抗体检测技术培训课件
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HIV抗体检测与质量控制培训课件
04
免疫荧光法（IFA）：利用荧光标记的抗体检测复合物
05
快速检测法（RDT）：利用试纸条检测复合物，操作简便，快速得出结果
检测方法
2
1
酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用抗原抗体反应进行检测
快速检测试剂（RDT）：利用试纸条进行快速检测
化学发光免疫分析（CLIA）：利用化学发光反应进行检测
免疫荧光法（IFA）：利用荧光标记的抗体进行检测
3
结果评估：检测结果恢复正常，质量控制得到加强
4
培训目标
4
提高检测能力
03
提高HIV抗体检测的准确性和灵敏度
02
熟悉HIV抗体检测的质量控制标准和流程
01
掌握HIV抗体检测的基本原理和方法
04
学会分析和解决HIV抗体检测过程中遇到的问题
确保检测质量
培训目标：提高HIV抗体检测的准确性和可靠性
培训内容：包括检测原理、操作流程、质量控制方法等
02
评估频率：定期评估，确保检测质量稳定
03
评估结果：根据评估结果，调整检测方法和流程，提高检测质量
04
培训内容
3
理论知识
HIV抗体检测原理
检测方法及步骤
质量控制标准及方法
结果判读及报告撰写
常见问题及解决方案
法律法规及伦理要求
实际操作
试剂准备：选择合适的试剂，按照说明书进行配制
1
样本处理：采集样本，进行预处理，如离心、稀释等
检测试剂的选择：选择经过认证的检测试剂，确保检测结果的准确性
1
检测方法的选择：选择合适的检测方法，确保检测结果的可靠性
2
检测结果的判定：根据检测结果，判断是否感染HIV病毒
医学免疫学免疫学检测技术ppt课件
14
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
双抗体夹心法、间接法ELISA
15
间接法ELISA
16
ELISA操作图
可调移液器
8孔道可调移液器 17
3. 放射免疫测定（RIA）
常用 125I，测定微量物质 4. 化学发光免疫分析
常用 鲁米诺，测定超微量物质 5. 免疫印迹法（Western Blotting）
先做凝胶电泳将蛋白质分区 再将蛋白质转移至固相载体 后用酶免疫、放射免疫等技术加以测定
1. 免疫荧光法（IFA ）
荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位
（1）直接荧光法 荧光素一抗 对每种抗体作标记 特异 测Ag
（2）间接荧光法： 荧光素二抗 不必标记每种抗体 敏感 测Ag/Ab
12
免疫荧光法
13
2. 酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化
（1）双抗体夹心法ELISA：查抗原
10
II ) Precipitation （二）沉淀反应
可溶性抗原 + 相应抗体肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为介质——琼脂扩散/免疫扩散
1. 单向免疫扩散：抗原 的定量（Ig、C3 ）
2. 双向免疫扩散：抗原/抗体的定性、组成及Ag相关性分析 3. 免疫电泳： 电泳 + 双向免疫扩散 （抗原分析）
21
3. 细胞因子检测
（1）免疫学检测法—— 夹心法ELISA FCM
（2）生物学检测法—— 细胞增殖（或细胞增殖抑制）试验 细胞毒（或细胞毒抑制）试验
（3） 分子生物学检测法 RT-PCR测定mRNA
4. 皮肤试验： 测试IV型超敏反应能力
22
（二）B细胞功能测定
1. B细胞增殖试验 小鼠：LPS 人： SPA；抗IgM
ELISA检测技术培训ppt课件精品模板分享(带动画)
目的：通过室内质控，可以及时发现检 测过程中可能存在的问题，并采取相应 的措施加以纠正，从而提高检测结果的 准确性和可靠性
实施：实验室应建立完善的室内质控体系， 并定期对检测过程进行质控，以确保检测 结果的准确性和可靠性
室间质评计划：制定并执行统一的质评计划，确保各实验室之间的质评活动相互协调
室间质评样品：由权威机构制备和分发统一的质评样品，各实验室使用相同的质评样品进行 检测
