死活细胞的鉴定方法
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法
1、活体染色剂—亚甲基蓝溶液以前的教材中，活体染色剂亚甲基蓝溶液可用来鉴别所有有新陈代谢的细胞，利用交换吸附的原理，只有活细胞才能完成交换吸附。
2、胚的染色—红墨水细胞膜在细胞存活时有选择透过性，所以有机染料一般不会吸收，所以用它可以鉴定种子的死活，如玉米细胞是活的，胚没被染红，胚乳被染红。
3、显微镜观察—质壁分离和复原活的成熟的植物细胞有明显的质壁分离和复原现象。
显微镜观察—胞质环流通过细胞质流动实验的观察可以知道，只有活细胞才有胞质环流现象。
4、染色剂—台盼蓝人教版教材中，用台盼蓝染色剂，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜，所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
5、酵母细胞—由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
死活细胞的鉴定方法
活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力，测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以，在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
1 染色法染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯（FDA）是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。
高中判断细胞死活的方法
高中判断细胞死活的方法1、细胞活染色法是判断细胞死活的最常用的方法。
细胞活染色是利用细胞内的染料色素向细胞的细胞膜渗透，从而判断细胞的活性，根据细胞的染色状态可以分析出细胞存活与否的情况。
活细胞可以将染料色素向细胞膜渗透内，释放着色素，从而使整个细胞呈现深色；死亡细胞不能将染料色素渗入细胞膜内，整个细胞只有简单的荧光。
2、细胞凝固染色法也是判断细胞死活的一种方法。
凝固染色法分为偏光显微镜和免疫染色两种方法。
偏光显微镜利用偏光显微镜来分析死亡细胞，活细胞细胞膜会很完整，上面有凝固，而死亡细胞细胞膜会出现破坏，凝固状态比较差；免疫染色法是通过特殊抗体将活细胞与死亡细胞区分开来，根据活细胞与死亡细胞的染色状态可以判断细胞死活情况。
二、细胞死活相关试剂1、细胞活染色的试剂：培养基、染料色素、抗体，这些试剂都可以用来判断细胞死活情况。
2、凝固染色的试剂：偏光显微镜试剂包含：偏光显微镜、抗体和染料；免疫染色的试剂包含：抗体和染料。
三、实验操作1、细胞活染色实验操作：（1）将细胞样本用培养基取出，然后放入低温室，调节温度到4℃；（2）根据细胞类型，将染料色素和抗体按比例混合；（3）将混合物和细胞样本放入封闭状态的容器中，搅拌均匀；（4）将容器放置于25℃恒温环境，等待细胞染色；（5）观察染色状态，分析细胞的活性，根据染色状态判断细胞存活与否的情况。
2、凝固染色实验操作：（1）准备偏光显微镜和免疫染色所需的试剂；（2）取出细胞样本，利用偏光显微镜对细胞进行检测，观察细胞膜的凝固状态；（3）将免疫染色试剂混合，混合物和细胞样本放入封闭状态的容器中，搅拌均匀；（4）将容器放置于25℃恒温环境，等待细胞染色；（5）观察染色状态，分析细胞的活性，根据染色状态判断细胞存活与否的情况。
四、细胞死活判断的重要性为了判断细胞死活，需要使用活染色和凝固染色方法，以准确地判断细胞的活性、数量以及存活情况。
细胞死活的判断很重要，因为它可以帮助我们研究细胞的生命周期，认识生物的机理，从而探索生物的发展规律，发现新的生物科学，为生命科学及其应用提供有价值的研究和发现。
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的方法
鉴定细胞死活的常见方法如下：
1.显微观察：使用倒置显微镜或荧光显微镜观察细胞形态和结构，判断细胞是否出现明显的形态变化或结构改变。
2.染色方法：使用各种染色剂（如乙酰红胶、甲基蓝、孔雀石绿等）对细胞进行染色，观察染色结果来判断细胞的颜色和形态，从而判断细胞的死活。
3.细胞膜渗透性检测：使用荧光染色剂（如PI、DAPI等）通过细胞膜进入细胞内，观察细胞是否发生荧光变化，判断细胞膜的完整性和死亡程度。
4.细胞内酶活性检测：使用特定的酶底物和荧光染料（如细胞色素c、卡尔比蓝等）对细胞内酶活性进行检测，观察是否发生荧光变化，判断细胞内的酶活性和细胞状态。
5.流式细胞术：使用流式细胞术对细胞进行筛选、分离和分析，通过测量细胞形态、大小、颜色等参数，来判断细胞的死亡程度和数量。
6.细胞增殖检测：通过检测细胞的DNA合成、核分裂或细胞周期等指标，来判断细胞生长和增殖的状态，进而推断细胞的死亡或存活。
