营养与食品卫生学课件实验六蔬菜中胡萝卜素的测定
高效液相色谱法测定15种蔬菜中的胡萝卜素
2、重复性和精密度
此外，该方法具有较好的重复性和精密度，能够满足实际测定的要求。通过 本研究的开展，为准确评估蔬菜的营养价值提供了科学依据。
谢谢观看
2、样品中胡萝卜素的测定结果
表1 15种蔬菜中胡萝卜素的含量（mg/100g）
3、样品中水分含量的测定结果
3、样品中水分含量的测定结果
采用烘干法测定了15种蔬菜中的水分含量，结果如表2所示。由表可知，不同 蔬菜中的水分含量也存在显著差异。其中，生菜和芹菜中的水分含量较高，分别 为94.7%和92.5%；红薯和土豆中的水分含量较低，分别为79.3%和78.6%。其他 蔬菜中的水分含量介于上述两者之间。
采用高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素，需对方法进行重复性和精密度 评估。实验结果表明，该方法的重复性和精密度均较好，能够满足实际测定的要 求。
2、重复性和精密度
结论 本次演示介绍了高效液相色谱法测定蔬菜中类胡萝卜素的方法及注意事项。 该方法具有分离效果好、分析速度快、灵敏度高等优点，能够准确测定蔬菜中类 胡萝卜素的含量。通过对不同种类蔬菜中类胡萝卜素含量的测定，发现叶菜类蔬 菜中类胡萝卜素含量较高，而根茎类蔬菜中类胡萝卜素含量较低。
2、实验方法
（2）色谱条件：采用高效液相色谱仪进行分离分析，色谱柱为C18柱（5μm， 4.6mm×250mm），流动相为甲醇-丙酮（1:1），流速为1ml/min，检测波长为 450nm，柱温为30℃。
2、实验方法
（3）标准曲线绘制：精确称取适量胡萝卜素标准品，用甲醇-丙酮（1:1）混 合溶剂配制成不同浓度的标准溶液。分别进样分析，以峰面积（A）对胡萝卜素 浓度（C）绘制标准曲线。
3、高效液相色谱法测定类胡萝 卜素
3、高效液相色谱法测定类胡萝卜素
实验二蔬菜中胡罗卜素的测定(纸层析法)营养与食品卫生
营养与食品卫生学
四、操作步骤
（5）将石油醚提取液通过盛有10g无水硫酸钠固 体的小漏斗，滤入瓷蒸发皿。用少量石油醚分数 次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤 液合并瓷蒸发皿中。 （6）将瓷蒸发皿置于低温电热板上蒸发至约1ml 时，取下，待其自然挥干。冷却后置于冰裕上， 立即用石油醚2ml沿蒸发皿壁将色素洗下，混匀立 即点样。 （7）层析
首都医科大学
营养与食品卫生学
七、实验报告应包括以下内容
1．实验目的。 2．实验原理。
3．实验方法。
4．实验操作步骤。 5．结果的计算。 6．实验注意事项。 7．结果的评价和小结。
首都医科大学
营养与食品卫生学
首都医科大学
首都医科大学
营养与食品卫生学
五、计算
式中：X2——样品中胡萝卜素的含量，以β －胡萝卜素计，mg/100g； c——在标准曲线上所查得的胡萝卜素 的含量，μg； V1——点样体积，ml； V2——加入瓷蒸发皿内的样品石油醚 提取液浓缩后的定容体积，ml； m——样品质量，g。
首都医科大学
营养与食品卫生学
（10）标准曲线绘制：取浓度为50μg/ml的β－胡萝卜素 应用液2ml放入100ml具塞锥形瓶中，以下操作步骤与样品 1－9项相同，但点样体积分别为20μl、40μl、60μl、 80μl和100μl，相当于含胡萝卜素1、2、3、4、5μg。 比色后，以胡萝卜素含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘 制标准曲线。
