羧酸酯酶(Carboxylesterase,CarE)活性测定试剂盒使用说明
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羧酸酯酶(Carboxylesterase,CarE)活性测定试剂盒使用说明产品简介:
哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固蓝显色;通过测定450nm光吸收增加速率,计算出CarE的活性。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、双蒸水和无水乙醇。
产品内容:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体×1瓶(棕色),4℃避光保存(收货后一周内完成测定)。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取约0.1g样品,加1.0mL试剂一,冰上充分研磨,15000rpm4℃离心30min,取上清液待测。
二、测定操作表:
1,分光光度计预热30min以上,调节波长到450nm,蒸馏水调零。
2,试剂二置于37℃水浴中预热30min以上。
3,空白管:在1mL玻璃比色皿中依次加入5μL蒸馏水和1000μL试剂二,迅速混匀后于450nm处测定3min内的吸光值变化,第10s吸光值记为A1,第190s
的吸光值记为A2。注意:空白管只需做1-2次。△A空白管=A2-A1。
4,测定管:在1mL玻璃比色皿中依次加入5μL上清液和1000μL试剂二,迅速混匀后于450nm处测定3min内的吸光值变化,第10s吸光值记为A3,第190s
的吸光值记为A4。△A测定管=A4-A3。
CarE活力计算:
CarE活力单位定义:37℃中每分钟催化吸光值增加1,定义为一个CarE活力单位(U)。
1,按照蛋白浓度计算:
CarE酶活(U/mg prot)=(△A测定管–△A空白管)÷(Cpr×V样)÷T
=66.7×(△A测定管–△A空白管)÷Cpr
Cpr:蛋白浓度,mg/ml;V样:加入上清液体积,0.005mL;T:反应时间,3min。蛋白浓度需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白含量测定试剂盒。
2,用样品质量计算:
CarE酶活(U/mg Fresh Weight)=(△A测定管–△A空白管)×(V样总÷V样)÷W ÷T
=66.7×(△A测定管–△A空白管)÷W
W:样品质量,g;V样总:上清液总体积,1mL;V样:加入上清液体积,0.005mL;T:反应时间,3min。