值得注意的是，不同的细胞类型和实验目的可能需要使用不同的死活检测方法。
区分活细胞和死细胞的方法
区分活细胞和死细胞的方法同学们，今天咱们来研究一下怎么区分活细胞和死细胞，这可有意思啦！有一种简单直接的方法，那就是观察细胞的形态。
活细胞通常看起来饱满、有光泽，就像充满活力的小朋友，精神头十足。
而死细胞呢，往往会变得干瘪、皱缩，就像泄了气的皮球。
比如说，我们观察洋葱表皮细胞，如果细胞看起来圆润、透明，那很可能是活的；要是变得皱巴巴、颜色暗淡，那可能就是死了。
还有一种方法是看细胞能不能进行新陈代谢。
活细胞就像一个小工厂，不停地进行着各种化学反应，吸收营养物质，排出废物。
我们可以通过检测细胞对某些物质的吸收或者产生来判断它是不是活着。
比如，给细胞提供一些有颜色的染料，如果活细胞能吸收这些染料，就说明它在进行新陈代谢。
再来说说细胞膜的通透性。
活细胞的细胞膜就像一个聪明的保安，只允许对细胞有用的物质进来，没用的或者有害的就挡在外面。
而死细胞的细胞膜就失去了这种控制能力，什么东西都能随便进出。
我们可以用一些特殊的染料或者试剂来检测细胞膜的通透性，从而判断细胞的生死。
细胞的繁殖能力也是一个重要的指标。
活细胞能够分裂、生长，不断产生新的细胞。
如果我们在显微镜下观察到细胞正在进行分裂，那它肯定是活的。
而死细胞可没有这种本事。
还有一种有趣的方法是台盼蓝染色法。
台盼蓝这种染料一般进不了活细胞，但能进入死细胞，让死细胞染上蓝色。
所以，我们把细胞和台盼蓝染料放在一起，如果细胞被染成蓝色，那就是死细胞；没被染色的就是活细胞。
在观察培养的细胞时，我们用台盼蓝染色，发现大部分细胞没有被染色，只有少数细胞变蓝了，那就说明大部分细胞是活的，少数细胞已经死亡。
通过这些方法，我们就能比较准确地区分活细胞和死细胞啦。
这对于我们研究细胞的生命活动、疾病的发生机制，还有药物的效果等等都非常重要。
想象一下，如果医生不知道怎么区分病变组织中的活细胞和死细胞，就很难制定出有效的治疗方案。
所以，学会区分它们，能帮助我们更好地了解生命的奥秘，解决很多实际的问题呢！。
死活细胞的鉴别
（一）、死活细胞的鉴别生活细胞近似无色透明，用普通光镜无法观察其形态，需用相差显微镜来观察。
染色排除法：组织培养中检查死活细胞最常用的是“染色排除法”这类方法简单但不甚严格，它只能判断细胞的代谢死亡，不反映细胞能否增殖。
由于未经过固定、专门染色，所以看不到死活细胞的形态差别。
所用染料的分类：一般的生物染料不能穿过活细胞膜只有细胞被固定或细胞膜被破坏，染料才能进入细胞膜。
第一类：死细胞着色，使死细胞着色的大部分是酸性染料。
它们不容易穿透活细胞的质膜，进入胞内，但却能渗透死亡的细胞，使之着色。
如①台盼兰（Trypan blue）：0.5-1%的台盼兰，pH7.0-7.2，每毫升细胞悬液加0.1ml 染液，2 分钟后镜检，活细胞没有染上，死细胞全部被染成蓝色。
②苯胺兰(Aniline’ black)：0.05%的苯胺黑以1：10 的量与细胞悬液混匀，1-2 分钟后，死细胞被染成黑色。
③伊红Y：细胞悬液与细胞悬液混喝，2 分钟后死细胞被染成桃红色。
等。
第二类：活细胞着色，多为碱性染料，如中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯胺蓝等。
它们是一些无毒或毒性很小的染料，由于电性吸引而堆积在细胞中某一特定的结构上从而显色，即它们解离后带正电，其中有的染料可与胞内某些结构专一性的结合。
①1%结晶紫染色生理1%结晶紫盐水与细胞悬液1：2 混合，立即镜检，或细胞被染成蓝紫色，而死细胞不着色。
属于活细胞染料。
活细胞染料无毒，无物理、化学变化，基本上不影响细胞的生命活动。
②用呀啶橙染色可以鉴别出细胞固定前的死活状态。
丫啶橙是一种与DNA 和RNA 都能结合的荧光染料，在兰光或紫外光激发下，DNA 可激发出530nm 的荧光发射峰，RNA 可激发出640nm 的荧光发射峰，它与双链DNA 的结合方式是潜入双链之间，而与单链DNA 和RNA 则由静电吸引堆积在磷酸根上。
在蓝光的激发下，细胞核发亮绿色荧光，核仁和胞质RNA质发生变形，其核呈暗绿色，胞质整个呈暗绿色。
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法细胞死活是生物学研究者最常见的技术之一，在研究细胞的死亡机制和存活率方面非常有用。
它的主要功能是帮助研究者更好地了解细胞的死活状态，从而有助于开发治疗某些疾病的新疗法。
本文将主要介绍如何识别细胞的死活情况。
首先，我们可以通过免疫细胞染色技术来识别细胞的死活情况。
通过免疫细胞染色，可以检测细胞表面抗原，从而辨别细胞是否处于活跃状态。
这是一种非常有效的判断细胞活性的方法，效率也比其他方法高得多。
此外，我们还可以通过细胞膜电位测定法来识别细胞的活活性。
当细胞处于活跃状态时，细胞膜电位会显示出异常低的水平，这可以作为判断细胞活性的标准之一。