点样：准确吸取待检液40μl在滤纸下端基线上A、B两 点之间或C、D两点之间迅速来回进行带状点样一次点 完（见图1）。每个样品点2带作为平行样。
首都医科大学
营养与食品卫生学
课件7：6.2 胡萝卜素的提取
A B CD 标样 样品 样品 标样 层析液——石油醚
层析液 会沿着 滤纸往 上扩散
结果评价 若萃取样品中出现了与标准样 品相同的层析带，则提取胡萝 卜素的实验成功；
若层析后的滤纸条上会出现多 个不同高度的色素点样，则提 取到的胡萝卜素含有杂质。
【课堂小结】 一、基础知识——胡萝卜素的理化性质 二、实验设计——萃取法
三、效果分析与评价——纸层析法
随堂练习
1 下列对于胡萝卜素的提取过程的叙述，错误的是 ( D) A．萃取过程中应避免明火加热，采用水浴加热 B．为了防止加热时有机溶剂的挥发，还需要在加 热瓶口安装冷凝回流装置 C．萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置 D．在浓缩前，不需要过滤，因为萃取液中没有不 溶物
2 下图为胡萝卜素的纸层析结果示意图，属于标准
思考1：乙醇和丙酮能够用于胡萝卜素的萃取吗？ 不能。因为乙醇和丙酮是水溶性有机溶剂。
思考2：哪种有机溶剂最适宜用来提取胡萝卜素？
探究二：影响萃取的因素 主要因素：萃取剂的性质和使用量 原料：颗粒的大小、紧密程度、含水量 环境：温度、时间等
原料颗粒小、水分少、萃取温度高、时间长
效果好
探究三：胡萝卜素提取装置的设计
课题二 胡萝卜素的取
专题六 植物有效成分的提取
【学习目标】
1.掌握胡萝卜素的性质和作用 2.学习胡萝卜素提取的方法及
实验装置 3.理解用纸层析法鉴定提取胡
萝卜素粗品
基础知识
（一）胡萝卜素：从胡萝卜中提取出来的橘黄色物质 包括多种结构类似物。
（二）胡萝卜素分类 α、β、γ 三类
根据碳碳 双键数目
胡萝卜素的鉴定 ——纸层析
纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析，原理是利 用被分离的物质在某种基质中移动的速度不同而进行 分离。
高中生物6-2 胡萝卜素的提取优秀课件
76
石油醚、氯代烃等混溶
毒性
低毒 对生物来说，
应无麻毒醉性
氯代甲烷中, 毒性最强
乙酸 乙酯
不溶于水，与醇、醚、氯
77
仿、丙酮、苯等大多数有
机溶剂混溶
低毒,麻醉性
乙醇
与水、乙醚、氯仿、酯等
78
有机溶剂和使用量〔主要〕 〔2〕材料自身：颗粒大小、紧密度、含水量等 〔3〕环境条件：萃取温度和时间 一般来说，颗粒越小，萃取温度越高，时间越长， 效果越好。
乙酯、乙醚、苯、
四氯化碳 〔2〕萃取剂要求：萃取胡萝卜素的有机溶剂应该具有较高
的沸点、能够充分溶解胡萝卜素，并且
不与水混溶。 思考1：乙醇和丙酮能够用于胡萝卜素的萃取吗？
不能。因为乙醇和丙酮是水溶性有机溶剂。
思考2：萃取胡萝卜素应该使用哪种有机溶剂？
下表列选举择了标几准种 ：具有有机较溶 高的剂沸的点性 ，能质够，充结分溶合上述原则，提取胡萝
是( C )
A.水
B.无机盐
C.有机溶剂
D.无机溶剂
5.用萃取法提取出的胡萝卜素粗品,可以通过纸层析法 进行鉴定,其原理是( C ) A.色素提取液中不同色素已经分层 B.阳光的照射使各种色素已经分层 C.各种色素在层析液中的溶解度不同,造成不同色素 在滤纸上的扩散速度不同 D.层析液中丙酮酸使色素溶解,而且彼此别离的扩散 速度不同
