第二章色谱法应用基础薄层色谱
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? 亲水性混合物TLC用固定相
? 纤维素、硅藻土、聚酰胺和离子交换树脂
常用TLC吸附剂
? 硅胶（Silica Gel） ? 多孔网状结构的中性或弱酸性吸附剂，适用
于酸性及中性物质的分离（大部分有机物均 可），碱性化合物能与硅胶作用，拖尾或无 法展开
? 氧化铝 ? 可用于碱性或中性化合物的分离
? 纤维素 ? 亲水性强，用于亲水性化合物的分离
第二章 色谱法应用基础 2.2 薄层色谱
2.2.1 薄层色谱的特点及原理
? 原理
? 吸附剂—载体（固定相） ? 流动相经吸附剂，借毛细管作用上升 ? 根据待分离组分对流动相、固定相相对亲和力不
同加以分离。 ? 核心：吸附、解析、再吸附、再解析 …… ? 常用：吸附薄层色谱
薄层色谱的特点
? 方法简便、价格低廉 ? 分析快速（GC、HPLC时间长） ? 在色谱板上检测样品，不丢失组分 ? 可使用多种显色剂，既能检测所有组分，也
另一机理
b 酚类化合物
? 喷洒重氮盐，形成有色 染料斑点
? 2tCl 3显色，黄褐色
? 氨水（熏）显色
c 醛类化合物
d 其它方法（通用）
? 高锰酸钾氧化法
? 硫酸法
? 酸碱指示剂 pH指示剂，溴酚蓝，甲基橙等
2）物理法
? a 紫外下观察化合物荧光 ? 萘、蒽醌的磺化物 256nm
? b 荧光法 ? 采用荧光吸附剂，或采用荧
? 显色特性，官能团的专属性显色剂（与标样一致） ? 原位扫描，吸收峰最大吸收波长与标样一致
? 与其他方式联用，将斑点洗脱收集，使用 GC、 HPLC和IR等联用分析与标样一致
2.2.7 定量分析
? 目测比较法（斑点大小，颜色深浅，误差大） ? 测定面积法（比目测法稍高） ? 洗脱测定法（将斑点处吸附剂取下，用溶剂洗脱
2.2.8 发展趋势
? 高效化 ? 微量化 ? 灵敏检测手段 ? 实用化、自动化 ? 定量化
作业
1、a）下列化合物选择适宜的显色剂；b）下 列化合物TLC分析时适宜的吸附剂。
十二烷基苯磺酸钠 十二醇聚氧乙烯醚 聚丙 烯酸钠
可只检测指定组分 ? 可在同一色谱板上同时分离多个样品（定性、
定量分析和跟踪反应过程，二次展开） ? 所需样品量少，5～10mg ? 灵敏度高
TLC与HPLC比较
展开形 流速控 平衡时 分析样 板高
式
制
间
品数 /μm
TLC 展开 毛细管 短 同时多 ～30
作用
个
HPLC 洗脱 泵调节 不定 一个 2～5
后，使用比色法、分光光度计等测量）
? 薄层扫描仪
? 吸收测定法（钨灯，氘灯）
? 反射法测定：灵敏度低，重现性好 ? 透射法测定：灵敏度高，易受干扰
? 荧光测定（氘灯，汞灯）
? 直接法（斑点能产生荧光） ? 荧光减退法（斑点能吸收紫外光，但不产生荧光）
? 扫描方式
? 线性扫描（光束比斑点略长，单向扫描） ? 锯齿扫描（微小正方形光束，不规则斑点）
薄层类型
疏水（亲脂） 亲水无机物、 相似的疏水 弱极性或中 亲水极性有 物质 等极性有机 机物 化合物
活性吸附剂