另外，我们还可以通过细胞膜的胞外/胞内pH值测定，也可以判断细胞的活活性。
当细胞处于活跃状态时，其胞外pH值显示出异常高的水平，而胞内pH值显示出异常低的水平。
此外，我们也可以使用免疫荧光技术来辨别细胞的死活情况。
通过免疫荧光，可以检测细胞内的某些细胞激素，从而判断细胞是否正在死亡。
如果细胞内的激素含量正常，则可以判断该细胞正处于活跃状态。
另外，我们还可以通过真菌抗原快速检测（FAR）技术，来区分细胞是活着还是死了。
这种技术将检测物质从细胞表面抗原中提取出来，然后对抗原进行鉴定，以及判断该细胞是活跃还是死亡。
最后，我们还可以通过外周血细胞汇总定量微板（PBMC）测定法，来判断细胞的死活情况。
这种技术可以鉴别外周血细胞的活活性，通过检测细胞内的特定生物学特征，以及血液样本中的细胞分布情况，来判断细胞的存活率。
总之，以上是几种常用的来识别细胞的死活情况的方法。
它们的共同特点是，都可以有效地帮助研究者识别细胞的死活情况，以便为未来的制药治疗带来帮助。
由于这些技术有着显著的功效，因此在研究细胞死活状态时，研究者都要考虑它们。
死活细胞鉴定
生物探究活动——鉴定植物细胞的死活【实验目的】学习用质壁分离法和用活体染色法鉴定细胞死活【实验原理】活细胞的原生质层具有选择透过性；而死细胞则为全透性。
选择透过性是质壁分离的先决条件。
因此能发生质壁分离的细胞就表示是活的，不能发生质壁分离的细胞则说明是死的。
死活细胞间不仅通透性不同，而pH值等情况也不同，它们对某些染料的反应明显不同。
某些染料能在活细胞的细胞液中积累，但不能染活的原生质；另一方面，这些染料可使死细胞的结构染色，但不积累于液泡。
所以可根据某些染料活体染色的情况来鉴定细胞死活。
【实验材料和用具】洋葱及其它植物材料、酒精灯、显微镜、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、1M蔗糖溶液、0.01%中性红溶液等。
【实验步骤】1、用质壁分离的方法鉴定细胞的死活。
撕洋葱表皮细胞滴加1M蔗糖溶液，在显微镜下观察。
细胞很快发生质壁分离，这就是细胞活着的证据。
另把制取的同样制片，用冷冻、加热、干燥、酒精浸泡等方法将它们的细胞杀死，然后取代上述活材料，做质壁分离实验，结果看到已死的细胞不能发生质壁分离现象。
用尿素、硝酸钾、氯化钙溶液等来代替蔗糖溶液，能快速鉴定细胞的死活。
2、用活体染色的方法的鉴定细胞的死活。
取洋葱或其它材料，用镊子撕下表皮（如表皮不易撕下，也可在水中用锋利的刀片轻轻刮去多余部分），或用刀片做成切片若干，将表皮或切片浸入中性红溶液中，放置5-10分钟最后用清水浸洗后置于载玻片上，加盖玻片，在显微镜下观察。
活细胞的液泡内染成红色至紫色，原生质不染色，死细胞常呈橙红色，原生质和细胞核被染色。
撕破的细胞，只剩细胞壁时，呈淡红色或淡紫色。
为进一步鉴别细胞的死活，可把玻片上的水溶液吸去，滴一滴1M蔗糖溶液，便可观察到活细胞能发生质壁分离，死细胞及只剩细胞壁的空细胞都有没有这种现象。
可用加热、冷冻或其它方法杀死植物组织，然后用上面所述方法进行处理，比较与活组织有何不同。
注：1台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
死活细胞的鉴定方法
活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力，测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以, 在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
1染色法染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝, 又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯（FDA是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体FDA本的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。
实验七 死活细胞鉴别
实验一死活细胞鉴别目的要求学习并掌握死活细胞鉴别的原理及方法。
实验原理死活细胞鉴别有许多不同的方法，其中最常用方法是染色排除法。
其原理是：许多酸性染料不容易穿过活细胞的质膜进入胞内，使其着色，以此来鉴别死活细胞。
也可以用荧光排除法来鉴别，其原理是：由于活细胞内有较强的酯酶活性，可将二丙酸酯荧光素分解出来，从而使细胞发出强烈的黄绿色荧光。
而死亡的细胞，由于酯酶活性丧失，不能分解二丙酸酯荧光素，则完全没有荧光，从而区别死活细胞。
实验用品（1）器材：显微镜、荧光显微镜、离心机。
