核酸的理化性质

四.变性与复性
（二） 复性 3. 分子杂交 不同来源的DNA分子放在一起热变性 然后慢慢冷却， 不同来源的 DNA分子放在一起热变性， 然后慢慢冷却 ， DNA 分子放在一起热变性， 让其复性。这些异源DNA RNA)之间有互补的序列或部分 DNA（ 让其复性 。 这些异源 DNA （ RNA) 之间有互补的序列或部分 互补的序列，则复性时会形成“杂交分子” 互补的序列，则复性时会形成“杂交分子”。
四.变性与复性 (一) 变 性 一
1. 变性的概念 核酸在某些物理或化学因素 的作用下 ， 其 空 核酸在某些 物理或化学因素的作用下 物理或化学因素 的作用下， 间结构发生改变 ， 从而引起理化性质的改变及生 间结构 发生改变， 发生改变 物活性的降低或丧失。 物活性的降低或丧失。 A260值升高 粘度下降 沉降系数加快 ……
增色效应常可用来衡量 DNA变性的程度。 DNA变性的程度 变性的程度。
(一 ) 变 性
4. 热变性曲线(熔解曲线)
发生热变性的过程中， 随温度的变化曲线。 在DNA发生热变性的过程中，A260随温度的变化曲线。 发生热变性的过程中
变性百分率 A260
不 同 DNA 的 熔 解 曲线不同， 曲线不同 ， 但很 类似。 类似。都是 —— S 形曲线
(一 ) 变 性
RNA的变性 RNA的变性 RNA含局部双螺旋，也可发生变性。 RNA含局部双螺旋，也可发生变性。 含局部双螺旋
特点： 特点： 变性效应不如DNA明显 变性效应不如DNA明显 增色效应的跳跃较平缓 Tm值较低 Tm值较低
四.变性与复性
（二） 复性
1. 复性的概念
变性DNA在适当条件下， 变性DNA在适当条件下，又可使两条彼此分开的 DNA在适当条件下 链重新缔合成为双螺旋结构，此过程成为复性。 链重新缔合成为双螺旋结构，此过程成为复性。 复性 退火：热变性的DNA在缓慢冷却的条件下的复性过程。 退火：热变性的DNA在缓慢冷却的条件下的复性过程。 DNA在缓慢冷却的条件下的复性过程
第四节
核酸的理化性质
一.一般的物理性质 1. 形 态
DNA —— 白色纤维状固体 白色纤维状 纤维状固体 RNA —— 白色粉末状固体 白色粉末状 粉末状固体
一.一般的物理性质 2. 溶解性
微溶于水 微溶于水 不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂 不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂 乙醇 RNA核蛋白体 RNP)易溶于 RNA核蛋白体(RNP)易溶于0.14mol/L的NaCl溶液 核蛋白体( 易溶于0.14mol/L的NaCl溶液 DNP可溶于高浓度 DNP可溶于高浓度(1~2mol/L)的NaCl溶液 可溶于高浓度(1~2mol/L)的NaCl溶液
3. 增色效应
变性后的DNA对260nm的紫外光吸收值比变性 对 变性后的 的紫外光吸收值比变性 前明显升高，这种现象称为增色效应 增色效应。 前明显升高，这种现象称为增色效应。 这是由于变性的DNA双螺旋解体，藏于螺旋内 双螺旋解体， 这是由于变性的 双螺旋解体 部的碱基暴露出来。 部的碱基暴露出来。
四.变性与复性
（二） 复性
2. 减色效应
当变性的DNA经复性以重新形成双螺旋结构时， 当变性的DNA经复性以重新形成双螺旋结构时， DNA经复性以重新形成双螺旋结构时 其溶液的A260值则减小，这种现象称为减色效应。 减色效应。 其溶液的A 值则减小，这种现象称为减色效应 减色效应常可用来衡量DNA复性的程度。 减色效应常可用来衡量DNA复性的程度。 DNA复性的程度
一.一般的物理性质 3. 粘 度
DNA溶液粘度极高 DNA溶液粘度极高 (因其分子直径小而长度大) 因其分子直径小而长度大) RNA溶液粘度要小得多 RNA溶液粘度要小得多
核酸变性或降解后，粘度降低 核酸变性或降解后，
二. 两性解离
核酸既含有酸性的磷酸基团 ， 又含有弱碱性 核酸既含有 酸性的磷酸基团， 酸性的磷酸基团 的碱基， 故可发生两性解离。 的碱基 ， 故可发生两性解离 。 其解离状态随溶液 值而改变。 的pH值而改变。 值而改变 由于磷酸基团的酸性很强，所以pI（等电点） 由于磷酸基团的酸性很强， 所以 （ 等电点） 较低，整个分子相当于多元酸。 较低，整个分子相当于多元酸。 利用核酸的两性解离可以通过调节核酸溶液 来沉淀核酸， 的pH来沉淀核酸，也可通过电泳分离纯化核酸。 来沉淀核酸 也可通过电泳分离纯化核酸。
(一 ) 变 性
2. 引起变性的因素
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物理因素： 热变性） 热（热变性） 紫外、辐射等 紫外、
使氢键断裂， 使氢键断裂，破
化学因素： 过酸（酸变性） 过酸（酸变性） 过碱（碱变性） 过碱（碱变性） 有机溶剂 尿素…… 尿素……
坏碱基堆集力，从 而引起核酸二级结 构的破坏。 构的破坏。
(一 ) 变 性
100
50
0 Tm 温度
(一 ) 变 性
5. 解链温度(Tm值)
影响Tm值的因素： 影响Tm值的因素： 值的因素 DNA分子中 碱基对的含量 DNA分子中GC碱基对的含量 分子中GC DNA分子中 含量高 DNA分子中GC含量高，则Tm值大 分子中GC含量高， Tm值大
DNA的溶液环境 DNA的溶液环境 如离子强度、 如离子强度、pH
核酸的杂交广泛应用于分子遗传学中。 核酸的杂交广泛应用于分子遗传学中。
100
50
0 温度
(一 ) 变 性
5. 解链温度(Tm值) ( melting temperature) 又称 熔解温度、熔点 熔解温度、
变性百分率 A260
指DNA的变性达 DNA的 到50%，即增色效 50% 应达到一半时的 温度 DNA的Tm值一 DNA的Tm值一 般在70~85℃ 般在70~85℃之间
三. 紫外吸收性质 嘌呤和嘧啶具有共轭双键， 嘌呤和嘧啶具有共轭双键 ， 能强烈吸收紫 外光 。 在 260nm处有最大吸收峰 。 对于纯的 处有最大吸收峰 DNA或RNA，可以通过测得 或 ，可以通过测得A260来推测其核酸 来推测其核酸 含量。 含量。 A260/ A280值可以反映核酸的纯度。 值可以反映核酸的纯度。 纯的DNA：A260/ A280 =1.8 ： 纯的 纯的RNA：A260/ A280 =2.0 ： 纯的