含水缓冲液或 极性很强的有 机液体的吸附 剂，无活性
含非极性固 定液的吸附 剂，无活性
方法
吸附薄层法 正相分配薄 反相分配薄
层色谱
层色谱
流动相
多种有机溶 用水或缓冲 极性溶剂
剂
液饱和的有
机溶剂
常用的薄层 硅胶、氧化 纤维素、无 改性纤维素、
材料
铝
活性硅胶 硅烷化硅胶
2.2.3 展开剂及三者关系图
? 1）常用展开剂洗脱能力（溶剂从吸附剂上解 脱被吸附物质的能力）
? 石油醚（己烷、戊烷等）＜环己烷＜二硫化 碳＜四氯化碳＜四氯乙烯＜苯＜二氯甲烷＜ 三氯甲烷＜乙醚（无水）＜四氢呋喃＜乙酸 乙酯（无水）＜甲基乙基甲酮＜正丁醇＜乙 醇＜甲醇＜水＜冰乙酸＜吡啶＜有机酸
一般有机物的极性由小到大排列顺序
?饱和烃＜不饱和烃＜醚＜酯 ＜醛、 酮 ＜胺 ＜羟基化合物＜酸 ＜离子 化合物（如R+NH3， RCOO-等）
2）常用吸附剂的吸附能力
? 蔗糖＜纤维素 ＜淀粉＜碳酸钙 ＜硫酸钙 ＜ 碳酸镁 ＜硅胶＜活性炭 ＜氧化镁 ＜三氧化 二铝
? 亲脂性化合物TLC用固定相
? 三氧化二铝、硅胶、乙酰纤维素等
? 对于碱性化合物 ? 中性展开剂 Rf＞酸性展开剂的 Rf
? 溶质的性质
? 极性大Rf值降低，极性小 Rf值增大。 ? 分子量大， Rf值降低
? 其它影响因素
? 薄层厚度、展开距离、展缸内蒸汽的饱和度、点 样量、薄层含水量等
? 3、Rf值与定量分析
? 根据标样的 Rf值与试样的Rf值进行比较进行定性分析
? 洗脱能力逐渐增强
2）三者关系图
2.2.4 TLC展开方式
? 上行展开 ? 下行展开 ? 一次展开 ? 二次展开 ? 单向展开 ? 双向展开 ? 径向展开
2.2.5 TLC显色方法
? a 芳胺类
1）化学法
? Ehrlich试剂
1,2-萘醌-4-磺酸
? 菲醌（主要用于邻苯二胺类）
? 茚三酮（用于鉴定脂肪胺、氨基酸等） ? 如L-丙氨酸、甲酯、（ S）-2-氨基丙醇等鉴定
按照吸附剂（固定相）分类 TLC可分为
? 吸附薄层色谱
? 是以吸附剂（固定相）和被分离物之间的吸附作 用为基础进行样品分离的形式
? 分配薄层色谱
? 利用被分离物在流动相和固定相的相对极性差异 来分离的形式
吸附薄层色谱和分配色谱的主要特点
方法
吸附薄层法 正相分配薄 反相分配薄
层色谱
层色谱
主要分离对 象
光物质溶液处理滤纸
? F254
? c 碘熏法
2.2.6 定性分析
? 1、Rf值 ? 又称比移值，是溶质的
运动速度与展开剂的运 动速度之比值。
? 2、影响Rf值的因素 ? 吸附剂的性质，吸附剂极性大，Rf ，反之Rf ? 展开剂的极性，极性大Rf ，反之 Rf
展开剂的酸碱性
? 对于酸性化合物 ? 中性展开剂 Rf＞碱性展开剂的 Rf
TLC与HPLC比较
有效板 检测方 溶剂用 溶剂更 固定相
数
式
量
换Βιβλιοθήκη Baidu
TLC ＜600 静态
少
易 一次性
HPLC 10000 动态
多
难 反复使 用
2.2.2 薄层色谱性质
? 样品（待测混合物）性质 ? 固定相 ? 流动相（展开剂） 重点选择展开剂
1）样品（待测混合物）性质