（2）试剂：1％台盼蓝溶液（生理盐水配制）、0.05％苯胺黑Hanks溶液、0.02％赤藓红B 染液、0.15％伊红Y染液（生理盐水配制）、丙酮Ph5～6的生理盐水、0.65mol/L甘露醇、二丙酸酯荧光素染液（取二丙酸酯荧光素10mg溶于5ml丙酮中，将此溶液逐滴加入5ml生理盐水或0.65mol/L甘露醇溶液中直至出现永久性乳白色沉淀为止）。
（3）材料：培养细胞。
方法台盼蓝（Trypan Blue）法。
（1）试剂：用生理盐水配成0.4％台盼蓝染液。
（2）染色制片：取0.5ml细胞悬液放入干净试管中，加入约0.1ml（1～2滴）染液，混合，2min后立即制成临时装片，镜检。
（3）结果：死细胞染成蓝色，活细胞不着色。
根据下式求细胞活力：细胞总数－死细胞数细胞存活率（％）＝×100％细胞总数观察结果生活力强的细胞能发出强烈的黄绿色荧光；生活力弱的细胞发出荧光也较弱；死亡细胞则无荧光。
作业书写实验报告，计算所测细胞成活率。
思考题细胞活力检测有何用途？。
对于死细胞和活细胞的检测
对于死细胞和活细胞的检测细胞检测是现代生命科学中一项重要的研究技术，它能够帮助科学家们更好地理解细胞的结构和功能。
在细胞检测中，对于死细胞和活细胞的区分是一项关键任务。
本文将介绍几种常用的方法和技术，用于死细胞和活细胞的检测。
一、显微镜观察法显微镜观察法是最常见和直观的方法之一。
通过光学显微镜或荧光显微镜观察细胞样本，死细胞和活细胞通常会显示出不同的形态和特征。
1. 死细胞：死亡的细胞通常会失去原有的形态结构，细胞膜会发生透明化，并且细胞内部结构会发生溶解或崩解。
在显微镜下观察，死细胞通常呈现出淡颜色或无颜色，失去了细胞的活力。
2. 活细胞：活细胞具有完整的形态结构，细胞膜完整无缺，并且细胞内部结构可见。
在显微镜下观察，活细胞通常呈现出鲜艳的颜色，细胞具有明显的活力。
显微镜观察法的优点是简单易行，但它无法量化细胞的存活率和死亡情况，只能提供对细胞状态的直观判断。
二、细胞染色法细胞染色法是一种常用的细胞检测方法，通过染色剂与细胞特定的成分或结构发生特异性反应，从而实现死细胞和活细胞的区分。
1. 年龄染色剂：细胞死亡后，其细胞膜通透性增加，可以用某些染色剂直接渗透到细胞内部，如乙锭和丙硫菌素等。
死细胞会呈现出亮绿色或亮红色，而活细胞则不会显颜色。
2. 细胞膜染色剂：细胞膜染色剂可与活细胞膜结合，形成可观察的颜色变化。
荧光染料如胶体金和荧光素-912等在活细胞中会表现出荧光信号，而在死细胞中没有或明显减弱。
细胞染色法具有较高的特异性和灵敏度，可以在显微镜下观察到细胞的染色情况，但它对于染色剂选择和操作技术要求较高。
三、流式细胞术流式细胞术是一种高通量的细胞检测方法，利用流式细胞仪对细胞进行快速和准确的分析。
1. 染色法：流式细胞仪通常配备多种不同的细胞染色试剂，如细胞膜染色剂、活细胞假染剂和核酸染色剂等。
通过选择适当的染色方法，可以将死细胞和活细胞准确地区分开来。
2. 四象限图法：流式细胞仪利用四象限图法，将细胞根据细胞膜与核酸染色的属性进行分类。
细胞死活的检测方法举隅
细胞死活的检测方法举隅作者：曹建平来源：《中学生理科应试》2021年第10期农业上，播种之前需要检测种子的活力;医学上，为了检测某一男子的生育能力，需要测定精子的活力;为了检验药物对肿瘤细胞的杀伤力，需要测定肿瘤细胞的存活率等等.由此可见，细胞死活的鉴定在生产生活和医学研究方面具有重要意义.本文简单介绍几种检测细胞死活的方法，并结合部分试题进行分析.一、检测方法举隅1.台盼蓝染色法台盼蓝是一种阴离子型染料，它只能透过受损细胞或死亡细胞的细胞膜（质膜），而正常的活细胞能加以排除，即死细胞着色，活细胞不着色.2.荧光染色法荧光素双醋酸酯（FDA）是一种常用的动植物细胞的生活力鉴定染料.FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由出入细胞.当FDA进入活细胞，被细胞内的脂酶分解，产生有极性的、能发出荧光的荧光素，荧光素不能自由透过活细胞膜，积累在细胞内，使细胞产生绿色荧光.3.美蓝染色法美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色，主要用于检测酵母细胞死活.由于活细胞具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞，被染成蓝色或淡蓝色.4.TTC染色法氯化三苯基四氮唑（TTC）常用于检测种子的生活力以及哺乳动物组织的缺血梗塞.TTC 溶于水中形成無色溶液，细胞中的脱氢酶可将TTC作为受氢体，使之还原成不溶于水的红色稳定的三苯基甲臢（TTF）. 如果脑组织细胞或胚种细胞死亡或生活力衰退，则不能染色或染色较浅.5.质壁分离法质壁分离法主要是检测成熟的植物细胞有无活性的方法.因为活细胞的原生质层具有选择透过性，所以活的成熟的植物细胞才可发生质壁分离.6.细胞质流动法细胞质流动需要消耗细胞代谢产生的能量，活细胞才进行细胞代谢，所以活细胞具有胞质环流现象.二、经典试题赏析例1 TTC法和红墨水染色法是检测种子活力常用方法，下列说法错误的是（）.A.