试剂质量不稳定：选择高质量的试剂，确保试剂在有效期内使用 试剂盒灵敏度低：调整试剂盒的灵敏度，提高检测的准确性 试剂盒特异性差：选择特异性好的试剂盒，避免交叉反应
试剂盒保存不当：按照试剂盒说明书正确保存试剂盒，避免受潮、污染等影响
自动化技术：提高ELISA检测 效率和质量的关键
智能化技术：实现ELISA检测 的自动化和智能化
通过将抗原或抗体与酶结合形 成酶标抗原或抗体，使其具有 酶的催化作用
酶联 测方法
在固相载体表面进行抗原抗体 反应，加入底物后根据颜色变
化判断结果
酶联免疫吸附试验具有灵敏度 高、特异性强、操作简便、易
于定量等优点
临床诊断：用于检测各种疾病相关的抗原、抗体和细胞因子等 食品安全：检测食品中的微生物、毒素和过敏原等 生物安全：检测实验室中的生物因子和微生物等 环保监测：检测环境中的污染物和有害物质等
ELISA检测技术在临床诊断中的应用：用于疾病早期诊断、疗效评估和预后判断 在科研领域的应用：用于疾病的基础研究和临床试验，提高研究质量和效率 未来发展趋势：随着技术进步和应用拓展，ELISA检测技术将更加便捷、准确和高效 展望：随着医疗科技的发展，ELISA检测技术将在未来发挥更加重要的作用
汇报人：
样本类型：血清、血浆、细胞培养 上清等
应用生物化学-抗体技术PPT课件
抗体技术的挑战
抗体生产成本高
01
由于抗体的大规模生产需要大量的细胞培养和纯化过程，因此
生产成本较高，限制了抗体的广泛应用。
抗体特异性问题
02
抗体的特异性是影响其应用的关键因素之一，如何提高抗体的
特异性是当前面临的重要挑战。
抗体稳定性不足
03
一些抗体在存储和运输过程中容易失去活性，影响其应用效果。
抗体技术的发展前景
生物制药
药物研发
抗体作为药物载体，可以用于药 物的定向输送，提高药物的疗效
和降低副作用。
免疫检测试剂
抗体可以用于制备免疫检测试剂， 如酶联免疫吸附试验（ELISA）、 免疫荧光等，用于检测生物体内
的物质。
单克隆抗体药物
利用杂交瘤技术制备的单克隆抗 体药物，具有高度特异性、低毒 性和长效性等特点，已广泛应用 于肿瘤、自身免疫性疾病等领域。
应用生物化学-抗体技术PPT 课件
• 引言 • 抗体的产生与种类 • 抗体技术的原理与流程 • 抗体技术的应用实例 • 抗体技术的挑战与前景 • 结论
01
引言
抗体的定义与特性
抗体
指免疫系统产生的一种蛋白质， 能够特异识别并结合抗原，发挥 免疫效应。
特性
高度特异性、结合力强、种类多 样。
抗体技术的历史与发展
历史
自19世纪末发现抗体以来，抗体技 术不断发展，经历了免疫学、单克隆 抗体技术、基因工程抗体等阶段。
发展
目前抗体技术已广泛应用于生物医药 、诊断、治疗等领域，为人类健康和 疾病治疗做出了巨大贡献。
抗体技术的应用领域
01
02
03
生物医药
用于药物研发、疾病诊断 和治疗，如肿瘤免疫治疗、 自身免疫性疾病治疗等。
艾滋病抗体检测技术ppt课件
Organization of the HIV-1 Virion
p24 Core Ag p ro te a s e
p31 integrase
p17 M atrix p 7 -g a g p 9 -g a g
学习交流PPT
6
Human immunodeficiency virus
HIV
HIV-1 （有A～J，O1～O4 多个亚型）
（7）负责对开展自愿咨询检测工作的艾滋病检测实验室的技术支持
和指导。
学习交流PPT
16
艾滋病确证实验室职能
（1）承担当地卫生行政部门指定的艾滋病病毒抗体确证、 抗体筛查和其他艾滋病检测工作。
• 7、组织全国艾滋病检测相关业务培训，组织制定和修改与艾滋病检测 工作有关的技术规范和指南。
学习交流PPT
15
艾滋病确证中心实验室职能
（1）负责职责范围内艾滋病检测实验室网络建设的业务技术指导和 评价，组织艾滋病检测实验室人员技术培训。
（2）建立艾滋病检测实验室质量控制体系，组织省级实验室能力验 证和艾滋病诊断试剂的临床质量评估。
学习交流PPT
10
HIV感染以后的血清学动态
急性期 HIV RNA
Anti-Ag
潜伏期 Anti-Ab
艾滋病期
Anti-gp41/120 (anti-gp36)1周 2周 3周 4周………………….1年 2年 3年…………….10年………..
