天然药化槐米中芦丁的提取分离鉴定及槲皮素的制备
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天然药化 槐米中芦丁的提取分离、鉴定及槲皮素的制备
芦丁又叫芸香苷，广泛存在于植物中。其中以槐花米和荞麦叶中含量最高，使用最多的 是槐花米。 槐花米为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的未开放花蕾。味苦性凉、具有清热凉血、 止血的功效。炒炭常用来治疗各种出血症，如肠风便血、痔血、尿血、崩漏下血等。 槐花米的主要成分为芦丁。 芦丁可降低毛细血管脆性和调节渗透性。 临床上用作毛细血 管脆性引起的出血症，并常作为高血压症的辅助治疗药， 一、实验目的与要求 1．掌握酸碱法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握化学鉴别实验、苷的水解及薄层检查等方法在苷类化合物鉴定中的作用。 3.了解 UV 在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 二、实验原理 芦丁（rutin）C27H30O16：浅黄色针状结晶 mp174~178℃（含三分子结晶水） ；188℃（无 结晶水） 。难溶于冷水，可溶于热水、热甲醇、冷甲醇、热乙醇、冷乙醇，不溶于乙醚、氯 仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液，酸化后析出。全水解得槲皮素和葡萄糖及鼠 李糖。 槲皮素（quercetin）C15H10O7﹒2H2O:黄色结晶,mp313~314℃（2 分子结晶水） 。316℃ （无水物） 。能溶于冷乙醇、易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙脂、冰醋酸、吡啶、丙酮 等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等。
OH HO O OH
OH
OH OO
O CH2 OO OH OH OH
OH HO O OH OH O OH
CH3 OH OH
芦丁(rutin)
槲皮素（quercetin）
CH2O H O
OH O
OH
OH
H OH
OH
CH3
H OH
OH OH
葡萄糖 三、实验内容（12 学时） 1．芦丁的提取、精制
鼠李糖
槐花米粗粉（60g） 置 1000ml 烧杯中，加水 600ml，加入石灰乳（大约 2-3g） ，搅拌， 调 PH8-9，加热至微沸，保持 30 分钟（维持 PH8-9）趁热先用脱 脂棉过滤，然后抽滤。
残渣
滤液 在 60~70℃下浓盐酸调至 PH4~5，静置 1 小时， 抽滤，洗涤沉淀至中性。
滤液
沉淀（粗制芦丁） 将沉淀悬浮于 300ml 蒸馏水中，加热煮 沸 15 ຫໍສະໝຸດ Baidu钟趁热抽滤。
残渣
滤液 充分静置过滤，60~70℃下干燥。 芦丁（精制品）
2．芦丁的酸水解 称取精制品芦丁约 2g 研细，加 1%H2SO4150ml，投入 500ml 锥形瓶中，放沸石，直火沸 腾后，保持 2 小时，放冷后抽滤。
取上述溶液 1~2ml，然后滴加 2%的 ZrOCl2 的甲醇溶液，观察颜色变化（生成黄色的络 合物） 。然后向试管中加入 2%的枸橼酸甲醇溶液，观察颜色变化（黄色溶液显著褪色） 。 （3）Molish 反应 取上述溶液 1~2ml，置于试管中，加 10%等体积的α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴 加少量浓硫酸，观察现象（两液界面处产生紫红色的环） 。 4．芦丁和槲皮素的薄层色谱鉴别 样品：5%的槲皮素的乙醇溶液 5%的芦丁的乙醇溶液 对照品：5%的槲皮素标准品的乙醇溶液 5%的芦丁标准品的乙醇溶液 薄层板：硅胶 G 以 0.4%CMC-Na 为黏合剂制板，105℃活化 1 小时。 展开剂：CHCL3-MeOH-HCOOH（15：5：1） 显色剂： 喷 1%AlCl3 的乙醇溶液， 显黄色斑点 （紫外灯下观察显更加明显的黄色荧光） 。 5．糖的纸层析鉴别 层析滤纸：中速（5×20cm） 样品： 取水解芦丁之后的滤液 10ml， 水浴加热， 且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至中性， 过滤，取滤液并浓缩至 2ml 左右，放冷后，供纸层析。 