【课堂小结】
有机溶剂
水
萃取剂
枯燥 浓缩
随堂练习
1.对胡萝卜素的提取和鉴定过程的分析正确的选项是D 〔〕 A．使用有机溶剂萃取法提取胡萝卜素时，所使用原 料的枯燥程度是最主要的影响因素 B．纸层析鉴定中点样完成，将滤纸卷成筒状使两侧 边缘连接在一起，放入层析液中 C．作为萃取胡萝卜素的有机溶剂需要与水混溶 D．采用水浴加热的原因是有机溶剂遇明火易爆炸
胡萝卜素的提取课件课件
物
10．胡萝卜素含有的化学元素有: B
A.C、H、O
B. C、H
C. C、H、O、N
D.C、H、N
第19页，幻灯片共21页
11.下图为提取胡萝卜素的装置示意图，请萃回取剂答的有性质关问题： 使用量
1）.胡萝卜原素料萃颗粒取的大的小效紧率密程主度要含取水决量 于萃取的温度 时间
和
，同时
还受到
等条件的影响。
a.胡萝卜素的性质和提取来源 b.影响萃取效率的因素 c.萃取胡萝卜素的过程 d.胡萝卜素的纸层析鉴定
第14页，幻灯片共21页
练一练
1、当人体缺乏某种维生素时，胡萝卜素可在体内转
化形成，这种维生素是：（ ） A
A、维生素A
B、维生素B
C、维生素C
D、维生素D
2、对叶绿体中的色素进行分析时，胡萝卜素的吸收
第10页，幻灯片共21页
• ＊注意事项： • 烘干胡萝卜时，温度过高、时间过长，胡
萝卜素会分解。
第11页，幻灯片共21页
• 2．3胡萝卜素的纸层析鉴定： • ①制备滤纸条：取18×30cm滤纸条，于距底
端2cm处划基线，取ABCD四个点。 • ②点样：用最细注射器针头分别吸取标准样
品和提取样品在AD和BC点样，吹干。 • ③层析：将滤纸卷成筒状并固定，放到盛有
（ A） A.石油醚 B.乙醚 C.四氯化碳 D.苯
第18页，幻灯片共21页
9.对于胡萝卜素的提取过程，叙述错误的是: D
A.萃取过程中应该避免明火加热，采用水浴加热
B.为了防止加热时，有机溶剂的挥发，还需要在加热
瓶口安装冷凝回流装置
C.萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置
D.在浓缩前，不需要过滤，因为萃取液中没有不溶
胡萝卜素的提取与鉴定PPT
二·实验原理
胡萝卜中含有丰富的天然色素，因其能在黄色到红色的范围 内为相关的食品饮料提供红色素。胡萝卜素是橘黄色结晶，化学 性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶 剂。
胡萝卜素有α-胡萝卜素，β-胡萝卜素，γ-胡萝卜素，δ-胡萝卜 素，ε-胡萝卜素，西红柿红素，黄体素等许多异构体。
原料颗粒小、水分少、萃取温度高、时间长 效果好
8
胡萝卜素提取过程
鉴定：纸 层析法
原料颗粒小，水分
除去萃取液中
少，萃取效果好。
的不溶物
1、萃取装置
胡
胡 萝
2、影响因素
萝
粉 干 萃过浓卜
卜 碎 燥 取滤缩素
9
实验步骤：
①原料加工： 取50g新鲜胡萝卜，清水清洗，沥干、粉碎、烘干。
②原料装填： 将胡萝卜粉与20mL石油醚装入蒸馏瓶。
6. 酶解水提法 利用纤维素酶和果胶酶破坏植物细胞壁提取类胡萝卜素，同时还可
以以超声波辅助提取。超声波也能起到帮助破碎细胞壁的作用，以加快 提取速度、节省成本。
5
3、实验室提取方法： 萃取法 胡萝卜素的理化性质： (1)橘黄色结晶；化学性质比较稳定 (2)不溶于水、微溶于酒精、 易溶于石油醚等有机溶剂
③加热萃取： 安装回流冷凝装置，沸水浴加热萃取30min。