窗口期
学习交流PPT
11
窗口期: 从机体感染HIV到产生相应抗体的
Ø 1986年国际微生物学会和病毒分类学会将HTLV-Ⅲ和 LAV统称为人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus 简称HIV)
p24 Core Ag p ro te a s e
p31 integrase
p17 M atrix p 7 -g a g p 9 -g a g
学习交流PPT
6
Human immunodeficiency virus
HIV
HIV-1 （有A～J，O1～O4 多个亚型）
（7）负责对开展自愿咨询检测工作的艾滋病检测实验室的技术支持
和指导。
学习交流PPT
16
艾滋病确证实验室职能
（1）承担当地卫生行政部门指定的艾滋病病毒抗体确证、 抗体筛查和其他艾滋病检测工作。
• 7、组织全国艾滋病检测相关业务培训，组织制定和修改与艾滋病检测 工作有关的技术规范和指南。
学习交流PPT
15
艾滋病确证中心实验室职能
（1）负责职责范围内艾滋病检测实验室网络建设的业务技术指导和 评价，组织艾滋病检测实验室人员技术培训。
（2）建立艾滋病检测实验室质量控制体系，组织省级实验室能力验 证和艾滋病诊断试剂的临床质量评估。
学习交流PPT
10
HIV感染以后的血清学动态
急性期 HIV RNA
Anti-Ag
潜伏期 Anti-Ab
艾滋病期
Anti-gp41/120 (anti-gp36)1周 2周 3周 4周………………….1年 2年 3年…………….10年………..
窗口期
学习交流PPT
11
窗口期: 从机体感染HIV到产生相应抗体的
Ø 1986年国际微生物学会和病毒分类学会将HTLV-Ⅲ和 LAV统称为人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus 简称HIV)
2023ELISA检测技术培训教案课件
未来发展方向预测
01
智能化ELISA检测技术
利用人工智能和机器学习等技术，实现ELISA检测的智能化和自动化，
提高检测效率和准确性。
02
高通量ELISA检测技术
发展高通量ELISA检测技术，实现大规模样本的快速、准确检测。
03
多功能ELISA检测技术
开发具有多种功能的ELISA检测技术，如同时检测多种目标物、实现样
建立标准化操作流程
制定详细的实验操作指南和标准化操作流程，确保实验人员能够 准确、一致地执行实验操作。
人员培训与考核
对实验人员进行专业培训，提高其技能水平和操作规范性；定期对 实验人员进行考核，确保其具备相应的实验能力。
设备与试剂管理
建立设备与试剂管理制度，确保实验设备和试剂的采购、验收、存 储和使用符合规范要求。
感染性疾病诊断
03
通过ELISA技术检测病原体特异性抗体或抗原，用于感染性疾病
的诊断和流行病学调查。
药物研发领域应用案例
药物靶点筛选
利用ELISA技术检测药物与靶蛋白的结合情况，筛选具有潜在药 理活性的候选药物。
药物代谢动力学研究
通过ELISA技术测定生物样品中药物或其代谢产物的浓度，研究 药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程。
持续改进方向和目标
1 2 3
提高检测灵敏度
通过优化实验条件、改进试剂配方等方式，提高 ELISA检测的灵敏度，降低假阴性率。
降低检测误差
通过加强质量控制、提高实验操作规范性等措施 ，降低ELISA检测的误差率，提高检测结果的准 确性和可靠性。
推动自动化和智能化发展
积极引进自动化和智能化技术，提高ELISA检测 的自动化程度和检测效率，减少人为因素对实验 结果的影响。
HIV抗体检测与质量控制培训优质课件
HIV抗体检测与质量控制培训优质课件一、教学内容本节课我们将深入学习HIV抗体检测的相关知识，教材为《临床免疫学》第十二章第三节，详细内容包括HIV病毒的基本知识、HIV 抗体的产生和检测方法、检测过程中的质量控制要点等。
二、教学目标1. 理解HIV病毒的基本知识，掌握HIV抗体的产生过程。
2. 学会HIV抗体检测的方法，了解检测过程中的质量控制要点。
3. 能够运用所学知识，对HIV抗体检测过程进行质量控制，提高检测结果的准确性。
三、教学难点与重点教学难点：HIV抗体检测方法的选择与应用，检测过程中的质量控制要点。
教学重点：HIV病毒基本知识，HIV抗体的产生，检测方法的操作步骤及质量控制。
四、教具与学具准备1. 教具：PPT课件，HIV抗体检测操作视频，相关案例资料。
2. 学具：笔记本，教材《临床免疫学》。
五、教学过程1. 导入：通过一个实际案例，介绍HIV抗体检测在临床诊断中的重要性，激发学生兴趣。
2. 理论知识讲解：（1）HIV病毒的基本知识；（2）HIV抗体的产生过程；（3）HIV抗体检测方法及原理。