对照品：1%葡萄糖标准品水溶液 1%鼠李糖标准品水溶液 展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5 上层） 显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺溶液后，105℃烘烤 5 分钟，显棕红色斑点。 6.光谱测定 芦丁溶液的配制 精密称取的芦丁纯品 1g，用无水甲醇溶解，并稀释至 10ml，从中吸取 5ml，置 50ml 容量瓶 中，用甲醇稀释至刻度。 A. 甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至 200～500nm 内进行扫描，重复一次，观察紫外光 谱。 B. 甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇钠溶液 3 滴后，立即测定，放置 5 分钟后 再测一次。 C. 三氯化铝光谱， 在盛有样品液的石英杯中， 加入三氯化铝 6 滴， 放置 1 分钟后进行测定。 测定后加入 3 滴盐酸溶液（盐酸：水＝1：1）再进行测定。 D. 醋酸钠光谱：取样品溶液约 3ml，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀（杯底剩有约 2mg 的醋酸钠） ，加入醋酸钠后两分钟内测定，5 分钟到 10 分钟后再测定一次。 E. 醋酸钠硼酸光谱：方法一：在测定用的盛有样品液和醋酸钠溶液的石英杯中加入足够量 的硼酸使成饱和溶液进行测定。本法适用于在加入醋酸钠 5 分钟后有分解现象者，方法 二：于 3ml 样品中加入 5 滴硼酸饱和溶液后，快速加入醋酸钠，立即测定。
滤液（作糖份鉴定用）
沉淀 水洗，粗品用 95%乙醇大 约 20ml 回流溶解，趁热 过滤，放置，加水至浓度为 50%左右，放置。 黄色细针状结晶（槲皮素） 抽滤，60~70℃下干燥
3．芦丁的定性反应 取芦丁 3-4mg，加入甲醇 5-6ml 使溶解，分成 3 份做下述实验。 （1）盐酸-镁粉反应 取上述溶液 1~2ml，加少量镁粉，再加 2 滴浓盐酸，振摇，观察颜色变化（逐渐出现红 至紫红色） 。 （2）锆盐-枸橼酸反应
芦丁又叫芸香苷，广泛存在于植物中。其中以槐花米和荞麦叶中含量最高，使用最多的 是槐花米。 槐花米为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的未开放花蕾。味苦性凉、具有清热凉血、 止血的功效。炒炭常用来治疗各种出血症，如肠风便血、痔血、尿血、崩漏下血等。 槐花米的主要成分为芦丁。 芦丁可降低毛细血管脆性和调节渗透性。 临床上用作毛细血 管脆性引起的出血症，并常作为高血压症的辅助治疗药， 一、实验目的与要求 1．掌握酸碱法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握化学鉴别实验、苷的水解及薄层检查等方法在苷类化合物鉴定中的作用。 3.了解 UV 在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 二、实验原理 芦丁（rutin）C27H30O16：浅黄色针状结晶 mp174~178℃（含三分子结晶水） ；188℃（无 结晶水） 。难溶于冷水，可溶于热水、热甲醇、冷甲醇、热乙醇、冷乙醇，不溶于乙醚、氯 仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液，酸化后析出。全水解得槲皮素和葡萄糖及鼠 李糖。 槲皮素（quercetin）C15H10O7﹒2H2O:黄色结晶,mp313~314℃（2 分子结晶水） 。316℃ （无水物） 。能溶于冷乙醇、易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙脂、冰醋酸、吡啶、丙酮 等，不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等。
OH HO O OH
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O CH2 OO OH OH OH
OH HO O OH OH O OH
CH3 OH OH
芦丁(rutin)
槲皮素（quercetin）
CH2O H O
OH O