? 溶解性：极性、弱极性和非极性溶剂溶解性 ? 酸碱性：pH值 ? 极性：相似相溶
? 纤维素、硅藻土、聚酰胺和离子交换树脂
常用TLC吸附剂
? 硅胶（Silica Gel） ? 多孔网状结构的中性或弱酸性吸附剂，适用
于酸性及中性物质的分离（大部分有机物均 可），碱性化合物能与硅胶作用，拖尾或无 法展开
? 氧化铝 ? 可用于碱性或中性化合物的分离
? 纤维素 ? 亲水性强，用于亲水性化合物的分离
第二章 色谱法应用基础 2.2 薄层色谱
2.2.1 薄层色谱的特点及原理
? 原理
? 吸附剂—载体（固定相） ? 流动相经吸附剂，借毛细管作用上升 ? 根据待分离组分对流动相、固定相相对亲和力不
同加以分离。 ? 核心：吸附、解析、再吸附、再解析 …… ? 常用：吸附薄层色谱
薄层色谱的特点
? 方法简便、价格低廉 ? 分析快速（GC、HPLC时间长） ? 在色谱板上检测样品，不丢失组分 ? 可使用多种显色剂，既能检测所有组分，也
另一机理
b 酚类化合物
? 喷洒重氮盐，形成有色 染料斑点
? 2tCl 3显色，黄褐色
? 氨水（熏）显色
c 醛类化合物
d 其它方法（通用）
? 高锰酸钾氧化法
? 硫酸法
? 酸碱指示剂 pH指示剂，溴酚蓝，甲基橙等
2）物理法
? a 紫外下观察化合物荧光 ? 萘、蒽醌的磺化物 256nm
? b 荧光法 ? 采用荧光吸附剂，或采用荧
? 显色特性，官能团的专属性显色剂（与标样一致） ? 原位扫描，吸收峰最大吸收波长与标样一致
? 与其他方式联用，将斑点洗脱收集，使用 GC、 HPLC和IR等联用分析与标样一致
2.2.7 定量分析
? 目测比较法（斑点大小，颜色深浅，误差大） ? 测定面积法（比目测法稍高） ? 洗脱测定法（将斑点处吸附剂取下，用溶剂洗脱
2.2.8 发展趋势
? 高效化 ? 微量化 ? 灵敏检测手段 ? 实用化、自动化 ? 定量化
作业
1、a）下列化合物选择适宜的显色剂；b）下 列化合物TLC分析时适宜的吸附剂。
十二烷基苯磺酸钠 十二醇聚氧乙烯醚 聚丙 烯酸钠
可只检测指定组分 ? 可在同一色谱板上同时分离多个样品（定性、
定量分析和跟踪反应过程，二次展开） ? 所需样品量少，5～10mg ? 灵敏度高
TLC与HPLC比较
展开形 流速控 平衡时 分析样 板高
式
制
间
品数 /μm
TLC 展开 毛细管 短 同时多 ～30
作用
个
HPLC 洗脱 泵调节 不定 一个 2～5
后，使用比色法、分光光度计等测量）
? 薄层扫描仪
? 吸收测定法（钨灯，氘灯）
? 反射法测定：灵敏度低，重现性好 ? 透射法测定：灵敏度高，易受干扰
? 荧光测定（氘灯，汞灯）
? 直接法（斑点能产生荧光） ? 荧光减退法（斑点能吸收紫外光，但不产生荧光）
? 扫描方式
? 线性扫描（光束比斑点略长，单向扫描） ? 锯齿扫描（微小正方形光束，不规则斑点）
薄层类型
疏水（亲脂） 亲水无机物、 相似的疏水 弱极性或中 亲水极性有 物质 等极性有机 机物 化合物
活性吸附剂
含水缓冲液或 极性很强的有 机液体的吸附 剂，无活性
含非极性固 定液的吸附 剂，无活性