④过滤： 将萃取物过滤，除去固体物，得到萃取液。
⑤浓缩： 安装蒸馏装置，加热萃取液，萃取剂挥发，得到胡萝
卜素。
＊注意事项： 烘干胡萝卜时，温度过高、时间过长，胡萝卜素会分解。
10
1.纸层析鉴定 点样层析后，若发现在滤纸上出现多个不同高度的色素点样。如果则说明
用产生的冲击波和射流可以破坏植物细胞和细胞膜结构，从而增加细胞 内容物通过细胞膜的穿透能力，有助于天然色素的释放与溶出。超声波 使提取液不断震荡，有助于溶质扩散，同时超声波的热效应使水温升温， 对原料有水浴作用。
八、蔬菜中胡萝卜素的测定（纸层析法）
食品检验实验：蔬菜中胡萝卜素的测定(纸层析法)(一)原理蔬菜的植物色素包括叶绿素、叶黄素及胡萝卜素等，它们能被丙酮石油醚溶液提取出来。
将样品提取液进行纸上层析，由于胡萝卜素极性最小，故被石油醚洗走的速度最快，从而可将胡萝卜素与其他色素分开，然后将胡萝卜素层析带洗脱进行比色定量。
(二)器材1．小乳钵。
2．10ml容量瓶。
3．层析缸。
4．层析纸。
5．分液漏斗50ml或100ml6．光电比色计。
(三)试剂1．石油醚(沸程60～90℃分析纯)。
2．丙酮(分析纯)。
3．丙酮-石油醚液(3：7) 以三份丙酮和七份石油醚振摇混合。
4．经过处理的河沙取河沙置于烧杯中，加10％HCl至高出沙面约1cm煮沸(煮时不断搅动)，然后弃去HCl，用蒸馏水洗至无酸为止。
5．无水硫酸钠(分析纯)。
6．β-胡萝卜素标准溶液精确称取纯β-胡萝卜素40mg于几毫升氯仿里，然后以石油醚稀释至100ml容量瓶中定容。
取该溶液5ml用石油醚稀释至50ml容量瓶中定容，即得40μg／ml的胡萝卜素标准应用液，置冷暗处保存。
(四)操作步骤1．在分液漏斗内先放30ml水。
2．称取绿叶蔬菜的均匀样品2g放入乳钵中(备25ml 3：7的丙酮-石油醚溶液)。
加少许河沙和数毫升丙酮-石油醚溶液于乳钵内，将样品研磨成糊状，用滴管吸取提取液至分液漏斗内。
这样，25ml丙酮-石油醚分十数次提取，直至提取液基本无色为止。
3．振摇分液漏斗，使丙酮溶于水中，待分层后，放去水层，加水洗涤3～4次以除尽丙酮。
过滤前，用吸水纸条吸干分液漏斗管口的水分。
4．将提取液通过盛有无水硫酸钠的漏斗，滤入10ml容量瓶内，再加少许石油醚洗涤漏斗及滤纸上附着的色素，并注入容量瓶内，加石油醚至10ml刻度，混匀。
5．层析(1)点样：于滤纸底端距边约3cm处，用铅笔画一基线，以1ml注射器准确吸取石油醚提取液0．5ml，徐徐点在基线的一条(或一点)上。
(2)展开：将点好样的滤纸卷成圆筒状(或呈长条状)，两边用线系牢，但不使两边重叠，放人事先以石油醚饱和的层析缸内，层析纸要放正，不接触缸边，层析纸基线下1／3浸入液面以内，进行上行展开。
胡萝卜素含量的测定
4. 稀释与测定
将滤液稀释到适当浓度，用分光 光度计在450nm波长处测定吸光 度。
1. 样品处理
将样品（如蔬菜、水果等）清洗 干净，晾干后切碎并称重，放入 研钵中研磨成匀浆。
5. 数据处理
根据吸光度值，利用标准曲线或 回归方程计算胡萝卜素的含量。
实验结果分析
数据处理
将测定的吸光度值代入标准曲线或回归方程，计算出样品中胡萝卜素的含量。
参考文献
06
参考文献
作者
01
张三
发表时间
02
XXXX年
期刊名称
03
食品科学
谢谢聆听
结果与文献比较
我们将实验结果与相关文献中的数据进行比较，以验证我们的实验方法和结果的可靠性。 通过比较，我们可以发现我们的结果与其他研究者的结果基本一致，说明我们的实验方法 是可靠的。