3. 实践操作演示：（1）展示HIV抗体检测操作视频；（2）讲解操作步骤及注意事项。
4. 质量控制要点讲解：（1）样本的采集与处理；（2）试剂的选择与使用；（3）检测过程的监控与评价。
5. 例题讲解：讲解一道HIV抗体检测的例题，分析解题思路。
6. 随堂练习：让学生针对所学知识，完成一道HIV抗体检测的练习题。
六、板书设计1. HIV抗体检测与质量控制2. 内容：（1）HIV病毒基本知识（2）HIV抗体产生过程（3）HIV抗体检测方法（4）质量控制要点七、作业设计1. 作业题目：（1）简述HIV病毒的基本知识。
（2）列举三种HIV抗体检测方法，并介绍其原理。
（3）谈谈在HIV抗体检测过程中，如何进行质量控制。
2. 答案：（1）HIV病毒的基本知识：HIV病毒是一种RNA病毒，主要侵犯人体免疫系统，导致免疫缺陷。
抗体检测技术课件
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
➢抗体检测技术
免疫酶技术 免疫荧光技术 凝集反应 沉淀反应 补体结合试验 放射免疫测定 蛋白印迹 免疫共沉淀 亲和力测定
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凝集反应
实验原理
ELISA利用了免疫反应的高度特异性和酶促反应的 高度敏感性检测抗原或抗体 1. 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其 免疫活性 2. 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这 种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的 活性 3. 按一定步骤进行抗原抗体反应 4. 加底物显色，根据颜色反应的深浅进行定性或定量 分析
抗原抗体为单一体系时，抗原浓度不同，沉 淀弧的特征不同：
抗原抗体为多体系时，出现的沉淀弧 有多条，彼此互不干扰。
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酶联免疫吸附测定实验 (ELISA)
Enzyme linked immunosorbent assay
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直接法： 此法用于未知抗原的检测，将未知待测抗原吸附于固相载体，加入已知酶标针对特定抗原的 抗体。 间接法： 此法用于未知抗体的检测，将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗体）与之 结合，洗涤后，加入酶标抗球蛋白抗体（酶标抗抗体）和底物进行测定。 双抗体夹心法 此法常用于测定抗原，将已知抗体吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗原）与之结合， 洗涤后，加入酶标抗体和底物进行测定。 双夹心间接法 此法常用于测定抗体，将已知抗原（捕获抗体的抗原）吸附于固相载体，加入待检标本（含 相应抗体）与之结合，洗涤后，加入特异性抗抗体，洗涤，再加入抗抗体特异性的酶标抗体 和底物进行测定。
➢抗体检测技术
免疫酶技术 免疫荧光技术 凝集反应 沉淀反应 补体结合试验 放射免疫测定 蛋白印迹 免疫共沉淀 亲和力测定
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凝集反应
实验原理
ELISA利用了免疫反应的高度特异性和酶促反应的 高度敏感性检测抗原或抗体 1. 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其 免疫活性 2. 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这 种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的 活性 3. 按一定步骤进行抗原抗体反应 4. 加底物显色，根据颜色反应的深浅进行定性或定量 分析
抗原抗体为单一体系时，抗原浓度不同，沉 淀弧的特征不同：
抗原抗体为多体系时，出现的沉淀弧 有多条，彼此互不干扰。
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酶联免疫吸附测定实验 (ELISA)
Enzyme linked immunosorbent assay