在TTC法中，胚被染成红色的是具有活力的种子B.红墨水染色法中，胚不着色或着色很浅的是具有活力的种子C.这两种方法在原理上相似，均应用了活细胞的膜具有选择透透过性D.在TTC染色法中，被染成红色较深的种子细胞呼吸可能较强解析由于TTC能被细胞呼吸产生的＼[H＼]还原成红色不溶于水的物质，胚是种子的主要结构，故胚被染成红色的是具有活力的种子，A选项正确;红墨水中的色素不是活细胞需要的物质，如果胚被染色较深，说明胚细胞死亡;如果胚不着色或着色很浅，说明胚具有活力，B 选项正确;两种染色方法的原理不同，红墨水利用了细胞膜的选择透过性，根据“TTC染色法”可知，TTC染色的原理是TTC被细胞呼吸产生的＼[H＼]还原成不溶于水的红色，利用的是细胞的代谢产物，C选项错误;细胞呼吸越强，产生的＼[H＼]越多，TTC被还原产生的红色不溶于水的物质越多，D选项正确.参考答案：C例2 在进行植物体细胞杂交前，必须先获得有活力的原生质体.测定原生质体活力的常用方法之一是荧光素双醋酸酯（FDA）染色法，其基本原理是FDA本身无荧光，可自由通过细胞膜，经细胞内酯酶分解产生积累在细胞内并能发出绿色荧光的荧光素.相关叙述正确的是（）.A.FDA是一种大分子物质，通过胞吞进入细胞B.荧光素分子能以自由扩散的方式通过细胞膜C.实验中配制的FDA溶液是一种低渗溶液D.绿色荧光的强度与原生质体的活力呈正相关解析根据FDA可自由通过细胞膜，确定其不是大分子物质，A选项错误;根据荧光素积累在细胞内，确定其不能自由通过细胞膜，B选项错误;因为原生质体没有细胞壁，若为低渗溶液，则原生质体会吸水涨破，不能完成实验，C选项错误;原生质体的活力越强，酯酶活性越强，产生的荧光素越多，D选项正确.参考答案：D例3 下列有关不同实验中细胞死活的推测，正确的是（）.A.在高倍镜下观察黑藻细胞，发现细胞质缓慢流动，表明此时细胞是死细胞B.用台盼蓝染液处理酵母菌，细胞被染成蓝色，表明酵母细胞是活细胞C.健那绿染液染色后的口腔上皮细胞，线粒体为蓝绿色，表明细胞是活细胞D.将洋葱鳞片叶细胞置于质量分数为10%的蔗糖溶液中未发生质壁分离，则确定此细胞是死细胞解析活细胞的细胞质不停地流动，黑藻的细胞质流动，表明细胞是活细胞，流动缓慢可能是温度太低造成，A选项错误;活细胞的细胞膜能控制物质进出，使台盼蓝不能透过细胞膜，酵母细胞被染成蓝色，说明细胞死亡，B选项错误;健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以将线粒体染成蓝绿色，C选项正确;将洋葱鳞片叶细胞置于质量分数为10%的蔗糖溶液中，细胞不能发生质壁分离，原因可能是该蔗糖溶液浓度低于细胞液浓度或细胞是死细胞，D选项错误.参考答案：C（收稿日期：2021-07-28）。
细胞活性检测方法有哪些？
细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标,如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。
目前常用的方法有很多,如有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素掺入法、MTT法等。
本文总结了一些常用的细胞活性检测方法的原理、特点，并对比了各自的优缺点。
一、染色计数法1. 化学染色法染色计数法是细胞培养中检查细胞死活最常用的方法，直接利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力，检查细胞活性，能在光学显微镜下观察到染色结果。
可分为两类：死细胞着色法和活细胞着色法。
使死细胞着色的常用染料有台盼蓝、苯胺黑、伊红Y。
能使活细胞着色的常用染料有结晶紫、亚甲基蓝、甲苯胺蓝等。
其中最常用的是台盼蓝染色法。
细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色，而活细胞能阻止染料进入细胞内，故可以鉴别死细胞与活细胞。
通过细胞计数可得出细胞的存活率。
本染色法方便实用，价格低廉，操作简单。
但是台盼蓝染色时，时间不宜过长，否则部分活细胞也会着色，会干扰计数。
而且，细胞没有经过固定，形态不清晰。
2. 荧光染色法一些荧光染料对死细胞和活细胞也有不同的作用效果，利用荧光显微镜检测细胞活性。
如碘化丙啶（PI），被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜，因此活细胞不被染料上色，只有死细胞或凋亡细胞才能被染上红色。
吖啶橙（AO）能透过质膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。
溴乙锭（EB）仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。
也可应用AO-EB双染法鉴定细胞死活。