结果的意义和影响
分析实验结果的意义和影响，可以帮助我们更好地了解胡萝卜素含量的影响因素以及其在 食品和健康领域的应用价值。例如，高胡萝卜素含量的食品可能具有更高的营养价值，对 人们的健康有益。
结果分析
比较不同样品中胡萝卜素的含量，分析其影响因素，如品种、生长环境、采摘 时间等。同时，将实验结果与国家标准或行业标准进行比较，评估样品的营养 价值或质量。
03
实验材料与设备
实验材料
新鲜胡萝卜
用于提取胡萝卜素，要 求新鲜、无病虫害。
甲醇
用于提取胡萝卜素，具 有较高的溶解度。
石油醚
用于提取胡萝卜素，具 有较高的溶解度和较低 的沸点。
硅藻土
用于过滤提取液，去除 杂质。
实验设备
电子天平
用于称量实验材料，要求精度高。
定胡萝卜素含量，通过比色法进行定 量分析。
果蔬食品中叶黄素、玉米黄质、隐黄质和胡萝卜素的测定
测定结果在食 品质量控制中 的应用
03
02
测定结果在食 品营养成分标 注中的应用
04
测定结果在食 品科学研究中 的应用稳定性高来自测定结果重复性01
重复性测试：对同一样品 进行多次测定，比较结果 一致性
02
结果稳定性：在不同时间、
不同实验室条件下进行测
定，比较结果稳定性
03
结果准确性：与标准方法 进行比较，评估测定结果 的准确性
04
结果可靠性：对不同样品
进行测定，评估测定结果
的可靠性
测定结果应用
果蔬食品中叶黄 素、玉米黄质、 隐黄质和胡萝卜 素的含量分析
紫外分光光度法
原理：利用叶黄素、玉米黄质、 隐黄质和胡萝卜素在紫外光区具 有吸收特性，通过测定吸光度值
来定量分析。
样品处理：将果蔬食品样品进行 提取、净化、浓缩等处理，得到
待测样品溶液。
仪器：紫外分光光度计
测定步骤：将待测样品溶液放入 紫外分光光度计中，选择合适的 波长进行扫描，记录吸光度值，
通过标准曲线进行定量分析。
荧光光谱法
原理：利用叶黄素、玉米黄质、隐黄 质和胡萝卜素在紫外光激发下发出荧 光的特性进行测定
优点：灵敏度高、选择性好、操作 简便、快速
缺点：易受样品中其他荧光物质的干 扰，需要选择合适的激发波长和发射 波长
应用：广泛应用于果蔬食品中叶黄素、 玉米黄质、隐黄质和胡萝卜素的测定
样品提取
样品预处理：将 果蔬食品洗净、 去皮、切碎、烘 干
演讲人
目录
01. 测定方法 02. 样品处理 03. 结果分析
高效液相色谱法
高效液相色谱法是一种常用的测定果蔬食品中 叶黄素、玉米黄质、隐黄质和胡萝卜素的方法。
营养与食品卫生学课件胡萝卜素2009
类胡萝卜素（carotinoids） Nhomakorabea广泛存在于蔬菜和水果
无氧型(oxygen-free)：α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、番茄红素 含氧型(oxygen-containing ) ：黄体素、玉米黄素、 β-隐黄素
生物学作用 1. 抗氧化： 清除单线态氧、过氧自由基 2. 预防动脉粥样硬化 3. 增强免疫
2020/8/4
三、仪器
1．组织捣碎机 2．层析缸 3．新华中速滤纸（16cm×20cm） 4．分液漏斗 125ml 5．具塞试管 50ml 、10ml 6．瓷蒸发皿 7．分光光度计 8．天平 9．水浴锅
2020/8/4
四、试剂
1．石油醚（分析纯） 2．丙酮（分析纯） 3．3:7丙酮-石油醚 4．无水硫酸钠 5．5%硫酸钠溶液 6．β-胡萝卜素标准液（20μg/ml）