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直接法： 此法用于未知抗原的检测，将未知待测抗原吸附于固相载体，加入已知酶标针对特定抗原的 抗体。 间接法： 此法用于未知抗体的检测，将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗体）与之 结合，洗涤后，加入酶标抗球蛋白抗体（酶标抗抗体）和底物进行测定。 双抗体夹心法 此法常用于测定抗原，将已知抗体吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗原）与之结合， 洗涤后，加入酶标抗体和底物进行测定。 双夹心间接法 此法常用于测定抗体，将已知抗原（捕获抗体的抗原）吸附于固相载体，加入待检标本（含 相应抗体）与之结合，洗涤后，加入特异性抗抗体，洗涤，再加入抗抗体特异性的酶标抗体 和底物进行测定。
hiv抗体检测技术 ppt课件
注意:不同厂家、不同方法临界值计算公式不同 cutoff=NC+0.1 cutoff=NC*2.1
四代艾滋病酶联免疫试剂比较
solid phase
第一代 病毒裂解液
HIV-1
conjugate -IgG抗体
specific detection of
IgG 抗体 HIV-1
method 间接
病毒裂解液
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体
IgM / IgG 抗体
HIV-1 / -2 / -O p24 抗原
夹心
酶联免疫吸附试验（ELISA）
优点：准确性高、价格低廉、
判断结果标准客观、
结果便于记录和保存
用途：流行病学监测及临床大量标本的检测
(2)化学发光或免疫荧光试验
急
诊检测。不需专门设备,
人员培训简单,一般可在10～30分钟内得出结
果。
缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易
保存。
HIV快速检测试剂按原理不同，分为以下三类：
1 免疫渗滤试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点 状 固定在膜上。加待检样品后，阳性结果在膜上抗 原部位显示出 有色斑点。有效试验质控点必须显色。
HIV抗体检测
行业标准:
《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》WS298-2008
技术规范:
《全国艾滋病检测技术规范》（ 2009年修订版）
HIV抗体检测程序
筛查试验
– 初筛 – 复检
确证试验
筛查试验
筛查试剂 必须是经国家食品药品监督管理局 注册批准、在有效期内的试剂，其中 酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用 临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 HIV抗体筛查样品 血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液。
四代艾滋病酶联免疫试剂比较
solid phase
第一代 病毒裂解液
HIV-1
conjugate -IgG抗体
specific detection of
IgG 抗体 HIV-1
method 间接
病毒裂解液
病毒裂解液 重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体
IgM / IgG 抗体
HIV-1 / -2 / -O p24 抗原
夹心
酶联免疫吸附试验（ELISA）
优点：准确性高、价格低廉、
判断结果标准客观、
结果便于记录和保存
用途：流行病学监测及临床大量标本的检测
(2)化学发光或免疫荧光试验
急
诊检测。不需专门设备,
人员培训简单,一般可在10～30分钟内得出结
果。
缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易
保存。
HIV快速检测试剂按原理不同，分为以下三类：
1 免疫渗滤试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点 状 固定在膜上。加待检样品后，阳性结果在膜上抗 原部位显示出 有色斑点。有效试验质控点必须显色。
HIV抗体检测
行业标准:
《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》WS298-2008
技术规范:
《全国艾滋病检测技术规范》（ 2009年修订版）
HIV抗体检测程序
筛查试验
– 初筛 – 复检
确证试验
筛查试验
筛查试剂 必须是经国家食品药品监督管理局 注册批准、在有效期内的试剂，其中 酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用 临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 HIV抗体筛查样品 血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液。