这种检测方法相比传统的染料，具有灵敏度高，操作简便，结果容易分辨等特点，而且利用双染法还可以分辨活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞、死亡细胞。
在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。
缺点在于，要求特殊的仪器进行检测，如荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜或流式细胞仪。
而且通过荧光染料具有毒性，操作时需要带手套。
死活细胞鉴别操作流程
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证明细胞死活的方法
证明细胞死活的方法细胞死活是生命科学领域中一个重要的研究方向，其中有多种不同的方法可用于检测细胞的死活。
下面是一些经典的方法及其原理和应用。
一、胞内酶活性检测法这种方式通过检测酶的活性来判断细胞的死活。
常见的酶包括：1. 胞内的酶：例如肝细胞中的丙氨酸转移酶（ALT）、天门冬氨酸转移酶（AST）等，这些酶在细胞死亡时会大量释放到细胞外。
2. 细胞膜酶：例如乳酸脱氢酶（LDH）、大肠杆菌毒素（ET）等，这些酶在细胞死亡时会破坏细胞膜而释放到细胞外。
这种方法的优势是可靠性高、操作简便，但其缺点是无法准确区分细胞的凋亡和坏死。
二、细胞形态学观察法细胞形态学观察法是使用光学显微镜或电子显微镜来直接观察细胞的形态变化。
常见的方法包括：1. 肌动蛋白染色法：通过染色显微镜观察肌动蛋白在细胞内的位置，从而判断细胞形态是否正常。
2. 同化染色法：使用荧光染料染色，观察细胞内各种细胞器是否正常分布，从而判断细胞死亡方式和死亡程度。
这种方法的优点是可以直观地观察到细胞形态及其内部结构的变化，但其缺点是操作复杂，对设备要求高。
三、细胞代谢检测法这种方式通常以ATP的含量和代谢酶的活性作为指标，通过检测这些指标来判断细胞的死活。
常见的方法包括：1. MTT法：MTT在氧化还原酶的作用下可以转换为紫色产物，从而通过分光光度计来判断细胞代谢活性。
2. 荧光染色法：使用荧光标记的ATP探针来观察ATP的含量从而判断细胞代谢活性。
这种方法的优势是可以更全面地反映细胞的代谢状态，但其缺点是操作复杂，对高灵敏度仪器的要求较高。
总结：以上就是细胞死活检测的一些经典方法，不同的方法有着各自的优缺点，并且一种方法的适用范围也会受到具体的实验条件、细胞类型、死亡方式等因素的影响。
区别细胞死活的方法
区别细胞死活的方法以《区别细胞死活的方法》为标题，写一篇3000字的中文文章表达细胞的存活状态一直是生物学领域的一个重要课题。
实验室中的细胞死活的检测，对每一个研究者来讲都十分重要。
然而，有几种检测方法可用于指示细胞的活替死的特性。
在本文中，我们将重点介绍几种常见的区别细胞死活的方法，以及这些方法的优势和局限性。
第一种检测方法是测量细胞膜电位、吞噬活力和膜稳定性。
在这种检测方法中，研究人员可以测量细胞膜电位和膜稳定性，检测细胞内存在的活性物质，以衡量细胞的能量代谢状态和其他活力特性。
此外，研究人员可以利用吞噬活力（如细胞吞噬染料）来检测细胞是否还活着。
第二种检测方法是针对细胞膜蛋白、游离脂肪酸和核酸来检测细胞活替死。
研究人员可以通过分析细胞膜蛋白的量来检测细胞死活状态，因为当细胞死亡后，膜蛋白会消失或衰退。
此外，研究人员可以利用脂肪酸比例来检测细胞的死活程度，因为当细胞死亡后，游离脂肪酸的含量会明显升高。
此外，研究人员还可以利用核酸检测技术，如定量PCR（qPCR），来检测细胞中特定基因的表达情况，以推断细胞是否存活。
第三种检测方法是测量细胞核状态。
此种方法借助染色技术，可以检测细胞核的形态及物理状态，以区分细胞的死活状态。
研究中，研究人员经常采用细胞核染色剂如碱型染料（如阿魏酸盐）和液态氨基丹（DAPI），来检测细胞核是否仍然存活。
总的来说，以上是几种测量细胞死活的方法，每一种都有其独特的优势和局限性。
测量细胞膜电位、吞噬活力和膜稳定性的方法可以提供电子显微镜下的细胞形态及物理状态的细节，可以更准确地判断细胞死活状态。
针对细胞膜蛋白、游离脂肪酸和核酸的检测方法，可以提供细胞代谢和基因表达方面的活替死信息，可以给出细胞死活状态的更精确的估计。
细胞核染色的技术，可以判断细胞的死活状态以及细胞的健康状况。
此外，不同的检测方法都可以结合实验技术，以便由研究人员选择最合适的技术，以正确地判断细胞的死活状态。
死活细胞的鉴定方法
死活细胞的鉴定方法鉴定死活细胞有多种方法，以下是几种常见的死活细胞鉴定方法：1.染色法染色法是一种常用的死活细胞鉴定方法。
它通过染色剂对细胞膜通透性的不同来区分活细胞和死细胞。
常用的染色剂有台盼蓝、中性红、碘化丙啶等。
台盼蓝可以透过死亡细胞的细胞膜，使死细胞着色，而活细胞则不能。
中性红和碘化丙啶则只能透过活细胞膜，使活细胞着色。
通过这种方法，可以清楚地看到细胞中的死活细胞分布情况。
2.荧光染色法荧光染色法是一种灵敏度更高的死活细胞鉴定方法。