（2）展开：将点好样的滤纸卷成圆筒状，固定两边（ 不使两边重叠），放入预先用石油醚饱和的层析缸 内。纸筒必须放正，滤纸筒基线以下1/3浸入液内， 进行上行层析。
2020/8/4
4cm 4
cm
9． 洗脱及比色
待胡萝卜素与其它色素完全分离后，停止层析，将 胡萝卜素层析带剪下，放入盛有5ml石油醚的试管中， 用力振摇，使之洗入醚内，以石油醚为空白，立即在 450nm波长处比色。
10. 作标准曲线
取胡萝卜素标准液（20 μg/ml ）0.05，0.1，0.2 ，0.4
，0.8 ml入试管
加石油醚至5ml
以石油醚
为空白在450nm波长处比色。
2020/8/4
六、计算
A
100
1
胡萝卜素= ——× V2 × —— × ———
纸层析法
六、注意事项
样品捣碎时加水不能太多，否则不仅提取困难， 还不容易得到均匀样品。 滤纸层析一结束，应立即从层析缸中取出，并尽 快剪下胡萝卜层析带进行洗脱，以免氧化使结果 偏低。 本方法适用于植物性食物和含有植物性食物的混 合食物中胡萝卜素的测定，其最小检出限为 0.11μg。 结果的允许差：同一实验室平行测定或重复测定 结果的相对偏差绝对值≤10%。
点样：准确吸取待检液40μl在滤纸下端基线上A、B两 点之间或C、D两点之间迅速来回进行带状点样一次点 完（见图1）。每个样品点2带作为平行样。
首都医科大学
营养与食品卫生学
展开：
待纸上所点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，用定 书机固定两边，置于预先用石油醚饱和的层析缸中（见图 2），进行上行展开。（注意纸纹方向与展开方向一致； 缸内石油醚深度约1cm即可，样斑不能直接接触石油醚。
首都医科大学
营养与食品卫生学
七、实验报告应包括以下内容
1．实验目的。 2．实验原理。
3．实验方法。
4．实验操作步骤。 5．结果的计算。 6．实验注意事项。 7．结果的评价和小结。
首都医科大学
营养与食品卫生学
首都医科大学
首都医科大学
营养与食品卫生学
四、操作步骤
（5）将石油醚提取液通过盛有10g无水硫酸钠固 体的小漏斗，滤入瓷蒸发皿。用少量石油醚分数 次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤 液合并瓷蒸发皿中。 （6）将瓷蒸发皿置于低温电热板上蒸发至约1ml 时，取下，待其自然挥干。冷却后置于冰裕上， 立即用石油醚2ml沿蒸发皿壁将色素洗下，混匀立 即点样。 （7）层析
营养与食品卫生学
四、操作步骤
以下步骤需在避光条件下进行 （1）样品提取： 取适量样品，相当于原样1～5g(含胡 萝卜素约20～80μg)的匀浆，置100ml带塞锥形瓶中，加 入丙酮20ml，石油醚5ml，振摇1min，静置5min。 （2）在150ml分液漏斗中，放入5％硫酸钠溶液30ml。 （3）将锥形瓶内的提取液小心移入上述分液漏斗中，再 于锥形瓶中加入10ml丙酮－石油醚混合液（3：7），振摇 1min，静置5min，将提取液并入分液漏斗中。如此反复提 取2～3次，直至提取液无色为止。 （4）振摇分液漏斗，放置分层后，弃去下层水溶液。再 用5%硫酸钠溶液15ml振摇洗涤，反复进行三次，直至下层 水溶液清亮为止，目的是除尽丙酮，防止乳化。
总胡萝卜素的测定(比色法)(精)
总胡萝卜素的测定（比色法）一、原理样品通过石油醚—丙酮（1：0.5V/V）混合液萃取，使之与非类胡萝卜素成分分离，在451nm波长下测定萃取溶液的消光度，可以计算出食品中总胡萝卜素的含量。