ELISA检测技术培训课件
实验结果应结合临床情 况和其他检查结果进行 综合分析。对于异常结 果应及时进行复查和确 认，避免误诊和漏诊。
03
elisa检测技术实验操作技 巧与注意事项
实验操作技巧
样品处理
根据实验要求，对样品进行适 当的处理，如稀释、过滤等， 以去除干扰物质。
洗涤和洗脱
采用适当的洗涤液和洗脱液， 对反应板进行充分的洗涤和洗 脱，以去除未结合的物质。
。
02
elisa检测技术原理及操作 流程
elisa检测技术原理
酶联免疫吸附分析法
利用抗原抗体结合的特异性，通过酶标记的抗体或抗原与相应抗原或抗体结合 ，形成酶标记的抗原抗体复合物。在复合物中，酶遇到相应的底物会发生显色 反应，根据颜色变化判断结果。
夹心法
当待测样品中的抗原与固相载体上的抗体结合后，再与酶标记的二抗结合形成 “三明治”结构。洗涤去除未结合的成分后，加入底物显色，根据颜色深浅进 行定量或定性分析。
elisa检测技术应用领域
01
02
03
04
临床诊断
ELISA被广泛应用于各种传染 性疾病、自身免疫性疾病、肿ISA可以用于检测食品中的 有害物质，如农药残留、重金
属等。
生物制药
ELISA被用于筛选和研发药物 ，以及监测药物在体内的浓度
。
环境监测
ELISA可以用于监测环境中的 有害物质，如污染物的浓度等
01
elisa检测技术概述
elisa检测技术定义
ELISA是酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)的简称，是一种以酶作为标记物的 免疫测定技术。
它利用抗原抗体的特异性结合反应，将待测样本中的目标抗 原或抗体与酶标记的抗体或抗原发生反应，通过酶催化底物 显色反应，对待测样本中的目标抗原或抗体进行定性或定量 检测。
HIV抗体检测与质量控制培训课件
HIV抗体检测与质量控制培训课件一、教学内容1. 第一章：HIV抗体检测的基本原理和方法；2. 第二章：HIV抗体检测的样本处理和操作步骤；3. 第三章：HIV抗体检测的仪器和试剂使用；4. 第四章：HIV抗体检测的结果解读与判断；5. 第五章：HIV抗体检测的质量控制措施与标准。
二、教学目标1. 理解并熟练掌握HIV抗体检测的基本原理和方法；2. 学会正确处理样本并进行操作步骤；3. 熟练使用相关仪器和试剂，并正确解读检测结果；4. 了解并实施HIV抗体检测的质量控制措施，达到相关标准。
三、教学难点与重点难点：HIV抗体检测的样本处理和操作步骤，以及质量控制措施的实施。
重点：HIV抗体检测的基本原理、方法，以及仪器和试剂的使用。
四、教具与学具准备教具：PPT课件、实验室仪器和试剂、样本处理器材。
学具：笔记本、笔、实验报告单。
五、教学过程1. 引入实践情景：介绍HIV抗体检测在临床诊断和预防中的应用，引发学员对HIV抗体检测与质量控制的关注。
2. 基本原理和方法讲解：通过PPT课件，讲解HIV抗体检测的基本原理和方法，结合实例进行阐述。
3. 样本处理和操作步骤演示：教师演示HIV抗体检测的样本处理和操作步骤，包括样本的采集、分离、加样、检测等。
4. 仪器和试剂使用练习：学员在教师指导下，练习使用实验室仪器和试剂，掌握操作技巧。
5. 结果解读与判断：讲解HIV抗体检测结果的解读与判断方法，并进行随堂练习。
6. 质量控制措施与标准讲解：介绍HIV抗体检测的质量控制措施与标准，包括室内质控和室间质评等。
7. 案例分析与讨论：分析实际案例，探讨质量控制措施在实际工作中的应用。
六、板书设计1. HIV抗体检测的基本原理；2. HIV抗体检测的样本处理和操作步骤；3. HIV抗体检测的仪器和试剂使用；4. HIV抗体检测结果的解读与判断；5. HIV抗体检测的质量控制措施与标准。
七、作业设计1. 题目：请简述HIV抗体检测的基本原理和方法。
《自身抗体的检测》课件
常见的自身抗体检测技术
1
ANA
全称抗核抗体，常见于结缔组织病和
ds-DNA
2
自身免疫性肝病等。
双股DNA抗体，常见于系统性红斑狼
疮等。
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SSA/Ro
SSA或Ro抗体，常见于干燥综合征和
SSB/La
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系统性红斑狼疮等。
SSB或La抗体，常见于干燥综合征等。
自身抗体检测的临床应用
诊断
治疗
可用于自身免疫疾病、感染性疾病和肿瘤的诊断。 可以为自身免疫疾病的治疗提供指导和监测。
自身抗体检测的意义和挑战
1 意义
2 挑战