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H OH
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CH3
H OH
OH OH
葡萄糖 三、实验内容（12 学时） 1．芦丁的提取、精制
鼠李糖
槐花米粗粉（60g） 置 1000ml 烧杯中，加水 600ml，加入石灰乳（大约 2-3g） ，搅拌， 调 PH8-9，加热至微沸，保持 30 分钟（维持 PH8-9）趁热先用脱 脂棉过滤，然后抽滤。
残渣
滤液 在 60~70℃下浓盐酸调至 PH4~5，静置 1 小时， 抽滤，洗涤沉淀至中性。
滤液
沉淀（粗制芦丁） 将沉淀悬浮于 300ml 蒸馏水中，加热煮 沸 15 ຫໍສະໝຸດ Baidu钟趁热抽滤。
残渣
滤液 充分静置过滤，60~70℃下干燥。 芦丁（精制品）
2．芦丁的酸水解 称取精制品芦丁约 2g 研细，加 1%H2SO4150ml，投入 500ml 锥形瓶中，放沸石，直火沸 腾后，保持 2 小时，放冷后抽滤。
取上述溶液 1~2ml，然后滴加 2%的 ZrOCl2 的甲醇溶液，观察颜色变化（生成黄色的络 合物） 。然后向试管中加入 2%的枸橼酸甲醇溶液，观察颜色变化（黄色溶液显著褪色） 。 （3）Molish 反应 取上述溶液 1~2ml，置于试管中，加 10%等体积的α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴 加少量浓硫酸，观察现象（两液界面处产生紫红色的环） 。 4．芦丁和槲皮素的薄层色谱鉴别 样品：5%的槲皮素的乙醇溶液 5%的芦丁的乙醇溶液 对照品：5%的槲皮素标准品的乙醇溶液 5%的芦丁标准品的乙醇溶液 薄层板：硅胶 G 以 0.4%CMC-Na 为黏合剂制板，105℃活化 1 小时。 展开剂：CHCL3-MeOH-HCOOH（15：5：1） 显色剂： 喷 1%AlCl3 的乙醇溶液， 显黄色斑点 （紫外灯下观察显更加明显的黄色荧光） 。 5．糖的纸层析鉴别 层析滤纸：中速（5×20cm） 样品： 取水解芦丁之后的滤液 10ml， 水浴加热， 且在搅拌下加适量碳酸钡细粉至中性， 过滤，取滤液并浓缩至 2ml 左右，放冷后，供纸层析。 对照品：1%葡萄糖标准品水溶液 1%鼠李糖标准品水溶液 展开剂：正丁醇：醋酸：水（4：1：5 上层） 显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺溶液后，105℃烘烤 5 分钟，显棕红色斑点。 6.光谱测定 芦丁溶液的配制 精密称取的芦丁纯品 1g，用无水甲醇溶解，并稀释至 10ml，从中吸取 5ml，置 50ml 容量瓶 中，用甲醇稀释至刻度。 A. 甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至 200～500nm 内进行扫描，重复一次，观察紫外光 谱。 B. 甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇钠溶液 3 滴后，立即测定，放置 5 分钟后 再测一次。 C. 三氯化铝光谱， 在盛有样品液的石英杯中， 加入三氯化铝 6 滴， 放置 1 分钟后进行测定。 测定后加入 3 滴盐酸溶液（盐酸：水＝1：1）再进行测定。 D. 醋酸钠光谱：取样品溶液约 3ml，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀（杯底剩有约 2mg 的醋酸钠） ，加入醋酸钠后两分钟内测定，5 分钟到 10 分钟后再测定一次。 E. 醋酸钠硼酸光谱：方法一：在测定用的盛有样品液和醋酸钠溶液的石英杯中加入足够量 的硼酸使成饱和溶液进行测定。本法适用于在加入醋酸钠 5 分钟后有分解现象者，方法 二：于 3ml 样品中加入 5 滴硼酸饱和溶液后，快速加入醋酸钠，立即测定。
滤液（作糖份鉴定用）
沉淀 水洗，粗品用 95%乙醇大 约 20ml 回流溶解，趁热 过滤，放置，加水至浓度为 50%左右，放置。 黄色细针状结晶（槲皮素） 抽滤，60~70℃下干燥
3．芦丁的定性反应 取芦丁 3-4mg，加入甲醇 5-6ml 使溶解，分成 3 份做下述实验。 （1）盐酸-镁粉反应 取上述溶液 1~2ml，加少量镁粉，再加 2 滴浓盐酸，振摇，观察颜色变化（逐渐出现红 至紫红色） 。 （2）锆盐-枸橼酸反应