二、材料、仪器与试剂（一）材料：胡萝卜、菠菜、油菜等。
（二）仪器：可见分光光度计、分液漏斗(150mL)、容量瓶（50mL）、量筒（100mL）、三角瓶（100mL）、研钵、铁架台、漏斗、铁圈。
（三）试剂：石油醚、丙酮、无水硫酸钠、石英砂、饱和氯化钠溶液。
三、操作步骤（一）样品处理：称取5g已捣碎混匀的样品置研钵内，加石油醚、丙酮（1:0.5）混合溶液10mL,石英砂少量，研磨提取，然后将提取液过滤至100mL三角瓶中。
如此反复提取残渣3~4次。
并过滤，直到提取液无色，将几次滤液从100mL三角瓶移至150mL 梨形分液漏斗中，并用水洗涤石油醚层，出现乳化时，加饱和NaCl溶液3~5mL，剧烈振荡，待液相分层后，弃去下层水相，重复2~3次，将石油醚层定量转移至50mL容量瓶中，用无水硫酸钠过滤，以石油醚定容，摇匀。
置暗处供比色用。
（二）测定：用1cm比色皿以石油醚作空白，在451nm波长处测定消光度。
四、计算以β-胡萝卜素含量计：E×V×100×1000×1000总胡萝卜素（μg/100g）=E1×W×100E×50×100×1000×1000=2500×W×100E= ×20000W式中：E——样品在451nm波长下消光值E1——1%β-胡萝卜素石油醚溶液在451nm波长下的消光值，即2500 V——样品中总胡萝卜素石油醚提取液定溶毫升数W——样品重量（g）。
菠菜中胡萝卜素的提取与鉴定
一、实验目的1、掌握从新鲜菠菜中提取、鉴定胡萝卜素的方法。
2、掌握测定胡萝卜素紫外—可见吸收光谱的计算方法。
二、实验原理绿色植物如菠菜中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
植物色素中的胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体，即α-、β-、γ-胡萝卜素，其中β-体含量较多，也最重要。
β-体具有维生素A的生理活性，其结构由两分子的维生素A在链端失去两分子水结合而成。
在生物体内β-体受酶催化氢化作用即形成维生素A。
目前β-体也可由工业生产，可以作为维生素A使用，同时也能作食品工业中的色素。
胡萝卜素不溶于水，可溶于有机溶剂中。
三、仪器与试剂1、仪器：紫外—可见分光光度计、层析柱、玻璃漏斗、分液漏斗、抽滤装置一套、研钵、试管、烧杯；2、试剂：菠菜叶、乙醇、石油醚、丙酮、无水硫酸钠、硅胶GF254、中性三氧化二铝、石英砂。
四、实验步骤a)样品处理：取约5g新鲜菠菜叶，洗干净后用滤纸吸干并用剪刀剪碎，于研钵中捣烂，用30mL2:1的石油醚—乙醇浸取。
抽滤浸取液，滤液转移到分液漏斗中，加等体积的水洗1次，洗涤时要轻轻振荡，以防止乳化，弃去下层的水—乙醇层，石油醚层再用等体积的水洗2次，除去乙醇和其他水溶性物质。
有机相用无水硫酸钠干燥。
蒸除大部分溶剂至体积约为1mL为止，取四分之三作柱层析分离。
b)柱层析分离在层析柱底部垫一点棉花，加入15cm高的石油醚，将中性三氧化二铝从玻璃漏斗中缓慢加入，小心打开柱下活塞，保持石油醚高度不变，必要时用装在玻璃棒上的橡皮塞轻轻地在柱周围敲击，使吸附剂装得平整致密。
柱内溶剂面始终不低于吸附剂。
装完后，再在上面铺一层2—3mm高地石英砂。
打开下端活塞，放出溶剂，直到液面刚好与石英砂平面相切时为止。