自身抗体检测可以提高自身免疫疾病的早 期诊断率和准确性，减少疾病的发生和发 展。
自身抗体检测的标准化、质量控制和参比 标准等问题仍需要进一步解决。
结论及展望
结论
自身抗体检测已成为临床医学中的重要工具， 在疾病的筛查、诊断、治疗和监测中发挥了 重要作用。
展望
随着技术的不断发展，自身抗体检测将越来 越趋向于高通量和个性化。希望未来的自身 抗体检测可以更好地为疾病的预防和治疗提 供支持。
利用特殊荧光素标记的相应 抗体探测待测样本中的自身 抗体，常用于系统性自身免 疫病的诊断。
酶联免疫吸附实验 (ELISA)
利用酶标记的抗体探测待测 样本中的自身抗体，常用于 自身免疫疾病的筛查。
免疫印迹(Western blot)
利用电泳将不同大小的自身 抗原分离，再用特异性抗体 检测其中的自身抗体，常用 于多种自身免疫病的诊断。
为什么需要进行自身抗体检测?
自身抗体检测可以帮助医生确定是否存在自身免疫疾病，并指导治疗和监测疾病的进展。自身抗体的定义和作用 Nhomakorabea定义
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抗体检测技术
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抗原抗体为单一体系时，抗原浓度不同，沉 淀弧的特征不同：
抗原抗体为多体系时，出现的沉淀弧
有多条，彼此互不干抗体检扰测技术。
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酶联免疫吸附测定实验 (ELISA)
Enzyme linked immunosorbent assay
抗体检测技术
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实验原理
ELISA利用了免疫反应的高度特异性和酶促反应的 高度敏感性检测抗原或抗体
2. 常用酶：HRP、AP、ß-半乳糖苷酶等
3. 底物：
HRP可溶性底物及呈色：
邻苯二胺(OPD)：橙红(492nm)；四甲基联苯胺(TMB)：蓝色(450nm)
5-氨基水杨酸(5-ASA)：棕色(550nm) 鲁咪诺+H2O2：荧光
HRP不可溶性底物及呈色：
DAB：棕黄色 α-萘酚：红色 3-氧基-9-乙基卡唑：红色 4-氯-1-萘酚： 灰蓝色
1. 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其 免疫活性
2. 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这 种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的 活性
3. 按一定步骤进行抗原抗体反应
4. 加底物显色，根据颜色反应的深浅进行定性或定量 分析
抗体检测技术
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方法类型
ELISA既可测抗原又可测抗体，根据试 剂来源、标本性状以及检测的具体条件， 可设计出不同类型的检测方法：
抗体检测技术
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抗体检测技术
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用途
Dr Dennis E Bidwell and Alister Voller created
the ELISA test to detect various kind of
diseases, such as malaria, Chagas disease, and
抗体检测技术
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2. Ag或Ab：纯度高、效价高、结合力高
3. 免疫吸附剂(固相Ag或Ab)： 包被：将Ag或Ab固相化的过程 包被缓冲液 封闭：包被后在用1-5%小牛血清白蛋白再包被
，以消除非特异吸附的干扰
抗体检测技术
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㈡ 酶结合物：
1. 要求：纯度高、催化转化率高、专一性强、性质稳
定、来源丰富、标记后稳定
抗体检测技术
➢抗体检测技术
免疫酶技术 免疫荧光技术 凝集反应 沉淀反应 补体结合试验 放射免疫测定 蛋白印迹 免疫共沉淀 亲和力测定
