汉防己生物碱的提取

汉防己生物碱的提取、分离与鉴定

汉防己为防己科千金藤属物Stephania tetrandra S. Mcore的根，是祛风解热镇痛药物，其有效成分为生物碱。主要是汉防己甲素和汉防已乙素。临床上除用作治疗高血压、神经性疼痛、抗阿米巴原虫外，还将粉防已生物碱的碘甲基、或溴甲基化合物作为肌肉松弛剂应用，此外汉防已甲素在动物实验中有抗癌和扩张血管的作用。

一、目的要求

通过汉防己中几种生物碱的提取分离和鉴定，要求掌握下列知识和技能。

1．生物碱的一般提取方法。

2．纯化单体的方法及薄层层析鉴定

二、已知生物碱的结构和性质

汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。

1．汉防已甲素（Tetrandrine，汉防已碱，粉防已碱）

无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯，mp 216℃，有双熔点现象，自丙酮中结晶者，150℃左右熔后加热又固化，至213℃复熔。

N

OCH3

OR

OCH3O

CH3O

N

CH3

CH3

H H

R=CH3 R=H 汉防己甲素汉防己乙素

O

2．汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱）

溶解行为与汉防已甲素相似，因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。籍此可以相互分离，用不同溶剂重结

昌时，其晶形和溶点不同：

乙醇 细棒状结晶 mp 245~40℃

甲醇 细棒状结晶 mp177~9℃

丙酮 六面粒状晶 mp134℃

吡啶-甲醇 mp 121~2℃

环已烷-EtocAc mp 156℃

3．轮环藤酚碱（Cylanoline ）

为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结昌，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。 N OH

OCH 3CH 3O

HO OH

CH 3

实验原理：汉防已根中总生物碱含量为1.5~2.3%，主要为汉防已甲素，含量约1%，汉防已乙素，含量约0.5%；轮环藤酚碱，含量为0.2%；以及其它数种微量生物碱。汉防已甲素（Tetrandrine ，汉防已碱，粉防已碱）无色针晶，不溶于水和石油醚，易溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚和氯仿等有机溶剂及稀酸水中，可溶于苯。汉防已乙素（Fangchinoline, 又称防已诺林碱，去甲粉防已碱）因有一个酚羟基，故极性较汉防已甲素稍高，在苯中的溶解度小于汉防已甲素而在乙醇中又大于汉防已甲素。籍此可以相互分离。轮环藤酚碱（Cylanoline ）为水溶性季铵生物碱，不溶于极性溶剂，氯化物为无色，八面体状结进晶，mp 214~6℃，碘化物为无色绢丝状结晶，mp185℃；苦味酸盐为黄色结晶，mp154~6℃。据这些碱溶解度差异即可进行分离。

汉防己生物碱的提取、分离与鉴定

实验四 生物碱的预试实验及总碱的提取

实验五 汉防己甲素、乙素分离

实验六 汉防已甲素、乙素的鉴定

实验四生物碱的预试实验及总碱的提取

实验目的1、掌握生物碱的一般提取方法；

2、掌握从总生物碱中分离、纯化亲脂性总碱的方法；

3、巩固硅胶TLC板的制备方法。

实验原理利用生物碱及其盐的溶解性提取亲脂性生物碱，再利用其极性大小同进行分离。

本次实验所需仪器：电子分析天平；研钵；烧杯；漏斗；恒温水浴箱；PH试纸；250ml 圆底烧瓶；球行（回流）、直行冷凝管（蒸馏）；空心塞；空心玻管；橡皮套；蒸馏头；真空接受管；弯玻管；缓冲瓶（抽滤瓶）；真空泵；耐压橡皮管；蒸发皿。

试剂：汉防己；10%盐酸；碘化汞钾；碘化铋钾；碘化碘钾；硅钨酸；85%乙醇

实验内容

1.系统预试

1.记录待预试药物的学名、植物来源、药用部分及其特征（熔点、沸点和折光率）。

2.检品溶液的制备：将检品先剪切成碎块然后用研钵研成粉末。取检品粉末2g，加蒸馏水20ml,加10%盐酸至pH≤3，在60℃左右的水浴上加热15分钟，冷却过滤，滤液供作以下实验。

3.初步鉴别：

①碘化汞钾试剂取检品液1ml ，滴加2滴碘化汞钾试剂，观察有无白色沉淀产生。

②碘化铋钾试剂取检品液1ml ，滴加2滴碘化铋钾试剂，观察有无橘红色或红棕色沉淀产生。

③碘化碘钾试剂取检品液1ml ，滴加2滴碘化碘钾试剂，观察有无棕色沉淀产生。

④硅钨酸试剂取检品液1ml ，滴加2滴硅钨酸试剂，观察有无淡黄色或白色沉淀产生。

2.汉防己总生物碱的提取：（萃取法）

称取50g汉防己粗粉置于250ml圆底烧瓶中，分别用85%乙醇150ml、100ml、100ml回流提取，分别提取1.5、1、1小时（或每次2小时），每次提取后，倾斜

倒出乙醇提取液，合并乙醇提取液，过滤，得乙醇提取液。将滤液减压浓缩至小体积移至蒸发皿水浴浓缩至无醇味，得总提取物（糖浆状）。

3、薄层板制备

除另有规定外,将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm）,取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。

注意：1.药材的量为烧瓶容量的1/3~1/2，再加溶剂使其浸过药面1~2cm。

2.欲蒸馏液装至烧瓶体积的1/2~2/3，应加入沸石。减压蒸馏操作注意事项见书。