酶抑制作用较强,在72 h时抑制率最大,达17.61%;乙酸乙酯萃取物对3种酶均有抑制作用,对EG和BG酶活性抑制作用较强,在48 h时对EG的抑制率最大,为27.18%,在24 h时对BG酶活性抑制作用最大,为29.28%;石油醚萃取物对CBH酶活性无显著影响,但对其他2种酶抑制作用显著,对EG酶的抑制作用较强,在72 h时对此酶的抑制作用最大,为39.89%.对3种解毒酶活性影响而言,3种提取物对CarE酶的活性影响不大;对GSTs酶的影响主要在12~48 h,其中乙酸乙酯萃取物的抑制作用最强,36 h时抑制率最大,为39.54%;对FMO酶的抑制作用呈波动式变化,其中以12 h、36 h抑制作用较强.[结论] 马缨丹氯仿提取物、乙酸乙酯和石油醚萃取物能抑制黄胸散白蚁体内的纤维素酶和解毒酶,扰乱其正常的生理代谢功能.【期刊名称】《林业科学》【年(卷),期】2017(053)005【总页数】9页(P107-115)【关键词】黄胸散白蚁;马缨丹提取物;纤维素酶;解毒酶;杀虫作用机制【作者】孙骊珠;罗兰;袁忠林【作者单位】青岛农业大学农学与植物保护学院青岛 266109;青岛农业大学农学与植物保护学院青岛 266109;青岛农业大学农学与植物保护学院青岛 266109【正文语种】中文【中图分类】S718.7白蚁是地球上最为古老的社会性昆虫之一，是热带、亚热带重要的经济和生态昆虫，它们能协助分解纤维素使得营养物质得以循环，但它们能损坏建筑物、堤坝、作物和树木等，造成很大的经济损失(Verma et al.， 2009； Quarcoo et al.， 2010)。
二斑叶螨对阿维菌素_哒螨灵和甲氰菊酯的抗性选育及其解毒酶活力变化_赵卫东
昆虫学报Acta Entomologica Sinica ,December 2003,46(6):788-792ISSN 0454-6296基金项目:国家/十五0科技攻关项目(2001BA509B08)作者简介:赵卫东,男,1977年1月生,山东济宁人,农药学硕士,现在天津市出入境检验检疫局任职*通讯作者Author for correspondence,E -mail:kywang@s dau 1edu 1cn 收稿日期Received:2002-10-08;接受日期Accepted:2003-03-11二斑叶螨对阿维菌素、哒螨灵和甲氰菊酯的抗性选育及其解毒酶活力变化赵卫东,王开运*,姜兴印,仪美芹(山东农业大学植物保护学院,山东泰安 271018)摘要:在室内模拟田间药剂的选择压力,用阿维菌素、哒螨灵和甲氰菊酯对二斑叶螨Tetranychuc u rticae 逐代处理,以选育其抗性种群。
选育至12代,对阿维菌素抗性增长到6172倍,对哒螨灵抗性增长到1211倍,对甲氰菊酯抗性增长到1919倍。
酶抑制剂和离体酶活性的测定结果表明,阿维菌素抗性种群的多功能氧化酶和谷胱甘肽S -转移酶的活性均有所提高;二斑叶螨对哒螨灵的抗性可能与多功能氧化酶、羧酸酯酶的活性增强有关;而羧酸酯酶、多功能氧化酶和谷胱甘肽S -转移酶活性的增强可能是二斑叶螨对甲氰菊酯产生抗性的主要原因。
关键词:二斑叶螨;阿维菌素;哒螨灵;甲氰菊酯;抗性选育;解毒酶中图分类号:Q96519 文献标识码:A 文章编号:0454-6296(2003)06-0788-05Resistance selection by abamectin,pyridaben and fenpropathrin and activity change of detoxicant enzymes in Tetran ychus urticaeZHAO Wei_Dong,W ANG Kai_Yun *,JIANG Xing_Yin,YI Mei_Qin (Plant Protection College,Shandong Agricultural University,Taian,Shandong 271018,China)Abstract :The selection for resistance by abamectin,pyridaben and fenpropathrin to Tetranychuc urticae were carried out in laboratory,as well as activity change of detoxicant enzymes.The susceptible population of T .urticae was separately treated with abamectin,pyridaben and fenpropathrin imitating field che micals selection pressure in order to breed its re -sistance.The results showed that the resistance of T .urticae had reached 6172-fold to abamectin,1919-fold to fen -propathrin and 1211-fold to pyridaben after 12generations treatment.The resistance mechanism was evaluated by activity measurement of enzymic inhibitors and detoxicant enzymes.It was concluded that the rise of resistance to abamectin was mainly associated with increased activities of mixed -function oxidases and glutathione S -transferase;the resistance to pyr -idaben was attributed to increased activities of carboxylesterase and mixed -function oxidases;the main cause of resistance to fenpropathrin was the increased ac tivities of carboxylesterase and glutathione S -transferase.Key words :Tetranychus urticae ;abamectin;pyridaben;fenpropathrin;resistance -selection;detoxicant enzymes 二斑叶螨Tetranychus urticae Koch 是一种重要的世界性害螨。
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羧酸酯酶（Carboxylesterase，CarE）活性测定试剂盒使用说明产品简介：
哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。
CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。
CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；通过测定450nm光吸收增加速率，计算出CarE的活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、双蒸水和无水乙醇。
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体×1瓶（棕色），4℃避光保存（收货后一周内完成测定）。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称取约0.1g样品，加1.0mL试剂一，冰上充分研磨，15000rpm4℃离心30min，取上清液待测。
二、测定操作表：
1，分光光度计预热30min以上，调节波长到450nm，蒸馏水调零。
2，试剂二置于37℃水浴中预热30min以上。
3，空白管：在1mL玻璃比色皿中依次加入5μL蒸馏水和1000μL试剂二，迅速混匀后于450nm处测定3min内的吸光值变化，第10s吸光值记为A1，第190s
的吸光值记为A2。
注意：空白管只需做1-2次。
△A空白管=A2-A1。
4，测定管：在1mL玻璃比色皿中依次加入5μL上清液和1000μL试剂二，迅速混匀后于450nm处测定3min内的吸光值变化，第10s吸光值记为A3，第190s
的吸光值记为A4。
△A测定管=A4-A3。
CarE活力计算：
CarE活力单位定义：37℃中每分钟催化吸光值增加1，定义为一个CarE活力单位（U）。
1，按照蛋白浓度计算：
CarE酶活(U/mg prot)=(△A测定管–△A空白管)÷（Cpr×V样）÷T
=66.7×(△A测定管–△A空白管)÷Cpr
Cpr：蛋白浓度，mg/ml；V样：加入上清液体积，0.005mL；T：反应时间，3min。
蛋白浓度需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白含量测定试剂盒。
2，用样品质量计算：
CarE酶活(U/mg Fresh Weight)=(△A测定管–△A空白管)×（V样总÷V样）÷W ÷T
=66.7×(△A测定管–△A空白管)÷W
W：样品质量，g；V样总：上清液总体积，1mL；V样：加入上清液体积，0.005mL；T：反应时间，3min。