它利用荧光染料对细胞进行染色，在荧光显微镜下观察细胞的荧光情况。
活细胞能够吸收荧光染料，发出荧光，而死细胞则不能。
这种方法可以更准确地检测出细胞中的死活细胞比例。
3.呼吸测试法呼吸测试法是一种直接检测细胞活性的方法。
它通过测量细胞在氧气消耗和二氧化碳释放方面的变化来评估细胞的活性。
活细胞在代谢过程中需要消耗氧气并释放二氧化碳，而死细胞则不具备这种代谢活性。
通过测量氧气和二氧化碳的浓度变化，可以判断细胞的死活情况。
4.膜电位法膜电位法是一种通过检测细胞膜电位变化来区分活细胞和死细胞的方法。
活细胞的细胞膜内外的电位差通常为负值，而死细胞的电位差则为正值。
利用这种电位差的变化，可以判断细胞的死活情况。
5.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）活性检测法G6PD活性检测法是一种通过检测G6PD酶的活性来区分活细胞和死细胞的方法。
G6PD是红细胞中的一种酶，当红细胞死亡时，该酶的活性会迅速下降。
通过检测G6PD的活性，可以判断细胞的死活情况。
6.线粒体膜电位检测法线粒体膜电位检测法是一种通过检测线粒体膜电位的变化来区分活细胞和死细胞的方法。
线粒体是细胞中负责能量代谢的重要细胞器，活细胞的线粒体膜电位通常为负值，而死细胞的线粒体膜电位则为正值。
通过检测线粒体膜电位的变化，可以判断细胞的死活情况。
死、活细胞鉴别实验原理及步骤
实验十四死、活细胞鉴别实验目的：掌握鉴定死、活细胞的常用方法及原理。
观察死、活细胞在形态及染色方面的主要差异。
下面介绍两种比较常用的方法方法（一）染色排除法实验原理和方法：组织培养中检查细胞死活最常用的方法是染色排除法，即以死活细胞对色素的不同吸附能力来鉴别，这种方法简单，适用。
但严格地说，它只能判断细胞的代谢死亡，不反应细胞能否增殖。
由于未经固定、染色，所以不能看到死、活细胞的形态差别，样品也不能保留。
本实验介绍动物细胞染色排除法常用的染料及染色方法：第一类死细胞着色：使死细胞着色的大多是酸性染料，它们不容易穿透活细胞的质膜进入细胞内，却能渗进死亡的细胞，使之着色。
台盼兰（Trypan Blue）：将台盼兰溶于被检测细胞所需的生理盐水中，配成0。
5—1。
0%溶液，调PH7。
0—7。
2，每毫升细胞悬液约加0。
1毫升染液，混合后约2分钟即可镜检。
死细胞被染成兰色。
因台盼兰有轻度的毒性，染色时间不宜太长。
染色时间15分钟以上，活细胞也会因为受损而着色。
台盼兰染液不宜久存，陈旧者有毒性。
苯胺黑（Aniline black）：0。
05%苯胺黑Hanks溶液以1：10量与细胞悬液混合1-2分钟后，镜检，死细胞着黑色。
此染料毒性很小。
赤显红B（Erythrosin B）：细胞先用Hanks液或PBS溶液洗，以除尽培养基中的或细胞周围的血清，取适量细胞与0。
02%的赤显红B混合，两小时之内镜检，死细胞着红色。
第二类：活细胞着色法0。
1%的结晶紫生理盐水溶液与细胞悬液1：2混合，立即镜检，活细胞染成兰色。
此外使活细胞着色的染料还有亚甲基兰（Methylene blue）、甲苯胺兰（Toluidine blue）。
方法（二）吖啶橙法[一]实验原理：细胞经甲醇-乙醚固定后，用吖啶橙染色，能鉴别出固定之前细胞的死、活状态。
吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种与DNA和RNA都能结合的荧光染料，在兰光或紫外光激发下，原来的活细胞经固定，染色后细胞呈绿色，核仁和散布在细胞质中的RNA呈桔红色，细胞质其余部分为淡红褐色。
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活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。
细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。
在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力，测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。
死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。
染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。
但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以，在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。
不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。
常用的方法包括染色法和仪器分析法。
1 染色法
