有机溶剂沉淀

有机溶剂沉淀生物高分子的特点是：分辨 率高于盐析；因溶剂沸点较低，除去及回 收方便。但有机溶剂沉淀法比盐析法易使 蛋白质变性失活。
沉淀用有机溶剂的选择主要考虑以下几个 方面的因素：
（1）介电常数小，沉淀作用强。
（2）对生物分子的变性作用小。
（3）毒性小，挥发性适中。
（4）沉淀用溶剂一般需能与水无限混溶，一 些与水部分混溶或微溶的溶剂如氯仿、乙醚 等也有使用。
（2）水溶性有机溶剂本身的水合作用降低 了自由水的浓度，压缩了亲水溶质分子表 面原有水化层的厚度，降低了他的亲水性， 导致脱水凝集。以上两个因素相比较，脱 水作用可能较静电作用占更主要的地位。
乙醇、丙酮的介电常数都较低，是最常用 的沉淀用溶剂。2.5mol/L甘氨酸的介电常数 很大，可以做蛋白质等生物高分子溶液的 稳定剂。
实际操作中，还要考虑有机溶剂与水混合 时热量的驱散。因此，整个操作过程需要 高度冷却。
一般先将蛋白质溶液冷却到0摄氏度左右， 并把有机溶剂预冷到更低温度，在充分搅 拌下加入冷的有机溶剂，以避免局部过浓 应其蛋白质变性。
注意：但对稳定性较好的生化物质如淀粉 酶，温度不需过低，沉淀温度可控制在10--15°C。此外，应控制溶剂的加入速度， 不宜过快。
較低离子强度的存在往往有利于沉淀作用，
甚至还有保护蛋白质，防止变性，减少水 和溶剂相互溶解及稳定介质ph的作用。用 溶剂沉淀蛋白质时离子强度以0.010.05mol/L为好，通常不应超过5%的含量。 常用的所谓助沉剂多为低浓度的单价盐，
有醋酸钠、醋酸铵、氯化钠等。这可能是
增加了蛋白质分子的表面电荷，从而增强 了分子间引力之故。
其他溶剂，如二甲基甲酰胺、二甲基 亚枫，也可以作沉淀剂用。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
有机溶剂沉淀时，温度是重要的因素，有 机溶剂存在下，大多数蛋白质的溶解度随 温度降低而显著的减少，因此低温下（最 好低于0）沉淀的完全。
有机溶剂会引起蛋白质分子空间结构变形， 如果这种变形超过一定程度，就会导致蛋 白质变性，变性的危险随温度升高而增大， 为了防止蛋白质变性，应在低温下沉淀。
乙醇，由于沉淀作用强，沸点适中，无毒 等优点，广泛用于沉淀蛋白质、核酸、多 糖等生物高分子及氨基酸等。
丙酮，沉淀作用大于乙醇。用丙酮代替乙 醇作沉淀剂一般可以减少用量1/4到1/3。但 沸点较低，挥发损失大，对肝脏有一定毒 性，着火点低等缺点应用不如乙醇广泛。
甲醇，沉淀作用与乙醇相当，但对蛋白 质的变性作用比乙醇，丙酮都小，由于 口服强毒，限制了他的使用。
反之浓的样品会增加共沉作用，降低分辨 率，变性的危险性也小于稀溶液。一般认 为蛋白质的初浓度以0.5%~2%为好，粘多糖 则以1%~2%较合适。
与盐析法相比，有机溶剂沉淀法具有如下优点： 1乙醇等有机溶剂易挥发2沉淀物与母液间的密 度差较大。
有机溶剂沉淀法的主要缺点是1容易使蛋白质 变性，因此操作条件应严加控制。2采用大量 有机溶剂，成本较高。3有机溶剂一般是易燃 易爆的。
少量中性盐【离子强度较高时（0.2mol/L 以上）】的存在，由于盐溶作用，会增大 蛋白质在有机溶剂-水溶液的溶解度，并随 离子强度增大而增大，所以用有机溶剂沉 淀时应减少无机量。用硫酸铵盐析所得的 沉淀物，如进一步用有机溶剂沉淀纯化， 则事先应经脱盐，否则会增加有机溶剂用 量。
与盐析相似，样品较稀时增加了溶剂投入 量和损耗，降低了溶质收率，还易产生稀 释变性，但共沉作用小，分离效果好。
制作人：蒋益德 学号：1109080014 日期：2013.12.25
1.说出有机溶剂沉淀法的原理 2.说出有机溶剂沉淀时需具备哪些条件
向水溶液里加入一定量亲水性有机溶剂， 降低溶剂的溶解度，使其沉淀析出的分离 纯化方法谓之“有机溶剂沉淀法”。
其机理有二。（一）亲水性有机溶剂加入 溶液后降低了介质的介电常数，溶质分子 之间的静电引力增加，聚集形成沉淀。根 据库伦公式：带电质点间的静电作用力在 质点电量不变，质点间距离不变的情况下 与介质的介电常数成反比。
等电点时蛋白质溶解度最低，因此有机溶 剂沉淀时，溶液ph应尽量在蛋白质等电点 附近，但是ph的控制还必须考虑蛋白质的 稳定性。例如很多酶的等电点在ph4-5之间， 比其他稳定的ph范围低，因此ph应首先满
足蛋白质稳定性的条件，不能过低。另外，
应避免让目的物与主要杂质带相反电荷， 导致严重共沉作用。
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