方法
吸附薄层法 正相分配薄 反相分配薄
层色谱
层色谱
流动相
多种有机溶 用水或缓冲 极性溶剂
剂
液饱和的有
机溶剂
常用的薄层 硅胶、氧化 纤维素、无 改性纤维素、
材料
铝
活性硅胶 硅烷化硅胶
2.2.3 展开剂及三者关系图
? 1）常用展开剂洗脱能力（溶剂从吸附剂上解 脱被吸附物质的能力）
? 石油醚（己烷、戊烷等）＜环己烷＜二硫化 碳＜四氯化碳＜四氯乙烯＜苯＜二氯甲烷＜ 三氯甲烷＜乙醚（无水）＜四氢呋喃＜乙酸 乙酯（无水）＜甲基乙基甲酮＜正丁醇＜乙 醇＜甲醇＜水＜冰乙酸＜吡啶＜有机酸
一般有机物的极性由小到大排列顺序
?饱和烃＜不饱和烃＜醚＜酯 ＜醛、 酮 ＜胺 ＜羟基化合物＜酸 ＜离子 化合物（如R+NH3， RCOO-等）
2）常用吸附剂的吸附能力
? 蔗糖＜纤维素 ＜淀粉＜碳酸钙 ＜硫酸钙 ＜ 碳酸镁 ＜硅胶＜活性炭 ＜氧化镁 ＜三氧化 二铝
? 亲脂性化合物TLC用固定相
? 三氧化二铝、硅胶、乙酰纤维素等
? 对于碱性化合物 ? 中性展开剂 Rf＞酸性展开剂的 Rf
? 溶质的性质
? 极性大Rf值降低，极性小 Rf值增大。 ? 分子量大， Rf值降低
? 其它影响因素
? 薄层厚度、展开距离、展缸内蒸汽的饱和度、点 样量、薄层含水量等
? 3、Rf值与定量分析
? 根据标样的 Rf值与试样的Rf值进行比较进行定性分析
? 洗脱能力逐渐增强
2）三者关系图
2.2.4 TLC展开方式
? 上行展开 ? 下行展开 ? 一次展开 ? 二次展开 ? 单向展开 ? 双向展开 ? 径向展开
2.2.5 TLC显色方法
? a 芳胺类
1）化学法
? Ehrlich试剂
1,2-萘醌-4-磺酸
? 菲醌（主要用于邻苯二胺类）
? 茚三酮（用于鉴定脂肪胺、氨基酸等） ? 如L-丙氨酸、甲酯、（ S）-2-氨基丙醇等鉴定
按照吸附剂（固定相）分类 TLC可分为
? 吸附薄层色谱
? 是以吸附剂（固定相）和被分离物之间的吸附作 用为基础进行样品分离的形式
? 分配薄层色谱
? 利用被分离物在流动相和固定相的相对极性差异 来分离的形式
吸附薄层色谱和分配色谱的主要特点
方法
吸附薄层法 正相分配薄 反相分配薄
层色谱
层色谱
主要分离对 象
光物质溶液处理滤纸
? F254
? c 碘熏法
2.2.6 定性分析
? 1、Rf值 ? 又称比移值，是溶质的
运动速度与展开剂的运 动速度之比值。
? 2、影响Rf值的因素 ? 吸附剂的性质，吸附剂极性大，Rf ，反之Rf ? 展开剂的极性，极性大Rf ，反之 Rf
展开剂的酸碱性
? 对于酸性化合物 ? 中性展开剂 Rf＞碱性展开剂的 Rf
TLC与HPLC比较
有效板 检测方 溶剂用 溶剂更 固定相
数
式
量
换Βιβλιοθήκη Baidu
TLC ＜600 静态
少
易 一次性
HPLC 10000 动态
多
难 反复使 用
2.2.2 薄层色谱性质
? 样品（待测混合物）性质 ? 固定相 ? 流动相（展开剂） 重点选择展开剂
1）样品（待测混合物）性质
? 溶解性：极性、弱极性和非极性溶剂溶解性 ? 酸碱性：pH值 ? 极性：相似相溶