叶绿素

置片刻。
加入少量碳酸钙； 弱光下研磨，速度要快
实验步骤
3．取滤纸1张，置漏斗中，用95%乙醇湿润，把提取液沿 玻棒倒入漏斗中，过滤到25mL容量瓶中，然后用少量95%乙醇 冲洗研钵和研棒数次，将液体全部倒入漏斗中。 4．用滴管吸取95%乙醇，将滤纸和残渣上的叶绿体色素 全部洗入容量瓶中。直至无绿色为止。最后用95%乙醇定容至 25ml，摇匀。 残渣中的色素要充分洗脱！
Ca/Cb
95%乙醇提取液中色素计算公式：
①
②
Ca=13.95A665- 6.88A649
Cb=24.96A649 – 7.32 A665
CT= Ca + Cb =18.08A649-6.63 A665
③
CX.C=(1000A470-2.05Ca-114Cb)/245 以上是求出叶绿素总浓度，mg.L-1
实验目的

掌握分光光度计法测定植物叶绿体色素含 量的原理与方法. 进行完全营养液与缺素营养液玉米苗间叶

绿体色素含量的比较并分析其差异的原因.
实验原理
高 等 植 物 叶 绿 体 色 素 叶绿素
叶绿素a---C55H72O5N4Mg 叶绿素b---C55H70O6N4Mg 胡萝卜素---C40H56 叶黄素---C40H56O
按以下公式计算各色素含量(mg.g鲜重-1 ) ：
叶绿体色素含量 =
色素的浓度×提取液体积(L)×稀释倍数 样品鲜重(g)
注意事项：
1、研磨要在弱光下进行，且速度要快； 2、研磨时要加入少量的碳酸钙，保护叶绿素； 3、残渣中的色素要充分洗脱； 4、波长要调准；
5、比色液不能混浊。
思考题
1、叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰，能否
叶绿体色素的提取
叶绿体色素，不溶于水，易
溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。同时，
叶绿素分子结构的“头部”是亲水 的，在植物细胞内与蛋白质结合以 色素蛋白复合体的结构存在于类囊 体膜上，需要经过水解作用才能被 完全提取出来。故通常用80%的 丙酮或95%乙醇提取叶绿素。
实验步骤
1．取2种处理新鲜玉米（完全/缺素）叶片，洗净， 擦干，去掉中脉，剪碎，混匀。 2．各称取0.2g，分别放入研钵中，加少量石英 砂和碳酸钙粉及2-3ml95％乙醇，研磨至组织发白，静

已知叶绿素 a、b 的 95％乙醇提取液在红光区的最大吸收
峰分别为 665nm 和 649nm ，可得到以下关系式：

A665=82.04Ca+9.27Cb A649=16.75Ca+45.60Cb
（1） （2）
将上式整理，可以得到下式：
Ca=13.95A665- 6.88A649
Cb=24.96A649 – 7.32 A665 CT= Ca + Cb =18.08A649-6.63 A665 CX.C=(1000A470-2.05Ca-114Cb)/245
实验步骤
过滤的比色液不能混浊
5．把叶绿体色素提取液倒入光径1cm 的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长 665nm、649nm和470nm下测定吸光度。
提取液 处理 总量 /ml 完全 缺素 25 25
吸光度
色素浓度
各色素含量
A665 A649 A470
Ca Cb CT CXC
Ca Cb CT CXC
用这一吸收峰波长进行叶绿素ａ、ｂ的定
量分析？为什么？
2、为什么提取叶绿素时干材料一定要用80
％的丙酮或乙醇，而新鲜的材料可以用无
水丙酮或乙醇提取？
类胡萝卜
蓝紫光区
红光区
最大吸收区域在 蓝紫光区（400-500nm）， 基本上不吸收黄、橙、 红光。
这四种色素在可见光谱中具有 不同的特征吸收峰

叶绿素与类胡萝卜素具有一定的吸收光谱，因此,在不分离的 情况下,可用分光光度计法来进行测定。今欲测定叶绿体色素
混合提取液中叶绿素 a 、 b 和类胡萝卜素的含量，只需测定
b乙醇溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于红光区和蓝
该提取液在三个特定波长下的吸光度 A 即可求得，叶绿素 a、
紫光区，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选
择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

此外我们发现叶绿体色素提取液中各色素的吸收光谱虽有不 同，但又存在着明显的重叠 吸光度的加和性告诉我们如果溶液中有数种吸光物质，则此 混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸 光度的总和，A ＝ K1C1 +K2C2
实验六 植物叶绿体色素含量的测定
（分光光度计法）
实验内容
（一）实验意义
（二）实验目的 （三）实验原理 （四）实验步骤 （五）结果计算 （六）注意事项
实验意义

植物叶绿体色素是吸收太阳光能，进行光 合Βιβλιοθήκη Baidu用的重要物质。 因此，测定叶绿体色素含量便成为研究光

合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物
育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的 应用.