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凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合反 应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的 细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在一 定条件下出现凝集。凝集反应中抗原称为 凝集原，抗体称为凝集素。
指测读ELISA光度计；针对固相载体形式的不同 ，各有特制的适用于板、珠和小试管的设计
性能指标：测读速度、读数的准确性、重复性、 精确度和可测范围、线性
优良的酶标仪的读数一般可精确0.001，准确性 为±1%，重复性达0.5%
操作：室温宜在15-30℃，使用前先预热仪器1530min，测读结果更稳定。测读A值时，要选用 产物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波长。有 的酶标仪可用双波长式测读
Johne's disease. ELISA tests also are used as in
in vitro diagnostics in medical laboratories. The
抗体检测技术Leabharlann 13一、试剂及仪器准备
（一） 免疫吸附剂 1.固相载体
⑴ 要求：① 吸附力强 ② 能保持Ag或Ab活性 ③ 不参与化学反应
抗体检测技术
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⑵ 载体性能比较 要求：载体材料+、- 结果差别大 检测方法：10ug/L IgG包被,加酶标抗IgG，显
色后，测20孔的OD，要求CV<10%
⑶ 常用载体： 材料：聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯 等 形状：小试管、小珠、微量反应板
AP可溶性底物及呈色：
对硝基苯磷酸酯(P-NPP)：黄色(405nm) 4-甲基伞基磷酸酯(4-MuP)： 荧光
AP不可溶性底物及呈色：
NBT和BCIP混合液：紫色 坚固红和萘酚ASMX混合液：红色
ß-半乳糖苷酶：
4-甲基伞基-ß-半乳糖苷：荧光抗体检测技术
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（三）设备：酶标比色仪简称酶标仪
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沉淀反应
1、絮状沉淀反应 2、环状沉淀反应 3、双向扩散 4、单向免疫扩散
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双向扩散法的操作：生理盐水配制1%-5%的 琼脂，取4mL倒在显微镜用的载玻片上，凝 固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入 抗体用于测定抗体效价，中心孔滴入抗体 ，外周孔滴入抗原，用于检测抗原的存在 和定性抗原。
1.直接法 2.间接法 3.双抗体夹心法 4.双夹心间接法
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直接法： 此法用于未知抗原的检测，将未知待测抗原吸附于固相载体，加入已知酶标针对特定抗原的 抗体。 间接法： 此法用于未知抗体的检测，将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗体）与之 结合，洗涤后，加入酶标抗球蛋白抗体（酶标抗抗体）和底物进行测定。 双抗体夹心法 此法常用于测定抗原，将已知抗体吸附于固相载体，加入待检标本（含相应抗原）与之结合， 洗涤后，加入酶标抗体和底物进行测定。 双夹心间接法 此法常用于测定抗体，将已知抗原（捕获抗体的抗原）吸附于固相载体，加入待检标本（含 相应抗体）与之结合，洗涤后，加入特异性抗抗体，洗涤，再加入抗抗体特异性的酶标抗体 和底物进行测定。
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A sandwich ELISA. (1) Plate is coated with a capture antibody; (2) sample is added, and any antigen present binds to capture antibody; (3) detecting antibody is added, and binds to antigen; (4) enzymelinked secondary antibody is added, and binds to detecting antibody; (5) substrate is added, and is converted by enzyme to detectable form.