体外抗菌实验培训课件

凡由检品中检出大肠埃希菌时，表明该药品可能
被粪便污染，患者服用后，有被粪便中可能存在的其 他肠道致病菌和寄生虫卵等病原体感染的危险。因此， 口服药品中不得检出大肠埃希菌。
检验要点：
(1)形态：革兰阴性短小无芽胞杆菌。
(2)分离培养：在伊红美兰（EMB)培养基上分解乳
糖，产生紫黑色、有金属光泽的菌落。
石炭酸系数（又称酚系数）
是以石炭酸为标准，在规定的试验条件下，作用 一定时间，将待测的化学消毒剂与石炭酸对伤寒沙门 菌或金黄色葡萄球菌的杀菌效力相比较， 所得杀菌 效力的比值。
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棋盘格法
是由于在试验时，含两种不同浓度 药物的试管排列呈棋盘状而得名， 用以 评价两种药物同时用不同浓度进行联合 试验时的抗菌活性。
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（二）特殊药品的无菌检查法
如果阳性对照管不长菌，则必须进行特殊处 理后方可按照一般药品的无菌检查法进行。
1．油类药物的无菌检查
一般油剂因与常规培养基不混溶，药品中的 微生物不易生长，所以一般可采用吐温培养基， 其余同一般药品无菌检查法。
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2．抗菌药物或含防腐剂药物的无菌检查
板上菌落呈无色或粉红色。二糖铁培养基TSl上分
解葡萄糖、产酸产气，不分解乳糖、蔗糖，有动力、
产生黑色沉淀。
(3)生化反应：见表21—l。
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第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法：
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀 菌浓度(MBC)。可以用液体培养基，也可用固体培 养基。
1．液体培养基连续稀释法 2．固体培养基连续稀释法
分平板法和斜面 法。
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琼脂扩散法：
是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以 抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作 用强弱。
如果被检药品具有抗菌作用，阳性对照管及试验 管均可能不长菌。因此在进行无菌检查前必须采用一 些方法除去药物本身的抗菌作用，然后再依上述方法 进行无菌检查。
(1)加入灭活剂 (2)微孔滤膜法 (3)稀释法 (4)离心沉淀法
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第二节 口服药及外用药物的微生物学检查
目前对口服药及外用药物的微生物 学检验主要是微生物限量检验，即限制 口服药及外用药的微生物总数和限制病 原微生物种类的系列测定项目。
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细菌总数的测定:
是了解被检药品在单位重量或体积(每克 或每毫升)内所含有的活菌数(实际是需氧菌 的活菌数)，以判断供试药物被细菌污染的程 度，是对该药品整个生产过程的卫生学总评 价的一个重要依据。
体外抗菌实验17源自霉菌和酵母菌总数的测定：是考察供试药物中每克或每毫升所含 的活霉菌和酵母菌的总数，以判明检品被 真菌污染的程度。
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纸条试验
即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有 一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或 无影响来判断它们在联合应用时的效应。
梯度平板纸条试验
需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于 平板表面，取滤纸条浸透另一待检药液，按梯度平板 中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后，如该 待检药液对平板内的药物有加强作用，则可见沿纸条 两边的抑菌区被扩大。
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病原菌检验的原则：
病原菌的形态和培养特征的观察是鉴别的基 本要求，对生化反应、血清学反应、动物毒力试 验等项目的要求因菌而异，各有其侧重点。
一般的检测程序为：
药物的准备或预处理→增菌培养→分离培养→纯 培养→染色镜检、生化试验、血清学试验、动物 试验等→结果判断。
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1、大肠埃希菌
是将待检药物先以合适的液体培养基在试管
内进行连续稀释，每管内再加入一定量的试验菌
液，培养后可得该药物的MIC，取MIC终点以上
未长菌的各管培养液，分别移种于另一无菌平板
上，培养后凡平板上无菌生长的药物最低浓度即
为该药物的MBC(或MLC)。
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活菌计数法
是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌， 作用一定时间后，取样进行活菌计数，从存活的微生 物数计算出药物对微生物的致死率。
(3)生化反应：乳糖发酵试验：产酸产气或产酸不产
气；IMViC试验：++--，注意与产气杆菌相区别。
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2、沙门菌
检验要点：
(1)形态：革兰阴性短小杆菌。
(2)分离培养：SS琼脂上，沙门菌不分解乳糖，产
生H2S，菌落无色、透明或半透明，圆形，边缘整 齐，表面光滑湿润，菌落中心呈黑褐色。EMB平
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我国规定的项目有：
细菌总数测定，霉菌总数测定。病原菌 (大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、沙门菌和破伤风梭菌)的检验和活螨的检 验等。
判断合格与否的标准是：
口服药及外用药中微生物总量须低于规定
限量外，并须在口服药物每克或每毫升中不得 含有大肠埃希菌、沙门菌；外用药物每克或每 毫升中不得含有铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌和破伤风梭菌，此外均不得检出活螨。
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第三节 联合抗菌试验
在药学上作中，常需检查两种抗菌药物
在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不 同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强 药物抗菌作用的为协同(synergism)；减弱药 物作用的为拮抗(antagonism)；相互无影响的 为无关(indjfference)；作用为二者之和的为累 加(addition)。
1、滤纸片法 适用于新药的初筛试验。
2．打孔法 适于药物血浓度的监测。
3．挖沟法 适用于在一个平板上试验一种药物对几种试验
菌的抗菌作用。
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第二节 杀菌试验
用以评价药物对微生物的致死活性。
最低杀菌浓度：
指该药物能杀死细菌的最低浓度。从对微生 物广义而言，也可称之为最低致死浓度(MLC)。
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第四节 体外抗菌试验的影响因素
1．试验菌 在抗菌试验中所用试验菌一般应该用标
准菌株。 2．培养基
培养基的质量须加控制。 3．抗菌药物
药物的浓度和总量直接影响抗菌试验的 结果，需要精确配制。
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第二十一章 药物制剂的微生物学检查
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药物制剂的微生物学检查
药物制剂的微生物学检查主要包 括无菌检验，细菌总数测定，霉菌总 数测定，以及病原菌的检验与螨的检 测等。