染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。
死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：
死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。
常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。
台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。
所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
甲基蓝有类似的染色机理。
植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。
死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。
美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原
型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。
荧光素双醋酸酯（FDA）是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。
当FDA进入活细胞后，被细胞内的脂酶分解，生成有极性的、能产生荧光的物质——荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞膜内，因而使有活力的细胞产生绿色荧光；而无活力的细胞因不能使FDA分解，而无法产生荧光。
除此之外，还有一些细胞器的专有染料。
如液泡系的专有染料中性红。
中性红是一种低毒性染料，可以使活细胞液泡着红色，而细胞质和细胞核不被着色；死细胞的液泡不被着色或浅染，染料弥散于整个细胞中，细胞核和细胞质被染成红色。
有时侯为了增加染色效果可以将两种染料结合使用，如甲基蓝-中性红混合染色法。
2 仪器分析法
可采用微电极技术（利用死活细胞膜两侧电位的差异）、全自动分析细胞记数仪和流式细胞仪等，可对细胞的死活进行精确的批量检测。
德国INNOVATIS出产的全自动Cedex细胞存活率/细胞计数仪/细胞分析仪是世界上第一台高分辨率、高清晰度扫描(专利)细胞分析仪，具有全自动台盼蓝染色、显微CCD成象、CEDEX工作站软件，可用于制药、医学、发酵、免疫、病理、毒性测试、生物技术等学科的研究开发和工业生产过程中的细胞计数和分析。
自动分析结果，检测分析数据输出（11项)：总细胞数目，总细胞浓度(cells/mL) ；活细胞数目，活细胞浓度 (cells/mL)；死细胞数目，死细胞浓度(cells/mL) ；细胞存活率 (%) ；细胞的平均圆度 (compactness) ；细胞的平均直径 (um) ；细胞团比例（Aggregate Rate）；细胞直径分布图（Diameter Histogram）；细胞团分布图（Aggregate Histogram）；细胞圆度分布图(Compactness Histogram) ；细胞生长时间曲线（Cultivation Time Chart）。
流式细胞仪法用来判断细胞死活的常用荧光探针有二大类：一类是能透过活的细胞膜进入细胞内而发出荧光的物质，例如FDA可被活细胞持留而发出黄
绿色荧光，若细胞有损伤则会从细胞中流失，观察不到荧光。
另一类是不能透过活细胞膜，但能对固定的细胞及膜有破损的细胞的核进行染色，例如碘化丙啶（ PI,Propidium iodide ）和溴化乙锭（ EB,Ethidium bromide ）就是常用的第二类荧光探针。
碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜，对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色。
而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性丧失，碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞。
目前常用的一种细胞凋亡与坏死检测试剂盒则含有Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)两种荧光染料。
细胞发生凋亡时，染色质会固缩，Hoechst 33342可以穿透细胞膜，染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强。
上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋强蓝色荧光。
此外，还可以用植物细胞的质壁分离试验来对植物细胞的死活进行见证，还可以通过观察细胞质的流动性进行细胞的死活鉴定。