营养与食品卫生学课件实验六蔬菜中胡萝卜素的测定
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用石油醚将胡萝卜素洗脱，用比色法直接测定。
三．仪器
1．组织捣碎机 2．层析缸 3．新华中速滤纸（16cm×20cm） 4．分液漏斗 125ml 5．具塞试管 50ml 、5ml 6．瓷蒸发皿 7．分光光度计 8．天平 9．水浴锅
四．试剂
1．石油醚（分析纯） 2．丙酮（分析纯） 3．3:7丙酮——石油醚 4．无水硫酸钠 5．5%硫酸钠溶液 6．β-胡萝卜素标准液（50μg/ml）
一. 实验目的：
熟悉蔬菜中胡萝卜素的测定原理 测定样品中的胡萝卜素的含量
二．原理：
蔬菜的植物色素包括叶绿素、叶黄素及胡萝卜素等 蔬菜中各种色素均可溶于石油醚，将一定量的植物
色素石油醚提取液点在层析纸的一端，用石油醚作 展开剂，进行上行展开。 由于胡萝卜素极性最小，故被石油醚洗走的速度最 快，从而可将胡萝卜素与其它色素分开。
五．操作步骤
1. 150g蔬菜(洗净晾干)+280ml水 → 捣碎3min(公用) 2. 称取10g匀浆（相当于原样品3g）入具塞比色管→加
入丙酮20ml、石油醚5ml →用力振摇1min(脱色) → 静置5min 3. 于125ml分液漏斗内先放入5%硫酸钠溶液30ml，用 滴管吸上清液入分液漏斗 4. 用3:7丙酮石油醚混合溶剂提取残渣，每次10ml，共 3次，直至提取液无色为止，每次提取液入分液漏斗
V1
W 1000
（mg/100g）
A = 样品光密度相当于标准的微克数
V1 = 点样毫升数 V2 = 浓缩后固定的体积 W = 样品重（克）
实验六 蔬菜中胡萝卜素的测定
维生素A原 (provitamin A)
在体内可转换成维生素A的类胡萝卜素 (carotenoid)， 包括：
α-胡萝卜素 β-胡萝卜素 γ-胡萝卜素 隐黄素
来自深色蔬菜水果（胡萝卜、辣椒、芒果、杏等）
维生素A (vitamin A) 生理功能
1. 维持正常的视觉：促进视紫红质的合成与再生 2. 细胞生长和分化 3. 免疫功能 4. 细胞膜表面糖蛋白合成 5. 抗氧化功能 6. 抑癌作用
7． 层析
（1） 点样：距滤纸底边4cm处用铅笔划一基线，在基 线上取两点，每点距纸两侧不少于4cm。准确吸取 检液0.3 ml，以画好的点为中心，迅速进行带状点样， 一次点完。
（2）展开：将点好样的滤纸卷成圆筒状，固定两边 （不使两边重叠），放入预先用石油醚饱和的层析 缸内。纸筒必须放正，滤纸筒基线以下1/3浸入液内， 进行上行层析。
注意：振摇分液漏斗使水与提取液混合均匀为宜（不宜重摇） 静置分层，放掉下层再以5%硫酸钠溶液15 ml振摇洗涤 反复三次以除尽丙酮。
提取液 残渣
提取液
5. 将上液通过盛有无水硫酸钠的漏斗滤入蒸发皿，用 少量石油醚分数次洗尽无水硫酸钠及分液漏斗中的 色素，洗液合并于蒸发皿。
6. 在60~70℃水浴上蒸至近干，立刻用石油醚少许稀释。 再用滴管吸石油醚液于5ml具塞刻度试管内，反复用 少量石油醚洗涤蒸发皿，洗液并入刻度试管，直至 洗至无色ห้องสมุดไป่ตู้定容至5ml，混匀待检。
8． 洗脱及比色
待胡萝卜素与其它色素完全分离后，停止层析，划 出溶剂前沿（便于计算Rf值）将胡萝卜素层析带剪下 （其色带的Rf值与标准色带值相同），放入盛有5ml石 油醚的试管中，用力振摇，使之洗入醚内，以石油醚为 空白，立即在450nm波长处比色。