将上述所剩的菠菜色素浓缩液用滴管小心的加到柱顶，加完后打开活塞，让液面下降到柱面以下1mm左右，关闭活塞，加数滴石油醚并打开活塞，使液面下降，反复几次，使色素全部进入柱体。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
三．仪器
1．组织捣碎机 2．层析缸 3．新华中速滤纸（16cm×20cm） 4．分液漏斗 125ml 5．具塞试管 50ml 、5ml 6．瓷蒸发皿 7．分光光度计 8．天平 9．水浴锅
四．试剂
1．石油醚（分析纯） 2．丙酮（分析纯） 3．3:7丙酮——石油醚 4．无水硫酸钠 5．5%硫酸钠溶液 6．β-胡萝卜素标准液（50μg/ml）
V1
W 1000
（mg/100g）
A = 样品光密度相当于标准的微克数
V1 = 点样毫升数 V2 = 浓缩后固定的体积 W = 样品重（克）
一. 实验目的：
熟悉蔬菜中胡萝卜素的测定原理 测定样品中的胡萝卜素的含量
二．原理：
蔬菜的植物色素包括叶绿素、叶黄素及胡萝卜素等 蔬菜中各种色素均可溶于石油醚，将一定量的植物
色素石油醚提取液点在层析纸的一端，用石油醚作 展开剂，进行上行展开。 由于胡萝卜素极性最小，故被石油醚洗走的速度最 快，从而可将胡萝卜素与其它色素分开。
7． 层析
（1） 点样：距滤纸底边4cm处用铅笔划一基线，在基 线上取两点，每点距纸两侧不少于4cm。准确吸取 检液0.3 ml，以画好的点为中心，迅速进行带状点样， 一次点完。
（2）展开：将点好样的滤纸卷成圆筒状，固定两边 （不使两边重叠），放入预先用石油醚饱和的层析 缸内。纸筒必须放正，滤纸筒基线以下1/3浸入液内， 进行上行层析。
8． 洗脱及比色
待胡萝卜素与其它色素完全分离后，停止层析，划 出溶剂前沿（便于计算Rf值）将胡萝卜素层析带剪下 （其色带的Rf值与标准色带值相同），放入盛有5ml石 油醚的试管中，用力振摇，使之洗入醚内，以石油醚为 空白，立即在450nm波长处比色。
六．计算
A1001胡萝卜素= ——× V2 × —— × ———
注意：振摇分液漏斗使水与提取液混合均匀为宜（不宜重摇） 静置分层，放掉下层再以5%硫酸钠溶液15 ml振摇洗涤 反复三次以除尽丙酮。
提取液 残渣
提取液
5. 将上液通过盛有无水硫酸钠的漏斗滤入蒸发皿，用 少量石油醚分数次洗尽无水硫酸钠及分液漏斗中的 色素，洗液合并于蒸发皿。
6. 在60~70℃水浴上蒸至近干，立刻用石油醚少许稀释。 再用滴管吸石油醚液于5ml具塞刻度试管内，反复用 少量石油醚洗涤蒸发皿，洗液并入刻度试管，直至 洗至无色，定容至5ml，混匀待检。
实验六 蔬菜中胡萝卜素的测定
维生素A原 (provitamin A)
在体内可转换成维生素A的类胡萝卜素 (carotenoid)， 包括：
α-胡萝卜素 β-胡萝卜素 γ-胡萝卜素 隐黄素
来自深色蔬菜水果（胡萝卜、辣椒、芒果、杏等）
维生素A (vitamin A) 生理功能
1. 维持正常的视觉：促进视紫红质的合成与再生 2. 细胞生长和分化 3. 免疫功能 4. 细胞膜表面糖蛋白合成 5. 抗氧化功能 6. 抑癌作用
五．操作步骤
1. 150g蔬菜(洗净晾干)+280ml水 → 捣碎3min(公用) 2. 称取10g匀浆（相当于原样品3g）入具塞比色管→加
入丙酮20ml、石油醚5ml →用力振摇1min(脱色) → 静置5min 3. 于125ml分液漏斗内先放入5%硫酸钠溶液30ml，用 滴管吸上清液入分液漏斗 4. 用3:7丙酮石油醚混合溶剂提取残渣，每次10ml，共 3次，直至提取液无色为止，每次提取液入分液漏斗