六．计算
A
100
1
胡萝卜素= ——× V2 × —— × ———
三．仪器
1．组织捣碎机 2．层析缸 3．新华中速滤纸（16cm×20cm） 4．分液漏斗 125ml 5．具塞试管 50ml 、5ml 6．瓷蒸发皿 7．分光光度计 8．天平 9．水浴锅
四．试剂
1．石油醚（分析纯） 2．丙酮（分析纯） 3．3:7丙酮——石油醚 4．无水硫酸钠 5．5%硫酸钠溶液 6．β-胡萝卜素标准液（50μg/ml）
一. 实验目的：
熟悉蔬菜中胡萝卜素的测定原理 测定样品中的胡萝卜素的含量
二．原理：
蔬菜的植物色素包括叶绿素、叶黄素及胡萝卜素等 蔬菜中各种色素均可溶于石油醚，将一定量的植物
色素石油醚提取液点在层析纸的一端，用石油醚作 展开剂，进行上行展开。 由于胡萝卜素极性最小，故被石油醚洗走的速度最 快，从而可将胡萝卜素与其它色素分开。
五．操作步骤
1. 150g蔬菜(洗净晾干)+280ml水 → 捣碎3min(公用) 2. 称取10g匀浆（相当于原样品3g）入具塞比色管→加
入丙酮20ml、石油醚5ml →用力振摇1min(脱色) → 静置5min 3. 于125ml分液漏斗内先放入5%硫酸钠溶液30ml，用 滴管吸上清液入分液漏斗 4. 用3:7丙酮石油醚混合溶剂提取残渣，每次10ml，共 3次，直至提取液无色为止，每次提取液入分液漏斗
V1
W 1000
（mg/100g）
A = 样品光密度相当于标准的微克数
V1 = 点样毫升数 V2 = 浓缩后固定的体积 W = 样品重（克）
实验六 蔬菜中胡萝卜素的测定
维生素A原 (provitamin A)
在体内可转换成维生素A的类胡萝卜素 (carotenoid)， 包括：
α-胡萝卜素 β-胡萝卜素 γ-胡萝卜素 隐黄素
来自深色蔬菜水果（胡萝卜、辣椒、芒果、杏等）
维生素A (vitamin A) 生理功能
1. 维持正常的视觉：促进视紫红质的合成与再生 2. 细胞生长和分化 3. 免疫功能 4. 细胞膜表面糖蛋白合成 5. 抗氧化功能 6. 抑癌作用
7． 层析
（1） 点样：距滤纸底边4cm处用铅笔划一基线，在基 线上取两点，每点距纸两侧不少于4cm。准确吸取 检液0.3 ml，以画好的点为中心，迅速进行带状点样， 一次点完。
（2）展开：将点好样的滤纸卷成圆筒状，固定两边 （不使两边重叠），放入预先用石油醚饱和的层析 缸内。纸筒必须放正，滤纸筒基线以下1/3浸入液内， 进行上行层析。
注意：振摇分液漏斗使水与提取液混合均匀为宜（不宜重摇） 静置分层，放掉下层再以5%硫酸钠溶液15 ml振摇洗涤 反复三次以除尽丙酮。
提取液 残渣
提取液
5. 将上液通过盛有无水硫酸钠的漏斗滤入蒸发皿，用 少量石油醚分数次洗尽无水硫酸钠及分液漏斗中的 色素，洗液合并于蒸发皿。
6. 在60~70℃水浴上蒸至近干，立刻用石油醚少许稀释。 再用滴管吸石油醚液于5ml具塞刻度试管内，反复用 少量石油醚洗涤蒸发皿，洗液并入刻度试管，直至 洗至无色ห้องสมุดไป่ตู้定容至5ml，混匀待检。
8． 洗脱及比色
待胡萝卜素与其它色素完全分离后，停止层析，划 出溶剂前沿（便于计算Rf值）将胡萝卜素层析带剪下 （其色带的Rf值与标准色带值相同），放入盛有5ml石 油醚的试管中，用力振摇，使之洗入醚内，以石油醚为 空白，立即在450nm波长处比色。
六．计算
A
100
1
胡萝卜素= ——× V2 × —— × ———